全 文 ：　［收稿日期］　２０１３－１１－１４；２０１４－０９－１１修回
　［作者简介］　李春玲（１９８７－），女，在读硕士，研究方向：真菌生理与发酵工艺。Ｅ－ｍａｉｌ：ｌｌｉｘｉａｏｊｉａｏ＠１６３．ｃｏｍ
　＊通讯作者：陈有君（１９６１－），男，教授，从事微生物生理与发酵工艺研究。Ｅ－ｍａｉｌ：ｃｙｏｕｊｕｎ＠ｓｉｎａ．ｃｏｍ
［文章编号］１００１－３６０１（２０１４）１０－０６２３－０１６７－０４
盐胁迫下褐环粘盖牛肝菌（ｓｐ９）质膜ＡＴＰａｓｅ的活性
李春玲，陈有君＊，李国光，孙 琳，黄 蕾
（内蒙古农业大学 生命科学学院，内蒙古 呼和浩特０１００１８）
　　［摘　要］为探明褐环粘盖牛肝菌调节高盐的培养机理，通过设置不同ｐＨ培养条件，研究了盐胁迫对
褐环粘盖牛肝菌（ｓｐ９）质膜 ＡＴＰａｓｅ活性的影响。结果表明：在初始ｐＨ４～６．５条件下，添加１００ｍｍｏｌ／Ｌ
ＮａＣｌ组菌丝细胞质膜的 Ｈ＋－ＡＴＰａｓｅ、Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ和Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ活性都较对照组有一定程度的升高，培
养基ｐＨ比对照组下降幅度大，且在初始ｐＨ５．５～６．５时其活性变化更明显。一定浓度的ＮａＣｌ，会对不同
ｐＨ培养的褐环粘盖牛肝菌生长代谢产生影响，且会通过 Ｈ＋－ＡＴＰａｓｅ、Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ、Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ、载体和
各种离子通道蛋白协调启动自身调节机制，以缓解外界对其造成伤害。
［关键词］褐环粘盖牛肝菌；ＡＴＰａｓｅ活性；ＮａＣｌ；盐胁迫
［中图分类号］Ｓ６４６．３ ［文献标识码］Ａ
Ｅｆｅｃｔ　ｏｆ　Ｄｉｆｅｒｅｎｔ　ＮａＣｌ　Ｓｔｒｅｓｓ　ｏｎ　ＡＴＰａｓｅ　Ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　Ｐｌａｓｍａ
Ｍｅｍｂｒａｎｅ　ｏｆ　Ｓｕｉｌｕｓ　ｌｕｔｅｕｓ（ｓｐ９）
ＬＩ　Ｃｈｕｎｌｉｎｇ，ＣＨＥＮ　Ｙｏｕｊｕｎ＊，ＬＩ　Ｇｕｏｇｕａｎｇ，ＳＵＮ　Ｌｉｎ，ＨＵＡＮＧ　Ｌｅｉ
（Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｌｉｆｅ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｉｎｎｅｒ　Ｍｏｎｇｏｌｉａ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｈｕｈｈｏｔ，Ｉｎｎｅｒ　Ｍｏｎｇｏｌｉａ　０１００１８，Ｃｈｉｎａ）
　　Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｔｈｅ　ＡＴＰａｓｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｐｌａｓｍａ　ｍｅｍｂｒａｎｅ　ｏｆ　Ｓｕｉｌｌｕｓ　ｌｕｔｅｕｓ　ｗａｓ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄ　ｕｎｄｅｒ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ
ＮａＣｌ　ｓｔｒｅｓｓ　ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ＮａＣｌ　ｓｔｒｅｓｓ　ｏｎ　ＡＴＰａｓｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｐｌａｓｍａ　ｍｅｍｂｒａｎｅ　ｏｆ　Ｓｕｉｌｌｕｓ
ｌｕｔｅｕｓ．Ｔｈｅ　ｒｅｓｕｌｔｓ　ｓｈｏｗｅｄ　ｔｈａｔ　Ｈ＋－ＡＴＰａｓｅ，Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ　ａｎｄ　Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｍｙｃｅｌｉｕｍ　ｐｌａｓｍａ
ｍｅｍｂｒａｎｅ　ｏｆ　Ｓｕｉｌｌｕｓ　ｌｕｔｅｕｓ　ｃｕｌｔｕｒｅｄ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｍｅｄｉｕｍ　ｗｉｔｈ　ａｄｄｉｎｇ　１００ｍｍｏｌ／Ｌ　ＮａＣｌ　ｉｓ　ｈｉｇｈｅｒ　ｔｈａｎ　ＣＫ　ｕｎｄｅｒ
ｉｎｉｔｉａｌ　ｐＨ　４～６．５ｔｏ　ｓｏｍｅ　ｄｅｇｒｅｅ，ａｎｄ　ｐＨ　ｏｆ　ｔｈｅ　ｍｅｄｉｕｍ　ｗｉｔｈ　ａｄｄｉｎｇ　ＮａＣｌ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｄｅｃｒｅａｓｅｓ
ｃｏｍｐａｒｅｄ　ｗｉｔｈ　ＣＫ，ｅｓｐｅｃｉａｌｙ　ｃｈａｎｇｅ　ｏｆ　ｔｈｅ　ＡＴＰａｓｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｉｓ　ｏｂｖｉｏｕｓ　ｕｎｄｅｒ　ｉｎｉｔｉａｌ　ｐＨ　５．５～６．５．Ｃｅｒｔａｉｎ
ＮａＣｌ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｈａｓ　ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｎ　ｇｒｏｗｔｈ　ａｎｄ　ｍｅｔａｂｏｌｉｓｍ　ｏｆ　Ｓｕｉｌｌｕｓ　ｌｕｔｅｕｓ　ｃｕｌｔｕｒｅｄ　ｏｎ　ｍｅｄｉａ　ｗｉｔｈ
ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｐＨ　ｂｕｔ　ｔｈｅ　ｄａｍａｇｅ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｅｎｖｉｒｏｎｍｅｎｔ　ｃａｎ　ｂｅ　ａｌｅｖｉａｔｅｄ　ｂｙ　ｔｈｅ　ａｕｔｏｇｅｎｏｕｓ　ｒｅｇｕｌａｔｉｏｎ
ｍｅｃｈａｎｉｓｍ　ｓｔａｒｔｅｄ　ｂｙ　ｃｏｏｒｄｉｎａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｈ＋－ＡＴＰａｓｅ，Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ，Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ，ｖｅｃｔｏｒｓ　ａｎｄ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｉｏｎ
ｃｈａｎｎｅｌ　ｐｒｏｔｅｉｎ
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｓｕｉｌｌｕｓ　ｌｕｔｅｕｓ；ＡＴＰａｓｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ；ＮａＣｌ　ｓｔｒｅｓｓ
　　 褐环粘盖牛肝菌〔Ｓｕｉｌｌｕｓ　ｌｕｔｅｕｓ（Ｌ．：Ｆｒ．）
Ｇｒａｙ〕，别名土色牛肝菌、褐环乳牛肝菌和黄乳牛肝
菌。该菌不仅有很高的食用价值和药用价值，而且
是一种优良的外生菌根真菌，可极大提高宿主植物
对不良环境（寒冷、高温、干旱、过湿、高盐以及含有
过量有毒物质）的适应能力［１－２］及抗盐碱胁迫［３］，促
进寄主植物的生长。菌根真菌可改善盐渍胁迫植物
生长被抑制的状况，其机理主要是菌根真菌可以增
加宿主植物磷等主要矿质营养元素的含量，其侵染
宿主植物后通过增加根的吸收面积来增加植株对水
分的吸收，改善宿主植物体内的各种离子平衡，降低
植物体内的Ｎａ＋和Ｃｌ－的相对比例［４］，减轻细胞质
膜和酶的损伤程度，从而保证植物在盐胁迫下正常
生长。Ｈ＋－ＡＴＰａｓｅ通过可逆浓度梯度转运氢离子
的膜整合糖蛋白转运氢离子。其能水解 ＡＴＰ产生
能量，并把细胞质内的 Ｈ＋泵出膜外，产生跨膜ｐＨ
梯度和电势梯度，形成质子电化学势△ｐＨ，供细胞
生长。质膜 Ｈ＋－ＡＴＰａｓｅ的活性受 Ｋ＋ 刺激［５］，而
Ｃａ２＋参与了质膜 Ｈ＋－ＡＴＰａｓｅ活性的磷酸化调节，
是 细 胞 内 重 要 的 第 二 信 使［６］，所 以 质 膜
Ｈ＋－ＡＴＰａｓｅ、Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ和Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ活性的
变化及调节与植物抗盐性之间存在直接或间接的关
系。近年来，已有对该菌在盐胁迫下生物量变化方
面的研究报道［３］，但在酶活方面的研究报道甚少。
为此，通过研究 ＮａＣｌ对褐环粘盖牛肝菌细胞质膜
ＡＴＰａｓｅ活性的影响，以探明其调节高盐的培养机
理，进一步完善褐环粘盖牛肝菌（ｓｐ９）的研究体系。
１ 材料与方法
１．１ 试验材料
１．１．１ 菌种 褐环粘盖牛肝菌（ｓｐ９），由内蒙古农
业大学菌根实验室提供，用Ｐａｃｈｌｅｗｓｋｉ固体培养基
培养后备用。
１．１．２ Ｐａｃｈｌｅｗｓｋｉ液体培养基（１　０００ｍＬ） 麦芽
汁１５ｍＬ，酒石酸铵２．５ｇ，ＫＨ２ＰＯ４１ｇ，ＭｇＳＯ４·
７Ｈ２Ｏ　０．５ｇ，无水葡萄糖２０ｇ，柠檬酸铁３ｍＬ，微量
　贵州农业科学　２０１４，４２（１０）：１６７～１７０
　Ｇｕｉｚｈｏｕ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ
元素１．０ｍＬ，ＶＢ１ ．０ｍＬ。
１．２ 试验方法
１．２．１ 褐环粘盖牛肝菌的培养 选用生长
８～１０ｄ的固体菌种，在装有５０ｍＬ　Ｐａｃｈｌｅｗｓｋ培
养基的１５０ｍＬ三角瓶中接入６块６ｍｍ的菌块，
２５℃静置培养１０ｄ后，转接在ｐＨ为４．０、４．５、５．０、
５．５、６．０和６．５的培养基中，每个ｐＨ 设０、１００
ｍｍｏｌ／Ｌ　２个 ＮａＣｌ浓度，每个处理３次重复，２５℃
静置培养４ｄ。
１．２．２ 培养基ｐＨ 的测定 将菌丝捞出后，用
ＰＨＳ－３Ｂ精密ｐＨ计测定ｐＨ值。
１．２．３ 草酸测定 采用分光光度法［７］，将前述培
养转接４ｄ后菌丝的培养基滤液吸取５ｍＬ于７ｍＬ
离心管中，在添加０．５ｍＬ的０．５ｍｏｌ／Ｌ　ＣａＣｌ２溶
液，４℃冰箱中贮存过夜，沉淀培养基中的草酸，离心
分离草酸钙后，再用５ｍＬ　ＨＣｌ溶解，用５％的三氯
化钛溶液显色，在４００ｎｍ波长下测定草酸量。
１．３ 酶活测定
１．３．１ 质膜制备 参照郭奇梅等［８］的方法进行，
菌丝经蒸馏水清洗后，按１ｇ鲜重菌丝加２ｍＬ研磨
液 （２５ ｍｍｏｌ／Ｌ　Ｔｒｉｓ－ｍｅｓ，５０ ｍｍｏｌ／Ｌ 蔗 糖，３
ｍｍｏｌ／Ｌ　ＰＶＰ，３ ｍｍｏｌ／Ｌ　ＥＤＴＡ，５ ｍｍｏｌ／Ｌ
ＥＧＴＡ，５ｍｍｏｌ／Ｌ 抗坏血酸，５ｇ／Ｌ 牛血清蛋白，
１００ｇ／Ｌ 甘油）；使用时添加１ｍｍｏｌ／Ｌ　ＤＴＴ 和
１ｍｍｏｌ／Ｌ　ＰＭＳＦ研磨，滤液在１　０００ｒ／ｍｉｎ。下离
心５ｍｉｎ，取上清液在８　０００ｒ／ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ取上
清，上清液在１２０　０００ｒ／ｍｉｎ离心３０ｍｉｎ弃去上清
液取沉淀，沉淀用悬浮液 〔５ ｍｍｏｌ／Ｌ　Ｔｒｉｓ－Ｍｅｓ
（ｐＨ７．２），５ｍｍｏｌ／Ｌ　ＫＣｌ，２５０ｍｍｏｌ／Ｌ 蔗糖，１００
ｇ／Ｌ甘油〕悬浮，得微粒体。将制得的微粒体平铺于
浓度梯度为２２０ｇ／Ｌ、３４０ｇ／Ｌ和４５０ｇ／Ｌ的蔗糖
上，于７　０００ｒ／ｍｉｎ离心２０ｍｉｎ，取蔗糖溶液界面处
的细胞膜组织，将收集到的部分加纯膜提取液，于
１３０　０００ｒ／ｍｉｎ离心２０ｍｉｎ，弃上清，取沉淀，用纯膜
悬浮液悬浮备用，以上操作均在４℃的环境中进行。
１．３．２ Ｈ＋－ＡＴＰａｓｅ 反应液：５０ｍｍｏｌ／Ｌ　Ｔｒｉｓ－
Ｍｅｓ（ｐＨ６．５），３ｍｍｏｌ／Ｌ　ＭｇＳＯ４，５０ｍｍｏｌ／Ｌ　ＫＣｌ，
１ｍｍｏｌ／Ｌ　ＮａＮ３，０．１ｍｍｏｌ／Ｌ　Ｎａ２ＭｏＯ４，５０ｍｍｏｌ／
Ｌ　ＮａＮＯ３，０．０２％（ｗ／ｖ）Ｔｒｉｔｏｎ　Ｘ－１００，膜蛋白２０～
５０μｇ，用２０ｍｍｏｌ／Ｌ的 ＡＴＰ－Ｎａ２启动反应。酶反
应体系在３７℃水浴中保温３０ｍｉｎ，用钼酸铵－硫酸
中止反应，添加 Ｆｉｓｋｅ＆Ｓｕｂｂａｒｏｗ 试剂显色 ４０
ｍｉｎ，在紫外可见分光光度计６６０ｎｍ波长处比色，
测定无机磷的释放量［９］。
１．３．３ Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ 反应液：０．２５ｍｏｌ／Ｌ蔗糖，
２５ ｍｍｏｌ／Ｌ　Ｈｅｐｅｓ－Ｔｒｉｓ （ｐＨ７．５），１ ｍｍｏｌ／Ｌ
ＮａＮ３，５０ｍｍｏｌ／Ｌ　ＮａＮＯ３，０．１ｍｍｏｌ／Ｌ钼酸胺，
３ｍｍｏｌ／Ｌ　ＡＴＰ－Ｎａ２，０．１ｍｍｏｌ／Ｌ　ＥＤＴＡ，０．０５％
（ｗ／ｖ）Ｔｒｉｔｏｎ　Ｘ－１００，３ ｍｍｏｌ／Ｌ　ＫＣｌ，膜 蛋 白
２０～５０μｇ。以２０ｍｍｏｌ／Ｌ　ＡＴＰ－Ｎａ２的添加启动反
应［１０］，３７℃保温３０ｍｉｎ，终止反应后测定无机磷的
释放量。
１．３．４ Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ 参照郝鲁宁等［１１］的方法，
反应液：０．２５ｍｏｌ／Ｌ蔗糖，２５ｍｍｏｌ／Ｌ　Ｈｅｐｅｓ－Ｔｒｉｓ
（ｐＨ７．５），１ｍｍｏｌ／ＬＮａＮ３，０．１ｍｍｏｌ／Ｌ钼酸胺，
０．１ｍｍｏｌ／Ｌ　ＥＤＴＡ－Ｎａ２，３ ｍｍｏｌ／ Ｌ　ＡＴＰ－Ｎａ２，
０．０２％（ｗ／ｖ）Ｔｒｉｔｏｎ　Ｘ－１００，膜蛋白２０～５０μｇ。以
２０ｍｍｏｌ／Ｌ　ＡＴＰ－Ｎａ２的加人启动反应，３７℃保温
３０ｍｉｎ，终止反应后测定无机磷的释放量。
２ 结果与分析
２．１ ＮａＣｌ对培养基ｐＨ及草酸分泌量的影响
从图１Ａ可知，未添加ＮａＣｌ组的培养基ｐＨ都
较初始值降低，且在ｐＨ５．５时下降幅度最大，说明
此菌在ｐＨ５．５时分泌的草酸较多。添加ＮａＣｌ组的
培养基ｐＨ 值也有明显的下降，但随着初始ｐＨ 的
增大，下降幅度也增大，且在初始ｐＨ 相同时，下降
幅度大于不加ＮａＣｌ组。说明，在外界高ＮａＣｌ培养
下，该菌分泌的草酸量增加，且在高ｐＨ下增加量更
大。图１Ｂ表明，未添加 ＮａＣｌ组的培养基ｐＨ 在
４．０～６．０范围内草酸分泌量随ｐＨ升高而升高，在
-2.5
-1.5
-0.5
0.5
-2
-1
0
3.5%%%%%%%%%%4.0%%%%%%%%%%%4.5%%%%%%%%%%5.0%%%%%%%%%%5.5%%%%%%%%%%%6.0%%%%%%%%%%6.5%%%%%%%%%%7.0
0 100%NaCI/(mmol/L)
pH
下
降
值
pH
%d
ec
re
m
en
t
初始 pH值
Initial%pH
(10.0)
10.0
30.0
50.0
70.0
90.0
110.0
130.0
草
酸
分
泌
量
/(m
g/
m
L)
Ox
al
ic
%se
cr
et
io
n
3.5%%%%%%%%%%4%%%%%%%%%%%%4.5%%%%%%%%%%%%5%%%%%%%%%%%%5.5%%%%%%%%%%%%6%%%%%%%%%%%6.5%%%%%%%%%%%%7
初始 pH值
Initial%pH
A
B
图１ 添加ＮａＣｌ后培养基ｐＨ及草酸分泌量的变化
　Ｆｉｇ．１　Ｅｆｆｅｃｔｓ　ｏｆ　ａｄｄｉｎｇ　ＮａＣｌ　ｏｎ　ｐＨ　ａｎｄ　ｏｘａｌｉｃ　ｓｅｃｒｅｔｉｏｎ
ｏｆ　ｔｈｅ　ｍｅｄｉｕｍ
·８６１·
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　贵 州 农 业 科 学
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　Ｇｕｉｚｈｏｕ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ
ｐＨ６．０ 左 右 分 泌 量 最 大，达 １０１．６３ ｍｇ／Ｌ；
ｐＨ６．０～６．５草酸分泌量呈下降趋势。添加ＮａＣｌ组
培养基ｐＨ变化趋势与不加ＮａＣｌ组基本一致，但相
同ｐＨ条件下，添加ＮａＣｌ组草酸分泌量明显高于未
添加组。说明，一定浓度ＮａＣｌ能促进草酸的分泌。
２．２ Ｈ＋－ＡＴＰａｓｅ、Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ与 Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ的
活性
从图２Ａ看出，未添加 ＮａＣｌ的菌丝细胞质膜
Ｈ＋－ＡＴＰａｓｅ活性在ｐＨ４．０～６．０先缓慢上升后急
剧上升，在ｐＨ６．０～６．５时呈下降趋势，且在ｐＨ
５．５～６．０时酶活性有最大值，为６．０３４Ｕ；但不同
ｐＨ值条件下的活性均低于添加ＮａＣｌ组。可见，在
外界高浓度 ＮａＣｌ培养下质膜 Ｈ＋－ＡＴＰａｓｅ活性升
高。
从图２Ｂ可知，未添加ＮａＣｌ组，在ｐＨ４．０～４．５
时，菌丝细胞质膜Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ活性呈上升趋势；在
ｐＨ４．５～５．０时，Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ活性最高，达５．６１７
Ｕ；从ｐＨ５．０开始，Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ的活性呈下降趋
势；到ｐＨ５．５左右，Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ活性又呈上升趋
势。整体上酶活性呈双峰形态。添加ＮａＣｌ组与和
不加ＮａＣｌ组菌丝细胞质膜 Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ活性变化
趋势大致相同，但相同ｐＨ 下，添加 ＮａＣｌ组 Ｋ＋－
ＡＴＰａｓｅ活性较未添加组高。可见，在外界高浓度
ＮａＣｌ培养下，Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ活性适当增高。
从图２Ｃ看出，未添加ＮａＣｌ组，在ｐＨ４．０～５．５
时，菌丝细胞质膜Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ活性随ｐＨ变化呈
缓慢上升趋势，在ｐＨ６左右，Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ活性最
高，达６．７２４Ｕ；在ｐＨ６～６．５时，Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ活
性呈下降趋势。添加ＮａＣｌ组，在ｐＨ４．０～５．５时，
菌丝细胞质膜Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ活性呈缓慢上升趋势，
且高于不加ＮａＣｌ组；而ｐＨ５．５～６．５时，添加ＮａＣｌ
组的Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ活性比不加 ＮａＣｌ组低，这可能
与催化质膜 Ｈ＋－ＡＴＰａｓｅ磷酸化的蛋白激酶活性调
节或其他代谢途径调节有关。
图２ Ｈ＋ －ＡＴＰａｓｅ、Ｋ＋ －ＡＴＰａｓｅ与Ｃａ２＋ －ＡＴＰａｓｅ的活性
Ｆｉｇ．２　Ｔｈｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　Ｈ＋－ＡＴＰａｓｅ，Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ　ａｎｄ　Ｃａ２＋ －ＡＴＰａｓｅ
３ 小结与讨论
１）添加 ＮａＣｌ后 Ｈ＋－ＡＴＰａｓｅ活性提高，增加
了细胞对外界 Ｈ＋的分泌量。质膜 Ｈ＋－ＡＴＰａｓｅ活
性的调节比较复杂，涉及许多水平及诸多因素。其
由多基因家族编码，基因表达具有组织特异性，各种
环境因素均可影响基因的表达（如盐［１２］）。在真核
生物中，也可能是菌自身为了避免Ｎａ＋在细胞质中
积累而产生毒害，而通过质膜上的Ｎａ＋／Ｈ＋逆向转
运蛋白体转出细胞质中Ｎａ＋，而Ｎａ＋／Ｈ＋逆向转运
蛋白体对Ｎａ＋的跨膜逆向转运依赖于细胞膜上质
膜 Ｈ＋－ＡＴＰａｓｅ转运 Ｈ＋而产生的膜两侧质子的电
化学梯度［１２］。总之，Ｈ＋－ＡＴＰａｓｅ含量的增加，是
ＮａＣｌ胁迫后引起菌丝质膜 Ｈ＋－ＡＴＰａｓｅ活性上升
高原因之一。
２）Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ能够提供主动吸收Ｋ＋的能量，
能维持细胞质中一定的 Ｋ＋水平，从而保证细胞进
行正常的生命活动。Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ也是生物质膜
重要 的 功 能 蛋 白，也 有 试 验 证 明，催 化 质 膜
Ｈ＋－ＡＴＰａｓｅ磷酸化的蛋白激酶对 Ｃａ２＋ 具有依赖
性［１３］，即在 Ｃａ２＋ 的介导下，蛋白激酶催化质膜
Ｈ＋－ＡＴＰａｓｅ的磷酸化。ＮａＣｌ刺激，使ｐＨ４．０～５．５
时Ｈ＋－ＡＴＰａｓｅ酶活性显著上升。推测，此时胞质
Ｃａ２＋浓度也很高，质膜Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ可逆着浓度梯
度跨质膜转运Ｃａ２＋，缓解因胞质Ｃａ２＋升高对菌造
成伤害。所以，ｐＨ４．０～５．５时，Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ活性
高于对照组。在高ｐＨ下有可能与其他离子交换或
渗透有关，导致Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ活性略低于对照组。
所以，高浓度ＮａＣｌ可使菌丝细胞质膜 Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ
活性呈一定的上升趋势，对Ｃａ２＋－ＡＴＰａｓｅ活性也有
显著影响。总之，在不同ｐＨ（４～６．５）下，外加ＮａＣｌ
胁迫，褐环粘盖牛肝菌细胞质膜 Ｈ＋－ＡＴＰａｓｅ和
Ｋ＋－ＡＴＰａｓｅ 活 性 呈 一 定 的 上 升 趋 势，对
Ｇａ２＋－ＡＴＰａｓｅ活性具有显著影响，这对进一步研究
该菌的抗盐机理具有重要意义。
［参 考 文 献］
［１］ 黄　艺，陶　澍．外生菌根对欧洲赤松苗（Ｐｉｎｕｓ　ｓｙｌ－
ｖｅｓｔｒｉｓ）Ｃｕ、Ｚｎ积累和分配的影响［Ｊ］．环境科学，２０００
·９６１·
　李春玲 等　盐胁迫下褐环粘盖牛肝菌（ｓｐ９）质膜ＡＴＰａｓｅ的活性
　ＬＩ　Ｃｈｕｎｌｉｎｇ　ｅｔ　ａｌ　Ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ＮａＣｌ　Ｓｔｒｅｓｓ　ｏｎ　ＡＴＰａｓｅ　Ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　Ｐｌａｓｍａ　Ｍｅｍｂｒａｎｅ　ｏｆ　Ｓｕｉｌｌｕｓ　ｌｕｔｅｕｓ（ｓｐ９）
（２１）：２－６．
［２］ Ｂｏｉｓ　Ｇ，Ｂｅｒｔｒａｎｄ　Ａ．Ｇｒｏｗｔｈ，ｃｏｍｐａｔｉｂｌｅ　ｓｏｌｕｔｅ　ａｎｄ
ｓａｌｔ　ａｃｃｕｍｕｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｆｉｖｅｍｙｃｏｒｒｈｉｚａｌ　ｆｕｎｇａｌ　ｓｐｅｃｉｅｓ
ｇｒｏｗｎｏｖｅｒ　ａ　ｒａｎｇｅ　ｏｆ　ＮａＣｌ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ［Ｊ］．Ｍｙｃｏｒ－
ｒｈｉｚａ，２００６（１６）：９９－１０９．
［３］ 刘　强，闫　伟．过量钠盐、碱性ｐＨ值对褐环粘盖牛
肝菌生长的影响［Ｊ］．内蒙古农业大学学报，２００９，３０
（２）：５２－５６．
［４］ 包斯琴．卷边桩菇（Ｐａｘｉｌｕｓ）抗盐菌株 ＭＡＪ和 ＮＡＵ
离子流和耐盐性比较研究［Ｄ］．北京：北京林业大学，
２０１２．
［５］ 邱全胜 植物细胞质膜 Ｈ＋－ＡＴＰａｓｅ的结构与功能
［Ｊ］．植物学通报，Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ｂｕｌｅｔｉｎ　ｏｆ　Ｂｏｔａｎｙ　１９９９，１６
（２）：１２２－１２６．
［６］ 杨颖丽，杨　宁，安黎哲，等．植物质膜 Ｈ＋－ＡＴＰａｓｅ
的研究进展［Ｊ］．西北植物学报，２００６，２６（１１）：２３８８－
２３９６．
［７］ 何春燕，黄敏华，李惠萍．比色法测定啤酒中的草酸含
量［Ｊ］．啤酒科技，２００６（１１）：１３－１５．
［８］ 郭奇梅，孙吉雄，安　渊，等．酸和铁胁迫对紫花苜蓿
根系质膜 Ｈ＋－ＡＴＰａｓｅ活性的影响［Ｊ］．草原与草坪，
２００９（３）：１３５－１３７．
［９］ 汪良驹，刘友良，马　凯．盐胁迫下无花果细胞质膜和
液泡膜 Ｈ＋－ＡＴＰａｓｅ活性对脯氨酸积累的影响［Ｊ］．
植物生理学报，２０００，２６（３）：２３２－２３６．
［１０］ 乙　引，汤章城．经渗透胁迫高梁根的质膜囊泡
Ｋ＋－ＡＴＰ酶及其运输特征［Ｊ］．植物生理学报，１９９６，
２２（３）：２３１－２３６．
［１１］ 郝鲁宁，余叔文．大麦根细胞质膜 Ｃａ２＋ －ＡＴＰ 酶和
Ｃａ２＋转运系统的特性［Ｊ］．植物生理学报，１９９３，１９
（２）：１７２－１８０．
［１２］ Ｒｏｄｒｉｇｕｅｚ－Ｒｏｓａｌｅｓ　Ｍ　Ｐ，Ｋｅｒｋｅｂ　Ｌ，Ｂｕｅｎｏ　Ｐ，ｅｔ　ａｌ．
ｃｈａｎｇｅｓ　ｉｎｄｕｃｅｄ　ｂｙ　ＮａＣｌ　ｉｎ　ｌｉｐｉｄ　ｃｏｎｔｅｎｔ　ａｎｄ　ｃｏｍｐｏ－
ｓｉｔｉｏｎ，ｌｉｐｏｈｙｇｅｎａｓｅ，ｐｌａｓｍａ　ｍｅｍｂｒａｎｅ　Ｈ＋ＡＴＰａｓｅ
ａｎｄ　ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ　ｅｎｚｙｍｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｔｏｍａｔｏ（Ｌｙｃｏｐｅｒ－
ｓｉｅｏｎ　ｅｓｃｕｌｅｎｔｕｍ　Ｍｉｌ．）ｃａｌｉ［Ｊ］．ｐｌａｎｔ　ｓｃｉ．，１９９９，
１４３：１４３－１５０．
［１３］ Ｓｈｉ　Ｈ　Ｚ，Ｑｕｉｎｔｅｒｏ　Ｆ　Ｇ，Ｐａｒｄｏ　Ｊ　Ｍ，ｅｔ　ａｌ．Ｔｈｅ　ｐｕｔａｔｉｖｅ
ｐｌａｓｍａ　ｍｅｍｂｒａｎｅ　Ｎａ＋／Ｈ＋ａｎｔｉｐｏｒｔｅｒ　ＳＯＳ１ｃｏｎｔｒｏｌｓ
ｌｏｎｇ－ｄｉｓｔａｎｃｅ　Ｎａ＋ｔｒａｎｓｐｏｒｔ　ｉｎ　ｐｌａｎｔｓ［Ｊ］．Ｐｌａｎｔ　Ｃｅｌ，
２００２，１４：４６５－４７７．
［１４］ Ｐａｌｍｇｒｅｎ　Ｍ　Ｇ．Ｐｌａｎｔ　ｐｌａｓｍａｍｅｍｂｒａｎｅ　Ｈ＋－ＡＴＰａｓｅ：
Ｐｏｗｅｒｈｏｕｓｅｓ　ｆｏｒ　ｎｕｔｒｉｅｎｔ　ｕｐｔａｋｅ［Ｊ］．Ａｎｎｕ．Ｒｅｖ．Ｐｌａｎｔ
Ｐｈｙｓｉｏｌ．Ｐｌａｎｔ　Ｍｏｌ．Ｂｉｏｌ，２００１，５２：８１７－８６１．
（责任编辑：杨　林
櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁櫁
）
（上接第１６６页）
毛鼠亚成年组怀孕率为１０．５３％［７］的研究结果有所
不同，也与贵州省主要害鼠黑线姬鼠［８］、褐家鼠［９］、
黄胸鼠［１０］、小家鼠［１１－１２］和高山姬鼠［１３－１４］亚成年组有
少量繁殖个体的研究结果不同。导致这一现象的原
因可能与该年龄组样本数少有关，对于贵州省针毛
鼠亚成年组个体是否能够繁殖的问题，仍有待今后
进一步研究。
［参 考 文 献］
［１］ 罗泽洵．大兴安岭及三江平原黑线姬鼠的种群年龄组
成［Ｊ］．动物学报，１９６３，１５（３）：３８２－３９６．
［２］ 杨荷芳．小型兽类年龄鉴定方法简评［Ｊ］．生态学杂
志，１９９０，９（２）：５４－５５．
［３］ 杨再学，松会武．黑线姬鼠种群年龄的研究［Ｊ］．贵州
农学院学报，１９９３，１２（１）：５８－６２．
［４］ 杨再学．褐家鼠种群年龄的研究［Ｊ］．贵州农业科学，
１９９４（４）：４０－４３．
［５］ 张　洁．中国兽类生物学研究（鼠类年龄鉴定与划分）
［Ｍ］．北京：中国林业出版社，１９９５：５２－６１．
［６］ 杨再学．中国鼠类年龄鉴定及研究进展［Ｍ］．贵阳：贵
州科技出版社，２００３：１－２０．
［７］ 洪震藩．社鼠、针毛鼠的种群年龄组成初步研究（啮齿
目：鼠科）［Ｊ］．武夷科学，１９８５（５）：１９７－２０７．
［８］ 杨再学，郑元利，胡支先，等．黑线姬鼠种群年龄组划
分标准比较研究［Ｊ］．西南农业学报，２００２，１５（１）：
１１２－１１５．
［９］ 杨再学，郑元利，潘世昌，等．褐家鼠的年龄鉴定及种
群年龄组成［Ｊ］．中国农学通报，２００９，２５（１４）：２１８－
２２３．
［１０］ 杨再学，金　星，周朝霞，等．黄胸鼠种群年龄鉴定和
种群繁殖研究［Ｊ］．贵州农业科学，２００６，３４（增刊）：
２１－２３．
［１１］ 潘世昌，杨秀群，归贤祥，等．小家鼠种群年龄的研究
［Ｊ］．西南农业学报，２００３，３１（２）：１６－１９．
［１２］ 潘世昌，杨再学，杨秀群，等．小家鼠胴体重指标划分
种群年龄的研究［Ｊ］．贵州农业科学，２００６，３４（增刊）：
１８－２０．
［１３］ 杨再学，金　星，龙贵兴．高山姬鼠种群年龄的研究
［Ｊ］．贵州农业科学，２０００，２８（６）：１２－１５．
［１４］ 杨再学，金　星，郭永旺，等．应用胴体重鉴定高山姬
鼠种群年龄［Ｊ］．山地农业生物学报，２０１１，３０（２）：
１０４－１０９．
（责任编辑：杨　林）
·０７１·
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　贵 州 农 业 科 学
　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　　Ｇｕｉｚｈｏｕ　Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ