全 文 ：油及羰基铁加至基础饲料面料中制作饼块 ,将吡唑溶于酒精中灌
胃 , 后来仍因模型对照组死亡率高达 71.9%, 以至灌胃酒精 6.2
g· kg-1· d-1仅 8周即被迫终止实验。表现为:模型组肝细胞出
现显著的脂肪变性 ,肝细胞呈点状 、灶状坏死 , 肝内炎细胞浸润;
同时肝功能受损 , 表现为 ALT、AST及球蛋白明显升高 , 白蛋白明
显降低;并且肝组织羟脯氨酸含量显著增高 , 这在中途死亡的大
鼠更明显 , 部分大鼠中央静脉周围和血窦部位可见纤维组织增
生 , 这表明大鼠已形成酒精性脂肪肝 、肝炎和肝纤维化 ,如果能延
长造模时间 , 肝纤维化程度将更重。
4.2　蒿鳖养阴软坚方具有减轻酒精性肝损伤的作用 蒿鳖养阴
软坚方由青蒿 、鳖甲 、生地 、丹参 、虎杖等组成 ,这些药物多有保肝
作用 , 系列研究表明该方对 CCl4、牛血清白蛋白和血吸虫尾蚴感
染等所致的实验性肝纤维化有确切的预防和治疗作用 ,该方在临
床上对慢性肝病有良好的疗效。 本研究从肝组织形态及羟脯氨
酸含量与肝功能方面证明蒿鳖养阴软坚方对大鼠酒精性脂肪肝 、
肝炎和肝纤维化有显著的预防作用。
4.3　蒿鳖养阴软坚方预防酒精性肝病的作用机制
4.3.1　抗脂质过氧化损伤 本研究表明酒精性肝病大鼠脂质过
氧化物水平增高。现认为乙醇及其代谢产物对肝脏的损伤以及
通过影响免疫因素 、氧化应激和脂质过氧化等在酒精性肝病过程
中发挥着重要作用 [ 7] , 脂质过氧化物增多是酒精性肝纤维化的
一个关键病理事件 [ 8] , 乙醇诱导 CYP2E1、CYP2A6和 CYP3A4产
生多种反应性氧类 , 损伤细胞膜系结构 , 产生脂质过氧化物 4 -
羟基 -壬烯醛和丙二醛(MDA), 同时乙醇损伤抗氧化防御系
统 [ 9] 。因此 MDA可反映脂质过氧化损伤的净效应。蒿鳖养阴
软坚方高 、低剂量组的 MDA水平明显低于模型对照组 , 表明该
方具有抗脂质过氧化损伤的作用 ,可能为其预防酒精性肝炎和肝
纤维化的作用机制之一 ,虽然其具体作用环节仍有待探讨。
4.3.2　降低 MMP-2和 MMP-9的水平 /活性 基质金属蛋白酶
(MMPs)降解肝内细胞外基质(ECM),有两种作用:一方面 MMP
-1降解胶原可消除 /减少肝脏中沉积的胶原纤维或防止其沉
积;另一方面 , MMP-2、MMP-9可降解正常肝血窦基底膜(由
IV型胶原等构成),导致肝血窦毛细血管化和胶原化 ,破坏了细
胞与细胞 、细胞与基质间的正常关系 , 引起或加剧肝纤维化。 在
肝脏 , 肝星状细胞(HSC)是 MMP-2的主要来源 , 当其转化为肌
成纤维细胞后可产生大量 MMP-2,库普弗细胞(KC)是 MMP-9
的主要来源 , 炎性损伤等可活化 HSC及刺激 KC, 使 MMP-2、
MMP-9产生增多。本研究经酶谱法证实酒精性肝病造模 10周
大鼠肝脏 MMP-2和 MMP-9水平 /活性显著升高 ,报道采用免
疫组化法观察到酒精性肝病造模 4, 8, 12, 16周肝脏 MMP-2和
MMP-9进行性增加 [ 10] 。高 、低剂量的蒿鳖养阴软坚方能降低
MMP-2、MMP-9水平 /活性 , 此可能通过其抗炎作用或直接抑
制 HSC等 , 系列研究表明该方药物血清能阻抑 HSC细胞周期而
抑制其增殖 ,从而减轻肝损伤 、防止肝纤维化 ,故降低 MMP-2和
MMP-9的水平 /活性可能是该方防治肝损伤的另一作用机制。
参考文献:
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收稿日期:2009-09-29;　修订日期:2010-04-10
基金项目:新疆维吾尔自治区地方病分子生物学重点实验室开放课题
(No.XJDX0208-2006-01)
作者简介:努尔艾买提江 ·阿布来提(1979-), 男(维吾尔族),新疆喀什
人 ,现为新疆医科大学在读硕士研究生 ,主要从事中药民族药开发工作.
＊通讯作者简介:买尔旦· 马合木提(1960-),男(维吾尔族),新疆伊宁
人 ,现任新疆医科大学主任药师 ,教授 ,硕士研究生导师 ,学士学位 ,主要
从事中药民族药开发工作.
新疆紫草止血作用研究
努尔艾买提江·阿布来提1 ,买尔旦·马合木提1, 2＊ ,古丽仙·胡加 1 ,古孜力努尔·依马木3
(1.新疆医科大学附肿瘤医院 , 新疆 乌鲁木齐　830011;　2.新疆新疆医科大学药学院 ,新疆 乌鲁木齐　830011;
3.新疆医科大学维吾尔医药系 ,新疆 乌鲁木齐　830011)
摘要:目的 研究新疆紫草的止血作用。方法 分别给小鼠连续灌胃给予新疆紫草正己烷 、醋酸乙酯 、95%乙醇和水提取
物 7 d, 采用断尾法考察对小鼠出血时间的影响 , 确定有效部位。在此基础上 ,用新疆紫草醋酸乙酯提取物分别给小鼠和
大鼠连续灌胃给药 14d, 测定小鼠凝血时间(CT)、出血时间(BT)和血小板计数 ,大鼠活化部分凝血活酶时间(APTT)、
凝血酶原时间(PT)、凝血酶时间(TT)、纤维蛋白原(FIB)含量的改变。结果 新疆紫草醋酸乙酯提取物能显著缩短 CT、
BT、升高血小板数量 、缩短凝血酶时间(TT)、提高纤维蛋白原含量(FIB)。结论 新疆紫草醋酸乙酯提取物具有较好的止
血作用 , 其机理可能与增加纤维蛋白原含量 , 促进纤维蛋白原转变为纤维蛋白的过程 ,升高小鼠血小板数量 , 影响抗凝和
纤溶系统有关。
关键词:新疆紫草;　止血作用;　凝血时间 ;　凝血酶时间;　纤维蛋白原;　血小板
DOI标识:doi:10.3969 /j.issn.1008-0805.2010.11.081
中图分类号:R285.5　　文献标识码:B　　文章编号:1008-0805(2010)11-2889-03
　　中药紫草为紫草科植物新疆紫草 ArnebiaeuchromaJohnst.,
紫草 LithospermunerythrorhizonSieb.etZucc.或内蒙紫草 Arnebia
guttataBunge的干燥根。 具有凉血 、活血 、解毒透疹等功效 [ 1] 。
在中医和维吾尔医均用于治疗许多难治性疾病如肿瘤 、艾滋病 、
过敏性紫癜 、银屑病等。紫草含有多种生物活性成分。现代药理
学研究发现这些成分具有抗肿瘤 、抗菌消炎 、保肝 、抗病毒及真
菌 、抗生育 、降血糖 、抗免疫缺陷 、抗凝血 、止血 、抗前列腺素生物
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2010VOL.21NO.11 时珍国医国药 2010年第 21卷第 11期
合成及抗脂质过氧化等作用 [ 2] 。杨荣等 [ 3]研究了软紫草 Arnebia
euchromaJohnst., 黄花软紫草 A.gutataBge., 紫草 Lithospermun
erythrorhizonSieb.etZucc.), 滇紫草 OnosmapaniculatumBur.et
Franch., 露蕊滇紫草 O.excertumHemsl.和密花滇紫草 O.Confer-
tumw.w.Simth.水提物和醇提物对小鼠断尾出血的作用 , 发现这
6种紫草的水提液和醇提液均有不同程度的止血作用。 其中软
紫草的水提液和黄花软紫草的醇提液作用较好。新疆紫草在新
疆分布广泛 , 品质最佳。 在以往的研究中 , 课题组研究了新疆紫
草的提取物的保肝作用 [ 4 ～ 7] 。为进一步深入研究新疆紫草的止
血作用和有效部位 , 我们初步考察了新疆紫草的正己烷 、醋酸乙
酯 、95%乙醇和水提取物对小鼠出血时间的影响 , 发现这些提取
物均可缩短断尾小鼠出血时间 ,其中醋酸乙酯提取物的作用优于
其它提取物。因此 , 本文报道了新疆紫草醋酸乙酯提取物对小鼠
出血时间(BT)、凝血时间(CT)、小板计数以及大鼠血液凝集参
数的影响 , 为进一步开发利用新疆紫草奠定基础。
1　材料与仪器
1.1　药材与试剂 新疆紫草(新疆参茸药业有限责任公司 , 批号
07112701, 由新疆医科大学药学院生药学教研室进行品种鉴定);
云南白药(云南白药集团股份有限公司 , 批号 20081208);戊巴
比妥钠(化学纯 ,北京通县育才精细化工厂 , 批号 950427);正己
烷 、醋酸乙酯 、95%乙醇等均为分析纯 , 醋酸泼尼松片(浙江仙琚
制药股份有限公司 ,批号 080977)。水为纯净水。 APTT、 TT、PT、
FIB试剂盒 DianstaticaStago。
1.2　动物 昆明种小鼠 ,体质量 18 ～ 22 g, Wistar大鼠 , 体质量
180 ～ 220g,雌雄各半 , 由新疆医科大学实验动物中心提供(许可
证号 SYXK-新 2003-0001)。自由摄食进水 , 饲料由实验动物
中心提供 , 室温 18 ～ 25℃饲养。
1.3　仪器 SYSMEXCA-7000全自动血凝仪(日本);DK-S24
电热恒温水浴锅(上海精宏实验设备有限公司);BS224s电子分
析天平(Sartorins公司);旋转蒸发器 RE-52(上海亚荣生化仪
器厂);SHB-Ⅲ 循环水式多用真空泵(郑州长城科教仪器有限
公司),内径 1 mm的毛细玻璃管 、灌胃管 、注射器 、血细胞计数
板 、显微镜。手术刀 ,眼科弯镊 , 秒表 ,载玻片 , 滤纸等。
2　方法
2.1　供试品的制备 称取紫草粉末(过 40目筛)500g, 分别用正
己烷 、醋酸乙酯 、95%乙醇 、水 , 于 70, 77, 80, 95 ～ 100℃下回流提
取 3次(2, 2, 1h),料液比为 1∶5,合并回流液 , 过滤 ,经减压回收
溶剂浓缩成浸膏 , 分别得提取物 Ⅰ 、Ⅱ 、Ⅲ和Ⅳ, 备用。临用前用
0.5 %羧甲基纤维素钠配制成所需浓度的混悬液备用 , 药物量
以按原药材计算。
2.2　止血有效部位的筛选 采用断尾法考察以上 4个提取物对
小鼠出血时间的影响 。取小鼠 50只 , 随机分为空白(0.5%CMC
-Na)对照组;给药组:高剂量(20 g· kg-1)、中剂量(10 g·
kg-1)和低剂量(5 g· kg-1);阳性对照组:云南白药(0.8 g·
kg-1),每组 10只。各组每日分别灌胃给药 Ⅰ , Ⅱ , Ⅲ和Ⅳ 1次 ,
连续 7 d。末次给药后 60min,将小鼠固定 , 露鼠尾于外 , 用手术
刀片于小鼠尾尖 1/ 2处横断(严格控制切割深度), 待血液自行
溢出开始计时每隔 30s用滤纸吸去血滴 1次 , 直至血流自然停止
(滤纸吸时无血)为止 , 即为出血时间。 记录小鼠出血时间
(BT)。计算出血时间的缩短率。结果以 SPSS12.0统计软件 ,进
行 t检验。见表 1 ～ 4。
BT缩短率(%)=空白对照组BT-给药组BT空白对照组 BT ×100%
表 1　新疆紫草正己烷提取物的止血时间( x±s)
组别 BT/min BT缩短率(%)
空白对照 12.7±2.18
己烷提取物(高) 9.86±1.74 22.36
己烷提取物(中) 11.32±1.73 10.87
己烷提取物(低) 9.46±1.23＊ 25.51
阳性对照 9.73±0.81＊ 23.38
　　n=10
表 2　新疆紫草醋酸乙酯提取物的止血时间( x±s)
组别 BT/min BT缩短率(%)
空白对照 14.96±1.79
醋酸乙酯提取物(高) 13.48±1.06＊ 9.89
醋酸乙酯提取物(中) 10.28±0.98＊ 31.28
醋酸乙酯提取物(低) 8.99±0.85＊ 39.91
阳性对照 11.42±1.00＊ 23.66
　　n=10
表 3　新疆紫草乙醇提取物的止血时间( x±s)
组别 BT/min BT缩短率(%)
空白对照 14.39±2.05 -
乙醇提取物(高) 9.73±2.03 32.38
乙醇提取物(中) 11.89±2.57 17.37
乙醇提取物(低) 9.44±1.81 34.40
阳性对照 10.50±0.96＊ 27.03
　　n=10
表 4　新疆紫草水提取物的止血时间( x±s)
组别 BT/min BT缩短率(%)
空白对照 16.15±1.39
水提取物(高) 8.77±1.04 45.70
水提取物(中) 9.21±0.91 42.97
水提取物(低) 9.09±1.39 43.71
阳性对照 8.40±0.48＊ 48.02
　　n=10
由表 1 ～ 4中数据可看出 ,与空白对照组相比 , 所有提取物均
可不同程度缩短小鼠的止血时间 ,其中醋酸乙酯提取物出血时间
的差异有统计学意义(P<0.05)。据此 , 确定醋酸乙酯部位为止
血有效部位。
2.3　醋酸乙酯提取物对出凝血相关指标的影响
2.3.1　对小鼠凝血时间的影响 [ 8]
毛细管法:取小鼠 50只 , 随机分为空白(0.5%CMC-Na)对
照组 , 给药组:高剂量(20 g· kg-1)、中剂量(10 g· kg-1)和低
剂量(5 g· kg-1);阳性对照组:云南白药(0.8 g· kg-1), 每组
10只。各组每日灌胃给药 1次 ,连续 14 d。末次给药后 60min,
参照毛细管法 ,用内径为 1 mm的毛细玻管插入小鼠内眦球后静
脉丛 , 深约 4 ～ 5 mm,轻轻转动再缩回 , 自血液流入玻管内开始
计时 , 达 5 cm血柱后取出毛细管平放于桌上。每隔 30 s折断毛
细管 0.5 cm, 观察折断处有无血凝丝出现 , 记录从毛细玻管采血
到出现血凝丝的时间 ,此即为凝血时间。
玻片法:分组及给药方法同上 , 末次给药后 60 min, 用眼科镊
迅速摘去一侧眼球 ,于载玻片两端各滴 1滴血 , 血滴直径约 6mm
, 立即用秒表计时 , 每隔 30 s用清洁大头针自血滴边缘向里轻轻
挑动 1次 , 并观察有无血丝挑起。 从采血开始至挑起血丝止 , 所
历时间即为凝血时间 ,另一滴血供复验。
2.3.2　 对小鼠出血时间的影响 取小鼠 50只 ,分组 、给药及操作
方法上。末次给药后 60min, 将小鼠固定, 露鼠尾于外 ,用手术刀
片于小鼠尾尖 1/ 2处横断(严格控制切割深度),待血液自行溢出
开始计时每隔 30s用滤纸吸去血滴一次 ,直至血流自然停止(滤纸
吸时无血)为止 ,即为出血时间。记录小鼠出血时间(BT)。
2.3.3　对小鼠血小板计数的影响 取小鼠 50只 , 随机分为空白
(CMC-Na)对照组 , 给药组:高 , 中 , 低剂量组;阳性对照组(醋
酸波尼松片按 0.011g· kg-1剂量), 每组 10只。给药方法同上 ,
末次给药后 60min,摘除小鼠右侧眼球取血 ,用微吸管吸血 20μl
于 1 %草酸铵溶液 0.38 ml内 , 充分摇匀 , 吸一小滴置于血细胞
计数板 , 静止 10 ～ 15min后 , 于高倍光学显微镜下计数各鼠血小
板数量 。
2.3.4　对大鼠血液凝集参数的影响 取 Wistar大鼠 50只 ,随机
分成 5组。分别为空白对照组;给药组:高剂量(14g· kg-1)、中
剂量(7· kg-1g)和低剂量(3.5g· kg-1);阳性对照组(云南白
药:0.9g· kg-1),每组 10只 ,灌胃给药 1次 /d,灌胃体积 2ml/只 ,
连续给药 14天。实验第 14天 ,每组大鼠相隔 40 min给药 ,给药
后 1 h依次腹腔注射 3%戊巴比妥钠生理盐水溶液 0.6 ml麻醉 ,
固定 , 迅速剥离腹主动脉 , 一次性注射器采血 ,立即注入于一次性
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时珍国医国药 2010年第 21卷第 11期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2010VOL.21NO.11
真空采血管(含 0.3ml, 0.109mol/L的枸椽酸钠抗凝剂)中 ,轻轻
颠倒摇匀后 , 立即于 3 000 r/min离心 10 min。 取血清 400μl,用
凝固法按试剂盒说明测定 PT(凝血酶原时间)、APTT(活化部分
凝血活酶时间)、TT(凝血酶时间)、FIB(纤维蛋白原含量)。
3 　结果
3.1 　对小鼠凝血时间的影响 与空白对照组相比 , 无论是玻片
法还是毛细管法 , 各剂量组凝血时间明显缩短。高 、中 、低剂量给
药组的凝血时间差异显著(P< 0.01或 P< 0.05)。与阳性对
照组相比 , 各剂量组凝血时间与云南白药相似。说明新疆紫草醋
酸乙酯提取物具有促凝血作用。结果见表 5。
3.2　 对小鼠出血时间的影响 与空白对照组相比 , 各剂量组出
血时间明显缩短。 高 、中 、低剂量给药组的出血时间差异均显著
(P< 0.01或 P< 0.05)。其出血时间随给药剂量的减小而缩
短。与阳性对照组相比 , 高剂量组出血时间与云南白药接近。说
明新疆紫草醋酸乙酯提取物能够明显缩短小鼠出血时间。结果
见表 5。
3.3　对小鼠血小板计数的影响 与空白对照组相比, 各剂量组的
血小板数量不同程度的升高。低剂量给药组的血小板数量升高明显
(P<0.01)。高、中剂量组血小板数量的变化无统计学意义(P﹥ 0.
05),与阳性对照药醋酸波尼松接近。说明新疆醋酸乙酯提取物在低
剂量时 ,能够明显升高小鼠血小板数量。结果见表 5。
3.4　对大鼠血液凝集参数的影响 与空白对照组相比 , 各剂量组
的 PT、APTT的变化无统计学意义(P>0.05);TT明显缩短(P<
0.05), 与阳性对照组相似;FIB的含量显著提高(P<0.05),略高
于阳性对照组。阳性组 FIB的含量与空白对照组的差异 ,无统计
学意义(P>0.05)。结果见表 6。
4　讨论
我们分别考察了新疆紫草正己烷 、醋酸乙酯 、 95%乙醇和水
提取物连续灌胃给药 7 d时对小鼠出血时间的影响 , 以确定其有
效部位 。结果 , 以上提取物均可不同程度缩短小鼠的出血时间。
正己烷提取物 3个剂量出血时间缩短率分别为 22.36%、10.87%
和 25.51%,醋酸乙酯提取物分别为 9.89%、31.28%和 39.91%,
95%乙醇提取物分别为 32.38%、 17.37%和 34.40%, 而水提物
分别为 45.70%、42.97%和 43.71%。从这些数值的大小看 , 水
提物的出血时间缩短率大于其他各组 ,但醋酸乙酯提取物的出血
时间缩短率具有明显的剂量相关性 , 统计分析结果也显示 , 与空
白对照组比较 ,醋酸乙酯提取物缩短小鼠的出血时间的差异具有
统计学意义(P<0.05)。据以往的文献报道 ,软紫草的水提物止
血效果优于醇提物 ,该文献未提及其他溶剂提取物的止血作用。
综合以上结果 ,我们以醋酸乙酯提取物为样品 , 考察了对小鼠凝
血时间(CT)、出血时间(BT)、血小板计数以及大鼠血液凝集参
数的影响。结果显示 , 新疆紫草醋酸乙酯提取物能显著缩短小鼠
CT、BT,升高小鼠血小板数量 、缩短凝血酶时间(TT)、提高纤维
蛋白原含量(FIB)。对凝血酶原时间(PT)、活化部分凝血活酶时
间(APTT)无影响。
表 5　新疆紫草对小鼠凝血时间的影响( x±s)
组别 凝血时间 t/min毛细管法 玻片法
出血时间
t/min
血小板数
n/×109· L-1
空白对照 1.861±1.05 3.053±1.65 13.45±6.27 908.600 0±78.795 37
高剂量 0.868±0.31＊ 1.032±0.44＊＊ 8.37±2.81＊ 992.500 0±236.368 47
中剂量 1.041±0.35＊ 1.079±0.40＊＊ 6.12±3.92＊＊ 1 028.300 0±218.997 23
低剂量 0.850±0.19＊＊ 1.160±0.40＊＊ 5.77±2.15＊＊ 1 212.700 0±231.930 57＊＊
阳性对照 1.058±0.30＊ 1.181±0.67＊＊ 8.12±4.47＊ 1 051.300 0±190.142 08 ＊
　　与空白对照组比较 , ＊ P< 0.05 , ＊＊P< 0.01
表 6　对大鼠血液凝集参数的影响( x±s)
组别 PT/s APTT/s TT/s FIB/g· L-1
空白对照 13.16±1.99 26.37±2.56 43.10±3.67 0.979±0.31
高剂量 12.68±1.57 25.62±3.15 39.74±1.75＊) 1.206±0.11＊)
中剂量 12.64±1.92 25.80±2.15 38.20±1.41＊) 1.302±0.09＊)
低剂量 12.98±1.62 26.00±2.35 37.91±1.10＊) 1.443±0.06＊)
阳性对照 12.9±1.62 26.25±4.00 37.39±1.42＊) 1.049±0.53
　　与空白对照组比较＊)P<0.05 , ＊＊)P<0.01;n=10
血液凝固是一系列酶促过程 ,最后使纤维蛋白原变为纤维蛋
白 , 血液由溶胶状态转为凝胶状态 ,凝血酶在止 、凝血中也发挥了
重要的作用。 PT值反映外源性凝血因子 , APTT值反映内源性凝
血因子 , 而 TT值则是主要反映凝血共同途径纤维蛋白原转变为
纤维蛋白过程中的重要指标。 血小板在血液凝固过程中发挥着
重要作用 , 它的黏附 、聚集 、释放起到止血作用 , 同时它还为各种
凝血酶原的活化提供必需的膜磷脂。 因此可以推测紫草醋酸乙
酯提取物的止血作用可能是通过增加纤维蛋白原含量 ,促进纤维
蛋白原转变为纤维蛋白的过程 。升高小鼠血小板数量 ,影响抗凝
和纤溶系统起作用 , 而对外源和内源性凝血因子无影响。
新疆紫草的化学复杂 , 主要有萘醌类色素 , 酚酸类 、生物碱
类 、苯酚及苯醌类 、三萜及甾醇类 、黄酮类以及多糖类等物质。这
些化合物的极性和在不同溶剂中的溶解性不同 ,反映在不同溶剂
提取物的药效不同。实验中观察到 ,新疆紫草正己烷 、醋酸乙酯 、
95%乙醇和水提物均显示有一定的止血作用 , 说明新疆紫草的止
血有效成分中既有极性小的化合物 , 又有极性大的水溶性化合
物。同时观察到 , 醋酸乙酯提取物在低剂量时 , 对 BT、血小板计
数 、TT、FIB的影响大于中 、高剂量组。原因可能在提取物中存在
有极性相似的多种化合物 ,在中 、高剂量组这些化合物中的非有
效成分含量相对较高 , 干扰或掩盖了止血有效成分的作用 , 而在
低剂量时 ,止血有效成分作用凸显的结果。新疆紫草不同极性部
位中止血有效成分及作用机理有待于进一步研究。
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH 2010VOL.21NO.11 时珍国医国药 2010年第 21卷第 11期