全 文 ：　第 21 卷　第 3 期 新　疆　医　学　院　学　报 Vol.21 , No.3　　　1998 年 ACTA ACADEMIAE MEDICINAE XINJIANG 1998
岩白菜素的免疫增强作用
阿斯亚·拜山佰　刘　发
(基础医学部药理学教研室)
摘要　目的:用常规免疫药理学试验方法 ,研究岩白菜素对小鼠免疫功能的影
响。方法:溶血素分光光度测定法 ,足跖肿胀法 ,同位素参入法等 。结果:岩白菜素 ig
125 、250 、375mg/kg·d×7 ～ 8d ,可提高小鼠血清溶血素含量;增强 SRBC 诱发的小鼠
迟发型超敏反应;提高血清溶菌酶含量和全血白细胞的吞噬功能;体内给药体外测定
法 ,提高〔3H〕-TdR参入 PHA 与 LPS 诱导的 T 、B淋巴细胞转化;提高小鼠脾细胞产
生白细胞介素 2。尚可逆转环磷酰胺对血清溶血素形成的抑制。结论:岩白菜素可
提高免疫功能。
关键词　岩白菜素;吞噬作用;淋巴细胞转化;白细胞介素 2;溶菌酶
　　岩白菜素(Ber)为从岩白菜等五科颗属
植物药中提出的有效成分。本研究用的 Ber
从新疆厚叶岩白菜提得。其生物活性显著 ,
临床用于治疗慢性气管炎 、胃炎〔1〕 、胃及十
二指肠溃疡等 。近年对岩白菜素的植物来
源 、一般药理作用及临床应用研究较多 ,但该
药对免疫功能的影响国内外均未见报道 。本
文目的在于探讨该药的免疫药理作用 ,为其
临床应用及开拓该类药物新用途提供理论依
据。
1　材料和方法
1.1　材料
1.1.1　NIH 、ICR及 BALB/c 小鼠 ,雌雄兼
用 ,均由新疆地方病学研究所动物室提供。
1.1.2　岩白菜素(Ber),白色结晶 ,新疆制药
厂出品 ,用前以 5%可溶性淀粉生理盐水配
成悬液 。RPM I-1640培养基 ,美国 JR Scien-
tific Inc产品;HEPES 德国 E M erck 产品;溶
菌酶 ,中国科学院上海生物化学研究所出品;
植物血凝素(PHA),脂多糖(LPS),美国产
品;〔3H〕-TdR 740 GBq/mmol ,中国原子能科
学研究院产品;新生小牛血清(NCS),新疆种
牛场出品 ,用前 56℃30 min灭活 。微球菌和
白葡萄球菌 ,均由本院微生物学教研室提供 。
1.2　方法　小鼠随机分成 5组:阴性对照组
(NS组);阳性对照组(Dex 或 Cyc);Ber 小剂
量组;Ber中剂量组;Ber 大剂量组。均口服
给药 ,连续 7 d。
1.2.1　血清溶血素(HC50)的测定　依文献
〔2〕方法在 540nm处测吸收率(A),并换算成
HC50 。
1.2.2　迟发型超敏反应(DTH)的测定　用
10%SRBC 50μl左足跖 sc 免疫小鼠 , 5 d后
给药右足跖相同剂量 SRBC 攻击 ,测量攻击
前后 24 h 右足跖厚度 ,以其差值表示肿胀
度〔3〕 。
1.2.3　T 淋巴细胞转化(TLT)的测定　用 96
孔培养板 ,每孔总量为 0.2 ml的 1640培养液
内含 NCS 15%, PHA 0.5 mg/ml ,肝素 15U/
ml ,HEPES 20mmol/L ,青 、链霉素各 100U/ml
及小鼠外周全血 0.1ml。于 CO2孵箱 37℃培
养48 h后各孔加〔3H〕-TdR 37 KBq ,继续培养
　190 新　疆　医　学　院　学　报 21 卷
至 72 h后 ,用多头细胞收集器收集于 49型
玻璃纤维滤膜上 ,以滤膜法〔4〕测定 dpm 值 ,
并按下式计算刺激指数(SI):SI =实验孔
dpm/阴性对照孔 dpm 。
1.2.4　B淋巴细胞转化(BLT)的测定　方
法同 1.2.3 , 只是有丝分裂原为脂多糖
(LPS)。
1.2.5　血清溶菌酶含量(S LC)的测定　采
用光学法〔5〕 。小鼠眼眶取血 ,分离血清 , 1∶1
稀释 。测定 0.2 m l血清与 1.8 m l微球菌液
(在 640 nm 处 ,以 1/15 mol/L 磷酸缓冲液调
透光率为 30%)反应前后透光率改变的百分
数 ,根据所求的方程计算 SLC 。
1.2.6　〔3H〕-TdR 参入的小鼠全血白细胞
吞噬能力的测定　依文献〔6〕方法测定全血
白细胞对白葡萄球菌的吞噬作用 ,并计算吞
噬指数(PI):PI(%)=〔1-(实验管 dpm 均
值/空白管 dpm 均值)〕×100。
1.2.7　白细胞介素-2(IL-2)的诱发及活性
检测　参照活化小鼠脾母细胞测定 IL-2的
活性法〔7〕并加以改进。
1.2.7.1　IL-2上清液的制备　ICR纯种小
鼠 24只 ,随机分为对照组及不同剂量的 Ber
组 ,给药 7 d 后无菌取脾 ,用 RPMI-1640 液
制成脾细胞悬液 ,3000 r/min离心15 min ,用
RPM I-1640液洗 2次后调脾细胞浓度为 5×
10
6/ml , 取脾细胞悬液 1.0 ml , 100μg/ml
ConA 30 μl加至培养试管中 ,设不加药物和
ConA 对照组(检测用的脾母细胞亦不加
ConA),不加药物而加 ConA 的阳性对照组
和不同剂量的 Ber组 , 37℃培养 24 h , 3000 r/
min离心 15 min ,获取上清液-20℃贮存备
用 ,即为 IL-1粗制品。
1.2.7.2　脾母细胞的制备 　ICR 小鼠 20
只 ,无菌取脾 ,用低渗压法处理红细胞。用
RPM I-1640液洗 2次后制成 5×106/ml的脾
母细胞悬液 ,加入 ConA 7 μg/ml(同时设不
加Con A 的阴性对照组),置 37℃5%CO2孵
箱培养 96 h 后 , 用含 10%NCS 的 RPM I-
1640液制成 1×106/ml的细胞悬液 ,当天用
于测定 IL-2的活性。
1.2.7.3　IL-2 检测 　取待检的 IL-2 上清
100 ml 、ConA活化的小鼠脾细胞悬液 100 μl
和 20%NCS-1640液 100 μl ,加入 96 孔培养
板内 , 37℃培养 16 h , 每孔加入〔3H〕-TdR
7.4KBq后 ,再温育 8 h ,滤膜法测 dpm 值 ,并
计算生长指数(GI)=(实验组 dpm 均值-空
白组 dpm 均值)/(ConA对照组 dpm 均值-
空白组 dpm 均值)。
1.2.8　岩白菜素的调节作用　通过血清溶
血素测定法观察 Ber对环磷酰胺抑制作用的
影响 ,方法同 1.2.1。
2　结果
2.1　对 HC50 、DTH 和 SLC 的影响　Ber促
进HC50的产生 ,增强 DTH 反应 ,提高 SLC ,
作用呈一定的剂量依赖性(表 1 ,2)。
表 1　Ber 和地塞米松(Dex)对血清溶血素浓度
(HC50)的影响( x ±s , n =10)
组别 n 剂　量(mg/ kg.d) HC50
NS 10 - 109±53
Dex 10 5 66±21
Ber 10 125 168±53 +++
Ber 10 250 187±54 +++
Ber 10 375 217±53 +++
　　注:与 NS组相比较 P<0.05 , P<0.01;与 Dex
组相比较+++P<0.01
　第 3 期 阿斯亚·拜山佰 ,等.岩白菜素的免疫增强作用 191
表 2　Ber和 Cyc对小鼠足跖迟发型超敏反应和血清溶菌酶的影响( x±s , n=10)
组　别 n 剂　量(mg/ kg.d)
小鼠足跖肿胀度
　　(mm)
血清溶菌酶浓度
　　(μg/m l)
NS 10 - 0.23±0.02 15.0±3.1
Cyc 10 10 0.18±0.03 10.1±0.8
Ber 10 25 0.28±0.11 ++ 18.0±2.2 +++
Ber 10 250 0.33±0.12 +++ 19.0±2.0 +++
Ber 10 375 0.38±0.12 +++ 20.0±2.5 +++
　　注:与 NS组比较 P>0.05 , P<0.05 , P<0.01;与 Cyc比较++P<0.05 , +++P<0.01
2.2　对小鼠外周全血 LT 的影响
Ber提高〔3H〕-TdR 参入的 T 、B 淋巴细
胞增殖反应(表 3)。
2.3　对〔3H〕-TdR参入的 WBC 吞噬功能的
影响　无 WBC空白组 dpm 均明显高于给药
组 ,Ber 组的 dpm 均低于 NS 组和 Cyc组 ,提
示 Ber可提高WBC 的吞噬功能(表 4)。
2.4　对小鼠脾细胞产生白细胞介素 2(IL-2)
的影响　3个不同剂量的 Ber组均明显提高
(IL-2)的产生(表 5)。
2.5　Ber可部分逆转环磷酰胺对生成血清溶
血素的抑制作用(表 6)。
表 3　Ber 对外周血 T 和 B淋巴细胞转化的影响( x±s , n=10)
组　别 剂　量(mg/ kg.d)
PHA
dpm S I
LPS
dmp SI
NS - 644±218 148±82.0
NS+PHA或 LPS - 2298±939 3.5 372±220 2.5
Ber 125 6304±888 9.7 2198±726 14.8
250 7006±797 10.8 2525±930 17.0
375 7072±867 10.9 2962±747 20.0
　　注:与阳性对照组比较 P<0.05 , P<0.01
表 4　Ber对小鼠外周血白细胞吞噬白葡萄球菌能力的影响( x ±s , n =10)
组　别 剂　量(mg/ kg.d) dpm
PI
(%)
无 WBC空白组 - 2195±485
有 WBC - 1660±382 25
Cyc 10 2050±372 7
Ber 125 1950±450 ++ 12
250 1300±210 +++ 41
375 910±232 +++ 49
　　　　注:与 NS组比较 P>0.05 , P<0.05 , P<0.01;与环磷酰胺组比较++P<0.05 , +++P<0.01
　192 新　疆　医　学　院　学　报 21 卷
表 5　Ber对小鼠脾细胞产生白介素-2 的影响( x±s , n=10)
组　别 剂　量(mg/ kg.d) dpm
PI
(%)
NS - 2 402±453 -
NS+ConA 0 5 527±690 1.02
Ber 125 6 898±722 1.47
250 7 280±718 1.58
375 9 305±964 2.26
　　　　注:与阳性对照组比较 P<0.01
表 6　Ber对环磷酰胺抑制血清溶血素产生作用的影响( x ±s , n =10)
组　别 剂　量(mg/ kg.d) HC 50
NS - 87±29
Cyc 10 28±2.0
Cyc+Ber 10+250 47±12 +++
Ber 250 173±63 +++
　　　　注:与 NS组比较 P<0.01;与 Cyc 组比较+++P<0.01
3　讨论
Ber可促进血清溶血素的产生 ,促进脂
多糖(LPS)诱导的小鼠 B 淋巴细胞的增殖 ,
增强小鼠足跖 DTH 反应和 PHA 诱导的 T
淋巴细胞转化。提高小鼠血清溶菌酶的含量
和全血白细胞吞噬白葡萄球菌的功能 ,促进
脾细胞产生 IL-2 ,并可逆转环磷酰胺对 HC50
的抑制作用。提示 , Ber 可提高小鼠的细胞
免疫 、体液免疫和非特异性免疫功能 ,并有一
定的免疫调节作用。
巨噬细胞经各种刺激物或淋巴细胞释放
MAF 的作用 ,活性增强成为效应细胞 ,可分
泌 50种以上的物质 ,大大增强细胞毒作用 ,
可杀伤多种靶细胞而对正常细胞无影响 。本
研究中 Ber可使小鼠血清溶菌酶含量增多 ,
提示 Ber对巨噬细胞有活化作用 ,可能是 Ber
治疗支气管炎 、镇咳 ,防治细胞增生 、癌变的
重要原因 。
白介素-2(IL-2)由 TH 细胞产生 , TH 产
生 IL-2依赖致分裂原 、抗原和巨噬细胞产生
的 IL-1。实验证明 , IL-2能使培养的 T 细胞
长期存活 ,可诱导产生 T 杀伤细胞(Tc),使
致敏的 Tc 活力大大增强 ,淋巴细胞和 IL-2
接触后 ,产生一种淋巴因子激活的杀伤细胞
(LAK), LAK 在实验动物和人都能大量产
生 ,是有效的抗肿瘤活性物。 I L-2 是产生这
种细胞的唯一需要的淋巴因子。近来报道 ,
自身免疫性疾病或免疫功能有缺陷与 IL-2
产生下降有关 ,如何杰氏病 、急性移植物抗宿
主反应 (GVHD)、系统性红斑狼疮 、结节性
麻风病和获得性免疫缺陷综合征(AIDS)等 ,
其原因是病人血清中含有抑制 T 细胞合成
IL-2 的因子或抑制 I L-2 受体表达〔8〕 。Ber
可促进脾细胞产生 IL-2 ,可能是其抗炎 、防
治感染的另一个原因 ,也为 Ber 用于自身免
疫性疾病和免疫缺陷病治疗提供理论依据 。
蔡有余等〔9〕通过对万余人治疗 5 年的观察 ,
证明 Ber有抑制食细胞重度增生和抗细胞癌
变的作用 ,可能是 Ber 增强免疫功能 ,促进
IL-2产生与分泌的结果 。
　第 3 期 阿斯亚·拜山佰 ,等.岩白菜素的免疫增强作用 193
参 考 文 献
1　中国医学科学院药物研究所.中草药通讯 ,
1979 , (2):4
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3　Lag range PH , Mackaness GB , Miller TE.Influence
of dose and route of antig en injection on the im-
munolo gical induction o f T cells.J Exp Med , 1974 ,
139:528
4　徐淑云 , 卞如濂 , 陈修主编.药理实验方法学.
第 2 版.北京:人民卫生出版社 , 1991.1231
5　余氵贺 ,谢少文 ,杨贵贞等主编.临床免疫技
术 .第 1 版 .上海科学技术出版社 ,
1982.388 ～ 398
6　Yang F , Zhang JM .〔3H〕-TdR incorpo ra-
tion method for measurement of peripheral
w hole w hite blood cell phagocytosing func-
tion.Shanghai J Immunol ,1986 , 6:302
7　Wong XL ,Gau IS , Li QS , et al.Some im-
proved methods of IL-2 and IL-2 measure-
ment Gin.J Immunol ,1989 ,5:106
8　卞如濂主编.抗炎免疫药理学与临床应
用.北京医科大学 、中国协和医科大学联
合出版社 ,1992.17
9　蔡有余 ,王庆友 ,刘芳 ,等.岩白菜素对食
道细胞增生作用的影响.中国医学科学
院学报 ,1991 ,13(9):73
〔收稿日期:1997-07-17〕
Immunoenhancing Action of Bergenin
Baisianbai Asiya , Liu Fa
Department of Pharmacology , X injiang Medical College
Abstract　Objective:To study the effects of Bergenin(Ber)to the immunologic function in mice.
Methods:Spect rophotometry , determination sw elling of footpad , and isotope-inco rporation etc
w ere used.Results:After Ber 125 , 250 , 375 mg/kg .d×7 ig to NIH BALB/c or ICR mice , serum
hemolysin concentrat ion 50%(HC50)was incresased;delayed type hypersensitivity(DTH)reaction
in mice immunized by SRBC was augmented;serum lysozyme concentration and phagocy tic func-
tion of peripheral white blood cells were increased;the transformat ion of 〔3H〕-TdR inco rpoated
murine s peripheral T and B-lymphocy te using phytohemagglut inin , lipopolysacharide as mitogen
w ere enhenced respectively , and the production of interleukin-2 by murine splenocy te;The sup-
pressive ef fects of cyclophosphamide to serum hemoly sin concentration 50%was also reversed by
Ber.Conclusions:Ber is an immunoenhancement agent.
Key words:Bergenin;phagocy tosis;lymphocy te t ransfo rmation;interleukin-2;lysozyme