全 文 ：微柱高效液相色谱法测定岩白菜素含量研究
张　甜1 ,郝南明2 ,董学畅1 ,张云霁3
(1.云南民族大学 化学与生物技术学院 ,云南 昆明 650031;2.文山师范高等专科学校 ,云南 文山 663000)
3.云南省施普瑞生物工程有限公司 ,云南 昆明 650106)
摘　要　研究了用微柱高效液相色谱法测定岩陀及复方岩白菜素片中岩白菜素的含量.样品中岩白菜素用甲醇超声振
荡提取 ,提取液通过 Sep-Pak-C18固相萃取小柱过滤收集 , 然后以Waters XterraTM RP18(1.0×50 mm , 2.5 μm)微柱为固定相 ,
22%的甲醇为流动相分离 ,岩白菜素在 0.99min即可达到基线分离 , 用紫外二极管矩阵检测器检测.方法标准回收率为 98.1%
～ 104%,相对标准偏差为 1.7%～ 2.2%.此方法可快速 、准确的测定岩白菜样品中岩白菜素的含量.
关键词　微柱高效液相色谱;岩白菜素;分析
【中图分类号】O652.63 【文献标识码】A 【文章编号】1672—8513(2005)02-0128-03
Study on Microcolumn High Performance Liquid Chromatography for the
Determination of Bergeninum in Rodgersia Pinnata
Hemsl and Compound Bergeninum Tablets
ZHANG Tian1 , HAO Nan-ming2 , DONG Xue-chang1 , ZHANG Yun-ji1
(1.School of Chemistry and Biotechnology , Yunnan Nationalities University , Kunming 650031 ,China;
2.Wenshan Teachers College , Wenshan 663000 , China;3.Yunnan Spirin Biotechnology
Co., Ltd , Kunming 650106 , China)
Abstract:A microcolumn high performance liquid chromatography method for the determinationof bergeninum in
Rodgersia pinnata Hemsl and compound bergeninum tablets was studied.The bergeninum was extracted from the sample
with methanol by ultrasonic extraction for 45 min.Then the bergeninum was separated on a Waters XterraTM RP18(1.0×
50mm , 2.5μm)chromatogram microcolumn with 22%methanol in 0.99 min , and monitored with the photodiode array
detector.The recoveries of the flavonoids are 98.1%～ 104%, and relative standard deviations are 1.7%～ 2.2%.This
method was applied to the determination of bergeninum with good results.
Key words:microcolumn high performance liquid chromatography;bergeninum;analysis
　　利用高科技手段 ,制定出能切实控制内在质量
的药品标准 ,是我国传统医药走向世界的重要举措
之一.
岩白菜素又称岩白菜内酯 、矮茶素 、佛手配
质[ 1 ,2] ,为虎耳草科植物岩白菜 、岩陀等的有效成
分.岩白菜类植物在云南分布较多 ,如滇产黄毛岩白
菜和岩陀(图 1 、图 2).岩白菜素具有止咳作用 ,被
《中华人民共和国药典》收为镇咳祛痰药 ,主要用于
治疗慢性支气管炎 ,另外还有平喘 、清热解毒 、止血
生肌等功效.其特点是对咳嗽中枢具有选择性抑制
作用 ,副作用小而不会产生耐药性.目前岩白菜素的
定量分析方法主要有紫外分光光度法[ 3] 、薄层扫描
法[ 4]和高效液相色谱法[ 5]等.由于微柱高效液相色
谱具有流动相消耗小 ,分析时间短 ,可不分流直接和
质谱联用等特点 ,近几年来得到了迅速发展[ 6-8] .本
文研究了用微柱高效液相色谱法分析岩陀及复方岩
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收稿日期:2004-09-01
作者简介:张甜(1980～ ),女(汉族), 河南驻马店人 ,硕士研究生 , 主要从事天然产物分离 、分析科学的学习及研究.
通讯联系人:董学畅(1945～ ), 男(白族), 云南大理人 , 硕士生导师 , 教授 , 主要从事功能有机化学试剂的合成与应用
研究.
第 14 卷第 2期
2005 年4 月 　　 云南民族大学学报(自然科学版)Journal of Yunnan Nationalities University(Natural Sciences Edition)
Vol.14 , No.2
Apr.2005
白菜素片中岩白菜素的含量 ,可使岩白菜素在不到
1分钟的时间内即可达到基线分离.和常规色谱法
相比 ,新方法操作简捷 、分析时间大为缩短.
1　实验部分
1.1　主要仪器与试剂
Alliance 高效液相色谱仪(美国Waters公司),包
括2690分离系统(四元泵 、柱温箱及自动进样器),
996紫外二极管矩阵检测器 ,Millennium32色谱管理
软件.
甲醇:高效液相色谱专用(Fisher公司);水为石
英亚沸蒸馏水并用Milli-Q50(美国Millipore公司)
超纯水仪处理 ,电阻(18Ψ.cm-1;岩白菜素标样为植
物中提取所得 ,经核磁和质谱鉴定为纯品.
1.2　色谱条件
色谱柱:Waters XterraTM RP18 (1.0 ×50mm ,
2.5μm);固相萃取柱为Waters Sep-Pak-C18固相萃
取小柱;流动相为:甲醇(V)∶水(V)=22∶78;流速为
0.1mL/min;进样体积 10μL.
1.3　对照品溶液的配制
准确称取岩白菜素标样 0.05g ,用甲醇溶解 ,置
于50mL 容量瓶中 ,并用甲醇定容 ,然后再以此溶液
为母液 ,分别配制成不同浓度的标准溶液 ,按以上色
谱条件进行分析.
1.4　待测样品溶液的配制
将待测样品粉碎后过 80 目筛 , 准确称取 0.
2000g ,加入 45mL甲醇超声振荡浸取 45min ,过滤并
定容到50mL ,取 5mL 滤液 ,以 10mL/min流速通过预
活化好的Waters Sep-Park-C18固相萃取小柱 ,弃去
最初的3 mL ,收集后面的 2mL用 0.45μm 针头过滤
器过滤 ,进样 10μL分析.
在上述色谱条件下样品和标样的色谱图见图 3.
2　结果与讨论
2.1　检测波长的选择
用二极管矩阵检测器对标样进行紫外扫描 ,所
得岩白菜素光谱如图 4所示 ,图中出现两个吸收峰 ,
分别在 272nm和 216nm 处 ,考虑到流动相中甲醇在
216nm附近对基线影响较大 ,实验中选择 272nm 作
为检测波长.
2.2　流动相的选择
考察了甲醇(V)∶水(V)=25∶75 , 甲醇(V)∶水
(V)=22∶78 ,乙醇(V)∶水(V)=20∶80 ,乙腈(V)∶水
(V)=20∶80 等几种流动相系统下岩白菜素出峰的
情况 ,发现当甲醇(V)∶水(V)=22∶78时分离效果和
峰形较好 ,岩白菜素的保留时间为 0.99min.
2.3　样品前处理
岩白菜素在极性有机溶剂中具有较大的溶解
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第 2 期　　　　　　　　张　甜 , 等:微柱高效液相色谱法测定岩白菜素含量研究
度 ,在甲醇中溶解性最好 ,故实验选用甲醇为提取溶
剂.试验了振荡浸取 、超声振荡浸取和加热回流提取
三种方法.结果表明超声振荡浸取 45min左右就能
使岩陀和复方岩白菜素片样品中的岩白菜素完全提
取出来 ,与其他方法相比节省时间 、不需加热 、而且
便于样品批量处理 ,因此实验选用甲醇 45mL 超声
振荡浸取 45min 来提取样品中的岩白菜素.
样品中除含有岩白菜素外 ,还含有少量弱极性
的干扰物质 ,该类物质在本实验的流动相条件下不
能完全洗脱下来 ,在色谱柱上残留积累 ,造成污染.
采用Waters Sep-Pak-C18固相萃取小柱来分离样
品提取液中的干扰物质 ,取样品的甲醇提取液先通
过小柱 ,可快速地实现样品的纯化.新方法用Waters
SPE真空提取装置 ,每次可同时处理 20 个样 ,小柱
活化和样品预分离的流速均为 10mL/min.
2.4　回归方程 、相关系数及检测限
分别配制浓度为 4μg/mL -1000μg/mL 一系列
的标准溶液 ,进样后计算出不同浓度的峰面积 ,计算
出回归方程为:A=2.9×105C-172.58259　(r=0.
9998)
在信噪比 S/N =3 下 , 测得最低检测浓度为
6.0ng/mL.
2.5　回收率实验及精密度
准确称取相同待测样品两份 ,其中一份为基准 ,
另一份加入已知量岩白菜素标样 ,在相同条件下测
定 5次 ,通过加入岩白菜素的测出率计算回收率 ,并
计算出相对标准偏差 ,结果表明当样品加入量都为
5mg 时 ,岩陀梗样品的平均回收率为 98.1%,岩陀片
样品的回收率为 104%,复方岩白菜素片样品的平
均回收率为 101.6%.
2.6　样品分析结果
待测样品按1.4处理 ,再进样分析 ,结果见表 1.
表 1 样品分析及结果
样品 测定值(%)RSD(%) 标准回收率(%)
岩陀梗 4.59 2.2 98.1
岩陀片 5.82 1.8 104
复方岩白菜素片 98.2 1.7 101.6
3　结论
从与传统高效液相色谱法的比较(表 2)可以看
出 ,由于采用了微柱高效液相色谱技术 ,分离时间比
常规高效液相色谱法大大缩短 ,完全分离岩白菜素
素只需 0.99min ,流动相流速只需 0.1mL/min ,流动
相消耗比常规高效液相色谱大为减少 ,分析精密度
和回收率也得到较大改善.新方法可用于岩白菜素
提取方法的评价及药品中岩白菜素的质量监控.
参考文献:
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(责任编辑　王　琳)
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