全 文 ：云 南 农 业 科 技
YunnanNongyeKeji2008年第1期
富,Mo较丰富,缺Zn面积大,缺B面积较大。土壤中
有效态Zn、Mn、B、Mo各县的含量差别较大。
参考文献:
[1]鲁如坤.土壤农业化学分析方法 [M].北京:中国农业出版社,
1999,205～226.
[2]苏德成.烟草栽培 [M].北京:中国财政经济出版社,2000,
64～66.
[3]袁可能.植物营养元素的土壤化学 [M].北京:科学出版社,
1983,46～251.
[4]余存祖,彭琳.黄土区土壤微量元素含量分布与微肥效应[J].
土壤学报,1991,28(3):317～326.
[5]王德宣,富德义.吉林省西部地区土壤微量元素有效性评价
[J].土壤,2002,34(2):86～93.
[6]陶晓秋.四川西南烟区土壤有效态微量元素含量评价[J].土壤,
2004,36(4):438～441.
桃红牛肝菌菌种的制备
孔治有,覃 鹏,汪建云
(保山师范高等专科学校,云南 保山 678000)
摘 要:桃红牛肝菌是菌根菌。若提供适宜的培养基和外界条件,则其菌丝可脱离与植物的共生关系而生长。探索
了桃红牛肝菌菌丝生长的水分、温度、培养基等因子,并提供了较好的菌种制备方案,可制出适宜于大规模试验用
的菌种。
关键词:牛肝菌;菌种;制备;自溶
众多的真菌资源中蕴藏着丰富的食用菌,其中很
大一部分为野生贸易真菌,是云南各地农贸市场上重
要的农副产品[1],其中牛肝菌类是一群食、毒均多的真
菌,全国各地都有分布,从统计看,云南的数量是最
丰富的[2]。牛肝菌等菌根食用菌与林木的根系形成共生
体,能够扩大林木根系的吸收面,增强根系吸收矿物
质、水分和含碳有机物的能力,从而促进林木生长[3],对
林木的生长具有重要意义。目前,云南省野生食用菌
的开发与保护很不协调,资源破坏严重,野生食用菌
的开发利用基本上处于 “自然生长、自由采摘、自发
交易”的状态 [4],这对野生菌和森林都带来了负面影
响。桃红牛肝菌 (BoletusregiusKrombh)既可食用,
又可入药,且具有抗癌活性[5],因此探讨其驯化、栽培
具有重要意义。但是目前相关报道极少,我们对此进
行了初步研究。在前期工作中,其菌丝已在试管内能
正常生长,但仅在试管内制备菌种是无法满足人工栽
培、半人工模拟栽培 (或称半人工模拟合成)、人工
促繁技术 (或称生态繁殖)[6]等试验的。本实验旨在从
水分、温度、培养基等条件着手探索桃红牛肝菌菌丝
在较大容积菌种瓶内生长的可能性,以便为较大规模
乃至工厂化生产提供理论依据。
1 材料与方法
1.1 材料
桃红牛肝菌菌株由保山师范高等专科学校生物实
验室于2003年7月从市场购回桃红牛肝菌分离得到。
1.2 方法
本实验于2004年8月21日至10月6日在云南保山进
行。试验根据小米的有无壳和3种水分梯度设计了6种
处理水平,分别编号为1～6,具体处理方法如下:
(1)无壳低水 (加水25ml); (2)无壳中水 (加水50
ml); (3)无壳高水 (加水100ml); (4)有壳低水
(加水25ml); (5)有壳中水 (加水50ml); (6)有
壳高水 (加水100ml)。每种处理都加小米50g,并进
收稿日期:2006-10-12
项目来源:保山师范高等专科学校校级课题(项目编号:04B015K)。
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行5次重复测定。所有处理都在250ml菌种瓶中进行。
用棉塞将瓶封口,在121.5～126℃下灭菌1小时,
冷却后在每瓶内接种一块桃红牛肝菌菌种 (约豌豆大
小)。将菌种瓶放置到20～25℃恒温培养箱中全黑暗培
养至菌落形成,并在接种3天后测定其生长速度及生
长势。再将1～6组培养基依次放入20～25℃、25～30℃、
0～5℃、6～20℃的环境中分别培养3天,并测出其生长
速度 (mm/天)和生长势 (优、良、中、差)。所有
数据用SPSS软件进行统计分析。
2 结果与分析
2.1 不同处理对菌落形成的影响
从菌落形成 (表1)可知,无壳低水及有壳低水
处理的菌落最大,而在其它处理之间没有显著差异。
从菌落差异性检验 (表2)可知,各水分梯度处理间
差异极显著,而有壳、无壳则无差异。说明菌落形成
的主要限制性因素是水分,而有壳、无壳则没有显著
影响。
2.2 不同处理对菌丝生长速度的影响
从图1可知,在20～25℃下,无壳中水及无壳高水
培养基中的菌丝生长较快;在25～30℃下,有壳低水
培养基中的菌丝生长较快;在6～20℃下,无壳高水培
养基中的菌丝生长较快,其它处理菌丝的生长速度都
较慢;而当温度为 0～5℃时,所有处理的菌丝基本停
止生长。从生长速度差异显著性检验 (表 3)可知,
在 20～25℃下,有壳无壳对菌丝生长速度的影响存在
极显著差异,而各水分梯度间对菌丝生长速度的影响
不显著;在 25～30℃下,水分梯度对菌丝生长速度具
有显著影响,而有壳无壳对菌丝生长速度的影响不显
著;在0～5℃及 6～20℃下,所有处理对菌丝生长速度
的影响都不存在显著差异。
2.3 不同处理对生长势的影响
生长势差异显著性检验 (表 4)表明,在整个生
长过程中,除在25～30℃及0～5℃下,有壳、无壳生长
势差异性检验不显著外,其余温度处理及有壳、无壳
都存在显著或极显著差异。
从表5可知,有壳高、中水对菌丝生长势的影响
是较有利的;虽然无壳高、中水对菌丝前期的生长有
利,但后期却出现了异常现象。
2.4 满瓶时统计结果
有壳中、高水处理的菌丝生长优,菌丝浓白,较
好;无壳高水处理的菌丝自溶较多,无壳中水处理的
菌丝也出现一定的自溶现象;无壳低水处理的菌丝生
长势弱,而有壳低水处理的菌丝生长势最差。
3 讨论
在小米有壳无壳条件下采用不同水分梯度的培养
基对桃红牛肝菌菌丝进行培养,其中无壳低水情况下
生长势弱,而无壳中、高水时前期生长势好,但满瓶
时菌丝出现自溶现象。有壳低水时菌丝生长势较差,
而有壳中、高水处理则可获得较好的菌丝。因无壳小
表1 菌落形成统计
注:**差异极显著,*差异显著。
表2 菌落差异显著性检验
图1 不同处理的菌丝生长速度
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表3 菌丝生长速度差异显著性检验
注:**差异极显著,*差异显著。
米煮后小米间间隙随含水量增大而减小,因此无壳
中、高水2组处理因通气较差出现菌丝自溶,而无壳
低水处理因含水量太少使菌丝生长势较差;有壳小米
煮后小米间间隙也随含水量增大而减小,但在料水比
1∶1或1∶2的情况下,培养基的通气状况能满足250ml
菌种瓶内桃红牛肝菌菌丝的生长,但在料水比1∶0.5的
情况下有壳小米的生长势也很差,这说明桃红牛肝菌
菌丝在生长过程中需要保证充足的氧气和适宜的水
分。
温度对桃红牛肝菌菌丝生长影响较大。在0～5℃
条件下,菌丝停止生长;在6～20℃时,菌丝生长也极
为缓慢;在20～25℃时,菌丝生长较好 (菌丝浓密、
色白、呈放射状);在26～30℃时,菌丝生长更快,菌
丝代谢加强,甚至会在瓶壁凝聚水珠,这时若培养基
通气状况差,便会出现菌丝自溶现象。而且在这一温
度下生长出来的菌丝较为稀疏。综合以上因素可知,
桃红牛肝菌菌丝在脱离与植物的共生关系后能耐低
温,但只有在适宜温度下(20～25℃)才能正常生长。
4 结论
桃红牛肝菌菌种制备可采用有壳小米做培养基,
因小米煮后的间隙仍可维持培养基的正常通气状况;
当采用带壳小米培养时,料水比可控制在1∶1与1∶2之
间,这能保证菌丝不仅具有充足的氧气,而且更能满
足其对水分的需求;桃红牛肝菌菌丝与植物脱离共生
关系后,最适宜的培养温度是20～25℃,当温度过高
注:**差异极显著,*差异显著。
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表5 U检验成果表
时会导致菌丝生长稀疏,而过低则会导致菌丝生长缓
慢甚至停止生长。
参考文献:
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策 [J].生物多样性,2005,13(1):58～69.
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[6]弓明钦,陈羽,王凤珍,等.松茸 [M].昆明:云南科技出版
社,1999,103～112.
佩罗基金资助项目获得批准
中国国际经济技术交流中心通报,常驻联合国代表团
明传电报告知,经 77国集团专家委员会第 22次会议审
议,由云南省农业科学院与云南省商务厅联合申请佩罗基
金资助的南南合作 “大湄公河次区域国家可持续发展农业
技术培训”项目已获得批准。
该项目旨在通过在越南、老挝等大湄公河次区域国家山
区引进及示范在云南山区成功应用的陆稻生产技术,对项目
区的农业行政管理人员、技术人员及农户进行培训,以大幅
度提高当地的陆稻产量,实现粮食自给及保证粮食安全,以
技术培训促进贸易交流与合作,实现云南及周边地区农业可
持续发展。该项目不仅是云南省首次获得佩罗基金资助,而
且是2007年度中国获得资助4个项目中,经费最多的一个。
目前,该项目的实施前期各项准备工作正在进行中。
李 露 (云南省农业科学院 650231)
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