全 文 ：健物杖术通报
·研 究报 告 · 刀才口 万 日四 乙口 比 为 年增 刊
新疆雪莲植株再生体系研究初探
庞红霞 祝长青 草建兵
新疆师范大学 分子生物与生物信息学研究室 ,乌鲁木齐
摘 要 以新接雪莲叶片 、叶柄和根为外植体 ,诱导新脸雪莲植株再生 , 获得愈伤组织诱导 、分化和生根最佳培养基 ,并
初步建立其再生体系。研究结果表明 所用培养基均能诱导出愈伤组织且诱导率录高可达 ,分化率最高可达 。对不同
外桂体的愈伤组织诱导结果表明 叶片和叶祸的诱导效果最好 ,根的诱导效果较差 。其中对叶片愈伤组织诱导效果最好的培养
基是 , 一 一 加 , 对叶柄的诱导效果最好的培养基是 , ,
一 一 分化培养基以 一 冷 较适宜 生根培养基以 从
创 较适宜。
关扭词 新挂雪莲 愈伤组织 诱导 激素 外植体
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新疆雪莲 。、 加 为菊
科风毛菊属多年生高山草本植物 ,具有重要的药用
价值 ,已被列为国家 级濒危物种 。一般生长在
海拔 以上生态环境非常恶劣的高山冰破
石 、流石滩石隙中 。新疆雪莲种子萌发率低 ,生境特
异 ,加之乱采滥挖 ,人工栽培困难 ,近年来资源严重
厦乏 ,难以满足人们 日益增长的需要 。该文以新
组雪莲叶片 ,叶柄和根为外植体 ,研究激素对新孤
雪莲愈伤组织诱导及分化影响 , 并建立再生体系 ,
为今后新孤雪莲组培快繁 ,离体细胞转化及次生代
谢产物扩大化生产方面的研究提供参考和借鉴 。
材料与方法
野生新孤雪莲种子采集于一号冰川 ,选取生长
健壮 、无病虫害的新疆雪莲种子 ,用蒸馏水浸泡
后 , 的酒精消毒 , 无菌蒸馏水冲洗 一 次 ,
输的 邪 消毒 , 再用无菌蒸馏水冲洗 一
次 ,接种到铺有三层滤纸的培养皿中 ,每皿加无菌
蒸馏水 , 在 士 ℃萌发 , 后将萌发后的种子
接种到的 培养基上生长 。新疆雪莲成苗后 ,
取无菌苗叶片 ,叶柄和根 ,剪成约 一 大小
收稿 日期 二以为一 一
基金项 目 科技援班计划项 目 一 ,新班维吾尔 自治区高校科研计划重点项 目 ,新级师范大学博士后启
动基金
作者简介 庞红胜 一 ,女 ,硕士 ,研究方向 植物分子生物学 一耐
通讯作者 军建兵 一 ,男 ,教授 ,主要从事新班濒危植物分子生物学方面的研究工作 一
DOI :10.13560/j.cnki .bio tech.bul l.1985.2009.s1.048
2 16 吐物杖术通报刀勿 为`肋城盯 以为 年增刊
的外植体 ,接种到 附加不同激素浓度的培养基
上 , 士 ℃暗培养 , 左右统计诱导率 ,继代两次
后 , 转人分化培养基 , 左右统计分化率及生根
率 。统计方法
诱导率二产生愈伤组织的外植体块数 总接种
的外植体块数
分化率二分化的愈伤组织块数 总接种的愈伤
组织块数
生根率二生根的苗数 总接种 的再生 苗数
】
统计分析 愈伤组织诱导率的每组数据以平均
值土标准误差 表示 。数据采用 咫 软件进行变
分析 。 ,在确定 值下 ,以 水平为最
小显著性差异 。
结果与分析
晰盛贡莲愈伤组织的诱导
对新班雪莲不同外植体愈伤组织诱导的
结果显示 表 ,不同浓度的 对新获雪莲叶
片和叶柄的诱导率影响显著 ,根的诱导率
显著高于其他两种外植体且适应范围较宽 ,诱导率
最高可达 。以叶片和叶柄为外植体 ,诱导率均
低于 。 种外植体诱导率之间 ,叶片与根 ,叶柄
与根之间的诱导率存在极显著性差异 《叉
,而叶片与叶柄之间的诱导率不存在显著性
差异 。综合分析 ,单独使用 从 的
诱导效果 根 叶柄 叶片 。
从 与 一 激素组合对新班雪莲叶片 、叶柄
和根愈伤组织诱导结果显示 见表 从 与
不同浓度组合对叶柄诱导率有影响极显著 凡
`刃 对叶片的诱导率影响显著 凡
而对根诱导率的影响不显著 二 仪泛
。叶片与叶柄诱导率之间存在极显著性差异
凡 仪幻 ,而叶片 、叶柄与根的诱导率之间
存在显著性差异 。综合分析 ,诱导
效果 叶片 叶柄 根 。 与 一
仪腼 激素组合对愈伤组织的诱导率最高 ,可达
。
在 与 一 激素组合中添加 , 一 ,正交
裹 对新二 龙不同外植体 伤组级的诱导
叶片诱导率 叶柄诱导率 根诱导率
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衰 与 一 徽 , 组合对断 , 龙不同外植体愈伤组织诱导的影晌
一
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叶片诱导率 叶柄诱导率 根诱导率
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2 (X 为 年 增 刊 庞红霞等 新疆雪莲植株再生体系研究初探
衰 植物滋 , 对断二 龙不同外植体愈伤组级的诱导
, 一
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诱导率 分化率 生长
外植体
叶片
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根
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设计实验结果表明 表 ,诱导率最高可达 。
不 同浓度 的激素组合对根的诱导率影响极显著
, 对叶柄的诱导率影响显著
,对叶片的诱导影响不显著
,叶片的诱导率最高可达 ,叶柄的诱导率
最高可达 。诱导过程中有部分愈伤组织分化
出芽 ,统计其分化率 ,结果表明 ,激素对叶片的分化
影响显著 ,对叶柄的分化影响不显
著 几 的 ,而根不分化 。生长量测定的结
果表明 叶片的愈伤组织生长量最高 ,是同条件下
根的生长量的 一 倍 。综合分析 , 几
, 一 一 伽 激素组合对叶柄
的诱导率最高 ,达 。
新拱雪莲愈伤组织的分化
不同浓度的激素组合对新孤雪莲愈伤组织的
分化培养 图 ,结果显示 表 各浓度激素组
合对分化率影响显著 , 其 中 的 和
加 的 一 组 合培 养基分 化率 最高 ,达
。各浓度激素间差异不显著 认 。
新桩雪莲组培苗的生根
再生苗生根培养结果表明 见图 激素对
组培苗生根的影响显著 , 单独使用
的效果优于添加 和 。 使用的最佳浓度
范围在 砂 之间 。 加 儿 时 ,生根
2 18 坡物杖术通报刀勿翻 几` 盯 “加吞施 《为 年 增 刊
表 不同植物激众组合对新班 准愈伤组织分化的影晌
编号 一 儿 , 一 接种数 分化率
士 山
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率最高 ,达 。在生根培养基上培养 后 ,打开
培养瓶盖炼苗 , 把生长健壮的小苗移栽到土壤
里 ,置于室温培养 ,植株正常生长但生长缓慢 。
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圈 断 , 莲再生苗生根率
愈伤组织 分化苗 生根
圈 断 , 挂植株再生圈
结论与讨论
新祖雪莲自然资源 日益匿乏 ,利用组织培养技
术是解决其资源短缺的主要方法 。以新疆雪莲叶
片 、叶柄和根为外植体进行愈伤组织的培养 ,从研
究结果中可以看出 ,植物激素对不同外植体的诱导
均有不同程度的影响 ,愈伤组织在不同培养基上的
诱导率 、分化率和生根率都有差异 。
在新疆雪莲离体培养的研究中 ,研究较多的是
用多激素组合培养基诱导叶片产生愈伤组织 ,但也
有报道 称使用单一生长素成功诱导叶片 、叶柄和
根产生愈伤组织 ,而该研究中 ,三因素激素组合的
诱导效果最好 , 对新疆雪莲叶片和叶柄的诱
导率影响显著 ,根为外植体诱导率最高 ,但 诱
导出的愈伤组织属胚性愈伤组织 , 易直接分化出
根 。在诱导过程中对其分化率做了初步统计发现 ,
在含有 、 , 一 和 一
几 的培养基中以叶片为外植体 , 既可以诱导出
愈伤组织又有不定芽和不定根的发生 ,这与影响非
洲菊叶柄离体培养再生的因素的研究报道中的相
一致 。前人以新疆雪莲的真叶 、胚芽 和体细胞
胚胎 【 为外植体从不同途径建立了快繁体系 ,但
以根为外植体诱导植株再生的研究较少 。该研究表
明 ,以根为外植体 ,激素组合诱导出的愈伤组织分
化能力低 , 愈伤组织生长量均比叶片和叶柄低 ,不
适合用于组胚快繁体系的建立 。有资料表明 , , 一
的作用效果因作物的不同而不同 ,双子叶植物需要
, 一 的浓度一般只有单子叶植物的 一 ,
该研究 中在 和 一 的基础上添加 , 一
后 ,外植体愈伤组织的诱导率均有提高 。组培苗生
根过程以单独使用 生根率最高 , 添加其他激
素并没有提高新疆雪莲组培苗的生根率 。
下转第 页
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司 , , 一
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新疆雪莲种子可在 ℃发芽 , 一 ℃生长 , 幼苗
能经受零下 ℃的严寒 ,在生长期不到两个月的环
境里 ,高度却能超过其他植物的 一 倍 ,它虽然要
年才能开花 ,但实际生长天数只有 个月 。实验
中发现将新孤雪莲组培苗移栽到室温的花盆中后 ,
生长极缓慢 。因此 ,有关其栽培问题尚待进一步研
究 。
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