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高效液相色谱法测定两种岩陀中岩白菜素的含量



全 文 :固醇和脂蛋白代谢,对肝脏有很好的保护作用。
参 考 文 献:
[1] Witztum J L,Steinberg D. Role of oxidized bw density lipoprotein
in atherogenesis[J]. J Clin Invest,1991,88(6) :1785-1792.
[2] Halliwe U B. Free radical,antioxidants,and human disease:curios-
ity,cause,or consequence[J]. Lancet,1994,344(8924) :721-
724.
[3] 赵 鸿.动脉粥样硬化发病机制的研究进展[J].中国现代实
用医学杂志,2005,4(12) :26-28.
[4] Towbin J A. The role of cytoskeletail proteins in cardiomy opthies
opinion[J]. Cell Bio1,1998,10(1) :131.
[5] Chen X P,Xun K L,Wu Q,et al. Oxidized low density lipoprotein
receptor mediates oxidized low density lipoprotein induced apopto-
sis in human umbilical vein endothelial cell:role of reactive oxygen
species[J]. Vascul Pharmacol,2007,47(1) :1-9.
[6] 徐 兵,李 昕,张 莉.辣椒素药理作用的研究进展[J]. 中
南药学,2007,5(6) :542-545.
[7] 李金莲,杨润梅,高南南.豚鼠:一种良好的高脂血症模型动物
[J].中国实验动物学报,2009,17(3) :239-242.
[8] 张印俊.降血脂药物的研究进展[J].国外医药:抗生素分册,
2003,24(6) :12-14.
高效液相色谱法测定两种岩陀中岩白菜素的含量
彭朝霞,杨朝莲,熊然英,晏祥杰
(六盘水市药品检验所,贵州 六盘水 553001)
摘 要:目的 采用高效液相色谱法测定岩陀中岩白菜素的含量。方法 色谱柱为 Hypersil C18柱(4. 6 mm × 250
mm,5 μm) ,流动相为乙腈 -水(10∶90) ,检测波长为 274 nm,柱温 25 ℃。结果 岩白菜素的线性范围为 0. 049 21 ~
3. 396 8 μg,r = 0. 999 8,加样回收率为 99. 8%,RSD为 1. 18%(n = 9)。结论 本文所建立的方法简单、准确、可靠、
重复性好,可用于岩陀中岩白菜素的含量测定。
关键词:岩陀;岩白菜素;含量测定
中图分类号:R927. 2 文献标识码:A 文章编号:1005-1678(2012)04-0419-03
HPLC determination of bergeninum in two kinds of Rhizoma Rodgersiae Sambucifoliae
PENG Zhao-xia,YANG Chao-lian,XIONG Ran-ying,YAN Xiang-jie
(Liupanshui Institute for Drug Control,Liupanshui 553001,China)
Abstract:Purpose To establish a method for determination of bergeninum in Rhizoma Rodgersiae
Sambucifoliae by HPLC.Methods The HPCL system was conducted as follows:Hypersil C18 column(4. 6
mm ×250 mm,5 μm) ,acetonitrile-water(10∶90)mixture as a mobile phase ,detection wavelength at 274
nm,1. 0 mL /min of flow rate and column temperature at 25 ℃ . Results The linear range of bergeninum
was 0. 049 21-3. 396 8 μg,r = 0. 999 8,the recovery was 99. 8% and RSD = 1. 18 (n = 9).
Conclusion The method is simple,accurate of higher sensitivity and reproducibe. This method can be
used for the determination of bergeninum in Rhizoma Rodgersiae Sambucifoliae.
Key words:Rhizoma Rodgersiae Sambucifoliae;bergeninum;content determination
收稿日期:2011-06-12
基金项目:贵州六盘水市科技项目(52020-2009-01-04-06)
作者简介:彭朝霞,女,副主任药师,Tel:0858-8266972,E-mail:
yjspzx@ yahoo. com. cn。
岩陀是虎耳草科鬼灯檠属植物西南鬼灯檠
(Rodgersia sambucifolia Hemsl)的根茎,性味:苦、涩,
凉;功能主治:清热凉血,调经止痛。用于肠炎,痢
疾,痛经,月经过多,风湿性关节炎,跌打损伤;外用
治外伤出血,阴囊湿疹[1]。其根茎富含虎耳草素
(Bergenin)又称岩白菜素,主要作用是镇咳祛痰,用
于慢性支气管炎[2]。近来的药理实验发现岩白菜
素除具有镇痛抗炎作用外[3],还具有抗炎、护肝、抗
914中国生化药物杂志 Chinese Journal of Biochemical Pharmaceutics 2012 年第 33 卷第 4 期
溃疡、提高免疫等作用[4]。岩白菜素已制成各种单
方或复方制剂用于临床。现在的岩陀均为野生药
材,生长在 1 600 ~ 2 200 米的海拔高度。主要分布
在四川西南部、贵州(威宁、六盘水)和云南北部,贵
州省六盘水市等地还将羽叶鬼灯擎(Rodgersia pin-
nata Franch)的根茎作为岩陀入药。为更好地对岩
陀质量进行控制,我们采用高效液相色谱法对岩陀
中岩白菜素的含量进行了分析。
1 仪器与试药
Waters1525 高效液相色谱仪;Waters2487 紫外
检测器;Brezz 色谱工作站(版本:3. 3) ;岛津 UV-
2550 型紫外-可见分光光度计。
样品 1:羽叶鬼灯擎(水城县勺米乡鱼塘村) ;样
品 2:西南鬼灯擎(水城县勺米乡严家垭口) ;样品
3:西南鬼灯擎(水城县勺米乡范家寨村) ;样品 4:西
南鬼灯擎(水城县勺米乡三棵桩) ;样品 5:西南鬼灯
擎(水城县哈青村) ;样品 6:西南鬼灯擎(水城县韭
菜坪)。所有样品均经贵阳中医学院中药系陈德媛
教授鉴定。
岩白菜素对照品(中国药品生物制品检定所,
批号:111532-200202)。
乙腈为色谱纯;水为纯净水;其余试剂均为分
析纯。
2 方法与结果
2. 1 色谱条件
色谱柱:Hypersil C18柱(4. 6 mm × 250 mm,5
μm) ;流速:1. 0 mL /min;柱温:25 ℃;流动相:乙腈-
水(10∶90) ;检测波长:274 nm。理论板数按岩白菜
素峰计应不低于 5 000。结果表明,在该色谱条件
中,岩白菜素峰和其他成分峰均能完全分离,分离度
大于 1. 50,符合要求。典型色谱图见图 1。
A.岩白菜素对照品;B.羽叶鬼灯擎(样品 1) ;C.西南鬼灯擎(样品 2)
图 1 高效液相色谱图
2. 2 对照品溶液的制备
精密称取岩白菜素对照品(五氧化二磷减压干
燥 20 h)49. 21 mg,置 100 mL量瓶中,加甲醇溶解并
稀释至刻度,摇匀,即得岩白菜素对照品储备液(每
1 mL含岩白菜素 0. 492 1 mg)。精密量取储备液 4
mL,置 10 mL 量瓶中,加甲醇稀释至刻度,摇匀,即
得岩白菜素对照品溶液(每 1 mL 含岩白菜素 196.
84 μg)。
2. 3 供试品溶液的制备
取岩陀粉末(过 40 目筛)0. 15 g,精密称定,加
入甲醇 50 mL,称定重量,超声提取 40 min,取出,放
冷,再称定重量,用甲醇补足减失重量,摇匀,滤过,
取续滤液作为供试品溶液。
2. 4 线性关系考察
精密量取岩白菜素对照品储备液 0. 1,0. 5,1,
2,3,4,5,6,7 和 8 mL分别置 10 mL量瓶中,加甲醇
稀释至刻度。分别精密量取 10 μL 注入液相色谱
仪,按 2. 1 项下色谱条件进行试验。以进样量(X,
μg)为横坐标,峰面积(Y)为纵坐标,绘制标准曲线。
得线性回归方程:Y = 1 340 000 X + 21 471,r =
0. 999 8。结果表明,岩白菜素在进样量 0. 049 21 ~
3. 396 8 μg范围内与峰面积具有良好的线性关系。
2. 5 精密度试验
取岩白菜素对照品溶液 10 μL注入色谱仪进行
试验,重复 6 次,峰面积 RSD 为 0. 5%,表明精密度
良好。
2. 6 稳定性试验
取岩陀粉末(样品 2)约 0. 15 g,精密称定,按
2. 3项下方法制备供试品溶液。分别于 0,2. 5,5,7,
9. 5,12,14. 5,17,19. 5,22,24,26,28 h 精密吸取 10
μL,注入液相色谱仪,记录峰面积。0 ~ 24 h 峰面积
RSD为 1. 9 %,表明岩白菜素室温下 24 h内具有良
好的稳定性。
2. 7 重复性试验
分别称取岩陀(样品 2)粉末 6 份,每份 0. 15 g,
精密称定后按 2. 3 项下制备供试品溶液,取 10 μL
进样测定,以干燥品计算平均含量和 RSD。岩白菜
素的平均含量为 10. 06%,RSD为 1. 86%,表明该方
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法的重复性良好。
2. 8 回收率试验
精密吸取 0. 492 1 mg /mL岩白菜素对照品溶液
2,5,10 mL各 3 份,分置 9 个具塞锥形瓶中,水浴挥
干。分别加入精密称定的样品 2 粉末 (水分
9. 47%)约 0. 1 g,按 2. 3 项下制备供试品溶液,吸取
10 μL进样测定,计算回收率,结果见表 1。岩白菜
素的平均回收率为 99. 06%,RSD为 1. 56%。
表 1 回收率试验结果
称样量
/g
原有量
/mg
加入量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
0. 103 5 9. 416 7 0. 984 2 10. 407 7 100. 69
0. 106 0 9. 644 2 0. 984 2 10. 621 6 99. 31
0. 103 4 9. 407 6 0. 984 2 10. 403 5 101. 19
0. 102 4 9. 316 6 2. 460 5 11. 756 8 99. 18
0. 098 0 8. 916 3 2. 460 5 11. 314 2 97. 46
0. 101 9 9. 271 1 2. 460 5 11. 639 0 96. 24
0. 102 5 9. 325 7 4. 921 0 14. 199 6 99. 04
0. 096 4 8. 770 7 4. 921 0 13. 611 9 98. 38
0. 105 0 9. 553 2 4. 921 0 14. 475 1 100. 02
2. 9 样品含量测定
取岩陀粉末约 0. 15 g,精密称定,按 2. 3 项下的
方法制备样品溶液,同时分别测定每个样品的水分,
以干燥品计算样品中岩白菜素的含量。样品 1 ~ 6
的岩白菜素含量依次为 7. 63%,10. 05%,8. 66%,
9. 38%,6. 16%和 8. 40%。
3 讨 论
3. 1 波长的选择
相关文献记述岩白菜素检测波长有 220,275 和
260 nm等[5-8],为选择合适的检测波长,对岩白菜素
对照品溶液(22. 4 μg /mL)进行了紫外光谱扫描。
结果表明,岩白菜素在 306. 2 与 274. 0 nm波长处有
最大吸收,且 274. 0 nm 波长处吸光度较大,故选用
274 nm为检测波长。
3. 2 流动相选择
文献记述检测岩白菜素的流动相有甲醇-水[5]、
甲醇-0. 2%磷酸[6]、1%醋酸溶液(用三乙胺调 pH
3. 7)-甲醇-乙腈[8]等,比较岩白菜素在甲醇-水、甲
醇-0. 1%磷酸、乙腈-水、乙腈-0. 1%磷酸各流动相条
件下的检出效果,流动相为乙腈-水(10∶90)时,岩白
菜素分离效果好,检出杂质峰较少,且与相邻杂质峰
分离度较好,响应值较高,更利于岩白菜素含量的检
测,故选用乙腈-水(10∶90)作为流动相。
3. 3 提取方法选择
岩白菜素在甲醇中溶解,在水和乙醇中微
溶[2],故采用甲醇作为提取溶剂。
比较了 30 min 回流提取、20,40,60 和 90 min
超声提取的效果。超声 40 min 提取样品,岩白菜素
含量较高;超声 20 min提取液中岩白菜素的含量较
低;其余三种方法提取效果无显著差异,为使方法简
便易行,又能尽量将岩白菜素提取出来,故使用超声
40 min提取样品。
4 结 论
目前岩陀的植物资源短缺,市场需求量较大,我
市岩陀的岩白菜素含量在 6%以上,云南产(为岩陀
高产区)岩陀的岩白菜素含量大约在 3%(此数据为
贵州省重点实验室提供) ,在我地民间有将羽叶鬼
灯擎作为岩陀使用的情况,其疗效与西南鬼灯擎差
不多[9],且其根茎中所含岩白菜素与正品岩陀所含
岩白菜素相差不大,故可将羽叶鬼灯擎做为岩陀的
一个药用资源使用,以扩大药源,解决野生岩陀资源
短缺的问题。
本文建立了岩陀中的岩白菜素高效液相色谱测
定方法,并对不同产地岩陀及替代品中的岩白菜素
含量进行了测定,建议在岩陀质量标准中增加岩白
菜素含量测定。
参考文献:
[1] 《中药辞海》编写组.中药辞海[M].第二卷.北京:中国医药科
技出版社,1996:817-818.
[2] 中国药典[S].一部. 2005:278.
[3] 黄丽萍,吴素芬.岩白菜素镇痛抗炎作用研究[J].中药药理与
临床,2009,25(3) :24.
[4] 夏从龙,刘光明,马晓匡.岩白菜素的研究进展[J]. 时珍国医
国药,2006,17(3)B:432 -433.
[5] 杨怀镜,姚宏春,张全望. HPLC法测定岩白菜素和复方岩白菜
素片的含量[J].中国药事,2003,17(3) :171.
[6] 王晓琼,康红英,陈声晶. RP-HPLC 法测定地茶止咳露中岩白
菜素的含量[J].中国药事,2010,24(12) :1224.
[7] 马晓云,宋愿智,汤利荣,等. 卡虎素含量测定的实验研究Ⅰ.
岩白菜素含量测定的实验研究[J]. 中国生化药物杂志,1993
(4) :56-57.
[8] 张玉华.复方岩白菜素片中岩白菜素和马来酸氯苯那敏的含
量测定[J].中国药业,2008,17(21) :25.
[9] 贵州中药资源普查办公室、贵州中药研究所. 贵州中药资源
[M] .北京:中国医药科技出版社,1992:693.
124中国生化药物杂志 Chinese Journal of Biochemical Pharmaceutics 2012 年第 33 卷第 4 期