全 文 ：[中药指纹图谱 ]
新疆紫草 HPLC指纹图谱的研究
姜　林 1 , 　李晓瑾 2 , 　贾晓光2
(1.新疆医科大学附属中医医院药研室 ,新疆 乌鲁木齐 830000;2. 新疆中药民族药研究所 ,新疆 乌鲁木齐
830000)
收稿日期:2004-10-12
作者简介:姜　林(1969～ ),男 ,新疆人 ,主管药师,硕士 ,主要从事新药新制剂研发工作。电话:0991-5814127。
关键词:新疆紫草;高效液相;指纹图谱
摘要:目的:建立了新疆紫草高效液相指纹图谱 ,并将其作为鉴别方法进行了验证。方法:采用高效液相法确定了适宜的
色谱条件并对 7个不同产地的新疆紫草和 3个产地的硬紫草中所含组分进行综合评价并测定了其左旋紫草素的含量。
结果:7个不同产地的新疆紫草指纹图谱主要特征大致相同 ,其主要成分之一左旋紫草素的含量与对照药材比无显著性
差异 , 而 3个产地的硬紫草与对照药材比指纹图谱主要特征及左旋紫草素的含量都有较大差异。结论:该指纹图谱可作
为新疆紫草鉴别方法之一 ,为新疆紫草质量控制提供了依据。
中图分类号:R284. 1　　　　　文献标识码:A　　　　　文章编号:1001-1528(2005)11-1241-03
HPLC fingerpr int chromatogram ofRadix Arneb iae
JIANG Lin
1 , 　LIX iao-jin2 , 　JIA Xiao-guang2
(1. Th e TCM Hospita lAffi lia ted toMed ica lUn iversity ofX in jiang, U rm qi830000 , China;2. Ch in eseHerd and M inority Medicine In stitu te o fX in jiang , Ur-
m qi830000, Ch ina)
KEYWORDS:Radix Arnebiae;HPLC;fingerprint spectrum
ABSTRACT:AIM:To establish theHPLC fingprin t spectrum ofRad ix Arnebiae as identifica tion. METHODS:
HPLC finge rprin t spectrum ofRad ix Arnebiae collected from the seven p roduc tion places and that o fRad ix Lithosper-
m i from three production places w ere evalua ted based on shikonin con ten.t RESULTS:The ma jo r features o f
HPLC fingerprint of the seven production places w ere approxim ately sim ilar to contro l samp le there w as no signifi-
cant d iffe rence among the conten ts butRad ix Lithosperm i from three production places w ere not the same. CON-
CLUSION:TheHPLC fingerprint spectrum ofRad ix Arnebiae can be used as an identifica tion. Itmay prov ide the
basis for quality contro l ofRad ix Arnebiae.
　　新疆紫草 Arnebia euchroma (Roy le) Johnst是紫草科软
紫草属植物 , 也叫新疆软紫草 , 是我国常用中药材 ,药用部位
是其干燥的根 , 收载于《中华人民共和国药典》, 具有清热凉
血 、解毒透疹之功。研究表明其有效成分紫草素及其衍生物
含量比其他紫草高三倍以上 , 因品质好列为药典收载品种之
首 , 而行销国内外 ,有道地药材之誉。 紫草素及其衍生物有
抗菌 、抗炎 、促进肉芽组织生长 、抗绒毛上皮癌等多种生理病
理功能。临床上用于治疗肝炎 、静脉炎 、血管性紫癜 、银屑
病 、烧伤等多种疾病。药典中收载了薄层色谱鉴别和分光光
度法对总色素的测定 。因其成分复杂 ,只以单一化学成分评
价其质量 , 不能反映紫草的全部药理作用 ,因此本文以高效
液相为手段 , 采用指纹图谱对其质量进行控制 , 并为其鉴别
提供依据。
1　仪器和材料
A liance 2695高效液相色谱系统(脱气机 、四元泵 、柱温
箱 、PDA2996, Em powe r化学工作站 , 美国 W aters公司产品 ),
甲醇为色谱纯 ,水为超纯水 , 0. 45 μm针筒式滤器 , 新疆紫草
对照药材 、左旋紫草素标准品购自中国药品生物制品检定
所。乌市 、巴州 1、巴州 2、阿富汗 、哈密 、温泉 、硬紫草 1、硬紫
草 2、硬紫草 3等紫草药材购自原产地及河北安国药材市
场 ,并经我院中药鉴定室李永和教授鉴定确认。见表 1。
2　实验方法
2. 1　色谱条件　色谱柱 , Symm etry shie ld Rp18(150 mm ×
3. 9 mm , 5μm), 检测波长 516 nm , 柱温(35±5)℃, 流动相 ,
A液-水 , B液-乙腈 , 进样量 20 μL, 按表 2进行洗脱 , 检测时
间 60 m in。
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第 27卷　第 11期
中 成 药
Chine se T raditiona l PatentM ed icine
Novem be r 2005
Vo.l 27　No. 11
表 1　 药材产地及拉丁学名
样品名 产地 拉丁学名
乌市 新疆乌鲁木齐 A rn ebia eu chrom a (Roy le) John st
巴州 1 巴州撒播地 A rn ebia eu chrom a (Roy le) John st
巴州 2 巴州保护区 A rn ebia eu chrom a (Roy le) John st
阿富汗 阿富汗 A rn ebia eu chrom a (Roy le) John st
哈密 哈密 A rn ebia eu chrom a (Roy le) John st
温泉 温泉 A rn ebia eu chrom a (Roy le) John st
硬紫草 1 安国市场 L ithosperm um eryth rorhizon sieb. et Zucc
硬紫草 2 云南 L ithosperm um eryth rorhizon sieb. et Zucc
硬紫草 3 安国市场 L ithosperm um eryth rorhizon sieb. et Zucc
对照药材 巴州 A rn ebia eu chrom a (Roy le) John st
表 2　 流动相线形梯度
Tim e (m in) A B 流速 mL m in - 1
0 70 30 1. 00
15 60 40 1. 00
30 50 50 1. 00
45 40 60 1. 00
60 30 70 1. 00
2. 2　左旋紫草素标准溶液制备　精密称取左旋紫草素标准
品 3. 8 m g,加甲醇定容至 10 m L, 配成 0. 38 m g m L- 1溶液
备用。
2. 3　药材对照品的制备　精密称取新疆紫草对照品 1 g,加
甲醇 15 mL, 超声提取 90 m in, 过滤后定容至 20 mL, 放 4 ℃
冰箱备用。
2. 4　供试液的制备　将乌市 、巴州 1、巴州 2、阿富汗 、安国 、
温泉 、对照药材 7产地的新疆紫草药材经干燥后进行粉碎 ,
精密称取各样品粉末 1 g, 加甲醇 15 m L,超声提取 90 m in,过
滤后定容至 20 mL, 放 4℃冰箱备用。
2. 5　样品分析　将新疆紫草对照药材和乌市 、巴州 1、巴州
2、阿富汗 、安国 、温泉产的新疆紫草药材制成的供试液 , 按上
述色谱条件进行分析(图 1), 得各样品的 HPLC图谱相应峰
的各种数值 ,同时用左旋紫草素标准品溶液进样 , 确定左旋
紫草素的出峰时间 ,以测左旋紫草素的含量。见图 1。
3　方法学考察
3. 1　系统适应性试验　按色谱条件进行 , 以左旋紫草素计
算理论塔板数大于 5000,分离度大于 1. 5,对称因子为 1. 05。
图 1　新疆紫草对照药材 HPLC色谱图(g-左旋紫草素)
3. 2　精密度试验　取供试品溶液 ,连续测定 5次 , 共有峰相
对保留时间 RSD <2. 0%,共有峰相对峰面积 RSD <2. 1%。
3. 3　重现性试验　取供试品同法制备 5份溶液进行测定 ,
共有峰相对保留时间 RSD <2. 4%, 共有峰相对峰面积 RSD
<2. 3%。
3. 4　稳定性试验　取供试品溶液 , 分别于 0, 6, 12, 18, 24 h
测定 , 共有峰相对峰面积 RSD <3. 0%。
4　实验结果
4. 1　相对保留值指纹谱的建立　根据公式计算各样品色谱
峰的 a值和 RA值 , 凡是 a值相同或相近 ,最大吸收波长 、比
吸收值都相等的峰 , 即可认为同一化合物峰 , 将各个样品每
个峰的 RA列在相应的 a值项下 , 某 a值项无相应峰的样品
其 RA值为 0, 得到相对保留值指纹谱 ,见表 3。
4. 2　样品之间的相似性　计算各个样品两两之间的峰重叠
率并列表 , 组成反映样品间相似性的峰重叠率距阵 ,该距阵
为对称矩阵 , 只列出一半即可 , 见表 4。
　　从表 4中可知 6产地新疆紫草与对照药材相比 , 色谱峰
的重叠率均在 66. 67 以上。
4. 3　样品的 HPLC的 8强峰　各个样品均选出其中峰面积
最大的 8个峰排列成表 , 得 5个样品的 8强峰 ,见表 5。
表 3　 不同产地紫草相对保留值指纹谱数据
相对保
留时间
a
各样品的 RA
乌市 巴州
1
巴州
2
阿富
汗 安国 温泉
对照
药材
共有
峰
0. 03 0. 00 0. 49 0. 25 0. 36 0. 69 0. 00 0. 00 4
0. 07 0. 53 0. 17 1. 00 1. 10 1. 50 0. 00 0. 44 6
0. 09 1. 80 2. 60 3. 20 2. 90 2. 20 1. 80 3. 10 7
0. 11 0. 19 0. 00 0. 26 0. 18 0. 33 0. 36 0. 24 6
0. 75 0. 00 0. 00 0. 00 0. 26 0. 00 0. 00 0. 00 1
0. 91 0. 00 0. 14 0. 00 0. 00 0. 00 0. 00 0. 00 1
1. 00 0. 17 3. 70 3. 10 1. 60 0. 83 2. 70 3. 10 7
1. 17 0. 00 0. 61 0. 78 0. 56 0. 20 0. 00 0. 44 5
1. 21 1. 10 45. 0 56. 0 18. 0 6. 40 45. 0 30. 0 7
1. 26 0. 00 1. 10 1. 60 0. 35 0. 20 1. 40 0. 76 6
1. 40 0. 00 0. 00 0. 00 0. 00 0. 00 0. 00 0. 22 1
1. 42 0. 00 0. 55 0. 33 0. 00 0. 20 0. 60 0. 34 5
1. 48 2. 80 7. 10 4. 70 0. 00 3. 60 11. 0 3. 00 6
1. 65 1. 60 11. 0 13. 0 6. 10 6. 70 23. 0 7. 50 7
1. 91 3. 30 48. 0 32. 0 29. 0 12. 5 24. 0 27. 0 7
1. 95 3. 20 35. 0 34. 0 40. 0 9. 10 27. 0 22. 0 7
2. 17 0. 25 0. 46 0. 59 0. 00 0. 00 0. 00 0. 68 4
2. 27 0. 28 1. 10 0. 27 5. 20 0. 17 0. 00 0. 97 6
2. 31 0. 00 0. 00 0. 00 0. 00 0. 00 0. 25 0. 00 1
2. 73 0. 00 0. 19 0. 16 0. 00 0. 00 0. 00 0. 00 2
总峰数 11 16 16 13 14 11 15
总相对面积 15. 22 157. 2 151. 2 105. 8 44. 94 137. 1 99. 79
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第 27卷　第 11期
中 成 药
Chine se T raditiona l PatentM ed icine
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表 4　 紫草 HPLC峰重叠率
样品号 乌市 巴州 1 巴州 2 阿富汗 安国 温泉 对照药材
乌市 100
巴州 1 74. 07 100
巴州 2 81. 48 93. 75 100
阿富汗 75 75. 86 82. 76 100
安国 80 86. 67 93. 33 81. 48 100
温泉 72. 73 66. 67 74. 07 66. 67 80 100
对照药材 84. 62 83. 87 90. 32 78. 57 89. 66 76. 92 100
　　从表 5中可知 6产地新疆紫草 8强峰与对照药材 8强峰
相比无明显差别。
4. 4　特征指纹峰　根据样品中的 8强峰及各色谱峰出现的
频率 , 选出 a值为 0. 09, 1. 00, 1. 21, 1. 48, 1. 65, 1. 91, 1. 95共
7个峰为本实验所研究新疆紫草的特征指纹峰。现将 7个样
品的特征指纹峰检出情况列于表 6中 , 并列出左旋紫草素的
含量 , 以规定两者之间的相关性。
　　从表 6可以看出 6产地新疆紫草中的化学组分与对照
药材相比 , 大致相同 ,其主要组分基本相同 ,其中巴州 1、巴州
2、阿富汗 、温泉产地新疆紫草中左旋紫草素的含量与对照药
材相比无显著性差异(P >0. 05), 而乌市 、安国中左旋紫草素
的含量与对照药材相比有显著性差异(P <0. 05)另外 6产地
新疆紫草药材的特征峰检出率除阿富汗为 85. 7%外 ,其余均
为 100%,说明各样品之间的化学成分相似性较高。
表 5　 紫草 HPLC 8强峰
样品号 1 2 3 4 5 6 7 8
a RA a RA a RA a RA a RA a RA a RA a RA
乌市 1. 91 3. 30 1. 95 3. 20 1. 48 2. 80 0. 09 1. 80 1. 65 1. 60 1. 21 1. 10 0. 07 0. 53 2. 27 0. 28
巴州 1 1. 91 48. 0 1. 21 45. 0 1. 95 35. 0 1. 65 11. 0 1. 48 7. 10 1. 00 3. 70 0. 09 2. 60 1. 26 1. 10
巴州 2 1. 21 156. 0 1. 95 34. 0 1. 91 32. 0 1. 65 13. 0 1. 48 4. 70 0. 09 3. 20 1. 00 3. 10 1. 26 1. 60
阿富汗 1. 95 40. 0p 1. 91 29. 0 1. 21 18. 0 1. 65 6. 10 2. 27 5. 20 0. 09 2. 90 1. 00 1. 60 0. 07 1. 10
安国 1. 91 12. 5 1. 95 9. 10 1. 65 6. 70 1. 21 6. 40 1. 48 3. 60 0. 09 2. 20 0. 07 1. 50 1. 00 0. 83
温泉 1. 21 45. 0 1. 95 27. 0 1. 91 24. 0 1. 65 23. 0 1. 48 11. 0 1. 00 2. 70 0. 09 1. 80 1. 26 1. 40
对照药材 1. 21 30. 0 1. 91 27. 0 1. 95 22. 0 1. 65 7. 50 0. 09 3. 10 1. 00 3. 10 1. 48 3. 00 2. 27 0. 97
表 6　 新疆紫草 HPLC特征指纹峰检出率及
左旋紫草素含量
相对保留时间
a
样品名称
乌市 巴州 1巴州 2阿富汗 哈密 温泉 对照药材
0. 09 + + + + + + +
1. 00 + + + + + + +
1. 21 + + + + + + +
1. 48 + + + + + + +
1. 65 + + + + + + +
1. 91 + + + + + + +
1. 95 + + + + + + +
特征峰检出数 7 7 7 6 7 7 7
特征峰检
出率( ) 100 100 100 85. 7 100 100 100
重叠率( ) 84. 62 83. 87 90. 32 78. 57 89. 66 76. 92 100
左旋紫草
素含量( ) 0. 011 0. 164 0. 141 0. 093 0. 0372 0. 157 0. 136
4. 5　鉴定　根据制定出的特征指纹峰 , 应用特征峰检出率 、
重叠率 、左旋紫草素含量其对其他紫草进行鉴定 , 以检验其
可靠性 , 见表 7。
　　取硬紫草 1、硬紫草 2、硬紫草 3与对照药材对比根据制
定出的特征指纹峰 , 应用特征峰检出率 、重叠率 、左旋紫草素
含量其对其他紫草进行鉴定 , 结果从表 7看出 , 它们的特征
峰检出率均为 71. 4%, 重叠率分别为 74. 07%、 53. 85%、
61. 54%, 左旋紫草素含量 0. 0073、0. 011、0. 0098、0. 136与新
疆紫草相比特征峰检出率均低于 80%, 重叠率均低于 76%,
左旋紫草素含量均低于 0. 011%。
5　讨论
根据实验结果可知 6产地新疆紫草品质与新疆紫草对
照药材基本相同 , 均为真品 ,其中巴州 1、巴州 2药材品质较
表 7　 硬紫草 HPLC特征指纹峰检出率及
左旋紫草素含量
相对保留时间
a
样品名称
硬紫草 1 硬紫草 2 硬紫草 3 对照药材
0. 09 + + + +
1. 00 + + + +
1. 21 + + + +
1. 48 - - - +
1. 65 + + + +
1. 91 - + - +
1. 95 + - + +
特征峰检出数 5 5 5 7
特征峰检出率( ) 71. 4 71. 4 71. 4 100
重叠率( ) 74. 07 53. 85 61. 54 100
左旋紫草素含量( ) 0. 0073 0. 011 0. 0098 0. 136
好 , 而 3产地硬紫草样品均非新疆紫草。 本研究采用了
HPLC技术 , 以新疆紫草对照药材为基础 ,建立了新疆紫草的
指纹谱。在实验色谱条件下 , 能得到较多的色谱峰且分离效
果好 , 椐此所得的相对保留值也十分稳定 , 所建立的色谱指
纹谱具有较大的稳定性和可控性。 我们认为该方法能得到
新疆紫草药材所含组分的大量信息 ,其指纹谱能反映新疆紫
草药材的内在品质。可用于新疆紫草药材品质和真伪品的
鉴别。
参考文献:
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105.
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第 27卷　第 11期
中 成 药
Chine se T raditiona l PatentM ed icine
Novem be r 2005
Vo.l 27　No. 11
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出版社 , 2002.
黄芪药材 HPLC指纹图谱研究
黄际薇 , 　李瑞珍 , 　刘　杰 , 　麦海燕
(中山大学附属第三医院 ,广东 广州 510630)
收稿日期:2004-10-20
基金项目:广州市重点技术攻关项目(JB02)97-Z-46-067
作者简介:黄际薇(1969～ ),女 ,主管药师 ,主要从事中药制剂。电话:13119524271, E-m ail:ykh jw@163. com
关键词:黄芪;高效液相色谱;指纹图谱
摘要:目的:对不同来源的黄芪药材指纹图谱进行比较研究。方法:应用 HPLC法 、ODS柱 、乙腈-水二元梯度洗脱 , 流速
为 1. 0 m L m in- 1 , 检测波长 203 nm。结果:不同来源的黄芪药材所含黄芪甲苷等成分均得到很好的分离。结论:该法
可用于鉴别黄芪的品种。
中图分类号:R284. 1　　　　　文献标识码:A　　　　　文章编号:1001-1528(2005)11-1244-03
HPLC fingerpr ints ofRadix astraga li of d ifferent sources
HUANG Ji-wei, 　LIRui-zhen, 　LIU Jie, 　MA IH ai-yan
(Th e Th ird A ffilia ted Hospi ta l, Sunyatsen Un iversity , Guangzhou 510630 , China)
KEYWORDS:Radix astragali;HPLC;finge rprin ts
ABSTRACT:AIM:Tomake comparative study onHPLC finge rprints of several kinds ofRadix astragali from dif-
ferent sources. METHODS:ODS co lumn w as used, w ith m ixture of ace tonitrile and w ater as mob ile phase in a
gradientmode. The flow ra te w as 1. 0 mL min- 1. The w ave leng th of measu rementw as at 203 nm. RESULTS:
The finge rprints o fRadix astragali we re obtained. CONCLUSION:Thismethod can be used to iden tifyRad ix as-
traga li from diffe rent sources conveniently.
　　黄芪为豆科植物蒙古黄芪 Astrag lus m em branaceus
(F isch) Bge. var. m ongho licu s(Bge. ) H siao或膜荚黄芪 As-
traga lus mem branaceus (F isch. ) Bge. 的干燥根。春 、秋二季
采挖 , 除去须根及根头 ,晒干。具补气固表 ,利尿托毒 , 排浓 ,
敛疮生肌的作用。临床用于气虚乏力 , 食少便溏 , 中气下陷 ,
久泻脱肛 , 便血崩漏 ,表虚自汗 , 气虚水肿 ,痈疽难溃 ,久溃不
敛 , 血虚痿黄 , 内热消渴;慢性肾炎蛋白尿 , 糖尿病 [ 1]等症。
传统的质量控制指标一般是测定其黄芪甲苷的含量 ,难以反
映药材的内在质量。 色谱指纹图谱可以较为全面地检测其
多种成分在药材中分布的全貌 , 使药材的内在质量情况可
视 [ 2] 。本文采用高效液相色谱 (HPLC)法 , 按照中药注射剂
指纹图谱研究的技术要求(暂行)[ 3] , 对不同产地的黄芪进
行了指纹图谱研究 , 作为评价和控制黄芪药材内在质量的标
准。
1　仪器与试剂
仪器和设备:美国 Ag ilent 1100型高效液相色谱仪 , 包
括:四元梯度泵 、真空在线脱气机 、柱温箱 、二极管阵列检测
器 、自动进样器 、化学工作站;超声波清洗器:CQ20(广州经
济技术开发区明珠电器有限公司);电子分析天平:P recisa
57871(全华科学仪器有限公司)。
黄芪甲苷对照品(批号 0781-9807中国药品生物制品检
定所), 乙腈(色谱纯), 纯化水(本制剂室自制);其余试剂均
为分析纯。
药材:黄芪均购自广州市药材公司 ,经广东药学院罗集
鹏教授鉴定为豆科植物蒙古黄芪 Astraglus m embranaceus
(F isch) Bge. var. mongho licus(Bge. ) H siao的干燥根(见表
1)。
2　试验方法
2. 1　色谱条件　色谱柱:H ype rsil ODS (4 mm ×250 mm 5
μm)色谱柱(Agilen t 1100);流动相:乙腈-水(30∶70)二元梯
度洗脱;流速 1 mL m in -1;检测波长 203 nm;柱温:30℃;分
析时间:60 m in;进样量:20 μL。
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第 27卷　第 11期
中 成 药
Chine se T raditiona l PatentM ed icine
Novem be r 2005
Vo.l 27　No. 11