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岩陀中岩白菜素提取工艺优化的探索



全 文 :岩陀为虎耳草科植物西南鬼灯擎Rodgersia
sambucifolia Hemsl. 或羽叶鬼灯擎Rodgersia pinnata
Hemsl.的干燥根茎〔 1 〕 ,具有收敛、消炎、祛风除湿的
功效,对菌痢、肠炎、感冒头痛、外伤出血、风湿骨
痛、老年性支气管炎等常见疾病有较好的疗效〔 2 〕 ,
在民间应用广泛。 岩白菜素( bergenin)为岩陀的主
要有效成分。 岩白菜素有止咳作用,中国药典收为
镇咳祛痰药,用于慢性支气管炎,文献曾报道岩白
菜素还有抗炎、抗溃疡、护肝、抗凝血、抗HIV病毒和
提高免疫能力及镇痛等作用〔 3〕 。 因此进一步开发利
用岩陀具有重要的社会价值。 目前,对岩陀中岩白
菜素的提取工艺缺乏系统研究,本文通过正交试验
法对其提取工艺进行探讨〔 4〕 。
1 仪器与试药
LC-20AD型HPLC系统, 包括CTO-20AC柱温
箱、CBM-20A系统控制器、SPD-M20A二极管阵列检
测器、LC solution工作站 ( 日本岛津公司) ;TU-1901
型双光束紫外可见分光光度计( 北京普析通用仪器
有限责任公司) ;KQ-500DB型数控超声波清洗器
( 昆山市超声仪器有限公司) ;XS205型梅特勒电子
天平( 上海亚荣生化仪器厂) ;中药材粉碎机( 浙江
温岭市林大机械有限公司) 。 所用药材购自云南大
理, 由贵州省药品检验所陈德媛研究员鉴定为真
品;岩白菜素对照品( 中国药品生物制品检定所,批
号:1532-200202) ;HPLC所用乙腈为色谱纯, 其它
试剂为分析纯,水为重蒸水。
2 方法与结果
2.1 色谱条件 色谱柱为 Diamonsil C18柱( 250
mm×4.6 mm,5 μm) ,检测波长为274 nm( 对照品紫
外光谱扫描图见图1) ,流速为1.0 mL·min-1,柱温为
岩陀中岩白菜素提取工艺优化的探索
王 燕1,金 杨2,刘振琪2*
( 1.大理学院药学与化学学院,云南大理 671000;2.大理州中医医院,云南大理 671000)
[ 摘要] 目的:优选岩陀中岩白菜素提取工艺。 方法:以岩白菜素含量为指标,以溶剂浓度、溶剂用量、提取次数和提取时间为考
察因素,采用正交试验法优选最佳提取工艺。 结果:最佳提取工艺是以60%甲醇为提取溶剂,溶剂用量为20 mL,提取3次,每次
30 min。 结论:此工艺简便、易行,稳定性好、重现性好,可为进一步开发利用岩陀提供理论参考。
[ 关键词] 岩陀;岩白菜素;提取工艺;正交试验
[ 中图分类号] R284.2 [ 文献标志码] B [ 文章编号] 1672-2345( 2012)09-0008-03
Optimization of the Extraction Process of Bergenin from Rodgersia pinnata
WANG Yan1, JIN Yang2, LIU Zhenqi2*
( 1. College of Pharmacy and Chemistry, Dali University, Dali, Yunnan 671000, China;
2. Chinese Medicine Hospital of Dali Prefecture, Dali, Yunnan 671000, China)
〔 Abstract〕 Objective: To optimize the extraction technology of bergenin from Rodgersia pinnata Hemsl. Methods: The extraction
technology of bergenin from Rodgersia pinnata Hemsl was optimized by orthogonal design taking the content of bergenin as index with
the solvent concentration, the amount of solvent, the extraction time and extraction times as investigation factors. Results: The optimal
extraction technology of bergenin from Rodgersia pinnata Hemsl was as 60% methanol as solvent, 20ml of solvent amount, 20 min of
extraction time, and 3 times of extraction. Conclusin: The optimum extracting technology is simple, feasible, stable and reproducible,
and it serves as theoretical reference for further development and utilization of Rodgersia pinnata Hemsl.
〔 Key words〕 Rodgersia pinnata Hemsl; bergenin; extraction technology; orthogonal design
大理学院学报
JOURNAL OF DALI UNIVERSITY
第11卷 第9期 2012年9月
Vol.11 No.9 Sep. 2012
8
30 ℃,流动相为乙腈-0.1%磷酸( 10∶90) 。 理论塔板
数按岩白菜素峰计不得少于4 000。对照品及样品色
谱图见图2。
图1 岩白菜素对照品的光谱扫描图谱
图2 岩陀中岩白菜素HPLC图谱
注:A.对照品;B.样品;C.空白;1.岩白菜素。
2.2 对照品溶液的配置 精密称取干燥至恒量的
岩白菜素对照品11.36 mg, 置于25 mL的量瓶中,加
60%甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,得0.454 4 mg·
mL-1的岩白菜素对照品溶液。
2.3 标准曲线的绘制 取上述岩白菜素对照品溶
液,分别进样2、4、6、8、10、12 μL,按上述色谱条件
测定。以峰面积积分值( Y)为纵坐标,岩白菜素进样
量( X,μg)为横坐标,绘制标准曲线,得回归方程为
Y=2×106X-86 377( r=0.999 8) 。 结果表明,岩白菜素
进样量在0.908 8~5.452 8 μg范围内与峰面积积分
值呈良好的线性关系。
2.4 供试品溶液的制备 合并所得滤液, 挥干,残
渣加甲醇适量,溶解,全部转移至25 mL容量瓶中,
用甲醇定容,摇匀,临用前过0.45 μm滤膜。
2.5 岩白菜素含量测定〔 5〕 取上述对照品溶液和供
试品溶液,注入高效液相色谱仪,各进样10 μL,用外
标法计算供试品溶液中岩白菜素的含量 ( mg·g-1) ,
计算公式为:
岩白菜素的含量( mg·g-1)=( A供/A对)×C对×25/W
A对为对照品溶液峰面积积分值;A供为供试品溶
液峰面积积分值;C对为对照品溶液浓度 ( mg·mL-1);
25为溶液稀释倍数;W为供试品取样量( g) 。
2.6 提取方法的选择 称取岩陀细粉 ( 过四号筛)
0.5 g,平行3份,精密称定,分别加20 mL甲醇,用冷
浸提取法冷浸24 h;超声提取法提取20 min;回流提
取法提取40 min,滤过,按“ 2.4”项下方法制备供试
品溶液,再按“ 2.1”项下色谱条件操作 ,各进样10
μL,测定岩白菜素含量。 不同提取方法对岩白菜素
含量的影响见表1。
表1 不同提取方法对岩白菜素含量的影响
由表1可知, 采用超声提取法得到的提取物岩
白菜素含量最高,因此选择超声为提取方法。
2.7 提取溶剂的选择〔 6 〕 称取岩陀细粉( 过四号
筛)0.5 g,平行4份,精密称定,分别加20 mL的水、甲
醇、乙醇和乙酸乙酯,用超声提取法提取20 min,滤
过,按“ 2.4”项下方法制备供试品溶液,再按“ 2.1”项
下色谱条件操作, 各进样10 μL, 测定岩白菜素含
量。 不同提取溶剂对岩白菜素含量的影响见表2。
表2 不同提取溶剂对岩白菜素含量的影响
提取方法 岩白菜素含量/mg·g -1
冷浸 20.04
回流 29.53
超声 36.29
提取溶剂 岩白菜素含量/mg·g -1
水 21.36
乙酸乙酯 24.47
甲醇 36.07
乙醇 30.06
2.000
1.500
1.000
0.500
0.000
190.00 300.00
波长/nm
Ab
s
王 燕,金 杨,刘振琪 岩陀中岩白菜素提取工艺优化的探索 第 11卷总第 105期
9
由表2可知, 采用甲醇作为提取溶剂得到的提
取物岩白菜素含量最高,因此选甲醇为提取溶剂。
2.8 正交试验 称取岩陀细粉( 过四号筛)0.5 g,平
行9份,精密称定,按L9( 34)表下条件进行提取,按
“ 2.4”项下方法制备供试品溶液,再按“ 2.1”项下色
谱条件操作,各进样10 μL,测定岩白菜素含量。 根
据预试验结果,选择溶剂浓度( A) ,溶剂体积( B) ,提
取时间( C)和提取次数( D)为考察因素,按正交设计
表进行试验。 因素水平见表3,正交试验结果见表4,
方差试验结果见表5。
表3 因素水平表
表4 正交试验结果
表5 方差分析结果
注:F0.05( 2,2)=19.0
由表4、表5可知,4种因素对提取物岩白菜素含
量的影响程度依次为C>A>D>B, 即提取时间>溶剂
浓度>提取次数>溶剂体积,提取时间、溶剂浓度、提
取次数对提取物岩白菜素含量都具有统计学意义
( P<0.05) , 溶剂体积对提取物岩白菜素含量无统计
学意义,且其3个水平结果相差不大。 为了使滤过等
操作便于进 行 , 最 终 确 定 最 佳 提 取 工 艺 为
A2B2C3D3,即用60%的甲醇20 mL,超声提取3次,
每次30 min。
2.9 验证试验 按正交试验结果, 称取岩陀细粉
( 过四号筛)0.5 g,平行6份,精密称定,分别加60%的
甲醇20 mL, 超声提取3次, 每次30 min, 滤过,按
“ 2.4”项下方法制备供试品溶液,再按“ 2.1”项下色
谱条件操作,各进样10 μL,测定岩白菜素含量。 结
果见表6。
表6 验证试验结果
由表6可知,优化得到的工艺简便、易行,稳定
性好,重现性好,可为进一步开发利用该药材提供
理论参考。
3 讨论
超声提取法操作简单、省时,最主要的是提取
效果高。 作为中药提取的工艺之一,具有良好的应
用前景,且实验可在室温下进行,设备简单,操作方
便〔 7〕 ,是提取岩陀中岩白菜素的一种有效方法。
在超声条件下提取岩陀中岩白菜素时,根据预
实验结果和文献报道〔 3 〕综合分析得知超声温度和
超声功率对岩白菜素含量影响微弱,因此未把超声
温度和超声功率列入正交试验。 通过正交试验结果
可知,提取时间、溶剂浓度、提取次数是影响岩白菜
素含量的主要因素,而溶剂体积对岩白菜素含量影
响较小。 本实验所优化得到的岩陀中岩白菜素提取
工艺简单、经济、稳定、可行。
[ 参考文献]
〔 1〕 贵州省药监局.贵州省中药材、民族药材质量标准〔 S〕 .贵
阳:贵州科技出版社,2003.
试验次数 岩白菜素含量/mg·g -1
1 38.75
4 38.85
RSD( %) 2.03
2 37.37
3 37.94
5 37.33
6 37.04
平均值 37.88
水平
A B C D
溶剂浓度/% 溶剂体积/mL 提取时间/min 提取次数/次
1 20 10 10 1
2 60 20 20 2
3 100 30 30 3
1 1 1 1 1 29.23
2 1 2 2 2 29.55
3 1 3 3 3 35.79
4 2 1 2 3 35.28
5 2 2 3 1 36.34
6 2 3 1 2 34.47
7 3 1 3 2 34.05
8 3 2 1 3 32.96
9 3 3 2 1 29.60
K1 31.523 32.853 32.220 31.723
K2 35.363 32.950 31.477 32.690
K3 32.203 33.287 35.393 34.677
R 3.840 0.434 3.916 2.954
A B C D
试验号
因素
岩白菜素含量/mg·g -1
方差来源 离差平方和 自由度 P 值 显著性
A 0.252 1 2 <0.05 *
B 0.003 1 2 >0.05
C 0.259 5 2 <0.05 *
D 0.136 3 2 <0.05 *
误差 0.003 1 2 — —
方差
0.126 1
0.001 5
0.129 8
0.068 2
0.001 5
F 值
84.042 9
1.000
86.501 0
45.446 0

大理学院学报总第 105 期 医学
10
〔 2〕 史彦斌,胡振英,董鹏程,等.中草药鬼灯檠的现代研究进
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[ 基金项目] 大理学院青年教师基金资助项目( KY201136)
[ 收稿日期] 2012-04-24 [ 修回日期] 2012-05-29
[ 作者简介] 王燕,实验师,主要从事中药质量标准研究.
*通信作者:刘振琪,副主任医师.
( 责任编辑 毛本勇)
凝胶膏剂系指提取物、饮片或化学药物与适宜
的亲水性基质混匀后,涂布于背衬材料上制成的贴
膏剂,2010年版 《 中国药典》 一部改称为凝胶膏剂
( 2000年版、2005年版药典收载为巴布膏剂( 习惯上
称为巴布剂))〔 1〕 。 巴布剂起源于日本的泥罨剂,在
此基础上,二十世纪70年代,日本开发了以水溶性
高分子材料为主要基质的现代巴布剂,并进入欧美
市场。 巴布剂是经皮给药制剂的一种新剂型,具有
国内凝胶膏剂的专利分析
张成桂,何 苗,巫秀美,赵 昱,高鹏飞*
( 云南省药用昆虫与蛛形类资源开发利用工程实验室,大理学院,云南大理 671000)
[ 摘要] 对在中国知识产权局申请的凝胶膏剂相关之专利进行了检索,分析了与凝胶膏剂相关的80多件已公开专利和50多件授
权专利。 按照其用途,将其归纳为妇科、补肾抗疲劳、乳腺疾病、肝硬化腹水、检测方法、降血糖、甲状腺、心血管、呼吸系统、肠胃
疾病、肛肠疾病、老年痴呆、抑郁症、抗菌肽、镇痛和跌打损伤、制备方法、剂型改革、实用新型18大类,并着重对授权专利做了详
细阐述,为凝胶膏剂专利技术进一步研究和发展提供了展望和建议。
[ 关键词] 凝胶膏剂;专利;综述
[ 中图分类号] R768 [ 文章标志码] A [ 文章编号] 1672-2345( 2012)09-0011-05
Domestic Gel Paste Patent Analysis
ZHANG Chenggui, HE Miao, WU Xiumei , ZHAO Yu, GAO Pengfei*
( The Key Laboratory of Medicinal Insects and Spiders Resources for Development & Utilization, Dali University,
Dali, Yunnan 671000,China)
〔 Abstract〕 More than eighty published patent applications and fifty authorized patents related to gel paste were retrieved from the
patent databases of State Intellectual Property Office of the Peoples Republic of China. They were categorized into 18 classes of
gynaecology, nourishing kidney and reducing tiredness, mammary diseases, hepatocirrhosis ascites, detection methods, hypoglycemic
agents, thyroid diseases, cardiovascular diseases, respiratory diseases, gastrointestinal diseases, anorectal diseases, Alzheimers
disease, depression, antimicrobial peptides, analgesia and traumatic injury, manufacture methods, reforms of formulation, and patents
of utility models with respect to their purposes. With special emphases on the authorized patents, these patent applications were
summarized and analyzed with the aim of furnishing more plentiful information and critical suggestions on relative ongoing R&D
projects concerned on gel paste.
〔 Key words〕 patent; gel paste; review
大理学院学报
JOURNAL OF DALI UNIVERSITY
第11卷 第9期 2012年9月
Vol.11 No.9 Sep. 2012
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