全 文 ：第 32 卷
Vol. 32
第 4 期
No. 4
西 华 师 范 大 学 学 报 ( 自 然 科 学 版 )
Journal of China West Normal University ( Natural Sciences)
2011 年 12 月
Dec． 2011
文章编号: 1673-5072( 2011) 03-0317-04
收稿日期: 2011 － 06 － 20
基金项目:四川省科技厅应用基础研究项目【 2008JY0111】
作者简介:程 犇( 1985 － ) ，女，四川南充人，西华师范大学生命科学学院硕士研究生，主要从事天然产物研究工作
通讯作者:黎云祥( 1968 － ) ，男，四川眉山人，西华师范大学生命科学学院教授，博士生导师，主要从事药用植物学与植物
分子生态学研究工作
Hplc法测定峨眉岩白菜中岩白菜素方法
程 犇，黎云祥，权秋梅，肖 杭，龚新越
( 西华师范大学生命科学学院，四川 南充 637009)
摘 要:岩白菜素( bergenin) ，分子式为 C14H16O9，白色疏松针状结晶或结晶性粉末，属于异香豆素类化合物．建立
了用高效液相的方法测定峨眉岩白菜中岩白菜素含量的方法．色谱柱 XDB － C18 ( 4． 6* 150mm，5μm) ．流动相:
甲醇∶水 = 20∶ 80，流速为 0． 9ml /min，检测波长 275nm，柱温 30℃ ± 0． 5．结果表明相关系数 R2 = 0． 9981，岩白菜素
含量在 0． 102 － 1． 02μg之间呈现线性关系．平均回收率为 99． 37%，RSD为 1． 724% ．考察了不同海拔下峨眉岩白菜
岩白菜素含量的差异，建立了较为快速，简单，准确的测定峨眉岩白菜素的高效液相测定方法．
关键词:高效液相色谱;峨眉岩白菜;岩白菜素
中图分类号: Q946 文献标识码: B
峨嵋岩白菜( Bergenia emeiensisC． Y． Wu) 为虎耳草科岩白菜属植物，多年生草本，高约 37cm． 产于四川
( 峨眉山、灌县) ．生于海拔 1 590m 左右的石隙［1］． 岩白菜中的主要药效成分为岩白菜素( bergenin) 熊果苷
( arbu t in) 等，其中含有的岩白菜素具有镇咳、祛痰功效，主要用于治疗慢性支气管炎．岩白菜属植物的主要
功效为止咳祛痰、止血、解毒．其主要活性作用与其所含的大量活性成分岩白菜素密切相关［2 － 6］．通过查阅与
岩白菜岩白菜素含量相关的文献发现至今没有峨眉岩白菜中岩白菜素的高效液相色谱定量分析方法的报
道．
本文利用高效液相色谱分析，优化流动相，参照文献［7］建立了较为可靠、快速且相对准确的测定植物提
取物中岩白菜素的高效液相色谱方法，为峨眉岩白菜的开发及相关研究提供参考资料．
1 仪器与试药
1． 1 仪 器
美国 Agilent 1200 高效液相色谱仪，紫外检测器，Agilent Chemstation系统软件．
1． 2 试 药
岩白菜素对照品，经检测纯度为 98%以上．甲醇为色谱纯，水为重蒸水，其余为分析纯．样品: 峨眉岩白
菜采至四川峨眉山( 6 月) ，洗净，阴干．经西华师范大学生命科学学院秦自生教授鉴定为虎耳草科岩白菜属
植物峨嵋岩白菜( Bergenia emeiensisC． Y． Wu) 的全草．
2 方 法
2． 1 色谱条件
色谱柱 XDB － C18( 4． 6* 150mm，5μm) ;流动相甲醇∶水( 20∶ 80) ;流速 0． 9ml /min;检测波长 275nm;柱
温 30℃ ±0． 5．在此条件下岩白菜素测出的峰型情况良好．
DOI:10.16246/j.issn.1673-5072.2011.04.002
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2． 2 标准曲线的绘制
用电子天平准确称取岩白菜素标准品 5． 1mg，并用甲醇溶解于 25ml 的容量瓶中制成浓度为 0． 204mg /
ml标准品溶液．分别将上述标准品溶液稀释 40 倍、20 倍、10 倍、7 倍、4 倍，然后各 20μL 注入高效液相色谱
仪中进行含量分析，以所得的峰面积为 y轴，测得的岩白菜素含量为 x轴，做标准曲线．
2． 3 精密度试验
精密吸取上述标准品溶液，在相同的色谱条件下进行分析，连续 5 次进样，每次进样 20μl．
2． 4 稳定性试验
取同一样品溶液，每隔一小时进样一次连续进样 5 次，每次进样 20μl测峰面积积分值．
2． 5 样品的测定
精密称定峨眉岩白菜药粉 0． 2g，置于锥形瓶中，加入 40%的甲醇 50ml，称重，用超声波提取法提取
60min，冷却到室温，称重用甲醇补足减失的重量，震荡摇匀，取上清液，用高速离心机离心 15min ( 4000r /
min) ，每次进样 20μl，用拟定的高效液相方法分析，以峰面积积分值计算岩白菜素的含量．
2． 6 重现性试验
精密称定已知含量的海拔 1 090m峨眉岩白菜根约 0． 2g，按供试品的制备的步骤处理并测定．
2． 7 回收率试验
精密称取同法测定已知含量的峨眉岩白菜( 海拔 1 090m) 5 份，精密加入岩白菜素对照品适量，依法测
定，计算回收率．
3 结 果
3． 1 标准曲线的绘制
以实验所得岩白菜素峰面积为 y 轴，测得的岩白菜素含量为 x 轴做标准曲线． 当进样量在 0. 102 －
1. 02μg之间时呈现线性关系．所得回归方程为 y = 1566． 2x + 5． 0985，相关系数 R2 = 0． 9981．岩白菜素标准
曲线见图 1
3． 2 精密度试验
所得峰面积数据分别为 1746． 196，
1762． 716，1761． 901，1756． 331，1744． 06．
峰面积的平均值为 1754． 241，标准差( SD)
为 8． 707，标准误差( SE) 为 1． 741，相对标
准偏差( RSD) 为 0． 496% ．
3． 3 稳定性试验
根据实验方法 2． 4 所述稳定性试验方
法测得峰面积数据分别为 1383． 355，
1363． 697，1410． 744，1392． 779，1339．
603．峰面积的平均值为 1378． 036，SD 为
24． 487，SE 为 4. 897，岩白菜素 RSD 为 1．
78% ．
3． 4 样品的测定
按照方法 2． 5 所述样品的测定方法对不同海拔岩白菜素含量进行测定，其结果见表 1．所得样品的岩白
菜素高效液相色谱图见图 2，其对照样品的高效液相色谱图见图 3．在测定过程中，样品与标准品的峰保留时
间均为 6． 73min．
第 32 卷第 4 期 程 犇，等: Hplc法测定峨眉岩白菜中岩白菜素方法 319
3． 5 重现性试验
重现性试验所得峰面积数据分别为 1358． 679，1379． 372，1349． 657，1392． 109，1423． 582．峰面积平均值
为 1380． 68，SD值为 26． 151，SE为 5． 23．该批样品中岩白菜素的相对标准偏差( RSD) 为 1． 89% ．
3． 6 回收率试验
回收率实验所得结果见表 2．
表 2 峨眉岩白菜中岩白菜素加样回收率测定结果
Tab． 2 Recovery experiment of bergenin
样品称样量 / ( g) 加入量 / ( mg) 测得量 / ( mg) 回收率 / ( % ) 平均值 / ( % ) RSD / ( % )
0． 2135 2． 35 4． 64 98． 70
0． 1997 2． 43 4． 59 99． 23
0． 2032 2． 10 4． 39 101． 35 99． 37 1． 15
0． 1972 2． 50 4． 57 97． 92
0． 2059 2． 35 4． 60 99． 65
4 讨 论
稳定性试验中岩白菜素含量的相对标准偏差为 1． 78%，在中国药典规定的范围内，说明岩白菜素的样
品溶液比较稳定可以满足测试的要求．
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重现性试验所测得的相对标准偏差小于 2%，说明仪器获得的数据有较好的重现性，能够真实准确的反
应实验结果．
精密度试验所得的 RSD值在规定的范围内，说明采用该方法所得结果精密度较好．
试验了流动相甲醇∶ 水在五种不同的浓度比例下分别为 ( 20%甲醇、40%甲醇、60%甲醇、80%甲醇、
100%甲醇) ，峨眉岩白菜中各成分的分离情况，结果显示甲醇∶水( 20∶ 80) 的比例时，岩白菜素峰型良好．
对比了不同溶剂的提取效果，选用的溶剂为水，20%甲醇，40%甲醇，60%甲醇，80%甲醇，100%甲醇，在
相同的超声条件下提取试验所得峰面积的平均值分别为 1290． 374、1313． 218、1362． 569、1303． 309、1255．
792、1219． 356 结果表明当选用 40%甲醇为溶剂时，所得的岩白菜素峰面积平均值为 1362． 569 容量最高，说
明选用 40%甲醇提取效果最好．根据相似相容的原理，当溶剂为 40%的甲醇时，它的极性与岩白菜素的极性
更相似，所以提取效果更好．
随着海拔的升高峨眉岩白菜中岩白菜素的含量有逐渐减少的趋势．峨眉岩白菜为喜阴植物，随着海拔的
升高空气中含氧量相对会减少，加之气温随着海拔升高也会降低可能会影响岩白菜素的合成．
本文建立了用高效液相色谱测定峨眉岩白菜中岩白菜素含量的方法，本方法快速、简便且受外部的干扰
少，实验结果准确，适用于对峨眉岩白菜中岩白菜素含量的测定．
参考文献:
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［7］ 丁家欣，张秋海，张 玲，等． HPLC法测定不同产地与采收期虎耳草中岩白菜素的含量［J］．中国中药杂志，2002，10:792 －793
Comparison of Bergenin Contents of Bergenia emeiensis
in Different Altitude in E mei
CHENG Ben，LI Yun-xiang，QUAN Qiu-mei，XIAO Hang，GONG Xin-yue
( College of Life Sciences，China West Normal University，Nanchong，Sichuan province 637009，China)
Abstract: The molecular formula of Bergenin is C14H16O9 ． Bergenin belongs to polysuhtituedisocoumarin ，with the
form of white loose needle crystal or crystal powder． A HPLC method for bergenin determination Bergenia purpuras-
cens employed． The method employed chrom atography column XDB － C18( 4． 6* 150mm，5μm) ，mobile phase
methanol∶ water = 20: 80，flew velocity 0． 9ml /min，detection wavelength 275 nm，and the column temperature of
30℃ ±0． 5． The standard curves of bergenin showed good linearity within the range of 0． 102 － 1． 02μg，R2 = 0．
9981． The average recovery was 99． 37%，RSD was 1． 724% ． Different bergenin contents of differents altitudes
were obtained for the planting of bergenin and the development of medicinal value．
Key words: HPLC; Bergenia emeiensis; bergenin