全 文 ：d ib le fu n g i 2010（4）
褐环粘盖牛肝菌液体发酵过程中菌丝活力研究
薛振文 1，2 应国华 1，2 吕明亮 1，2 李伶俐 1，2 王 益 3 田苏奎 4 郑泽仁 5 高凤娟 6
（1丽水市林业科学研究院，浙江丽水 323000；2丽水市大山菇业研究开发有限公司，浙江丽水 323000；3丽水市白云生态林场，浙江丽水 323003；
4 缙云县括苍山林场，浙江丽水 321400；5 缙云县大洋山林场，浙江丽水 321400；6 丽水学院，浙江丽水 323000）
摘 要 以褐环粘盖牛肝菌菌球形状、大小、色泽、培养液颜
色、摇瓶壁沉积物、菌丝球得率为评价指标，描述了发酵过程中
菌丝活力变化情况，同时用量化的方法测定菌丝活力，结合两
种方法全面的评价了褐环粘盖牛肝菌液体发酵过程中菌丝活力
的变化情况。结果表明：褐环粘盖牛肝菌在液体培养 14~18 d 收
获，菌丝体活性最好，菌丝量基本上达到最大，是菌丝体理想的
收获阶段。
关键词 褐环粘盖牛肝菌 液体发酵 菌丝活力 评价方法
文章编号 1000-8357（2010）04-0012-02
收稿日期：2010-04-02
基金项目 ： 浙江省科技项目 “菌根技术培育牛肝菌 ”
2007C22087、 省院合作项目 “牛肝菌菌根林营造技术研究与示范”
2006SY03、丽水市科技项目“褐环粘盖牛肝菌人工栽培技术中试示
范”LKjZB200702。
褐环粘盖牛肝菌[Suillus luteus（L.:Fr） Gray]是一种优良的
菌根食用菌，在国内广泛分布，它不仅具有很好的促生长作用[1]，
还是国内商品食用菌种类之一，也是出口的野生食用菌之一。
褐环粘盖牛肝菌液体培养及菌剂制作是实现其人工栽培产业
化开发的基础，而液体培养中菌丝体活力的研究是液体培养的
前提，更是菌剂规模化生产的关键技术。李敏[2]等从酶学的角度
研究发现菌丝体的酸性磷酸酶活性、菌丝体相对电导率可作为
反映菌丝体活力的指标，但在实践生产中快速、准确辨别菌丝
体活力的可操作性不大。 研究从实践生产出发，用两种简便的
方法评价菌丝体活力，现将研究报告如下：
1 材料与方法
1.1 供试菌株 褐环粘盖牛肝菌，菌种为丽水市林业科学研
究院食用菌研究所保藏。
1.2 培养基 ME 培养基。
1.3 液体培养方法 培养条件均为 500 mL 三角瓶中分装
320 mL 液体培养基， 将平板培养基上的菌丝体划成 2 cm2的
小块，接种量为 1块/瓶，25℃、150 r/min振荡培养 14 d后处理。
1.4 菌球活性定性测定方法 评价体系：以菌球形状、大小、
色泽、培养液颜色、菌丝球得率为评价指标综合评价菌丝活性。
1.5 菌球活性定量测定方法 随机取液体培养不同阶段的
100 颗菌球放置于平板培养基上，分别在第 5 天和第 10 天观
察萌发情况并记录。
萌发率/%=萌发数/接种总数×100
2 结果与分析
2.1 液体发酵过程菌丝的形态描述法 菌球的形状、 大小、
色泽、菌丝球得率、培养液颜色、摇瓶壁沉积物是构成菌丝活
力评价体系的重要指标。 各个指标统一描述了液体发酵过程
中菌丝的活力情况。 菌丝的形态描述如表 1。
表 1 中，菌丝体的形状都为球形，前 14 天菌球表面无刺，
从第 18 天开始菌球表面有刺。表面有刺与否与菌丝体的活力
关系密切，一般活力好的菌丝体容易断裂，球表面的各个生长
点即刺状菌丝容易断裂形成新的繁殖体， 表现为菌球表面光
滑无刺。 说明从第 18 天开始菌球开始有衰老的趋势。
菌球大小与菌丝活力关系密切，菌球活力好，球表面的各
个生长点容易断裂，表现为菌球体积不会增大。经解剖菌球结
构发现，菌球中心部分菌丝变黑，有自溶现象，菌球表面为白
色。表明菌球体积大，内部菌丝由于缺氧或营养的不足慢慢失
去活力或变弱，而外部菌丝活力旺盛。 由表 1 知，随着发酵时
间的推移，菌球增大。 表明菌球活力在减弱。
菌球的色泽是衡量菌丝活力最直观的指标， 当液体发酵
到第 14 天时菌球为白色，菌丝活力最好，到第 18 天时菌球变
为淡黄色，开始衰老。
摇瓶壁沉积物是液体中菌丝体沉积在壁上形成的。 摇瓶
壁沉积物颜色可直观判定菌丝活力， 也可作为辨别是否感染
杂菌的标示。 当液体发酵到第 14 天，摇瓶壁沉积物颜色为白
色，表明菌丝活力好；当到第 18 天后沉积物颜色变为淡黄色
和黄色，菌球开始衰老。
液体发酵过程中， 菌丝球得率增加实际上包括菌球增大
和菌球数量增多两个方面。 有效菌丝球得率是指有活力的菌
丝生物量，菌球越大，有效菌丝球得率越低。 因而菌球较小是
液体发酵理想状态。 随着发酵时间的推移， 菌丝球得率在增
加。 而有效菌丝球得率会随着菌球活力的减弱变小。
培养液颜色的深浅是由菌丝体利用营养成分的程度和菌
球老化分泌的色素两方面决定的。液体发酵前期，培养液颜色
的深浅反映了菌株利用营养成分的程度。由表 1 知，培养液颜
色在第 14 天变为淡黄色， 表明培养液中营养成分开始不足，
无法较充分的满足菌丝生长的需要， 预示着菌球的活力会减
弱。 因而培养液颜色是判定菌球活力的预示性指标。
综上可知，随着液体发酵时间的推移，菌球的各评价指标
都在发生着动态的变化。 菌球和摇瓶壁上的沉积物颜色在加
深，培养液颜色在减弱，菌球在增大，菌球表面刺逐渐增多，菌
表 1 褐环粘盖牛肝菌液体发酵过程中菌丝的形态
编
号
液体培养
时间/d
菌球
形状
菌球
大小
色泽
培养液
颜色
摇瓶壁
沉积物
湿重
g/瓶
1 6 有或无菌球 有或无菌球 白色 红褐色 壁上无白色菌丝 3.67
2 10 球形、无刺 菌球较少、约 1 mm 白色 红褐色 壁上有或无白色菌丝 6.66
3 14 球形、无刺 菌球较小、1~3 mm 白色 淡黄色 壁上有白色菌丝圈 18.71
4 18 球形、无刺或刺少 菌球较小、1~3 mm 淡黄色 淡黄色 壁上有淡黄色菌丝圈 20.21
5 26 球形、无刺或有刺 菌球较大、1~4 mm 棕色 淡黄色 壁上有黄色菌丝圈 23.18
生 理 生 化
12
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丝球得率在增加，但有效菌丝球得率会先增后减。
2.2 液体发酵过程菌球活力测定法 一般而言，回接到平板
上的菌球萌发率越高说明菌丝活力越强。 取不同生长期的菌
球回接到平板培养基上，分别在回接的第 5 天和第 10 天观察
菌球萌发情况，统计结果如图 1。
在适宜的条件下，菌球的活性越好，萌发越快。 将液体发
酵 10 d、14 d、18 d和 26 d的菌球回接到平板培养基上培养 5 d
后菌球的萌发情况如图 1， 发酵第 14 天和第 18 天的菌球萌
发率分别高达 80%和 78%， 而发酵 26 d 的菌球萌发率仅为
45%。 表明发酵第 14 天和第 18 天的菌球活力较好， 而发酵
26 d 的菌球活力较差。
菌球萌发慢说明活力较弱，但仍能萌发，说明菌球还有活
力。 将液体不同发酵阶段的菌球回接到平板培养基上培养
10 d 后菌球的萌发情况显示： 发酵 10 d、14 d、18 d 的菌球萌
发率分别高达 94%、99%、98%， 而发酵了 26 d 的菌球萌发率
仅为 73%。 此结果表明菌球发酵到第 18 天，98%菌球的菌球
有活力， 而发酵 26 d 的菌球仅有 73%有活力，27%的菌球已
经失去活力。
从整个发酵过程分析，液体发酵 14~18 d，98%~99%菌球
有活力，78%~80%菌球活力较好。 但液体发酵 26 d，仅 73%菌球
有活力，45%菌球活力较好。 因而液体发酵的收获期为 14~18d。
3 结论与讨论
形态描述法中评价体系的各评价指标定性的说明了液体
发酵过程中，菌球的活力变化情况。培养时间的长短直接影响
到菌丝量和菌丝活力，培养时间越长，菌丝量增大，但菌丝活
力减弱，有效菌丝球得率减低；相反培养时间较短，菌丝活力
虽强，但菌丝量很少，有效菌丝球得率也很低。 研究确定出褐
环粘盖牛肝菌液体发酵 14~18 d 效果最好， 表现为菌球及摇
瓶壁上沉积物都呈白色，菌球较小、无刺或刺少，培养液中的
营养成分利用完全，有效菌丝球得率较高。
菌球活力测定法将菌球活力用量化的方法得出结论：褐
环粘盖牛肝菌液体发酵 14~18 d，98%~99%菌球有活力，78%
~80%菌球活力较好。 但液体发酵 26 d， 仅 73%菌球有活力，
45%菌球活力较好。 因而液体发酵的收获期为 14~18 d。
两种方法从定性和定量两个角度， 统一的确定了褐环粘
盖牛肝菌液体发酵终点（即菌丝最佳收获期）为 14~18 d。
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图 1 菌球活力测定
100
80
60
40
20
0
10 14 18 26
液体培养时间/d
萌
发
率
/%
回接第 5天
回接第 10天
生 理 生 化
!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!!
（上接 P2）
13