全 文 ：　·药物分析与检验·
基金项目:2006年江西省教育厅科技项目:赣教技字 [ 2006] 226号
作者简介:谢一辉 ,男 ,教授　　Tel:(0791)7118913　　E-mail:xieyh6152003@yahoo.com.cn
HPLC测定安痛藤中岩白菜素的含量
谢一辉 1 ,张叶青 2 ,邓鹏 1 ,余无双 1(1.江西中医学院 ,南昌 330006;2.华北煤炭医学院 ,河北唐山 063000)
摘要:目的　建立安痛藤中有效成分岩白菜素含量的方法。方法　采用高效液相色谱法 ,色谱柱为 InertsilODS-3(250 mm×4.6
mm, 5μm);流动相为甲醇∶水(23∶77);流速为 1.0 mL·min-1;检测波长为 275nm;柱温为 30℃。结果　岩白菜素在 0.087 5 ～
1.40μg内有良好线性关系 , r=0.999 8,平均回收率为 101.3%, RSD为 1.9%。结论　该方法准确 、稳定 、简便、可行。
关键词:高效液相色谱;安痛藤;岩白菜素
中图分类号:R284.1;R917.101　　　文献标识码:B　　　文章编号:1007-7693(2008)04-0319-02
DeterminationofBergenininCissusasamicabyHPLC
XIEYi-hui1 , ZHANGYe-qing2 , DENGPeng1 , YUWu-shuang1(1.JiangxiCollegeofTCM, Nanchang330006, China;
2.Northchinacoalmedicalcollege, Tangshan063000, China)
ABSTRACT:OBJECTIVE　AnHPLCmethodforthedeterminationofbergenininCissusassamica(Laws.)wasestablished.
METHODS　HPLCmethodwascarriedoutthroughInertsilODS-3(250mm×4.6mm, 5μm)chromatographycolumnwithamobile
phaseofmethanol-water(23∶77)andflewvelocityof1.0 mL· min-1 anddetectionwavelengthof275 nm, temperaturewas30 ℃.
RESULTS　Thestandardcurvesofbergeninshowedgoodlinearitywithintherangeof0.087 5 ～ 1.40 μg, r=0.999 8.Theaverage
recoverywas101.3%, RSDwas1.9%.CONCLUSION　Themethodwasquick, simple, accurateandreliableforthedeterminationof
bergenininCissusassamica(Laws.).
KEYWORDS:HPLC;Cissusassamica(Laws.);bergenin
　　安痛藤为葡萄科白粉藤属植物苦朗藤 Cissusassamica
(Laws.)的藤茎 , 具有祛风除湿 ,散瘀 , 拔毒作用 ,主治风湿痹
痛 , 跌打扭伤 ,痈疽肿毒 , 为江西等地治疗类风湿性关节炎的
习用药材。它主要分布在中南 、西南及江西 、福建 、西藏等
地 [ 1] 。目前国内外关于对安痛藤质量控制方面的报道几乎
是个空白。研究表明 , 安痛藤有较强的抗类风湿关节炎的作
用 [ 2] 。作者在安痛藤活性成分研究中已分离得到多个化合
物单体 , 并已通过光谱鉴定 ,其中岩白菜素的含量最高 , 为安
痛藤的主要活性成分之一。故将岩白菜素作为安痛藤质控
成分 , 为安痛藤进一步生理活性研究以及资源深度开发和合
理利用提供科学依据 。
1　仪器与试药
Agilent1200高效液相色谱仪 , KQ3200型超声仪。 岩白
菜素对照品(1532-200202, 供含量测定用 , 中国药品生物制
品检定所)。甲醇 、乙腈为色谱纯 , 其他试剂均为分析纯 , 水
为超纯水。安痛藤药材采于江西赣南地区 , 由江西中医学院
刘庆华老师鉴定为葡萄科植物苦朗藤 Cisusassamica
(Laws.)。
2　实验方法与分析结果
2.1　色谱分析条件
色谱柱为 InertsilODS-3 (250 mm×4.5 mm, 5 μm), 流
动相为甲醇-水(23∶77), 柱温为 30℃, 流速为 1mL· min-1 ,
检测波长为 275 nm,进样量 10 μL, 在上述色谱条件下 , 岩白
菜素与其他成分分离良好 ,理论塔板数以岩白菜素峰计算不
低于 5 000,分离度大于 1.5,结果见图 1、2。
图 1　岩白菜素对照品 HPLC色谱图
Fig1　HPLCchromatogramofbergeninreferencesubstance
·319·中国现代应用药学杂志 2008年 8月第 25卷第 4期　　　　　　　　　　　　　　　ChinJMAP, 2008August, Vol.25No.4
DOI :10.13748/j.cnki.issn1007-7693.2008.04.013
图 2　安痛藤供试品 HPLC色谱图
Fig2　HPLCchromatogramofCissusassamica(Laws.)sample
2.2　对照品溶液的制备
精密称取岩白菜素对照品适量 ,加水适量 ,超声溶解 ,转
置 25mL量瓶中 ,加水至刻度 ,摇匀即得(0.175mg· mL-1)。
2.3　供试品溶液的制备
取安痛藤粉末(过 60目)约 0.15 g, 精密称定 , 置具塞锥
形瓶中 , 精密加入水 25 mL, 称定重量 ,超声 20 min, 称定重
量 , 用水补足减失的重量 ,摇匀 ,滤膜滤过 , 即得。
2.4　方法学考察
2.4.1　线性关系的考察　精密吸取对照品溶液 0.5, 1, 2, 4,
6, 8 mL置于 10 mL量瓶中 , 加水至刻度 , 制成浓度为 8.75,
17.50, 35, 70, 105, 140 μg· mL-1岩白菜素对照品溶液 , 分别
进样 10μL。以岩白菜素的浓度(μg· mL-1)为横坐标 , 峰
面积为纵坐标进行线性回归 , 回归方程为:Y=11.524 X+
4.569 5, r=0.999 8,结果表明:岩白菜素在 0.087 5 ～ 1.40
μg内有良好线性关系。
2.4.2　稳定性试验　取安痛藤 0.15 g, 精密称定 ,按供试液
制备项制备供试液 , 每次进样 10 μL, 共 6次 , 时间间隔为 0,
4, 6, 8, 10, 12 h, 记录峰面积值。计算结果显示:6次岩白菜
素含量测定结果基本不变 , 平均值为 1.217%, RSD=
0.85%,结果表明供试液至少在 12 h内稳定。
2.4.3　重复进样精密度试验　精密吸取安痛藤供试液 , 连
续进样 6次 , 每次 10 μL, 6次进样测得岩白菜素含量平均结
果为 1.217%, RSD=0.52%,表明本试验方法精密度良好。
2.4.4　重复性试验　取安痛藤粉末 6份 , 约 0.15 g, 精密称
定 , 按供试液制备项制备供试液 ,进样 ,记录峰面积值。 6份
样品岩白菜素含量平均值为 1.215%, RSD=2.0%, 结果表
明本试验方法重复性良好。
2.4.5　加样回收试验　取安痛藤粉末 9份 ,各约 0.12 g,精
密称定 , 按低 、中 、高三个浓度分别加入适量岩白菜素对照品
溶液 , 按供试液制备项制备供试液。每次进样 10 μL,每份供
试品溶液进样 5次 , 计算加收率。结果平均加样回收率为
101.3%, RSD=1.9%(n=9)
2.4.6　样品测定　取不同产地及不同采购时间的安痛藤样
品按 “ 2.3”项下方法制成供试液 , 精密量取对照品溶液与供
试品溶液各 10μL, 按上述色谱条件测定 ,计算安痛藤中岩白
菜素百分含量 ,结果见表 1。
表 1　样品中岩白菜素含量测定结果(n=3)
Tab1　Determinationofbergenininsamples(n=3)
样品来源 样品采购时间 岩白菜素含量 /% RSD/%
采于江西赣南 2004-4 0.9698 0.93
购于江西樟树 2004-10 1.221 1.9
购于广西南宁 2005-10 0.9156 2.5
采于江西赣南 2005-11 1.216 2.0
购于江西南昌 2006-10 0.9745 2.3
3　讨论
3.1　检测波长的确定
将岩白菜素对照品液在 190 ～ 400 nm波长范围内扫描 ,
岩白菜素在 220 nm和 275nm处有最大吸收。因 275 nm波
长处岩白菜素吸收峰灵敏度较高 、稳定 ,且供试液中其他成
分干扰较小 , 故选用 275nm作为检测波长。
3.2　供试品提取方法的选择
岩白菜素溶于水 、甲醇和乙醇 , 故采用水 、乙醇 、甲醇三
种溶剂以及超声和回流两种提取方法进行提取条件比较实
验 , 同时考察了不同超声提取时间(10, 20, 30, 40, 50, 60min)
和不同粒度的药材粉未(20, 40, 60, 80, 100, 120目)对提取效
果的影响。试验结果表明:过 60目药材粉末 , 用水超声提取
20 min较为适宜。
3.3　分离条件的选择
用不同流动相系统:甲醇-水(不同比例);乙腈-水(不同
比例)进行系统适用性试验。结果表明以甲醇-水(23∶77)为
流动相 , 流速 1.0mL· min-1 ,柱温 30 ℃,检测波长 275 nm,
供试品中岩白菜素得到较好分离。
选择了三种色谱柱:InertsilODS-3(250 mm×4.6 mm, 5
μm,特纳公司)色谱柱 、HypersilODS2 (250 mm×4.6 mm, 5
μm,大连依利特)色谱柱和 DiamonsilTM(钻石)HPLCC18(200
mm×4.6mm, 5 μm, 迪马公司)色谱柱 , 按本法测定安痛藤
药材中岩白菜素的含量 ,测定结果基本一致。表明本法适应
性较好。
REFERENCES
[ 1] EditoralBoardofChinaHerbal, StateAdministrationofTraditional
ChineseMedicine, China.ChinaHerbal(中华本草)[ M] .Vol
5.Shanghai:ShanghaiScienceandTechnologyPublisher1999:
286-287.
[ 2] HUANGLP, XIEYH, XIAOBQ, etal.TheefectsofCisus
assamicaonadjuvantarthritisinrats[ J] .LishizhenMedMater
MedRes(时珍国医国药), 2006, (17)11:2 139-2 140.
收稿日期:2007-11-29
·320· ChinJMAP, 2008August, Vol.25 No.4　　　　　　　　　　　　　　　中国现代应用药学杂志 2008年 8月第 25卷第 4期