全 文 ：作者简介:湛建峰 , 硕士研究生 , 主管药师;研究方向:药物分析;Tel:(010) 67095745;E-mail:zhanjianfeng2000@t om.com
反相离子对色谱法同时测定复方岩白菜素片中岩白菜
素和马来酸氯苯那敏的含量
湛建峰1 , 2 , 4 , 张　雁3 , 黄海伟4 (1 湖南省岳阳市药品检验所 , 岳阳　414000;2 中国药科大学;
　3 湘潭市药品检验所;　4中国药品生物制品检定所)
摘要:　目的 建立反相离子对色谱法测定复方岩白菜素片中岩白菜素和马来酸氯苯那敏含量的方法。方
法采用反相离子对色谱法 , 色谱柱为 Ag ilent zorbax C8 ;以 0.05mo l·L-1磷酸二氢钠 (含 4mmol· L-1庚
烷磺酸钠 , 用磷酸调节 pH 至 3.0)-乙腈 (7∶3 , v/v)为流动相;流速为 1.0mL · min-1 , 检测波长:
208nm;柱温:26℃。结果 岩白菜素在浓度为 0.125 ～ 0.375mg · mL-1时呈线性关系 , 平均回收率为
99.88%, RSD为 0.44%;马来酸氯苯那敏在浓度为 0.002 ～ 0.006mg ·mL-1时呈线性关系 , 平均回收率
为 99.29%, RSD为 0.51%。结论 该法简便 、 可靠 、准确 , 适合于复方岩白菜素片中岩白菜素和马来酸
氯苯那敏含量的测定 。
关键词:　岩白菜素;马来酸氯苯那敏;反相离子对色谱法;含量测定
中图分类号:R917　　文献标识码:A　　文章编号:1002-7777 (2009)08-0801-04
Determination of Bergenin and Chlorphenamine Maleate in Tabellae Bergenin Compositaeby Ion Pair Chromatography
Zhan Jianfeng1 , 2 , 4 ,Zhang Yan3 and Huang Haiw ei2(1Yueyang Inst itute fo r Drug Control , Hunan Province ,
Yueyang 414000;　2 Chinese Pharmaceutical Unive rsity ;　3Xiang tan Institute for Drug Contro l;　4
National Inst itute for the Control of Pharmaceutical and Biolo gical Products)
ABSTRACT:　 Objective To establish an Ion Pair chromatog raphy me thod fo r the determina tion of
bergenin and chlo rphenamine maleate in tabellae bergenin compositae.Methods The determinat ion w as
performed on a A gilent zorbax C8 column and mobi le phase consisted of 0.05mol·L-1 Sodium Dihydrogen
Phosphate (containing 4mmo l · L-1 sodium heptanesulfonate , adjusted pH to 3.0 by pho spho ric acid)-
acetonit rile(7∶3 , v/v).The f low rate w as 1.0mL ·min-1 , and the de termination w aveleng th w as se t at
208nm.Results Bergenin and chlorphenamine show ed a good lineari ty over the range of 0.125 ～ 0.375mg ·
mL-1 and 0.002 ～ 0.006mg ·mL-1 , respectively .The average recoveries of bergenin and chlorphenamine
were 99.88%(RSD=0.44%)and 99.29%(RSD=0.51%).Conclusions The method is simple , reliable
and accura te for determination of bergenin and chlorphenamine in tabel lae bergenin compositae.
KEYWORDS:　bergenin;chlo rphenamine maleate;ion pai r chromatog raphy ;determination
　　虎儿草科岩白菜素 (Bergenia)为多年生草本
植物[ 1] , 该属植物均可供药用。中药岩白菜为民间
常用药 , 最早载于清 《分类草药性》 , 具有滋补强
壮 , 止血 , 止咳等功效[ 2] 。马来酸氯苯那敏俗称扑
尔敏 , 为组胺 H 1 受体拮抗剂 , 能与组胺竞争 H 1
受体而对抗组胺的过敏作用。主要用于治疗各种过
敏性疾病 , 如虫咬 、药物过敏等 。复方岩白菜素片
为镇咳驱痰药 , 是由岩白菜素和马来酸氯苯那敏组
成的复方制剂 , 是市场上治疗支气管炎的首选药
物 , 收载于 《卫生部药品标准化学药品第一册》。
其仅对岩白菜素进行了紫外分光光度法的含量测
定[ 3] , 未对马来酸氯苯那敏进行测定。本文建立了
801中国药事 2009年第 23卷第 8期
DOI :10.16153/j.1002-7777.2009.08.020
用反相离子对色谱法同时测定岩白菜素及马来酸氯
苯那敏含量的方法 , 样品处理简单 , 方法快速 、 准
确 、 可靠 , 可有效控制该制剂质量 。
1　仪器与试药
日本岛津 LC-10A TVP 型高效液相色谱仪
(Class vp 工作站 , SPD-M10AVP 紫外检测器);
UV2501紫外可见分光光度计 (日本岛津)。
岩白菜素对照品 (中国药品生物制品检定所 ,
批号:111532-200202 含量测定用);马来酸氯苯
那敏对照品 (中国药品生物制品检定所 , 批号:
100047-200606 , 含量测定用 , 含量:99.7%);复
方岩白菜素片 (湖南湘潭飞鸽制药有限公司 , 批
号: 0712092 , 0711031 , 0710072 , 0802037 ,
0804059);乙腈为色谱纯 , 水为高纯水 , 其他试
剂 、 试药均为分析纯 。
2　方法与结果
2.1　色谱条件
色 谱 柱:Agi lent zo rbax C8 (4.6mm ×
250mm , 5 μm);流动相:0.05mol ·L-1磷酸二氢
钠 (含 4mmol · L-1庚烷磺酸钠 , 用磷酸调节 pH
至 3.0)-乙腈 (7∶3 , v/v);柱温:室温;流速:
1.0mL · min-1 , 检 测波 长:208nm 。进 样量:
20μL ;理论板数:以岩白菜素和马来酸氯苯那敏
计算 , 分别为 3273 和 11940;分离度:马来酸 、
氯苯那敏与岩白菜素为 2.0和 20.9。
2.2　对照品溶液的制备
精密称取岩白菜素对照品适量 , 加流动相适量
溶解 , 制成 500μg ·mL-1 , 作为岩白菜素对照品储
备液;另精密称取马来酸氯苯那敏对照品适量 , 加
流动相适量溶解 , 制成每 1mL 中含马来酸氯苯那
敏 20μg , 作为马来酸氯苯那敏对照品储备液 。精
密量取岩白菜素对照品储备液 5mL 和马来酸氯苯
那敏对照品储备液 2mL , 置 10mL 量瓶中 , 加流
动相稀释至刻度 , 摇匀即得。
2.3　供试品溶液的制备
精密称取复方岩白菜素片细粉适量 (约相当于
岩白菜素 125mg , 马来酸氯苯那敏 2mg)置
100mL 量瓶中 , 加流动相溶解并稀释至刻度 , 摇
匀 , 过滤 , 精密量取续滤液 2mL 至 10mL 量瓶中 ,
加流动相稀释至刻度 , 摇匀既得。
2.4　阴性对照液的制备
精密称取缺岩白菜素及马来酸氯苯那敏的辅料
适量 , 加流动相溶解并过滤 , 取续滤液作为阴性对
照液 。
2.5　测定法
分别精密吸取阴性对照液 、 对照品溶液 、 供试
品溶液各 20μL在上述色谱条件进样 , 测定 , 结果
见图 1。
a.对照品;b.供试品;c.阴性对照;
1.马来酸;2.岩白菜素;3.氯苯那敏。
图 1　H PLC 色谱图
2.6　线性关系考察
精密称取岩白菜素对照品 25mg , 置 50mL 量
瓶中 , 加流动相适量溶解后稀释至刻度 , 精密吸取
上述溶液 2.5 , 4.0 , 5.0 , 6.0 , 7.5mL , 分别置
10mL 量瓶 , 加流动相稀释至刻度 , 摇匀 , 分别精
密吸取 20μL 注入液相色谱仪 , 按上述色谱条件测
定岩白菜素峰面积 , 以浓度 (mg · mL-1)为横坐
标 (X), 以峰面积为纵坐标 (Y), 绘制标准曲线 ,
得回归方程:
Y =2.220×106X +5.385×106 　r=0.9991
结果表明 , 岩白菜素在 0.125 ～ 0.375mg · mL-1范
围内线性关系良好;精密称取马来酸氯苯那敏对照
品 10mg , 置 100mL 量瓶中 , 加流动相适量溶解后
稀释至刻度 , 精密量取上述稀释液 5mL 至 25mL
量瓶中 , 加流动相稀释至刻度。精密吸取 1.0 ,
1.5 , 2.0 , 2.5 , 3.0mL , 分别置 10mL 量瓶 , 加
流动相稀释至刻度 , 摇匀 , 分别精密吸取 20μL 注
入液相色谱仪 , 按上述色谱条件测定氯苯那敏峰面
积 , 以浓度 (mg ·mL-1)为横坐标 (X), 以峰面
积为纵坐标 (Y), 绘制标准曲线 , 得回归方程:
Y =2.293×105X -1.627×103 　r=0.9998
结果表明 , 氯苯那敏在 0.002 ～ 0.006mg · mL-1范
围内线性关系良好 。
2.7　精密度与稳定性试验
取上述岩白菜素对照品 0.25mg ·mL-1的溶液
及马来酸氯苯那敏对照品 0.004mg ·mL-1的混合
802 中国药事 2009年第 23卷第 8期
溶液 , 连续进样 5次 , 以峰面积计算 , RSD 分别
为 0.10%和 0.12%。
取上述岩白菜素对照品 0.25mg ·mL-1的溶液
及马来酸氯苯那敏对照品 0.004mg ·mL-1的混合
溶液 , 分别在 0 , 2 , 4 , 6 , 8 , 10 , 12 , 24h 时分
别进样 20μL , 以峰面积计算 , RSD分别为 0.32%
和 0.27%, 表明供试品溶液在 24h内稳定。
2.8　重复性试验
取同一批号的复方岩白菜素片样品 (批号:
0712092)5份 (n=5), 照含量测定项下方法测
定 , 平均含量分别为 92.62% , RSD为 0.22%。
2.9　回收率试验
精密称取岩白菜素适量和马来酸氯苯那敏对照
品溶液 , 按 “2.2” 项下方法分别配制成低 、 中 、
高 3种不同浓度的溶液 (80%, 100%, 120%)各
3份 , 各加入处方量辅料 , 进样 3次 , 计算岩白菜
素和马来酸氯苯那敏的平均回收率 , 结果见表 1。
表 1　岩白菜素和马来酸氯苯那敏的回收率测定结果
岩白菜素
加入量
(mg)
测得量
(mg)
平均回收
率(%)
RSD
(%)
　
马来酸氯苯那敏
加入量
(mg)
测得量
(m g)
平均回收
率(%)
RSD
(%)
100.23 100.14 　 　 　 1.64 1.64
99.59 100.03 99.72 0.80　 1.64 1.59 98.58 1.5
100.36 100.17 　 　 　 1.64 1.62
125.09 125.62 　 　 　 2.05 2.07
125.20 125.42 100.19 0.22　 2.05 2.06 100.49 0.49
125.41 125.39 　 　 　 2.05 2.05
150.20 150.19 　 　 　 2.46 2.44
150.13 150.24 99.95 0.15　 2.46 2.45 98.78 1.10
150.14 149.81 　 　 　 2.46 2.40
2.10　样品测定
精密称取复方岩白菜素片细粉适量 (约相当于
岩白菜素 125mg , 马来酸氯苯那敏2mg)置100mL
量瓶中 , 加流动相溶解并稀释至刻度 , 摇匀 , 滤
过 , 取续滤液 2.00mL 至 10mL 量瓶中 , 加流动相
稀释至刻度。另取岩白菜素对照品及马来酸氯苯那
敏对照品适量 , 加流动相溶解并稀释至每 mL 含岩
白菜 素 0.25mg · mL-1 和马 来 酸 氯 苯 那 敏
0.004mg ·mL-1的混合溶液 。在上述色谱条件下进
样 20μL 测定 , 按外标法计算含量 , 并与部颁标准
方法比较 , 结果见表 2 , 表 3 。
　　经方差分析 , 紫外分光光度法与反相离子对色
谱法测定岩白菜素含量 , 结果无显著性差异 (P >
0.05), 反相离子对色谱法可作为该制剂的含量测
定方法。
表 2　岩白菜素样品含量测定结果
批号 紫外分光光度法(标示含量%)
RSD
(%)
反相离子对色谱法
(标示含量%)
RSD
(%)
0712092 93.64 0.22 92.82 0.32
0711031 95.00 0.30 94.73 0.18
0710072 94.42 0.21 93.16 0.27
0802037 98.66 0.18 98.10 0.28
0804059 99.42 0.26 98.13 0.31
表 3　马来酸氯苯那敏样品含量测定结果
批号 反相离子对色谱法(标示含量%) RSD(%)
0712092 93.51 0.38
0711031 94.25 0.24
0710072 95.86 0.53
0802037 97.27 0.36
0804059 99.42 0.68
3　讨论
3.1　色谱条件的选择
岩白菜素的测定方法有许多文献报道[ 4-6] , 复
方岩白菜素片的液相含量测定文献报道[ 7-9] 也很多 ,
对于流动相多为甲醇-水 、 乙腈-水 , 改变峰形的方
法多为调节溶液的 pH 值或者加入三乙胺 , 有的文
献甚至把马来酸峰误认为氯苯那敏峰 。通过本文建
立的方法与文献报道方法比对 , 马来酸峰与岩白菜
素峰分离良好 , 氯苯那敏峰的峰形有显著改善 , 而
且理论塔板数提高约 10倍 。
通过 DAD 检测器对波长的分析 , 2 种物质在
紫外吸收段的吸收峰平缓 , 在 208nm 的末端吸收
处 , 2种物质的吸收峰响应值理想 , 且基线平整无
干扰。流动相中乙腈的量对马来酸氯苯那敏峰的保
留时间影响明显 , 而在一定范围内对岩白菜素峰的
保留时间影响则不大 。最后试验确定当乙腈量为
30%时 , 两峰的分离效果最佳 。
因马来酸为二元酸 , 其二级电离常数对应的
PKa分别为 2.00和 6.26[ 10] , 在通常的流动相 pH
范围内 , 马来酸氯苯那敏主要解离为氯苯那敏阳离
子和马来酸阴离子 , 氯苯那敏峰形常常不理想 , 对
称性不好 , 不利于定量分析 。因为马来酸氯苯那敏
解离后形成的氯苯那敏是阳离子 , 所以 , 可选用阴
离子对试剂即长碳链磺酸盐类 (可选用的有戊烷磺
酸钠 、 庚烷磺酸钠 、辛烷磺酸钠 、十二烷基硫酸钠
等)作为离子对试剂 , 选用的阴离子对试剂 C 链
越长 , 在反相色谱中生成的离子对的疏水性越强 ,
在固定相上的保留值越大 。同时 , 调节 pH 偏酸
性 , 如 pH3.0 , 在此 pH 条件下 , (下转第 806页)
803中国药事 2009年第 23卷第 8期
70%。若采用 200mL 冲洗可消除该药物对 3 种试
验菌的抗菌作用 , 回收率分别为 82.5%, 79.7%,
80.2%。冲洗量 300mL 回收率分别为 92.6%,
90.7%, 95.6%。选择冲洗量 300mL 回收率效果
最佳 。
表 2结果显示 , 罗红霉素缓释颗粒控制菌检查
采用薄膜过滤法 , 若用 pH 7.0氯化钠-蛋白胨缓冲
液 300mL , 每次 100mL 进行冲洗 , 试验组 M UG
未显荧光 , MUG阴性 , 靛基质试液液面呈试剂本
色 , 结果未检出所加入的大肠埃希菌 , 说明不能消
除该药的抑菌成分 。而采用 pH7.0 氯化钠-蛋白胨
缓冲液 500mL 或 700mL , MUG 显荧光 , MUG 阳
性 , 靛基质试液液面呈玫瑰红色 , 结果检出大肠埃
希菌 , 可用于消除该药的抑菌成分 , 用于该药品控
制菌的检查。
对于采用离心集菌培养基稀释法的供试品 , 采
用 500r · min-1低速离心 5min 时 , 适当提速为
1000r · min-1离心 5m in , 药液相对澄清 , 易于洗
脱 , 各菌的回收率容易达到 70%。
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(上接第 803页)马来酸以一级电离为主 , 氯苯那
敏以氯苯那敏阳离子形式存在 , 加入的阴离子对试
剂可与氯苯那敏阳离子生成稳定的离子对 , 呈电中
性 , 可使氯苯那敏色谱峰形更尖锐 , 峰宽更窄 , 对
于色谱条件的优化有显著效果 。本试验曾以未加离
子对试剂的流动相作为色谱条件 , 结果氯苯那敏色
谱峰严重拖尾 , 峰宽增宽 , 柱效下降明显。试验证
明 , 反相离子对色谱法对于类似这种有机碱盐的色
谱分离是有优化作用的。
3.2　氯苯那敏峰的识别
马来酸阴离子与水中的 H +形成马来酸弱电解
质 , 存在电离平衡 , 在此 pH 条件下 , 为一级电
离。因此 , 马来酸氯苯那敏会出现 2个峰 , 一个是
马来酸峰 (用马来酸溶液定位), 极性较大 , 在反
相色谱中出峰时间短;另一个是中性离子对峰 , 极
性较小 , 保留值较大。在相同的色谱条件下进样 ,
马来酸峰 、岩白菜素峰及中性离子峰分离度良好 。
3.3　方法的比较
《卫生部药品标准化学药品第一册》 中采用紫
外分光光度法对该制剂中的岩白菜素进行含量测
定 , 其专属性不强 , 且原标准未对马来酸氯苯那敏
的含量进行限定 。本文采用反相离子对色谱法同时
对岩白菜素及马来酸氯苯那敏的含量进行测定 , 简
便 、 可靠 、准确 , 可实现在同一色谱系统下同时对
2种成分进行定量研究。
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