全 文 ：现代生物医学进展 www.shengwuyixue.com Progress inModern Biomedicine Vol.12 NO.35 DEC.2012
日本旋覆花总黄酮的微波提取与含量测定
何国云 1 李 钢 1 耿红梅 2 李彩珍 1 董一侠 1 刘德艳 1
（1秦皇岛市山海关人民医院 河北秦皇岛066200；2河北省衡水学院 河北衡水053000）
摘要 目的：探讨提取日本旋覆花总黄酮的方法并对其含量进行分析。方法：采用微波技术提取日本旋覆花中的总黄酮，同时以芦
丁为对照品，用分光光度法测定不同产地日本旋覆花的总黄酮含量。结果：日本旋覆花总黄酮在10.4～51.7μg/ml范围内线性关系
良好，回归方程为：Y=12.1841X+0.0003（r= 9999，n=5),方法回收率为99.2%，RSD为1.49%。结论：微波提取技术操作简单，效果
可靠，适用于日本旋覆花总黄酮的提取。
关键词：微波技术；日本旋覆花；总黄酮；提取；含量测定
中图分类号：R927.2文献标识码：A 文章编号：1673-6273（2012）35-6957-03
MicrowaveExtractionandDeterminationofTotalFlavonoidsinInula
JaponicaThunb.
HEGuo-yun1,LIGang1,GENGHong-mei2,LICai-zhen1,DONGYi-xia1,LIUDe-yan1
(1QinghuangdaoShanghaiguanPeoplesHospital,Qinhuangdao,Hebei,066200;
2HengshuiUniversity,Hengshui,Hebei,053000,China)
ABSTRACTObjective:To extract and determine the total flavonoids in Inula japonica Thunb.Methods:Total flavonoids in Inula
japonica Thunb. were extracted by microwave tcchnology and measured through UV-spectroscopy with rutin as standard.Results:The
linearrelationshipwasgoodintheInulajaponicaThunb.Ifthetotalflavonoidssrangewaswithin10.4～51.7μg/m,regressionequation:
Y=12.1841X+0.0003（r=0.9999，n=5), the recoverywas99.2%, RSDwas1.49%.Conclusion:The method isconvenient, accurate and
canbeusedfortheextractionoftotalflavonoidsinInulajaponicaThunb.
Keywords:Microwavetechnology;InulajaponicaThunb.;Totalflavonoids;Extraction;Determination
ChineseLibraryClassification:R927.2 Documentcode:A
ArticleID:1673-6273(2012)35-6957-03
作者简介：何国云（1968-），女，副主任药师，主要从事药物临床与
检验，电话：13803355123，E-mail:heguoyun_happy@163.com
（收稿日期：2012-08-06接受日期：2012-08-30）
前言
旋覆花是常用的中药，在《神农本草经》中列为下品。性微
温，味苦、辛、咸,能降气，消痰，行水，止呕。用于风寒咳嗽、痰饮
蓄结、胸膈痞满、喘咳痰多、呕吐噫气、心下痞硬[1-3]。中国药典规
定的旋覆花为日本旋覆花(InulajaponicaThunb.)及欧亚旋覆
花(I.britannicaL.)的干燥头状花序[4]。目前我国中药市场上旋
覆花商品药材主要来源于日本旋覆花，少量来源于欧亚旋覆花[5]。
目前临床报道证实，欧亚旋覆花的化学成分主要是黄酮类[6-8]、
倍半萜内酯和萜类化合物[9,10]。笔者已对日本旋覆花中的化学
成分进行了研究，并对其中总黄酮的含量进行了测定，目的是
为有效控制旋覆花药材的临床品质，比较日本旋覆花和欧亚旋
覆花总黄酮含量的差别，笔者采用微波技术提取了不同产地的
日本旋覆花总黄酮，并对其含量进行测定，旨在为旋覆花的临
床研究提供理论依据。
1材料方法
1.1实验材料
1.1.1仪器设备 采用北京普析通用仪器有限责任公司生产的
TU-1901型双光束紫外可见分光光度计；北京优晟联合科技有
限公司生产的UWB型恒温水浴箱；北京博远祥德科学仪器有
限公司生产的 XS105DU型电子分析天平；G70D20CSP-D2
(SO)型格兰仕微波炉（额定功率1180W）；北京永光明仪器有限
公司生产的FZ102型植物试样粉碎机。
1.1 2试药 采用中国药品生物制品检定所提供的芦丁作为对
照品（生产批号：10080-200306），其他实验中所用试剂均为分
析纯。旋覆花采购于河南、山西、青海、内蒙古、河北、黑龙江等
地，经衡水市药品检验所主任中药师蔡咏梅鉴定，均确定为菊
科植物日本旋覆花，将以上鉴定完毕后日本旋覆花粉碎备用。
1.2试验方法
1.2.1制备对照品溶液 将精密称取经减压干燥至恒重的芦丁
10mg作为对照品，将其放入100mL的量瓶中，加入95%的乙
醇溶液溶解，加入过程中不断搅拌，至100mL刻度后摇匀溶
液，此时每1mL溶液中约含芦丁0.105mg。
1.2.2制备供试品溶液 将精密称取的1.0g日本旋覆花粉末置
于250mL三角瓶中，按料液比1:5加入80%乙醇，在微波功率
为额定功率的30%的条件下，微波提取3min后滤过，加无水
乙醇定容至25mL容量瓶中，将溶液充分摇匀后备用。
1.2.3选择测定波长 提取少量对照品溶液和供试品溶液，分
别在400~800nm波长范围内用分光光度计扫描。经反复扫描
后，确定在510nm波长处对照品溶液和供试品溶液均被最大
·药学·
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DOI:10.13241/j.cnki.pmb.2012.35.011
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吸收，同时在510nm波长处空白试剂与未加显色剂的样品溶
液均不被吸收，因而确定试验中以510nm为检测波长。
1.2.4制备标准曲线 分别精密量取对照品溶液0.0mL、1.0mL、
2.0mL、3.0mL、4.0mL和5.0mL，分别置于10mL量瓶中并加
水至5mL，每个量瓶中分别加入0.3mL的5%NaNO2溶液，边
加入边搅拌，摇匀后放置6min；加入0.3mL的10%Al(NO3)3溶
液，边加入边搅拌，摇匀后放置 6min；加入 4.0 ml的 10%
NaOH溶液，边加入边搅拌，并加水至刻度线，摇匀后放置
6min。根据分光光度法（《中国药典》2005年版一部附录）[2]，将
0.0ml的标准溶液做空白对照，在510nm的波长处测定溶液的
吸收度，同时以吸收度为纵坐标，溶液浓度为横坐标，绘制标准
曲线，根据绘制出的标准曲线得到回归方程：Y=12.
1841X+0.0003（r=0.9999，n=5），芦丁在10.5~51.5μg/mL的范围
内线性关系满意。
1.2.5精密度试验 精密量取一定浓度的供试品溶液，并连续
测定其吸收度5次，若RSD为0.34%，提示仪器的精密度良
好。
1.2.6溶液稳定性试验 将精密量取的供试品溶液在室温分别
放置0、10min、20min、30min、40min、50min、1h，测定吸收度，
其RSD分别为0.82%。表明供试品溶液在1hr内稳定，测定应
控制在1hr内完成。
1.2.7重复性试验 精密称取同批样品5份制备供试品溶液，
照标准曲线制备方法项下测定含量。供试品的平均含量为
8.80%，RSD=1.73%，表明重现性良好。
2结果及分析
2.1加样回收率测定结果
精密称取已知含量的日本旋覆花6份，分别精密加芦丁对
照品适量，照测定方法测定，平均回收率为 99.2%，RSD=1.
49%，见表1。
表1加样回收率测定结果
Table1 Therecoveryofsamples
Sampleweight(g) Totalflavonecontent(mg) Rutinaddingamount(mg) Mesuredquantity(mg) Rateofrecovery(%)
0.1228 10.68 10.8 21.17 97.1
0.1223 10.64 10.8 21.47 100.3
0.1241 10.80 10.7 21.43 99.5
0.1250 10.88 10.5 21.12 101.1
0.1233 10.72 10.6 21.01 98.2
0.1230 10.70 10.4 20.65 98.6
2.2所选样品总黄酮含量测定结果
精密量取3mL供试品溶液，置10mL量瓶中，照标准曲
线制备方法项下操作，测定并记录吸收度A1，同时精密量取3
mL供试品溶液，置于10mL量瓶中,加蒸镏水至刻度处，充分
搅拌摇匀后，测定并记录吸收度A2，两次测定所得吸收度的差
值即为供试品中总黄酮的吸收度。样品中的总黄酮的含量测定
结果。见表2。
表2所选样品总黄酮含量测定结果（n=5）
Table2 Determinationoftotalflavonoidsresultsintheselectedsamples（n=5）
Sourceofmedicinalmaterials Totalflavonecontent（%） RSD（%）
Anhui 8.80 1.73
Shanxi 6.87 1.88
Hebei Anguo 6.10 1.71
Hebei Xianghe 5.69 1.56
Henan 6.30 1.11
Neimenggu 4.58 1.93
Qinghai 4.02 1.86
Heilongjiang 4.16 1.65
3讨论
全世界属于旋覆花属(InulaL.)的植物约有100多种，呼吸
科旋覆花属植物中也普遍存在黄酮类成分,如黄酮、黄酮醇、二
氢黄酮和二氢黄酮醇及其糖苷它们广泛分布于欧洲、亚洲和非
洲。在中国约有20多种,在我国主产于河南、河北、江苏、浙江、
安徽等地。夏、秋二季花开时采收，除去杂质，阴干或晒干。生用
或蜜炙用[11-13]。《神农本草经》：主结气胁下满，惊悸。除水，去五
脏间寒热，补中，下气[14]，其中日本旋覆花被广泛运用于临床
治疗中[15,16]。中草药中的黄酮类成分具有广泛的生物学活性，临
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床上常将其运用于心血管疾病、消化系统疾病、呼吸系统疾病
及恶性肿瘤中，如何有效提取植物中黄酮类化合物，已日益受
到临床医师的关注[17,18]。InulajaponicaThunb.是旋覆花的中文
名，中国药典记载为旋覆花,为避免与中药名旋覆花混淆，
也被改称日本旋覆花，文中所提及的日本旋覆花均为
该植物[19,20]。
通过微波技术提取日本旋覆花总黄酮的方式，可以了解不
同产地日本旋覆花的总黄酮含量。同时用芦丁为对照品，建立
了通过比色法测定日本旋覆花总黄酮含量的方法，该检测方法
反应速度快，提高了药物提取效率，同时为旋覆花质量的控制
提供了理论依据。通过对河南、山西、青海、内蒙古、河北、黑龙
江等不同产地日本旋覆花中总黄酮的含量进行测定，实验结果
提示日本旋覆花在不同产地之间总黄酮的含量有差别，其中以
安徽产日本旋覆花总黄酮含量为最高，青海产的日本旋覆花总
黄酮含量为最低。由可见生态环境影响了药材有效成分的积
累，估计与植物的来源、生长温度、品种基因、采收季节、干燥过
程和储存条件等因素有关。因此，根据有效成分的含量确定药
材的种植基地是非常必要的。
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本研究还发现，出现心肌梗死后并不仅仅是梗死心肌节段
发生相应改变，整个心室的全部心肌节段都会受到影响，但程
度不同。本研究结果表明,变化最为显著的是梗死心肌节段,甚
至呈现负向运动；其次发生变化的是梗死节段邻近的非梗死心
肌节段。与正常组相比，差异也具有统计学意义，这大概与机械
应变在梗死心肌邻近节段产生活性氧类物质诱导心肌凋亡以
及活化基质金属蛋白酶从而引起胶原降解和纤维变性有关[13]。
Rodriguez等[14]研究发现，冠状动脉回旋支中段阻塞仅 70秒
时，缺血邻近节段透壁心脏应变及纤维－薄片应变就发生改
变，估计这一变化或许出现在分子重构之前。除此之外，造成心
脏收缩功能减低的其一原因为室壁僵硬度升高，现在已有实验
和临床研究进一步表明在非梗死区域室壁僵硬度也是升高的[15]。
我们的研究对正常心肌及梗死心肌纵向及径向运动特点
进行了初步分析，认为VVI技术是一项无创评价心肌局部节
段运动的新技术，在定量诊断冠心病心肌梗死方面显示出较好
的应用潜力，具有一定临床参考价值。
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