全 文 ： 药理药化
收稿日期:2008-09-08;　修订日期:2008-11-03
基金项目:国家自然科学基金资助项目(No.20762004);
海南省自然科学基金项目(No.20604);
海南省重点科技项目(No.070207)
作者简介:莫峥嵘(1969-),女(汉族),海南琼海人 ,现任海南师范大学化
学与化工学院讲师 ,硕士学位 ,主要从事天然产物化学研究工作.
＊通讯作者简介:陈光英(1971-), 女(汉族),四川射洪人 , 现任海南师范
大学化学与化工学院教授 ,博士学位 ,主要从事天然产物化学研究工作.
青梅茎中岩白菜素的提取工艺研究
莫峥嵘 , 蔡仁文 , 李玖慧 , 陈光英＊ , 韩长日
(海南省热带药用植物化学重点实验室 ,海南师范大学化学与化工学院 ,海南 海口　571158)
摘要:目的 研究青梅茎中提取岩白菜素的最佳工艺。方法 以岩白菜素含量为指标 , 比较冷浸提取 、超声提取 、回流提
取 3种方法提取物中岩白菜素含量。并以正交实验确定回流提取的最佳工艺。结果 3种提取方法中回流提取的提取物
中岩白菜素含量最高 , 正交实验优化条件为:料液比为 1:15,提取时间为 1.5 h, 提取次数 1次 。结论 在此最佳参数组合
下 , 岩白菜素的含量为 0.23%。
关键词:青梅;　岩白菜素;　提取工艺
中图分类号:R284.2　　文献标识码:A　　文章编号:1008-0805(2008)12-封 3-02
StudyontheExtractionTechnologyofBergeninfromtheStemofVaticaMangachpoi
Blanco　　
MOZheng-rong, CAIRen-wen, LIJiu-hui,CHENGuang-ying＊ ,HANChang-ri
(KeyLabofTropicalMedicinalPlantChemistryofHainanProvince, ColegeofChemistry＆ChemicalEnginer-
ing, HainanNormalUniversity, Haikou571158, China)
Abstract:ObjectiveTostudythebestextractiontechnologyofbergeninfromthestemofVaticaMangachpoiBlancogrowingin
Hainan.MethodsThecold-soakedextracting, ultrasonicextractionandheatrefluxextractiontechnologieswererespectivelyused
forextractionofbergenin.Accordingtotheorthogonaldesign, theoptimumrefluxextractionwassoughtthroughexperimentalinvesti-
gation.ResultsTheoptimumparametersofextractingbergeninwereasfolows:extractingfor1.5hours, onetime, and1:15ofthera-
tioofmaterialandsolvent.ConclusionTheyieldingcontentofbergeninwas0.23% attheconditionofoptimumparameters.
Keywords:VaticamangachpoiBlanco;　Bergenin;　Extractiontechnology
　　青梅 VaticamangachpoiBlanco系龙脑香科(Diptercocarpace-
ae)青梅属(Vaticagenus)植物 , 主要分布于海南保亭 、三亚 、东
方 、白沙 、乐东 、万宁和琼中等地 [ 1] 。 在民间 , 海南青梅叶长期用
作杀菌消毒 、治疗肝炎及提取中药龙脑香。
通过对青梅茎的有效成分的提取 、分离 、纯化及结构鉴定 ,确
定青梅中含有岩白菜素(bergenin)[ 2] 。岩白菜素主要作用是止
咳祛痰 , 但近年的药理实验发现岩白菜素还具有抗炎 、护肝 、抗溃
疡 、提高免疫等作用 [ 3] 。 陈光英等 [ 4]用高效液相色谱法测定青
梅茎皮中岩白菜素的含量 ,其含量为 0.8%。
由于青梅茎中含有大量的岩白菜素 ,而青梅茎中岩白菜素的
提取工艺研究还未见报道 , 因此 ,为了充分利用青梅药用植物 ,本
实验拟对青梅茎岩白菜素的提取工艺进行实验和比较 , 以期优
化 、筛选出理想的提取工艺。
1　器材
大连依利特公司 UV230紫外检测器 , P230高压恒流泵(双
泵), EC2000工作站;日本 SHIMADZU十万分之一天平;甲醇为
色谱纯 , 水为重蒸水 , 其余试剂为分析纯;岩白菜素标准品(购
自芜湖尔塔医药科技有限公司);青梅药材采自海南万宁 , 经海
南师范大学生命科学学院钟琼芯副教授鉴定为龙脑香科青梅属
植物 VaticamangachpoiBlanco, 样本保存在海南师范大学热带药
用植物化学重点实验室内。
2　方法
2.1　色谱条件 [ 4] 色谱柱:KromasilC18(250 mm×4.6 mm, 5μm);流动相:A:0.5% 冰乙酸水溶液(V/V), B:甲醇。梯度洗
脱 , 洗脱条件如下:0 min(A:80, B:20 V/V);10 min(A:65, B:35
V/V);25min(A:64, B:36V/V);30 min(A:0, B:100 V/V);42min
(A:20, B:80 V/V);流速:0.4 ml· min-1;检测波长 274 nm;柱
温:30 ℃;进样量:10μl。在此色谱条件下 ,青梅茎中岩白菜素样
品与岩白菜素对照品相比较 ,保留时间基本一致 , 在 274 nm波长
处其它色谱峰干扰小 ,青梅茎岩白菜素得到较好的分离而且含量
较高 , 见图 1和图 2。
图 1　岩白菜素对照品的 HPLC图谱
2.2　标准曲线的绘制 精密称取干燥至恒重的岩白菜素对照品
10 mg, 置于 25 ml容量瓶中 , 加甲醇溶解并定容 , 制成浓度为
0.4 mg· ml-1的储备液。以此为母液配制浓度为 0.2 mg· ml-1
溶液;再以 0.2mg· ml-1为母液 ,配制浓度为 0.1 mg· ml-1的溶
液;依次类推 , 配制成浓度分别为 0.05 , 0.02 5, 0.012 5 mg·
ml-1的标液 [ 4] 。精密吸取不同浓度的对照品溶液各 10μl, 按上
述色谱条件测定峰面积 ,以峰面积为纵坐标 ,对照品进样质量为
横坐标 ,进行回归分析 , 则回归方程为 Y=3961.7X-103.4, R2 =
0.999 1,结果表明 , 在 0.125 ～ 4 μg之间 ,峰面积与进样量之间的
线性关系良好。该定量分析方法可用于青梅茎提取液中岩白菜
素含量的检测分析。
图 2　青梅茎岩白菜素样品的HPLC图谱
2.3　不同提取方法提取物中岩白菜素的含量比较 [ 5] 称取青梅
茎粗粉 1.0 g3份 ,分别加 15倍量 95%的乙醇 , 用冷浸提取法冷
浸两次 , 1天 /次;超声提取法提取两次 , 20 min/次;回流提取法提
取两次 , 1.5 h/次。 分别合并两次提取液 , 过滤 , 浓缩定容置 10
ml容量瓶 ,备用。按 “ 2.1”项色谱条件测定岩白菜素含量 , 结果
表明 , 用回流提取法得到的提取物岩白菜素含量最高。所以以下
实验选择回流提取法进行提取条件优化筛选。
2.4　回流提取法提取条件优化筛选 [ 6 ～ 8]
2.4.1　回流提取法单因素实验
2.4.1.1　不同提取溶剂对提取物岩白菜素含量的影响 采用水 、
石灰水和浓度分别为 30%, 40%, 50%, 60%, 70%, 80%, 95%的
乙醇作为提取溶剂进行筛选实验 ,结果表明 , 用乙醇提取的岩白
菜素含量比用水 、石灰水提取的都要高 , 不同浓度的乙醇提取的
岩白菜素含量也不同 , 60%的乙醇为溶剂提取岩白菜素的含量最
高 , 因此选择 60%乙醇为最佳提取溶剂。
2.4.1.2　提取时间对提取物岩白菜素含量的影响 分别以 1,
1.5, 2, 2.5, 3 h为提取时间进行筛选实验 ,结果表明:随着提取时
间的延长 , 所提取的青梅茎中的岩白菜素的含量逐渐减少 , 2 h
后岩白菜素含量趋于较稳定的状态 , 故认为 1 h为适宜提取
时间。
2.4.1.3　提取次数对提取物岩白菜素含量的影响 选择提取次
数分别为 1次 、2次 、3次进行筛选实验 , 结果表明:提取次数为 1
次时 , 岩白菜素含量最高 , 之后略有下降并趋于较稳定的状态。
因此 , 以 1次为较理想的提取次数。
2.4.1.4　提取料液比对提取物岩白菜素含量影响 选择料液比
1:10, 1:15, 1:20, 1:25分别进行实验 , 结果表明:随着料液比的
增大 , 所提取岩白菜素的含量逐渐增大 , 当料液比为 1:15时 ,出
现最大值 , 之后下降。因此 ,认为料液比以 1:15为最佳值。
2.4.2　回流提取法多因素正交实验 在上述单因素实验的基础
上 , 选取了料液比 (A)、提取次数 (B)、提取时间(C)作为考察因
素 , 分别称取 1.0g青梅茎粗粉 , 以岩白菜素的含量作为考核指
标 , 按 3因素 3水平进行正交实验 ,其正交实验设计见表 1, 正交
实验结果统计见表 2。
表 1　回流提取法多因素正交实验设计
水平 A料液比
B
提取次数
C
提取时间t/h
1 1:13 1 1
2 1:15 2 1.5
3 1:17 3 2
表 2　L9(34)回流提取法多因素正交实验结果统计
实验
序号
A
料液比
B
提取次数
C
提取时间 t/h
岩白菜素含量
/mg· g-1
1 1 1 1 2.141 1
2 1 2 2 2.077 7
3 1 3 3 2.077 7
4 2 1 2 2.280 3
5 2 2 3 1.725 1
6 2 3 1 1.784 1
7 3 1 3 1.971 6
8 3 1 3 1.971 6
9 3 2 1 1.916 7
I1 6.446 2 6.393 0 5.842 8I2 5.789 5 5.720 4 6.164 9I3 5.696 1 5.818 4 5.983 1
R 0.25 0.22 0.11
以正交实验法优选了乙醇回流提取青梅茎中岩白菜素的提
取工艺 ,结果表明 , 各因素对提取效果的影响主次关系为提取料
液比(A)>提取次数(B)>提取时间(C), 确定最佳提取工艺
为:提取料液比 1:15, 提取次数 1,提取时间 1.5 h。
2.5　最佳工艺验证 称取青梅茎粗粉 1.0 g, 平行 3份。按上述
正交实验法优选的最佳工艺条件进行实验。结果见表 3。
表 3　最佳工艺条件验证
实验序号 岩白菜素含量 /mg· g-1
1 2.294 7
2 2.281 6
3 2.271 4
3次重复最佳工艺验证表明 , 本工艺设计合理 ,稳定可行。
3　结论
本实验确定了回流提取法提取青梅茎岩白菜素的工艺条件。
单因素实验最佳条件为:60%乙醇为提取溶剂 、提取料液比为 1:
15, 提取次数为 1, 提取时间为 1h。正交实验最佳工艺为:提取料
液比 1:15, 提取次数 1,提取时间 1.5 h。在优化条件筛选时 , 以
正交实验结果为准。
青梅茎中岩白菜素的含量为 0.23%, 而青梅茎皮中岩白菜
素的含量为 0.8%,主要是由于青梅茎比青梅茎皮含有较多的纤
维素所致。
参考文献:
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