全 文 ：西北植物学报 , 2005, 25( 2): 397— 399
Acta Bot . Boreal .-Occident. Sin.
文章编号: 1000-4025( 2005) 02-0397-03
西藏产两种岩白菜中岩白菜素的 HPLC测定
纪兰菊
(中国科学院西北高原生物研究所 ,西宁 810001)
摘　要:建立测定了岩白菜中岩白菜素含量的方法 .色谱柱: Water s C18柱 ( 5μm× 3. 9 m m× 150 mm) ,流动相:甲醇
∶水∶磷酸= 20∶ 80∶ 0. 1,流速为 1. 0 mL /min,检测波长 275 nm, AUFS 0. 01,柱温为室温 . 结果表明 ,岩白菜素
在 0. 16～ 0. 08μg有良好线性关系 ,r= 0. 999 2,平均回收率为 98. 14% , RSD为 1. 12% . 本方法是测定岩白菜中岩
白菜素含量的快速、简便、准确可靠的定量方法 .
关键词: 高效液相色谱 ;岩白菜 ;岩白菜素
中图分类号: Q946　　　文献标识码: A
Bergenin HPLC Determination of Two Species of
Bergenia growing in Tibet
JI Lan-ju
( Northw es t Plateau Insti tute of Biology, Chines e Academy of Sciences, Xining 810001, China)
Abstract: A HPLC method fo r berg enin determination Bergenia purpurascens was established. The method
w as as follows: ch romatog raphy column: w aters C18 ( 5μm× 3. 9 mm× 150 mm) , mobile phase: methano l∶
water∶ phospho ric= 20∶ 80∶ 0. 1, f lew velocity 1. 0 mL /min, detection waveleng th 275 nm , AU FS 0. 01,
tempera ture as same as room temperature. The standard curv es of bergenin show ed good lineari ty wi thin
the range of 0. 16～ 0. 08μg, r= 0. 999 2. The average recovery w as 98. 14% , RSD was 1. 12% . The method
w as quick, simple, accurate and reliable fo r the determination of bergenin in Bergenia purpurascens.
Key words: HPLC; Bergenia purpurascens; berg enin
　　岩白菜 (藏药俗称力嘎都 ) (Bergenia purpuras-
cens )为虎耳草科多年生常绿草本植物 ,分布在云
南、四川、西藏等高山阴湿石缝中 ,岩白菜中的主要
药效成分为岩白菜素 ( berg enin)熊果苷 ( arbutin) [ 1]
等 ,具有抗菌、消炎、镇咳、祛痰等功效 ,多用于民族
药中肺系统疾病及消化道系统疾病的治疗 . 国家药
典收载的岩白菜及药品岩白菜素的含量测定 [2, 3 ] ,均
采用分光光度法 ,也曾有虎耳草科中岩白菜素的
HPLC测定法 [ 4, 5] .本实验对西藏色季拉山所产的岩
白菜植物根茎进行提取、分离、纯化后得到 4个化合
物 ,经红外、核磁光谱鉴定为 β -谷甾醇、熊果苷、岩白
菜素、胡萝卜苷 ,其中岩白菜素得量最高 ,因此 ,采用
反相高效液相色谱法对西藏地区海拔 4 000 m以上
的色季拉山、亚东地区、米拉山分布的岩白菜及近缘
植物蛇岩白菜 (B . pacumbis )中的岩白菜素含量进
行了测定 ,为该植物的深度开发和合理利用提供科
学依据 .
收稿日期: 2004-03-16;修改稿收到日期: 2004-06-22
基金项目:国家中西部重点专项 ( 2001BA901A47)
作者简介:纪兰菊 ( 1952- ) ,女 ,北京人 ,副研究员 ,主要从事藏药药物化学研究 .
1　仪器、试剂、材料及标准品的配制
Waters高效液相色谱仪 600E, 486智能紫外可
见光检测器 (日本产 ) ; 2200 B超声波仪 , Mi ll: Q超
纯水装置 (国产 ) ;岩白菜素对照品由中国药品生物
制品鉴定所提供 ,批号 0678-2000016(供含量测定
用 ) ;分析样品 ,岩白菜与蛇岩白菜于 2001年 8月中
下旬自行采集于西藏地区的色季拉山、米拉山、亚东
地区 ,取根茎部分洗净 ,阴干 ,经中国科学院西北高
原生物研究所潘锦堂研究员鉴定为岩白菜与蛇岩白
菜 ;色谱纯甲醇购于山东省禹王公司 ,分析纯甲醇、
磷酸等购自天津化学试剂公司 .
2　色谱条件
色谱柱: Waters C18柱 ( 5μm× 3. 9 mm× 150
mm);流动相: 甲醇∶水∶磷酸 ( 20∶ 80∶ 0. 1) ;流
速 1. 0 mL /min;检测波长 275 nm , AUFS 0. 01;柱
温:室温 .理论塔板数按岩白菜素计应不低于 2 500,
在此条件下岩白菜素与其它组分均能达到基线分
离 . 对照品及样品的 HPLC分离图见图 1.
3　方法与结果
3. 1　线性关系考察
图 1　 HPLC色谱分离图
a.岩白菜素对照品 ; b.样品
Fig. 1　 HPLC chromatog r aphy s
a. Berg enin; b. Sample
　　精密称取岩白菜素对照品 ,用甲醇制成岩白菜
素为 0. 04 mg /mL的对照品溶液 ,分别精密吸取对
照品溶液 4、 8、 12、 16、 20μL,注入高效液相色谱仪 ,
以岩白菜素峰面积值 y为纵坐标 ,岩白菜素的浓度
x 为横坐标 ,得回归方程为 y = 111 629. 2x +
3 414 371,相关系数 r= 0. 999 2,线性范围 0. 16～
0. 08μg.
3. 2　精密度试验
精密吸取上述对照品溶液 16μL,按上述色谱
条件分析 ,连续进样 5次 ;岩白菜素的峰面积测定值
分别为 2 858 280、 2 870 218、 2 873 379、 2 803 320、
2 738 325, RSD为 2. 0% .
3. 3　稳定性试验
精密称取同一样品 ,按样品处理方法制备成供
试品溶液 ,分别于 0、 2、 4、 6、 8 h重复进样 ,测定样品
中岩白菜素峰面积积分平均值为 1 649 075, RSD
为 1. 51% . 证明岩白菜素的样品溶液相对稳定 ,能
够满足测试要求 .
3. 4　重复性试验
精密称取同一样品 ,进行 5次平行试验 ,该样品
中的岩白菜素的平均含量为 5. 74% , RSD 为
2. 9% .
3. 5　回收率试验
精密称取已知含量的岩白菜 0. 20 g,加入一定
量的岩白菜素对照品 ,按供试品的制备方法制备 ,进
行分析 ,药材中岩白菜素的平均回收率为 98. 14% ,
RSD为 1. 12% (表 1) .
3. 6　样品的制备方法及测定
样品中岩白菜素的含量测定的准确性与样品处
理的方法有直接关系 ,由于岩白菜素为醇溶性成分 ,
以甲醇为提取溶媒 ,对不同粒度 ,同一样品中甲醇回
流提取和超声波振荡提取两种方法进行了对比试验
(表 2) ,结果显示岩白菜素的提取率与样品的粒度
有关 ,同时甲醇回流提取效果优于超声波振荡提取 .
故取不同产地 2种岩白菜根茎部分 ,超微粉碎 ,精密
称取经 200目细度过筛的药材细粉 0. 200 0 g ,置锥
形瓶中 ,精密加入 25 mL甲醇 ,称定重量 ,回流提取
120 min,放至室温 ,用甲醇补足减失的重量 ,摇匀 ,
过 0. 45μm滤膜 ,按上述分析条件进行测定 ,用外
标法以峰面积积分值计算岩白菜素的含量 ,结果见
表 3.
398 西　北　植　物　学　报 25卷
表 1　岩白菜素的加样回收率
Table 1　 Recovery expe riment o f berg enin
序号
No.
样品中岩白菜素
Bergenin in
sample( mg /g)
添加岩白菜素
Added
bergenin
( mg /g )
测定岩白菜素含量
Content of
bergenin
determinated
( mg /g)
回收率
Recovery
(% )
X
Average
(% )
R SD
(% )
1 28. 3 16. 67 44. 77 98. 2
2 28. 3 16. 67 44. 57 97. 0
3 30. 8 20. 0 46. 93 96. 8 98. 14 1. 12
4 30. 8 20. 0 47. 37 99. 4
5 28. 3 30. 0 61. 50 99. 3
表 2　不同提取方法的岩白菜素的含量
Table 2　 Bergenin in different ex tra ctive m eth ods(% )
提取方法
M ethod of ex t raction
粒度 (目 )
Size
30 min 60 min 120 min
回流 Ref lux 80 4. 19 5. 08 5. 12
回流 Ref lux 200 4. 35 5. 23 5. 70
甲醇超声 Supersonic by
M ethanol
80 2. 55 2. 75 3. 66
甲醇超声 Supersonic by
M ethanol
200 2. 60 2. 68 3. 80
表 3　不同产地 2种岩白菜植物中岩白菜素的含量 (n= 3)
Table 3　 Bergenin in tw o species o f Bergenia of differ ent area (n= 3)
品名
Sample
色季拉山
Sejila mountain
亚东地区
Yadong area
米拉山
Mila mountain
岩白菜 1, 2　B ergenia p urpu rascens 5. 64, 4. 85 6. 17, 5. 28 5. 70, 6. 20
蛇岩白菜 1, 2　B ergenia p acumbis 2. 67, 2. 87 2. 27, 2. 94 2. 98, 2. 56
　　注: 1和 2分别为不同地方采集的样品 .
Note: Sample 1 and 2 are col lected in di fferen t area.
4　讨　论
本文对色谱分离条件和方法进行了考察 ,试验
了甲醇∶水∶醋酸与甲醇∶水∶磷酸为流动相的不
同配比 ,比较了岩白菜药材中各组分的分离情况 ,结
果表明采用甲醇∶水∶磷酸系统 ( 20∶ 80∶ 0. 1)的
比例时 ,分离情况良好 ,证明该方法简便、准确、稳
定、干扰少 ,适用于岩白菜属植物中岩白菜素的含量
测定 .
表 3显示了岩白菜及蛇岩白菜中的岩白菜素的
含量地域差异不明显 ,同时 ,岩白菜植物中有效成分
岩白菜素的含量远远高于蛇岩白菜 .
参考文献:
[1 ]　中药大辞典 [ M ].上海:上海科学技术出版社 , 1996.
[2 ]　云南省药品检验所 .云南省药品标准 [M ] .昆明:云南人民出版社 , 1974: 193.
[3 ]　国家药典委员会 .中华人民共和国药典 [M ] .北京:化学工业出版社 , 2000: 146.
[4 ]　 DIN G JX(丁家欣 ) , ZHAN G Q H(张秋海 ) , ZHANG L(张　玲 ) ,W AN G Z SH(王逐生 ) . Determination bergenin in Saxi f r aga stolonif era
Curt. of dif f erent area and period [ J] .Ch ina J. Chin . Mater . Mea. (中国中药杂志 ) , 2002, 27( 10): 792- 793( in Ch inese) .
[ 5 ]　 CHEN W D(陈文斗 ) , NIE M H(聂明华 ) . Determination of bergenin in A . ch inensis Frach and B . purp urascens Engl by HPLC [ J] . Acta
Pharm. Sin. (药学学报 ) , 1998, 23( 7): 606( in Chines e) .
3992期 纪兰菊: 西藏产两种岩白菜中岩白菜素的 HPLC测定