全 文 ：收稿日期:2010-04-29;　修订日期:2010-07-26
作者简介:李玉萍(1964-),女(汉族),重庆人 ,现任江西科技师范学院生
命科学学院教授 ,博士学位 ,主要从事天然活性成分的机能性研究与开发
工作.
野藤茶愈伤组织的诱导研究
李玉萍 ,朱露娟 ,苏　虎 ,皮小芳
(江西科技师范学院生命科学学院 ,江西 南昌　330013)
摘要:目的 探讨影响野藤茶愈伤组织诱导因素 , 建立野藤茶愈伤组织培养方法。方法 以生长旺盛的野藤茶的叶 、茎为
外植体 , 采用组织培养方法 ,观察不同外植体 、光照和植物生长物质种类及其配比对野藤茶愈伤组织诱导的影响。结果
叶和茎都能诱导愈伤组织 , 25℃、暗培养有利于愈伤组织生长 , 6-苄氨基嘌呤(6-BA)与 α-萘乙酸(NAA)和 2, 4 -二
氯苯氧乙酸(2, 4-D)的配合使用有利于愈伤组织的诱导 ,出愈率可达 86.1%。结论 野藤茶愈伤组织的最适宜培养基
为 MS+6-BA1.5 mg· L-1 +NAA8mg· L-1 +2, 4-D40 mg· L-1(pH5.8)。
关键词:藤茶;　组织培养;　愈伤组织;　诱导
DOI标识:doi:10.3969 /j.issn.1008-0805.2011.04.109
中图分类号:R284　　文献标识码:B　　文章编号:1008-0805(2011)04-1019-01
　　藤茶 Amplelopsisgrossedentata(Hand-Mazz).W.T.Wang为
葡萄科(VitaceaeMichx)蛇葡萄属(Amplelopsis)的一种茶用 、药用
植物 , 以茎或叶入药 , 主产于我国湖北 、湖南 、广西 、江西 、福建等
地。现代药理学研究表明 , 藤茶含有黄酮 、多酚和多糖等生物活
性成分 , 具有增强免疫功能 、抗氧化 、降血糖 、降血脂 、抑癌 、抑菌 、
消炎 、镇痛 、消肿等作用 , 常被用于治疗黄疸型肝炎 、感冒风热 、咽
喉肿痛 、口舌生疮 、便秘等病症 ,民间有 “神茶”之称 [ 1 , 2] 。
近年来 , 随着人类疾病谱的改变和保健意识的增强 , 藤茶的
消费量也随之增加 , 区域性野生藤茶资源很难满足日益增长的需
求 [ 3] 。组织培养技术在药用植物上的广泛应用 , 为野生药用资
源保护和生产替代品提供了新的途径。 然而关于藤茶离体再生
体系建立的报道极少 ,仅有武芸等 [ 4]就植物生长调节剂 、不同碳
源和不同碳源浓度对藤茶愈伤组织诱导的影响作了初步研究。
本文探讨了不同外植体 、消毒处理 、光照 、植物生长物质种类及其
配比对野藤茶愈伤组织的诱导效应 ,为藤茶离体再生体系的建立
奠定基础。
1　材料与仪器
1.1　材料 供试植物材料采自江西萍乡上栗县的生长健壮 、无病虫
害的野藤茶植株 , 经本校药学院药学教研室鉴定为 Amplelopsis
grossedentata(Hand-Mazz).W.T.Wang。取其嫩叶和茎为外植体。
1.2　仪器与试剂 SW-CJ-1BU超净操作台(上海智诚有限公
司), SPX-100B-Z微电脑生化培养箱(上海博迅有限公司),
HV-85全自动高压蒸气灭菌器(日本), Mili-Q超纯水系统
(美国 MilliPore公司), 电子天平 AV114C(梅特勒 -奥豪斯)。
实验所需试剂均为分析纯。
2　方法
2.1　无菌外植体的获得 外植体为野藤茶的叶和茎。将野藤茶
叶和茎在自来水下冲洗 2 h。在超净工作台中 , 用无菌水冲洗 3
～ 5次后 ,用 70%酒精浸泡 30 s后 , 浸泡于 2% NaClO3, 5, 8, 10,
15, 20min。最后用无菌水冲洗 6 ～ 8次。在无菌条件下将消毒
后的茎段切成长约 1 ～ 1.5cm的小段 ,叶片切成 0.5 cm2大小 ,接
种于 MS培养基 , 培养 7d后统计外植体污染率。
2.2　培养条件 用 MS培养基为基本培养基 , 添加 0.7%琼脂 ,
3%蔗糖 ,调节 pH值至 5.8, 121℃高压灭菌 15 min, 备用;植物生
长调节剂(4 mg· ml-1)用一次性过滤灭菌器灭菌 , 备用。整个
培养过程在以下条件下进行:温度(25 ±1)℃, 暗室培养或光照
时间 12h/d,光照强度 1 000 ～ 1 500 lx。
2.3　生长素对愈伤组织的诱导效应 在组织培养中 , 生长素主要
被用于诱导愈伤组织形成。以 MT培养基为基础 , 挑选质地 、大
小及长度相近的外植体接种于添加不同浓度的 6 -苄氨基嘌呤
(6 -Benzylaminopurine, 6 -BA)、萘乙酸 (naphthaleneacetic
acid, NAA)及 2, 4-二氯苯氧乙酸(2, 4-D)等植物激素的培养
基上 , 每种培养基配方接种数为 6瓶 , 每瓶 4个叶或茎 ,观察愈伤
组织的诱导率。 30d后按以下公式计算诱导率:
诱导率(%)=形成愈伤组织的外植体块数 /接种外植体的
块数 ×100%
2.4　外植体对愈伤组织的诱导效应 分别挑选幼嫩枝条上的茎 、
叶接种于相同的培养基上 , 重复方法 “ 2.3”项中培养过程 , 观察
愈伤组织的生长情况。
3　结果与分析
3.1　外植体消毒处理 以 2%NaClO处理外植体的污染率随处理
时间延长而降低 ,且有叶和茎之分。外植体经 “用无菌水冲洗 3
次※用 70%酒精浸泡 30 s※叶用 2% NaClO浸泡 5 min,茎用 2%
NaClO浸泡 8min※用无菌水冲洗 8次※接种于 MS培养基”过程
处理可得 100%的无菌外植体。但浸泡时间超过 10 min, 则出现
外植体在培养过程中变褐死亡现象 ,不利于培养。
3.2　光培养和暗培养对愈伤组织诱导的影响 将叶和茎分别接
种于 15种不同生长调节物质组合的培养基中进行暗培养或光照
培养(12h/d), 15d后愈伤组织开始生长 , 30d后统计出愈率 , 发
现暗培养更适合愈伤组织诱导。
3.3　植物激素配比对愈伤组织诱导的影响 以藤茶的茎和叶为
材料 , 在不添加任何植物激素或单独使用细胞分裂素(6-BA)、
生长素(NAA、2, 4-D)的培养基上均未能诱导出愈伤组织。 细
胞分裂素(1.5 mg· L-1)与一定浓度的生长素配合添加于 MS培
养基中 ,培养 15 d后可诱导出愈伤组织。结果见表 1。
由表 1可以看出 , 当 2, 4-D和 NAA浓度偏低时 , 完全不能
诱导愈伤组织。随着 2, 4-D和 NAA浓度的升高 , 愈伤组织的发
生率呈上升趋势。当 2, 4-D浓度为 60 mg· L-1时 , 出愈率达
86.1%,但随着培养时间的延长 ,愈伤组织有逐渐变褐 、死亡的现
象。且 2, 4-D浓度超过一定量的时不能诱导愈伤组织。由此
推断:诱导愈伤组织的最佳培养基配方是 MS+6-BA1.5 mg·
L-1 +NAA8mg· L-1 + 2, 4-D40 mg· L-1 , 所诱导的出愈率
达 71.3%, 愈伤组织的长势较好 ,且表面有突起的芽点。
3.4　不同外植体诱导愈伤组织能力的差异 为了确定藤茶愈伤
组织的最佳诱导部位 , 把叶片 、茎接种于含有 MS+ 6-BA 1.5
mg· L-1 +NAA8mg· L-1 +2, 4-D40mg· L-1的培养基中 , 接
种 16d后 2种外植体均能产生愈伤组织 , 叶和茎的愈伤组织平
均诱导率分别为 66.4%和 68.7%(见图 1)。但不同外植体诱导
的愈伤组织生长势表现明显的差异。茎诱导的愈伤组织生长势
一般 , 颜色为黄色或黄白色 , 致密;叶片诱导的愈伤组织生长势较
好 , 愈伤组织黄白色 , 疏松。
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LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2011VOL.22NO.4 时珍国医国药 2011年第 22卷第 4期
4　讨论
目前我国藤茶植物的开发应用主要利用野生资源 ,人工引种
栽培技术的研究刚起步 [ 5] 。湖北民族学院的郑小江教授领导的
课题组经过多年选育得到的优良无性系 “绿凤”藤茶 [ 6] , 并 “绿
凤”藤茶的叶 、茎 、根须等为外植体探讨了植物生长调节剂 、不同
碳源和不同碳源浓度对藤茶愈伤组织诱导的影响作了初步研究 ,
获得最适培养基为:MS+6-BA1.5 mg· L-1 +NAA0.2 mg·
L-1 +PVP2 g· L-1 , 叶和茎的愈伤组织诱导率分别为 18.6%和
59%[ 4] 。本实验研究表明 , 藤茶的叶和茎的均可成为愈伤组织
的外植体 , 这与武芸 [ 4]的实验结果大致相同 , 但将野生藤茶的叶
片及茎段接种于 MS+6-BA1.5mg· L-1 +NAA8mg· L-1 +
2, 4-D40mg· L-1培养基 ,愈伤组织平均诱导率分别为 66.4%
和 68.7%, 大大提高了叶的愈伤组织诱导率。
表 1　生长素浓度及配比对藤茶愈伤组织诱导的影响
培养基编号 6-BA 2, 4-D NAA出愈率(%)出愈时间 愈伤状态
1 1.5 0.2 2.5 - - -
2 1.5 0.4 5.0 - - -
3 1.5 0.8 2.5 - - -
4 1.5 4.0 5.0 - - -
5 1.5 8.0 5.0 - - --
1b 1.5 10.0 0.2 - - -
2b 1.5 20.0 0.4 - - -
3b 1.5 40.0 0.8 - - -
4b 1.5 40.0 2.0 37.4 16 黄色 /黄白色 、有黏性 、致密 /疏松
5b 1.5 40.0 4.0 51.4 16 黄色 /黄白色 、致密 /疏松
AA 1.5 40.0 6.0 67.6 15 颗粒状 、黄色 /黄白色 、致密 /疏松
BB 1.5 40.0 8.0 71.3 15 颗粒状 、黄色 /黄白色 、致密 /疏松
CC 1.5 60.0 8.0 86.1 15 颗粒状 、黄色 /黄白色 、致密 /疏松
DD 1.5 80.0 8.0 - - -
EE 1.5 100.0 8.0 - - -
　　激素浓度单位均为 mg· L-1
图 1　不同外植体对愈伤组织的诱导效应
植物生长调节剂对藤茶愈伤组织诱导的影响一般认为植物
生长调节剂是诱导愈伤组织成败的重要的因素。本实验表明 , 进
行愈伤组织诱导时应加入适量生长素和细胞分裂素。
综上所述 ,采用野藤茶叶及茎诱导产生愈伤组织的方法可
行 , 取材容易 ,消毒简便 , 愈伤诱导率较高 , 为该属植物的组织培
养技术的建立提供了基础实验数据。然而对于利用茎和叶诱导
的愈伤组织进行快速繁殖获得新植株 ,以及有效药用成分的含量
和变化等 ,还有待于进一步深入研究。
参考文献:
[ 1 ] 　覃骊兰.藤茶的化学成分及药理作用研究进展 [ J] .上海中医药杂
志 , 2008, 42(6):94.
[ 2 ] 　罗祖友 ,付晓芳 ,吴谋成.藤茶的研究进展 [ J].食品科学 , 2005, 26
(8):513.
[ 3 ] 　张友胜 ,杨伟丽 , 熊浩平.类茶植物显齿蛇葡萄的研究利用现状
[ J] .茶叶通讯 , 2001, 1:19.
[ 4 ] 　武　芸 ,郑小江 ,丁　莉.绿凤藤茶愈伤组织诱导的初步研究 [ J] .
北方园艺 , 2009, 3:59.
[ 5 ] 　易　诚.藤茶绿枝扦插技术初探 [ J] .湖南环境生物职业技术学院
学报 , 2003, 9(1):31.
[ 6 ] 　郑小江 ,刘金龙 ,向班贵 , 等.显齿蛇葡萄新品种-绿凤 [ J] .园艺学
报 , 2004, 31(5):701.
收稿日期:2010-05-13;　修订日期:2010-12-20
作者简介:蒲旭辉(1984-),女(汉族),山东潍坊人 ,现为潍坊医学院在读
硕士研究生 ,主要从事中草药开发研究工作.
＊通讯作者简介:康　白(1955-), 女(汉族),山东荣成人 , 现任潍坊医学
院教授 ,主要从事中草药开发研究工作.
丝瓜络对慢性心力衰竭大鼠心功能的作用
蒲旭辉 ,康　白＊ ,韩慧蓉 ,房春燕 ,许莉莉
(潍坊医学院 ,山东 潍坊　261053)
摘要:目的 观察丝瓜络对慢性心力衰竭(ChronicHeartFailure, CHF)大鼠心功能的作用。方法 采用异丙肾上腺素(Iso-
proterenol, ISO)法制备心衰大鼠模型 ,造模成功后 , 连续用药 28d。采用左心室插管术检测大鼠心率(HR)、左室内压峰值
(LVSP)、左室舒张末压(LVEDP)、左室等容收缩期压力最大上升速率(+dp/dtm), 左室舒张期压力下降速度(-dp/
dtm)。术后按同一位置摘取心脏 ,计算心脏重量指数(CI)。结果 丝瓜络大剂量组和阳性对照组能显著降低慢性心衰大
鼠的 HR、LVEDP和 CI, 升高 LVSP、 ±dp/dtm, 明显改善大鼠的一般状态。而丝瓜络小剂量组除可使心衰大鼠 HR减慢
外 , 对大鼠的一般状态 、 LVEDP、CI、LVSP、±dp/dtm均无明显影响。结论 大剂量应用丝瓜络可明显改善异丙肾上腺素
诱导慢性心衰大鼠的血流动力学 ,具有防治慢性心力衰竭的作用。
关键词:丝瓜络;　心力衰竭;　血流动力学;　异丙肾上腺素
DOI标识:doi:10.3969 /j.issn.1008-0805.2011.04.110
中图分类号:R285.5　　文献标识码:B　　文章编号:1008-0805(2011)04-1020-02
　　丝瓜络(Retinervusluffaefructus, RLF)是葫芦科植物丝瓜的
成熟果实维管束 , 具有通经活络 、清热解毒 、利尿消肿等功效 ,常
在中药方剂中应用 [ 1] 。研究表明 , RLF具有降血脂及预防心肌
缺血性损伤的作用 [ 2, 3];但其是否能改善心衰大鼠的心功能尚未
见报道 。本实验通过建立大鼠心衰模型 ,选用黄芪注射液作为阳
性对照药物 [ 4] , 采用左心室插管术观察 RLF对心衰大鼠心功能
的影响 ,以期为开发 RLF新的药理作用提供理论依据。
1　材料
1.1　动物 健康 Wistar大鼠 50只 , 雌雄各半 , 清洁级 , 体质量
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时珍国医国药 2011年第 22卷第 4期 LISHIZHENMEDICINEANDMATERIAMEDICARESEARCH2011VOL.22NO.4