全 文 ：临床与医疗
152 科技展望 2014/15
1 前言
牛肝菌类是牛肝菌科和松塔牛肝菌科等真菌的统称，除少
数品种有毒或味苦而不能食用外，大部分品种均可食用。目前
全国已发现的牛肝菌约有 26种，其中在云南有 22种，有 11
种为云南省所独有。牛肝菌不但美味可口，营养丰富 ,经常服
用还有较好的防治保健及辅助作用，故而深受人们的青睐 [1-3]。
药理研究表明，牛肝菌具有调节免疫力、抗肿瘤、降血脂、降
血压、预防心血管疾病等功效 [4-5]。为确认牛肝菌的有效成分，
人们对牛肝菌的成分进行了研究，表明牛肝菌富含蛋白质、多
糖、维生素及钙、磷、铁等矿物质 [6]。在所含有效成分中，以
多糖和蛋白质最为引人瞩目。现代研究表明，菌类多糖具有增
强免疫力，抗肿瘤，增强免疫力之功效。但到目前为止，有关
牛肝菌多糖的研究还未见报道。为此，本文采用水提醇沉法对
其多糖进行了提取，然后采用硫酸 -蒽酮法对其含量进行了测
定，最后采用 DPPH法和总还原力法对各种牛肝菌多糖的抗氧
化能力进行了研究，从而为其进一步综合利用提供理论依据。
2 实验部分
2.1 仪器与试剂
仪器：N-1100旋转蒸发仪 (上海爱朗仪器有限公司 )、
TGL-16C高速台式离心机（上海安亭科学仪器厂）、CP214电
子天平 (感量为 1mg,上海奥豪斯仪器有限公司 )、0401A-1型
远红外不锈钢高温烘箱（上海市崇明实验仪器厂）、TU-1810
紫外分光光度计 (北京普析通用用仪器有限责任公司 )。
试剂：石油醚 (沸程 60～ 90℃ )、乙醇、丙酮、乙醚、
葡萄糖、硫酸、蒽酮、DPPH、磷酸氢二钠、磷酸二氢钠、铁
氰化钾、三氯乙酸、氯化铁。
牛肝菌的收集和预处理：将牛肝菌清洗干净，60℃烘干至
恒重 ,粉碎成粉末 ,过 100目筛，然后 70℃烘干至恒重，取出
后置于真空干燥器中备用。
2.2 牛肝菌多糖提取 [7]
称取 20g牛肝菌样品，置于圆底烧瓶中，加石油醚 (沸
程 60～ 90℃ )150mL，90℃水浴脱脂 4h，将溶剂挥干（在通
风橱中），加入 80%乙醇 80mL，以回流装置 90℃回流提取
2h，重复提取一次，滤纸过滤，滤渣挥干溶剂置于圆底烧瓶
中，加 120mL蒸馏水，沸水浴回流提取 2h，滤纸过滤，再以
120mL蒸馏水重复提取一次，两次滤液合并，真空浓缩 (60℃，
真空度 0.095MPa)至 150mL，Sevage法除蛋白，反复进行至
无蛋白层，加入无水乙醇使乙醇浓度达到 80%，于 4℃冰箱中
过夜，离心 (6000r/min，10min)，多糖沉淀依次用无水乙醇、
丙酮、乙醚各洗两次，60℃干燥至恒重，即得牛肝菌精制多糖。
称重备用。
2.3 牛肝菌多糖含量的测定 [7]
称取干燥至恒重的葡萄糖标准品 24.6mg,置于 100mL容
量瓶中 ,以蒸馏水定容至刻度 ,配成 0.246mg/mL的标准液。
分别精确吸取标准液 1、2、3、4、5mL置 10mL容量瓶中 ,以
蒸馏水稀释定容得系列标准溶液。精确吸取各标准溶液 1mL,
置 10mL具塞试管中 ,加入 0.2%硫酸蒽酮试液 4mL,摇匀 ,冰
水浴 10min,立即置于沸水浴加热 15min,取出用冷水冷却至室
温并放置 10min，620nm处测定吸光度。另精密吸取蒸馏水
1mL,同法操作 ,作为空白对照。样品的测定步骤同上。
2.4 牛肝菌粗多糖抗氧化试验
2.4.1牛肝菌多糖对 DPPH的清除作用 [8-9]
准确称取 DPPH0.0030mg，用乙醇定容至 100mL，置于黑
暗处。用乙醇调节零点，将 2mL牛肝菌待测样品，1mLDPPH
自由基溶液依次加入试管中，于黑暗条件下反应 30min，后于
515nm下读取吸光度为 A；取 2mLl乙醇，1mLDPPH自由基
溶液依次加入试管中，于黑暗条件下反应 30min，后于 515nm
下读取吸光度为 A1；取 2mL牛肝菌待测样品，1mL乙醇依次
加入试管中，于黑暗条件下反应 30min，后于 515nm下读取吸
光度为 A0；所有样品均测试 3次。依据下列公式计算清除率：
%1001
1
0 


 
A
AA清除率
A：样品组与 DPPH溶液混合后的吸光度值；A0：样品本
身的吸光度，以蒸馏水代替显色剂；A1：DPPH溶液的吸光度值。
2.4.2牛肝菌总还原力的测定 [9,10]
取 pH=6.6的磷酸缓冲液和质量分数为 1%的铁氰化钾溶
液各 0.5mL,加入不同质量浓度的多糖溶液 1.5mL,混匀后 50℃
水浴 20min,然后加入质量分数为 10%的三氯乙酸溶液 1mL
终止反应，混匀 800r/min离心 10min，取上清液 3mL,再加
入质量分数为 0.1%的氯化铁 0.5mL，混匀，静置 10min，于
700nm处测定吸光度。所有样品均测试 3次。
3 结果与分析
3.1 葡萄糖标准曲线的绘制
由图 1知，以吸收度 A为纵坐标 ,葡萄糖浓度 C(μg/mL)
为横坐标作标准曲线 ,得回归方程为 :A=6.7319c+0.012。葡
萄糖标准曲线的相关系数 R2=0.995,表明质量浓度在 0.025ug/
mL～ 0.124ug/mL时，葡萄糖的质量浓度与吸光值之间呈现出
良好的线性关系，很好的符合了朗伯—比尔定律。
六种常见牛肝菌多糖含量及其抗氧化活性研究
杨 强 罗家雄 史俊友
（曲靖师范学院，云南 曲靖 655011）
摘 要：云南省独特的地理位置和自然环境孕育了丰富的牛肝菌资源，其品种丰富，产量巨大，但目前为止对其
营养成分和功效的比较研究还很少。为此本文以白牛肝、黄牛肝、酸牛肝等六种常见牛肝菌的多糖进行研究：首先采用
水提醇沉法对牛肝菌多糖进行提取，后以葡萄糖为标准采用紫外分光光度计对牛肝菌中多糖含量进行测定，最后采用
DPPH 和总还原力法比较了六种牛肝菌多糖的抗氧化能力。结果表明，白牛肝和酸牛肝多糖含量较高，其抗氧化能力也
较强。
关键词：牛肝菌 多糖 抗氧化
中图分类号：A715 文献标识码：A 文章编号：1672-8289（2014）15-0152-02
科技展望 2014/15 153
临床与医疗
图 1 葡萄糖标准曲线
3.2 牛肝菌多糖含量的测定
表 1 多糖含量测定结果
牛肝
菌种类 黄牛肝 酸牛肝 白牛肝 黑牛肝 葱菌 见手青
多糖含量
(g) 4.05 4.80 3.52 2.26 3.78 2.89
依据图 1葡萄糖标准曲线，利用外标法得六种牛肝菌多糖
含量，结果见表 1。黄牛肝、酸牛肝、白牛肝、黑牛肝、葱菌、
见手青的多糖含量分别为 4.05g、4.80g、3.52g、2.26g、3.78g、
2.89g,可知黄牛肝和酸牛肝多糖含量最高，白牛肝和葱菌次之，
黑牛肝最低。
3.3 牛肝菌粗提物抗氧化能力研究
3.3.1牛肝菌多糖对 DPPH的清除作用
由图 2可知，六种牛肝菌多糖对 DPPH的清除能力相似。
在 50-1600μg/mL浓度范围内，随着多糖浓度的增加，该提取
物对 DPPH的清除率逐渐增加；六种牛肝菌多糖对 DPPH的清
除能力均出现此种趋势。其中黄牛肝多糖清除 DPPH自由基能
力较强。
图 2 六种牛肝菌多糖对 DPPH 的清除作用
3.3.2六种牛肝菌多糖提取物总还原力测定
由图 3可知，牛肝菌多糖质量浓度越大，吸光度越高，说
明还原性物质的还原能力越强。从图 3看出，六种菌多糖提取
物总还原力在 50-1600μg/mL浓度范围内，随着粗提取物浓
度的增加，吸光度逐渐增大，还原力逐渐增强。六种牛肝菌
总还原力的大小均出现此种趋势。相比较而言，白牛肝总还
原力稍强。
图 3 六种牛肝菌粗提取物还原力
参考文献：
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JPJNutr,1986,44:307-315.
基金项目：本文系曲靖师范学院综合设计性实验：
Syjx2013009。
作者简介：杨强（1992-）, 男，汉族，云南沾益人，曲
靖师范学院化学化工学院本科在读，研究方向：天然产物研
究与开发；罗家雄（1992-），男，汉族，云南会泽人，曲靖
师范学院化学化工学院本科在读，研究方向：天然产物研究
与开发；史俊友（1981-），男，汉族，山东济阳人，博士，
曲靖师范学院化学化工学院副教授，研究方向：天然产物研
究与开发。
y = 6.7319x + 0.012
R2 = 0.995
0
0.1
0.2
0.3
0.4
0.5
0.6
0.7
0.8
0.9
1
0 0.02 0.04 0.06 0.08 0.1 0.12 0.14
葡萄糖的质量浓度
吸
光
度