全 文 ：第 2 3 卷第 6 期 无 锡 轻 工 大 学 学 报
al of W u x i U niv ers i t y of L i gh t I nd u s t y r
V ol
.
2 3
N ov
.
N O
.
b
2 0 0 4
文章编号 :1 0 0 9一0 3 8 X( 2 0 0 4 ) 0 6 一0 0 96一 0 4
美味牛肝菌深层发酵条件的优化及成分分析
邓百万 , 陈文一强
( 陕西理 工学院陕西省资源生物 重点实验室 , 陕西 汉 中 7 2 3 0 0 1)
摘 要 : 对 美味牛肝菌 ( B ol et u 、 。 d ul i 、 ) 深层发酵条件及 菌丝体主要 营养成分进行 了分析研究 , 结
果表明 , 最适培养基 配方 为 : 葡 萄糖 3 0 . 0 9 , 玉 米粉 20 , 。 g , 酵母 膏 7 . 0 9 , K H Z P O ; 2 . 0 9 ,
M g S O
4 · 7 H
Z
O 1
.
0 9
,
V B
: 0
.
0 1 m g
,
C a C O
3 2
.
0 9 ; 最优发酵条件的初始 p H 值 5 . 2一 5 . 8 , 振荡
速度 180 : / m in , 培养温度 27 ℃ , 10 0 m L 三角瓶装液量 6 0 m L . 并对美味牛肝菌深层培养菌丝体中
蛋白质成分 、 灰分 、 脂肪 、 粗纤维 、 矿物质及 多糖等进行 了浏 定和分析 .
关键词 : 美味牛肝菌 ; 深层发酵 ; 优化 ; 成分分析
中图分类号 : T Q 9 20 . 6 文献标识码 : A
S t u d y o n S u b m e r g e d F e r m e n t a t i o n a n d A n a l y s is o f
M a i n C o m P o n e n t s o f B o l e t u s e d u l i s
D E N G B a i
一
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,
C H E N W e n
一
q i a n g
( S h a a n x i K e y L a b o r a t o r y o f B i-o r e s o u r s
,
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v o r s i t y o f T e e h n o lo g y
,
H a n z h
o n g 7 2 30 0 1
.
C h i n a )
A b s t r a e t : T h i s p a p e r e x p lo r e s t h e s u i t a b l e f e r nr e n t a t i o n
e c n d i t i o n s a f f e e t i n g t h e nr y e e l i
a
g r o w t h o f
B o l e t u 、 e d u Zi s
.
E x p e r im e n t a l r e s u l t s i n d ie a t e d t h a t t h e o F
, t im u m e o nr p o s i t i o n o f t h e f
e r nr e n t
a 飞i o n
m e d i u m 15 a s f o l l o w i n g
:
g l u e o s e 30
,
0 9
,
C o r n m e a l 2 0
.
0 9
,
y e a s t e x t r a c t 7
.
0 9
,
K H : P O
; 2
.
0 9
,
M g S O
; · 7 H
Z
O 1
.
0 9
,
V B : 0
,
0 1 m g a n d C a C O
3 2
.
0 9
.
T l
l e h ig h e s t y i e ld o f m y e
e
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a w a s o b t a i n
e
d
u n d e r t h e e o n d i t i o n s w h e n t h e s h a k e r r o t a t i o n s p e e d
,
p H
,
t e m p e
r a t u r e a n d m e d i u m l o a d i n g
a m o u n t w e r e e o n t r o l l e d a t 1 8 0 r / m i n
,
5
.
2一 5 . 8 , 2 7 它 , a n d 6 0 m L / 10 0 m L , r e s p e e t iv e ly .
K e y w o r d s : B o l e t u s e d u l i s ; s u b m e r g e d f e r m e n t
a t i o n ; o p t im u m ; e o m p o n e n t s a n a l y s i s
美味牛肝菌 ( B o l e r u 、 。d u l i 、 B u l l . e x F r . )俗称
大脚菇 ,属层菌纲 , 伞菌 目 , 牛肝菌科 , 牛肝 菌属 , 分
布于 四川 、 云南 、 福建 、 陕西等地 . 其菌肉厚而细软 ,
味道鲜美 , 营养丰富 , 是人们最喜欢的野生食用菌
之一 1[, 2〕 . 长期食用能增 强机体免疫能 力 , 具抗肿
瘤 、 抗突变 、 降血脂 、 抗病毒等作用 . 该菌提取物对
小白鼠肉瘤 18 0 的抑制率为 10 0写 , 对艾氏腹水癌
的抑制率为 90 %比 ` j . 该菌还产生腺嗓岭 、 胆碱和腐
胺等生物碱 ,可药用 , 是 “ 舒筋丸 ” 的成分之一 , 可治
疗腰腿疼痛 , 手足麻木 , 筋骨不舒 , 四肢抽搐 , 是一
种食药兼 用 的山珍 品川 . 由于美味 牛肝菌是菌根
菌 , 目前不能人工栽培 ,野生资源不能满足人们的需
要 ,液体发酵获得营养菌丝取代 一子实体是解决这一问
题的有效办法 . 为此 ,对美味牛肝菌深层发酵条件进
行了优化研究 ,对菌丝体主要营养成分及质量进行了
分析测定 ,为开发利用真菌资源提供参考依据 ,
收稿 日期 : 2 0 0 4 一0 2一 2 2 ; 修回日期 : 2 0 0 4 一0 3一 2 5 .
基金项 目 : 陕西省教育厅专项科研基金项 目 ( 9 9J K 10 9 )资助课题 .
作者简介 : 邓百万 ( 19 63 , ) ,男 , 陕西眉县人 , 副教授 .
第 6 期 邓 百万等 :美味牛肝菌深层发酵条件的优化及成分分析
1 材料与方法
1
.
1 材料
1
.
1
.
1 实验材料 美味牛肝菌子实体采 自陕西省
佛坪县三官庙乡 .
1
.
1
.
2 菌种 美味牛肝菌由陕西省资源生物重点
实验室食药用菌菌种保藏中心提供 .
1
.
1
.
3 培养基
1) 母种培养基 : 葡萄糖 2 0. 0 9, 马铃薯 2 0 . 0
g
,鼓 皮 10 0 . 0 9 , K H Z p O 4 5 . 0 9 , M g S O ; · 7 H Z O
3
·
0 9
,
V B : 10 m g
,琼脂 2 0 . 0 9 , 水 1 0 0 0 m L 〔 5」.
2) 单因子基础培养基 : 碳源基础培养基 : 酵母
粉 5 . 0 9 , K H Z P O ; 3 . 0 9 , M g SO ; · 7 H Z O 1 . s rn g ,
v B
I 0
.
0 1 m g
,
C a C O
3
2
.
0 9 ; 氮源基础培养基 : 葡
萄糖 2 0 . 0 9 , 玉 米 粉 2 0 . 0 9 , K H : P O ; 3 . 0 9 ,
M g SO
; · 7 H 2 0 1
.
5 m g
,
V B : 0
.
0 1 rn g
,
C a C O
3
2
.
0 9
.
1
.
2 方法
1
.
2
.
1 美味牛肝菌菌丝体液体培养
1) 菌种活化 : 配制 C P D A 培养基 , 分装试管 ,
12 1
.
3 C 30 m in 灭菌 ,放置斜面 , 接种美味牛肝菌
母种 ,在 2 8 ℃ 培养 ,待菌丝满管后备用 .
2) 液体培养 : 配制液体培养基 , 10 0 m L 三角瓶
装液量 60 m L , 1 21 . 3 C 3 0 m in 灭菌 ,接活化菌种 .
在初始 p H 值 4 . 6一 5 . 8 ,振荡速度 18 o r /m i n ,培养
温度 26 ℃条件下 ,进行液体发酵培养 .
3) 菌丝生物量的测重 : 发酵后的菌丝体经离心
过滤并用纯净水冲洗 3 次 ,再用滤纸吸至不滴水 ,
用天平精确称重 .
4) 成分测定的材料处理 : 菌丝冲洗干净~ 烘干
( 80 ℃ )一粉碎一过 40 目筛一备用 .
1
.
2
.
2 成分测定
1) 灰分测定 : 采用重量法 〔 6〕 .
2) 粗蛋白含量测定 : 采用微量凯氏定氮法困 .
3) 粗脂肪含量测定 : 采用索氏提取法困 .
4) 粗纤维含量测定 : 采用重量法￡’ 〕 .
5) 多糖含量测定 : 采用苯酚一硫酸法川 .
6 ) 氨基酸含量测定 : 采用 F D B N 柱前衍生高
效液相色谱法 ( H P L C一 1 10 0 型 ) . 层 析柱 : Z o r b a x
C 1 8 ;流动相 : 磷酸二氢钾和 乙睛水溶液 [V (水 ) , V
(乙情 ) 一 4 5 , 5 5 j .
2 结 果
2
.
1 发酵培养基的筛选
2
.
1
.
1 碳源叶美味牛肝 菌营养菌丝 生长 的影响
以酵母粉 5 . 0 9 , K H : p o ; 3 . 0 9 , M g s q · 7 H : O
1
·
50 m g
,
V B I 0
.
0 1 m g
,
C a C O
3 2
.
0 9 为单因子基础
培养基 ,分别以 20 . 0 9 的葡萄糖 、 蔗糖 、 乳糖 、 甘露
醇 、 果糖 、 麦芽糖并附加玉米粉 20 . 0 9 为碳源 , 以基
础培养基为对照 , 接活化菌种 1 . 0 c m “ , 振荡培养 ,
测定不同碳源对营养菌丝生长的影响 (见表 1) .
表 1 不 同碳源对营养菌丝生长的影响
T a b
.
1 E fe
e t o f d if fe er n t e a r b o n s o u r c e s on t h
e gr o w th o f
n u t r ie n t m y
c e l ia
碳 源 菌丝生物量 / ( g / L )
葡萄糖 120
蔗糖 9 6
乳糖 8 0
甘露醇 75
麦芽糖 1 12
果糖 1 0 7
表 1 表明 , 以葡萄糖 、 麦芽糖 、 果糖等作为碳源
时 ,液体发酵菌丝生物量皆高 . 在这些碳源中 , 以葡
萄糖为碳源的培养基 中菌丝体生物量最高 , 为 12 0
g / L
,菌丝球体积小 , 均匀 , 密度高 . 以 乳糖 、 甘露醇
等为碳源的培养基 中美味牛肝菌菌丝生长较差 ,说
明这些碳源为非常用糖物质 . 确定葡萄糖为美味牛
肝菌发酵最适碳源 .
2
.
1
.
2 氮源对美味牛肝菌营养菌丝 生长的影响
以葡萄糖 2 0 · 0 9 , 玉米粉 2 0 . 0 9 , K H Z P O ; 3 . 0 9 ,
M g SO
; · 7 H
Z
O 1
.
5 m g
,
V B
1 0
.
0 1 m g
,
C a C O
3 2
.
o g
为单因子基础培养基 , 分别 以 5 . 0 9 的 N H ; N 0 3 、
K N O
。 、 米糠 、 豆饼粉 、 酵母浸出膏 、 牛肉膏 、 蛋白陈
和水解乳蛋 白为氮源 , 以基础培养基为对照 , 接活
化菌种 1 , 0 c m “ ,振荡培养 ,测定不同氮源对营养菌
丝生长的影响 ,结果见表 .2
表 2 不 同氮源对营养菌丝生长的影响
T a b
.
2 E f fe e t
o f d ife
r e n t n it r o ge n s o u r e es o n t h e gr o w t h o f
n u t r i叨 t m y e e l ia
氮 源 菌丝生物量 / ( g儿 )
酵母浸出膏
牛 肉膏
蛋白陈
水解乳蛋白
豆饼粉
米糠
N H
;
N O
3
K N ( )
3
1 4 0
1 3 2
7 5
8 6
3 2
4 3
2 8
3 6
无 锡 轻 工 大 学 学 报 第 23卷
物量有明显的影响 .随着转速 的升高 , 菌丝生物量
升高 , 在 180 r/ m in 达到较高 , 继续增加振荡速度 ,
菌丝生物量增加不 明显 . 因此 , 美味牛肝菌液体发
酵最适振荡速度为 18 o r /m i.n
2 0 0广
n。OCó
口丈
0
LOǎ泛巴面娜州刘扭
nUOn
l卜d
(日竺ù训异侧勃姆
表 2 表明 , 在附加不 同氮源培养基 中 , 有机氮
源比无机氮源更有利于菌丝生长 , 以酵母浸出膏为
氮源的培养基 中菌丝生物量最高 , 为 1 40 9 / L , 菌丝
球体积 大小适 中 , 均 匀 . 在 以米糠 、 豆饼粉 , N H 4
N O
3 、 K N O
。为氮源的培养基中菌丝生长较差 , 虽然
米糠 、 豆饼粉为有机氮源 , 但含氮量要低于其它有
机氮源 ,说明培养基 中含氮量较低的有机氮源不是
美味牛肝菌菌 丝生长的最适氮源 . 因此 , 确定酵母
浸出膏为美味牛肝菌发酵最适氮源 .
2
.
1
.
3 培养基成分综合 实验 以葡萄糖和玉米粉
为碳 源 , 酵 母 浸 出 膏 为氮 源 , 添 加 K H : P O ; ,
M g S O
4 · 7 H
Z
O 和 V B , 0 . 0 1 m g , C a C O 3 2 . o g 进行
玩 ( 3 ` )正交试验 . 根 据极差分析结果 , 影 响菌丝体
得率的大小关系分别为 A > C > D > B . 各因子的最
佳水平组合是 A 3B 3 C ZD I , 因此确定发酵培养基配
方为 : 葡萄糖 3 0 . 0 9 , 玉米粉 20 . 0 9 , 酵母浸 出膏
7
.
0 9
,
K H
Z
P O
;
2
.
0 9 , M g SO
; · 7 H
z
O 1
.
0 9
,
V B
i
0
.
0 1 m g
,
C a C O
3 2
.
0 9
.
2
.
2 发酵条件实验
2
,
2
.
1 p H 值对 关味牛肝菌营养菌丝 生长的 影响
将 培养 液分别 调 p H 值为 4 . 6 , 4 . 8 , 5 . 。 , 5 . 2 ,
5
.
4
,
5
.
6
,
5
.
8
,
6
.
0
,
6
.
2
, 接斜面 菌种 1 . o e耐 , 在
2 6 ℃ , 20 0 r /m i n , 10 0 m L 三角瓶装液量 6 0 m L , 振
荡培养 6 d . 测定 p H 值对美味牛肝菌营养菌丝生长
的影响 (见图 1) .
2 0 Or
。吮元一一而广不而一下而了一石万一万而一飞而
r/ m i n
图 2 振荡速度对美味牛肝菌丝生长的影响
F ig
.
2 T h e s ti r e d 印 e d e f fe c t o n th e 罗 o w ht o f B o le t u s
e d u l i s m y c e lia
2
.
2
.
3 培养温度对美味牛肝 菌营养菌丝 生长的影
响 选择 1 6 , 18 , 2 0 , 2 2 , 2 4 , 2 6 , 2 8 , 3 0 , 32 ,C发酵温
度 , 接斜面菌种 1 . 0 e m , , 在 p H 值 5 . 4 , 2 8 0 : / m i n ,
10 0 m L 三角瓶装液量 60 m L ,振荡培养 6 d ; 测定培
养温度 对美 味 牛肝 菌营养菌丝 生 长 的影 响 (见
图 3 ) .
1 5 0 广
“片犷而六苏该广砚飞犷丽气矿不
温度 /℃
n甘nCUd`CUù台ǎ曰、巴诚娜州刽恤
图 1 p H 值对美味牛肝菌丝生长的影响
Fi .g 1 PH e fe
c t o n t h e gr o w th of B o l e tu s ` d u il s m y e e lia
图 1 表明 , 在 p H 值 < 4 . 6 , p H > 5 . 8 时 , 菌丝
生物量呈下降趋势 . 在 p H 值为 5 . 2 ~ 5 . 8 之间 , 菌
丝体生长速度维持在较高水平 , 菌丝生物量较高 .
因此 , 美味牛肝菌液体发酵最适 p H 值范 围为 p H
值 5 . 2 ~ 5 . .8
2
.
2
.
2 振 荡速度对美味牛肝 菌营养菌丝 生长的影
响 选择 9 0 , 1 10 , 1 3 0 , 1 5 0 , 1 7 0 , 1 9 0 , 2 1 0 r / m i n 不
同振荡速度 , 接斜面菌种 1 . 0 。 m “ , 在 26 ’ C , p H 值
5
.
4
,
10 0 m L 三角瓶装液量 60 m L ,振荡培养 6 d . 测
定振荡速度对美味牛肝菌营养菌丝生长的影响 ( 见
图 2) . 图 2 表明 ,不同振荡速度对美味牛肝菌丝生
图 3 培养温度对美味牛肝菌丝生长的影响
Fi g
.
3 Th
e t em P
e
ar t
u即 o f fe r m e n ta t i on e fe e t o n th e
gr
o w t h o f B
o l e t u s e d u il s m y ce l ia
图 3 表明 ,不同温度对菌丝生物量有明显的影
响 . 菌丝生物 量在一定范 围内随温度的升高而增
高 , 2 8 ℃时菌丝生物量达最高 , 为 10 2 . 8 9 / L , 超过
2 8 ℃菌丝生物量则下降 . 因此 ,美味牛肝菌液体发
酵最适培养温度为 28 ℃ .
2
.
2
.
4 装液童对美味牛肝 菌营养菌丝 生长 的影响
10 0 m L 三角瓶中分别选择 3 0 , 4 0 , 5 0 , 60 , 7 0 , 8 0 ,
9 0 m L 装液量 ,接斜面菌种 1 . 0 c m Z ,在 p H 值 5 , 4 ,
18 0 r / m in
,
2 8 ℃条件下 ,振荡培养 6 d ,测定装液量
对美味牛肝菌营养菌丝生长的影响 (见图 4) .
图 4 表明 , 随着装液量的增加菌丝生物量随之
增加 ,装液量在 60 tn L 以上时 , 菌丝发酵产生难闻
的气体 ;低于 60 m L 时 , 菌丝生物量较低 . 因此 , 美
味牛肝菌液体发酵最适装液量为 60 m .L
O。Oé月了65H
P
左盆qJO山
第 6期 邓百万等 :美味牛肝菌深层发酵条件的优化及成分分析
表 41 0 0 9美味牛肝菌丝体氮基酸种类及质 ,
T a b
.
4 Th e tyP巴 a n d e o n t e n st o f am i n o a e id i n m y ce li a o f
B o l e t u s e d“ 115
必需
氨基酸
氨基酸
质量 /m g
氨基酸
质量 /m g
0179403246弱绷.753281洲阴姚l6蹦luGerSvsCiaAHroPnyThrTValeuLleMtvsP
201550
。
ǎ闷、幼à诚葬州刽佃
3 0 4 0 5 0 6 0 7 0
装液体积 /m L
8 0 9 0
1 0 2 1
.
8 4
1 1 4 1
.
7 7
3 8 5
、
3 4
图 4 装液 . 对美味牛肝菌营养菌丝生长的影响
F i g
.
4 T h e m
e d i u m Io a d i n g e fe
e t on t h e gr o w th o f B
o -
I e r u s e d u il s m y e
e li a
2
.
3 美味牛肝菌菌丝体主要营养成分测定分析
2
.
3
.
1 美味牛肝菌菌丝体主要营养成分 表 3结
果表明 ,菌丝体含有丰富的蛋白质 、 多糖和适量的
脂肪 、 纤维和灰分 . 菌丝体 中的粗蛋白和粗脂肪质
量高于野生子实体图 , 特别是粗多糖质量显著高于
担子菌纲 8 种真菌中的粗多糖0I[ 〕 、
表 3 美味牛肝菌菌丝中主要营养成分及质且
T a b
.
3 T h
e m i ne
r a l e le m e n t s a n d e o n t e n st o f n u t r i e n t m y c e l i a
o f B o l e t
u s e d u li s
8 3 1
.
0 7
1 4 9
.
4 5
1 1 2 4
.
3 1
1 0 7 8
.
4 7
5 7 3 2
.
2 5
1 5 4 5 8
.
17
营养成分
灰分
粗蛋白
粗脂肪
粗纤维
粗多糖
碳水化合物
质量分数 / %
5
.
26
26
.
4 6
6
.
4 8
8
.
2 3
1 0 6 2
4 2
.
9 5
2
.
3
.
2 美味牛肝 菌菌丝体 中氛基酸种类及质量
表 4 结果表明 , 美味牛肝菌菌丝体因方法所限未检
出色氨酸 ,在所测定的 17 种氨基酸中 , 必需氨基酸
和非必需氨基酸种类齐全 . 1 0 9 美味牛肝菌丝体
中必需氨基酸质量是 5 73 2 . 25 m g , 必需氨基酸占
氨基酸总量的 37 . 08 % . 美味牛肝菌丝体中必需氨
基酸 的 质 量普遍 高于 子 实体 中必 需 氨 基 酸 的
质量 [“ 〕 .
3 结 论
美味牛肝菌对供试碳源都有不同程度的利用 ,
说明该菌对单糖 、 双糖 、 多糖和糖醇都能利用 , 但以
葡萄糖的利用率较高 . 美味牛肝菌的菌丝体对按态
氮很难利用 , 而对有机氮的利用率高 , 其中以使用
酵母浸出膏和牛 肉膏等时其菌丝生长速度较快 . 尤
其是酵母浸 出膏 , 可促进菌丝大量生长 , 且菌丝球
均匀 ,密度高 . 培养基中加人 C a C O 3对培养基 p H 值
起调节作用 , C a抖 对菌丝生物量的转化有促进作
用 . 无机盐 K H : P q 和 M g SO ; , 7 H Z O , 质量比以
2
,
1的比例添加时其菌丝生物量较高 .
正交试验的最适培养基是 : 葡萄糖 30 · 0 9, 玉
米粉 2 0 . 0 9 , 酵母 浸 出膏 7 . 0 9 , K H : PO ; 2 . 0 9 ,
M g SO
; · 7 H
Z
0 1
.
0 9
,
V B
飞0
.
0 1 m g
,
C a C O
3 2
.
0 9
.
美味牛肝菌深层培养的最适 发酵条件的初始
p H 值 5 . 2一 5 . 8 ,振荡速度 18 o r /m i n ,培养温度 2 8
℃ , 10 0 m L 三角瓶装液量 60 m L
美味牛肝菌深层 培养的菌丝体主要 营养成分
质量普遍高于野生子实体 〔” 〕 ,其中粗蛋 白 、 粗脂肪
和粗多糖质量明显高于子实体 . 从对食品高蛋白含
量要求的角度分析 ,美味牛肝菌菌丝体的营养价值
优于子实体 . 按干重计 , 菌丝体含有 17 种氨基酸 ,
10 0 9 美味牛肝菌丝 体中氨基酸 总量是 1 5 4 58 . 17
m g
,必需氨基酸 占氨基酸 总量 的 37 . 08 % , 以撷氨
酸质量最高 . 美味牛肝菌深层培养的菌丝体富含氨
基酸这一特性证实 , 可通过深层发酵解决美味牛肝
菌野生资源不足的矛盾来满足人们对蛋 白食品和
营养保健品日益增长的需求 .
(下转第 10 2 页 )
1 02无 锡 轻 工 大 学 学 报 第 2 3卷
2
.
3渗透稳定剂的影响
分别用 0. 6m o l/L 的蔗糖屯甘露醇 、 山梨醇和
NaI C来配制高渗缓冲液和高渗再生培养基 , 以研究
不同的渗透稳定剂对原生质体形成和再生的影响 .
原始菌液为 7 . 。 又 10 8 C F U , 缓 冲液 p H 值为 5 , 8 ,
工具酶为 C e l l u e l a s , 1 . S L ,结果见表 3 .
表 3 渗透稳定剂 的影响
T a b
.
3 E f f七e t o f os m o t i e s t a b il iz e sr
一下薪痴厂一一履至质体一 原生质体种类 产生率 / % 再生率 / %
蔗糖 5 7 . 1 1 2 , 5
甘露醇 5 7 7 . 7
山梨醇 4 2 . 8 6 . 7
N a C I 3 8
.
5 3
.
4
从表 3 可见 ,本实验结果与其他研究者报道的
结果 “ 在真菌原生质体形成和再生中有机稳定剂的
效果好于无机稳定剂 ,有机稳定剂中蔗糖的效果最
好 ,甘露醇的效果次之 ” 是一致的 .
2
,
4 p H 值的影响
为研究不同的 p H 值对酵母菌原生质体形成和
再生的影响 , 作者用 0 . 6 m ol / L 的蔗糖配制高渗缓
冲液和高渗再生培养基 ,研 究缓冲液 p H 值分别为
5
.
8
,
6
.
8
,
7
.
2 时酵母菌原生质体的产生率和再生
率 ,原始菌液为 5 . 6 义 l o B C F U . 工具酶用 C el uc l a s t
1
.
S L
,酶处理时间为 l h ,结果见表 4 .
参考文献 :
p H 值
表 4 pH 值的影响
T a b
.
4 E f f e e t o f PH
原生质体
产生率 / %
原生质体
再生率 / %
以 C e l l u e l a s t 1 . S L 为工具酶时 , 在酸性条件
下 ,原生质体的产生率和形成率均比较高 ,其 中 p H
5
.
8 和 p H 6 . 8 原生质体产生率几乎无差异 ,但是原
生质体的再生率还是有一定差异的 , p H 值为 5 . 8
时的再生率明显高于 p H 值为 6 . 8 时的再生率 . 在
p H 值超过 7 . 0 后 , 无论是原生质体的产生率还是
原生质体的再生率均大幅度降低 , 这种情况与酵母
菌喜好在偏酸性的环境中生长是一致的 .
3 结 论
纤维素酶 C el lu d as t 1 . S L 可 以作为酵母菌原
生质体 的形成和再生 中使用 的工具酶 , 最佳条件
是 : 以 p H 5 . 8 的磷 酸缓冲液配制的 0 . 6 m ol / I一 蔗
糖液为高渗稳定剂 , 质量分数 8%的酶液处理 l h ,
菌龄 6 h , 酶处理后在加 0 . 6 m ol l/ J 蔗糖的完全培
养基上再生 24 h . 在这样的条件下 , 原生质体产生
率与再生率与用蜗牛酶做工具酶类似 .
〔l」 L in L F , L e v in R E . R e l a t iv e e ff e e r i v e n e s s o f y e a s t c e ll w a ll d ig e s t i n g e n z y nr e s o n ya r r r o w i a l : P o l夕: : c a 〔J j . M i e r o b i璐 .
1 9 9 0
,
6 3 ( 2 5 5 )
:
1 0 9一 1 1 5 .
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( 责任编辑 : 李春丽 )
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