全 文 ：中 国 酿 造
2010年 第 6期
总第 219期
天山雪莲花（Saussurea involucrata Kar.et Kir.）属菊科
凤毛菊植物，主要分布于天山南北坡，是新疆特有的药用
植物，因生长在雪线以上的高寒地带，具有散寒除湿、活
血通络、抗炎镇痛等独特的药用功效[1]。药理实验证明，天
山雪莲花具有抗癌、扩张血管、降血压、抗疲劳等作用，被
越来越广泛地用在中成药和保健食品的组方中[2]。
新疆雪莲养生葡萄酒是新疆天山莲药业有限公司以
新疆特产干型葡萄酒为基酒，辅以天山雪莲花、枸杞、龙眼
肉、菊花、当归等，采用现代科学技术与传统制酒方法研制
而成的新疆特产保健酒。葡萄酒中的多糖具有提高葡萄
酒稳定性、改善葡萄酒口感及色泽、提高葡萄酒香气质量
等用途[3-4]。黄酮类化合物则具有增强心血管功能、抗肿瘤、
增强免疫力、延缓衰老等功能[5]。为了提高和有效控制新
疆雪莲养生葡萄酒的产品质量，实验用分光光度法[6-7]测定
了雪莲养生葡萄酒中的总黄酮及多糖含量，为进一步的研
究打下基础。
1 材料与方法
1.1 试剂与仪器
雪莲养生葡萄酒：新疆天山莲药业有限公司；芦丁标
准品、葡萄糖标准品、亚硝酸钠、硝酸铝、氢氧化钠、无水乙
醇、苯酚、浓硫酸（质量分数98%）均为分析纯。
UV-2450可见紫外分光光度计：日本岛津公司；旋转
蒸发仪RE-3000：上海亚荣生化仪器厂；AB204-N分析天
平（精确至0.0001g）：梅特勒公司；2XZ（S）-2型旋片式真空
泵：上海德英真空照明设备有限公司；DZF-6020型真空干
燥箱：上海科学仪器有限公司；HH-601超级恒温水浴：金
坛市医疗仪器厂。
1.2 测定总黄酮的实验方法
1.2.1 标准溶液的制备及样品的处理
准确称取在105℃干燥至恒重的芦丁对照品50.0mg。
置于100mL容量瓶中，加适量60%vol乙醇置水浴上微热使
溶解，放冷，用60%vol乙醇稀释至刻度，摇匀。准确量取
25.00mL置50mL容量瓶中，加60%vol乙醇稀释至刻度，摇
匀，即得（1mL对照品溶液含无水芦丁0.25mg）。
准确量取样品10.00mL，用加水饱和的正丁醇振摇提
取5次（20mL、10mL、10mL、10mL、10mL），合并正丁醇提
取液，于旋转蒸发仪上蒸干，加适量甲醇溶解并定容转移
至50mL容量瓶中作为供试品溶液备用。
1.2.2 测定波长的选择
准确量取芦丁溶液1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL、
5.00mL各2份，分别置于25mL容量瓶中，加水补至5mL，一
份加60%vol乙醇至刻度作为参比；另一份加4%亚硝酸钠
溶液1mL，摇匀，放置6min，加10%硝酸铝溶液1mL，摇匀，
放置6min，加4%氢氧化钠溶液10mL，再加60%vol乙醇稀
新疆雪莲养生葡萄酒中总黄酮及多糖含量的测定
邓长生1，彭 秧1，王新宇2，李 玲1*，迪拉热·穆沙1
(1.新疆大学化学化工学院,新疆 乌鲁木齐 830046；2.新疆天山莲药业有限公司，新疆 乌鲁木齐 830000)
摘 要：采用NaNO2-Al（NO3）3-NaOH为显色剂和苯酚-硫为显色剂的分光光度法，以样品显色前后的差示吸光度值△A为测量指标，
分别测定了新疆雪莲养生葡萄酒中的总黄酮和多糖含量。总黄酮测定结果为198.20mg/100mL；回收率为96.2%~102.5%；RSD为
0.96%。多糖测定结果为52.30mg/100mL；回收率为95.3%~105.1%；RSD为1.28%。结果表明，该测定方法结果可靠、重现性好。
关 键 词：分光光度法；雪莲养生葡萄酒；总黄酮；多糖
中图分类号：O657.32 文献标识码：B 文章编号：0254-5071（2010）06-0153-04
Determination of the total flavonoids and polysaccharides in Xinjiang snow lotus healthy wine
DENG Changsheng1, PENG Yang1, WANG Xinyu2, LI Ling1*, DI Rela·MU Sha1
(1. College of Chemistry and Chemical Engineering, Xinjiang University, Urumqi 830046, China;
2. Xinjiang TianShan Lotus Medicine Co., Ltd, Urumqi 830000, China)
Abstract: Total contents of flavonoids and polysaccharides in Xinjiang snow lotus healthy wine were determined with changes of absorbency (△A)
before and after coloration by spectrophotometries with NaNO2-Al (NO3)3-NaOH and phenol-sulfuric acid as chromogenic agents respectively. Total
content of flavonoids was 198.20 mg/100mL with recovery ranged between 96.2% and 102.5% and RSD by 0.96%. Content of polysaccharides was
52.30 mg/100mL with recovery between 95.3% and 105.1% and RSD by 1.28%. The results indicated that using spectrophotometric methods with
NaNO2-Al（NO3)3-NaOH and phenol-sulfuric acid as chromogenic agents for determination of total contents of flavonoids and polysaccharides in
Xinjiang snow lotus healthy wine is reliable and reproducible.
Key words: spectrophotometry; snow lotus healthy wine; total contents of flavonoids; polysaccharides
收稿日期：2010-02-07
基金项目：自治区高技术研究发展项目（150033）
作者简介：邓长生（1984-），男，在读硕士研究生，主要从事现代分离技术的研究工作；李 玲*，副教授，通讯作者。
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Serial No．219 China Brewing
图3 葡萄糖标准曲线
Figure 3. Standard curve of glucose
释至刻度，摇匀，放置12min后，于波长400nm~600nm处扫
描测定，测定芦丁对照液络合前后的差示吸光度值ΔA，
见图1。可见，浓度不同的芦丁对照品溶液显色后在波长
510nm处均具有最大吸收。
1.2.3 标准曲线的制备
按1.2.2所得测定结果，取系列芦丁标准溶液在波长
510nm处的差示吸光度值ΔA。进行线性回归，得芦丁标准
溶液曲线（图2），回归方程为ΔA= -0.0077+12.74C，r =
0.999921（n=5）。
1.2.4 样品的测定及精密度
准确量取酒样待测液2.50mL 2份，分别置于25mL容
量瓶中，加水至5mL，一份加60%vol乙醇至刻度作为参比；
另一份加4%亚硝酸钠溶液1mL，使混匀，放置6min，加
10%硝酸铝溶液1mL，摇匀，放置6min，加4%氢氧化钠溶
液10mL，再加60%vol乙醇稀释至刻度，摇匀，放置12min，
测定溶液络合前后的差示吸光度值ΔA，然后用回归方程
计算出酒样中总黄酮的含量，平行测定5次，其结果见表1。
1.2.5 加标回收实验
准确移取适量酒样，加入不同量芦丁标准溶液，按
1.2.4样品测定方法进行加标回收实验，结果见表2。
1.3 多糖测定的实验方法
1.3.1 标准溶液的制备及样品的处理
准确称取105℃干燥至恒重的葡萄糖1.0000g，溶解定
容至1L容量瓶中。配制成浓度为1.0000g/L的葡萄糖标准
溶液。分别移取标准溶液0.0mL、0.5mL、1.0mL、1.5mL、
2.0mL、2.5mL、3.0mL、3.5mL于50mL容量瓶中，用蒸馏水定
容至刻度，配成葡萄糖系列标准溶液。
准确移取雪莲养生葡萄酒100.00mL，旋转蒸发浓缩
至约20mL，加80mL（4倍体积）95%vol乙醇，过夜，使多糖
沉降。弃去上清液，将底部多糖50℃烘干，再将其溶解定溶
于50mL容量瓶中，备用。
1.3.2 测定波长的选择
准确移取系列葡萄糖标准溶液以及样品待测液各
1.00mL于8个10mL试管中，依次向其中加入1mL苯酚和
5mL浓硫酸，振荡摇匀，于室温条件下显色15min，同时做
空白。在波长300nm~700nm处扫描吸光度值。结果发现，
对照品和样品溶液显色后都在波长487nm处有最大吸收
峰，故确定测定波长为487nm。
1.3.3 标准曲线的绘制
图1 芦丁差示吸收光谱图
Figure 1. Differential absorbency spectrum of rutin
图2 芦丁标准曲线
Figure 2. Standard curve of rutin
实验号
样品待测液中总黄酮
含量/（mg·100mL-1）
原酒中总黄酮含量/
（mg·100mL-1）
原酒中总黄酮平均
含量/（mg·100mL-1）
1 3.946 197.3
2 3.907 195.4
3 3.969 198.5 198.2
4 4.001 200.1
5 3.993 199.7
RSD/% 0.96
表1 样品平行测定结果
Table 1. Parallelism of the results
本底值/mg 加标量/mg 测定值/mg 回收率/%
0.2960 0.2000 0.4968 100.4
0.2960 0.3000 0.5885 97.5
0.2960 0.4000 0.6892 98.3
0.3946 0.3000 0.6832 96.2
0.3946 0.4000 0.7834 97.2
0.3946 0.5000 0.9073 102.5
表2 总黄酮加标回收实验结果
Table 2. Recovery of standard total flavonoids
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图6 显色温度总黄酮测定结果的影响
Figure 6. Effects of chromogenic temperature on determination of
total flavonoids
图5 显色时间对多糖测定结果的影响
Figure 5. Effects of chromogenic time on determination of
polysaccharides
按1.3.2所得测定结果，取系列葡萄糖标准溶液于波长
487nm处的吸光度值进行线性回归，得葡萄糖溶液标准曲
线（图3），回归方程为A=0.01571+10.29286C，r=0.9994（n=7）。
1.3.4 样品溶液的测定及精密度
准确移取已处理的样品待测液1.00mL于10mL试管
中，依次向其中加入1mL苯酚和5mL浓硫酸，振荡摇匀，于
室温下显色15min，同时做空白。在波长487nm处测定其吸
光度值，平行测定5次，测定结果见表3。
1.3.5 加标回收实验
准确移取适量样品待测液，加入不同量葡萄糖标准溶
液，按1.3.4样品测定方法进行加标回收实验，结果见表4。
2 结果与分析
2.1 测定总黄酮时酒样前处理方法研究
雪莲养生葡萄酒是以新疆特产干型葡萄酒为基酒，
辅以天山雪莲、枸杞、龙眼肉、菊花、当归等研制而成。酒
中多糖、蛋白质等成分相对于其他葡萄酒较多，图4是经正
丁醇提取与不经正丁醇提取的差示吸光度值ΔA随显色时
间的关系。
由图4可见，未经正丁醇提取的酒样的差示吸光度值
ΔA在显色45min后仍未到达稳定值，在30min后溶液中多
糖、蛋白质等成分会逐渐形成絮状沉淀，进一步吸附了
黄酮类化合物显色后形成的红色络合物，使测定结果偏
低。而经正丁醇提取的样品溶液的差示吸光度值ΔA在显
色12min后即稳定。因此实验中采用正丁醇对酒样中黄酮
类物质进行提取，有效提高了测定的准确度和稳定性。
2.2 显色时间的影响
2.2.1 测定总黄酮的显色时间
按1.2.4所述方法，在加入4%NaOH后在室温条件下放
置不同时间，测定差示吸光度值ΔA与时间的关系，结果见
图5。可见样品溶液的差示吸光度值ΔA在显色12min后趋
于稳定，并保持45不变，稳定性较好。
2.2.2 测定多糖的显色时间
按1.3.4所述方法，在加入浓硫酸后在室温下放置不同
时间，测定样品溶液的吸光度值A与时间的关系，结果见
图5。可见样品溶液显色后的吸光度值A在显色15min后趋
于稳定，并保持3h不变，稳定性好。
2.3 显色温度的影响
2.3.1 测定总黄酮的显色温度
实验号
样品待测液中多糖含
量/（mg·100mL-1）
原酒中多糖含量/
（mg·100mL-1）
原酒中多糖平均含
量/（mg·100mL-1）
1 2.179 54.48
2 2.162 54.05
3 2.140 53.50 53.82
4 2.111 52.78
5 2.172 54.30
RSD/% 1.28
表3 样品平行测定结果
Table 3. Parallelism of the results
本底值/mg 加标量/mg 测定值/mg 回收率/%
0.01046 0.005000 0.01557 102.2
0.01046 0.01000 0.02021 97.5
0.01046 0.01500 0.02476 95.3
0.02092 0.01500 0.03532 96.0
0.02092 0.02000 0.04064 98.6
0.02092 0.02500 0.04720 105.1
表4 多糖加标回收实验结果
Table 4.Recovery of standard polysaccharides
图4 前处理对总黄酮测定结果的影响
Figure 4. Effects of pre-treatment on determination of total flavonoids
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按1.2.4所述方法，在加入4%NaOH后，分别调节温度
至10℃、15℃（室温）、25℃、35℃、45℃、55℃显色12min，测
定差示吸光度值ΔA，结果见图6。
由图6可见，在10℃~35℃时，差示吸光度值ΔA保持不
变，45℃以后ΔA略有升高，这是由于随着温度的不断升高，
乙醇的不断挥发，使得待测液浓度升高的缘故。因此该方
法测定结果在室温范围内保持不变，在实验中只需在室温
条件下进行即可。
2.3.2 测定多糖的显色温度
由于实验中要用到浓硫酸，浓硫酸加入到待测样品溶
液中时温度将大幅度上升，通过显色温度实验可知，显色
温度对测定结果的影响不大。因此实验中只需将显色后
的溶液放置15min接近室温时测定即可。
2.4 试剂浓度的影响
2.4.1 亚硝酸钠溶液浓度
按1.2.4实验步骤，分别加入浓度为1%、2%、3%、4%、
5%、6%、8%、10%的NaNO2溶液各1mL，其他条件不变。以
溶液浓度为横坐标，差示吸光度值ΔA为纵坐标，则其浓度
优化曲线见图7。当NaNO2溶液浓度为4%时，差示吸光度
值ΔA最大，而当其浓度>6%时，差示吸光度值ΔA基本稳
定，变化较小。基于该实验结果，选择浓度为4%的NaNO2
溶液进行测定。
2.4.2 硝酸铝溶液浓度
按1.2.4实验步骤分别加入浓度2%、6%、8%、9%、10%、
11%、12%、13%、15%的硝酸铝溶液各1mL，条他条件不
变。以溶液浓度为横坐标，差示吸光度值ΔA为纵坐标，其
浓度优化曲线，见图7。随着硝酸铝溶液浓度的增大，差示
吸光度值ΔA逐渐增大，当浓度为10%时，达到最大，当大
于13%时，ΔA略微减小，这是由于过大的浓度使得待测液
产生了絮状沉淀的缘故。因此，实验选用10%的硝酸铝溶
液进行测定。
2.4.3 氢氧化钠溶液浓度
按1.2.4实验步骤分别加入浓度为1%、2%、3%、4%、
5%、6%、8%、10%的NaOH溶液各10mL，其他条件不变。以
溶液浓度为横坐标，差示吸光度值ΔA为纵坐标，则其浓度
优化曲线，见图7。当NaOH溶液浓度大于4%时，差示吸光
度值ΔA趋于稳定。这是由于碱性太弱不足以使全部黄酮
类化合物开环进而生成红色络合物而显色。基于该实验
结果，选择浓度为4%的NaOH溶液进行测定。
3 结论
因酒中黄酮类化合物与Al3+显色之后溶液颜色与葡
萄酒自身颜色很接近。因此实验通过测定酒样络合显色
前后的差示吸光度值ΔA来确定酒中的总黄酮，这样有效
地消除了葡萄酒自身颜色的干扰，提高了测定准确度。
新疆雪莲养生葡萄酒总黄酮含量为198.2mg/100mL，
加标回收率为96.2%~102.5%，RSD为0.96%；多糖含量为
52.30mg/100mL，加标回收率为95.3%~105.1%，RSD为
1.28%。实验数据表明，新疆雪莲养生葡萄酒总黄酮含量
高于其他类型保健酒[8-9]。
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图7 显色剂浓度对总黄酮测定结果的影响
Figure 7. Effects of chromogenic Regent consistency on the totle
flavonoids mensuration
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黄豆在炒熟或烘焙的过程中，温度和标准的控制是比较难把握的。炒制的黄豆再磨成粉食用并不科学，因为黄豆中
含有胰蛋白酶抑制素、尿酶、血球凝集素等因子。干炒、爆黄豆时，这些因子在干热条件下并不被分解。
因此，吃了干炒豆磨成的粉后，这些抑制素会引起副作用，如肚子发胀，影响消化吸收功能。如果吃得多了，或炒得外焦内
生，吃了还会引起恶心、呕吐、腹泻等中毒现象。所以，仅从加工方式上看，吃豆类只单纯烘焙或炒熟后再磨成粉，未经前期特殊
处理的想法很便捷，但却缺乏对食物知识的了解。
小
常
识
炒黄豆磨成粉食用其实不科学
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