全 文 :广 东 化 工 2015年 第 19期
· 42 · www.gdchem.com 第 42卷总第 309期
五指毛桃抗氧化活性研究
况伟 1,刘志伟 1,张晨 2,李柏玲 1
(1.嘉应学院 客家研究院,广东 梅州 514015;2.嘉应学院 教务处,广东 梅州 514015)
[摘 要]对客家常用中草药五指毛桃进行提取并研究其抗氧化活性,为利用五指毛桃开发天然抗氧化剂提供依据。采用 9种溶剂(甲醇、60 %
乙醇、80 %乙醇、95 %乙醇、异丙醇、正丁醇、三氯甲烷、乙酸乙酯、蒸馏水)结合超声波辅助提取法及传统煎煮法分别提取五指毛桃活性成分,
用亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠分光光度法、福林-酚法、二苯代苦味酰基自由基(DPPH)法分别测定提取液的总黄酮含量、总酚含量、自由基清除
活性。结果表明,以五指毛桃干粉重计,乙酸乙酯提取物的总黄酮含量最大,甲醇提取物的总酚含量最大;在超声波辅助提取法中 60 %乙醇、
95 %乙醇、蒸馏水三种提取物和传统煎煮法的提取物 DPPH自由基清除率大于 15 %,其余均小于 15 %。
[关键词]五指毛桃;提取;超声波辅助;传统煎煮;抗氧化
[中图分类号]TS202.3 [文献标识码]A [文章编号]1007-1865(2015)19-0042-02
Studies on the Antioxidant Activities of Radix Fici Hirtae
Kuang Wei1, Liu Zhiwei1, Zhang Chen2, Li Boling1
(1. Hakka Research College, Jiaying University, Meizhou 514015;2. Academic Affairs Office, Jiaying University, Meizhou 514015, China)
Abstract: The research aimed to study the antioxidant activities of extracts from Radix fici hirtae commonly used as Chinese herbals in Hakka area to provide
new references for the development and application of Radix fici hirtae for potential sources of safe dietary supplement or antioxidant of natural origin to promote
human health. The powders of root of Radix fici hirtae were extracted by nine different reagents (methanol, 60 % ethanol, 80 % ethanol, 95 % ethanol, isopropanol,
n-butyl alcohol, chloroform, ethyl acetate, distilled water) separately with assistant of ultrasonic and traditional decocting method. The content of total flavonoid and
total phenol was measured by aluminum chloride and Folin-Ciocalteu colorimetric assays, respectively. The antioxidant activity in vitro of extract was investigated
by DPPH radical-scavenging assay. The results showed that extract of ethyl acetate had the highest contentant of total flavonoids, extract of methanol had the highest
content of total phenol based on the dry weight of powder, and extracts of 60 % ethanol, 95 % ethanol, distilled water with assistant of ultrasonic and traditional
decocting extraction had abilities to scavenge more than 15 % of measused DPPH·.
Keywords: radix fici hirtae;extract;ultrasonic assistant;traditional decoction;antioxidant activity
天然抗氧化剂因安全、高效、营养、保健等功能,近年来备
受关注。天然抗氧化剂可以帮助人类预防心脏病和癌症等多种疾
病,并能增进脑力,延缓衰老[1,2]。五指毛桃为岭南常用草药,以
桑科植物粗叶榕的根入药,其性平,味甘、辛,有健脾补肺、利
湿舒筋之功,用于脾虚浮肿、食少无力、肺痨咳嗽、盗汗、风湿
痹痛、产后无乳等症状[3]。本研究对五指毛桃进行提取并研究其
抗氧化活性,为利用五指毛桃开发天然抗氧化剂提供依据。
1 材料与方法
1.1 实验材料与试剂
五指毛桃:梅州市标和药店;芦丁标准品:国药集团化学试
剂有限公司;没食子酸:国药集团化学试剂有限公司;福林-酚试
剂:上海源聚生物科技有限公司;DPPH(二苯代苦味酰基自由基):
日本和光纯药工药株式会社。其他实验用试剂均为分析纯。
1.2 试验仪器
分光光度计,722S;低速大容量多管离心机,LXJ-ⅡB,上
海安亭科学仪器厂;Crest超声洗涤仪,No-1100D,美国。
1.3 试验方法
1.3.1 抗氧化成分的提取
将干燥好的五指毛桃根分批少量放入高速粉碎机中粉碎,过
60目筛,密封袋封好,4 ℃冰箱保存备用。
超声波辅助提取法[4]:取 9 个 150 mL 三角烧瓶,分别加入
10.00 g五指毛桃粉末,按 1 g:10 mL的固液比分别加入 100 mL
的甲醇、60 %乙醇、80 %乙醇、95 %乙醇、异丙醇、正丁醇、三
氯甲烷、乙酸乙酯、蒸馏水等不同的试剂,保鲜膜封口。静置 20
min后,用超声洗涤仪超声提取 1 h,离心,滤纸过滤,滤液置于
100 mL容量瓶中,用对应同种提取溶剂定容,4 ℃冰箱保存备用。
传统煎煮法[5]:称取 10.00 g五指毛桃粉末于烧杯中,加入蒸
馏水 100 mL,加热至沸,煮沸后再以文火煎煮 30 min。后将煎煮
物离心,滤纸过滤,滤液置于 100 mL容量瓶中,蒸馏水定容,4 ℃
冰箱保存备用。
1.3.2 提取率的测定
取一称量瓶置于烘箱内干燥至恒重,用电子天平称其质量 m,
然后吸取 5 mL提取液于称量瓶中,置于烘箱内烘干溶剂至恒重,
最后称其质量 m0,提取率 E=(m0-m)×20/10×100 %[6]。
1.3.3 总黄酮含量的测定
采用亚硝酸钠-硝酸铝-氢氧化钠分光光度法测定提取物的总
黄酮含量,在 510 nm处测定吸光度值。总黄酮含量表示为每克中
草药提取物干重相当的芦丁(Rutin)的量,mg/g[7]。芦丁标准品配
成浓度为 100 mg/L的标准品溶液。以 95 %乙醇溶液为空白,以
芦丁含量(mg)为横坐标,吸光值 A510为纵坐标,进行线性回归得
标准曲线方程 y=0.5211x-0.0023,R2=0.9955。
1.3.4 总酚含量的测定
采用福林-酚法检测提取物的总酚含量。以没食子酸作为参照
标准,在 760 nm处测定吸光度值。总酚含量分别表示为每克中草
药提取物干重相当的没食子酸的量,mg/g[8]。用标准没食子酸配
成浓度为 100 mg/L的标准品溶液。进行线性回归得标准曲线方程
y=14.279x+0.027,R2=0.9986。
1.3.5 清除 DPPH自由基能力的测定
精确吸取提取液 0.5 mL,加入到 3 mL DPPH溶液中,摇匀,
暗处静置反应 30 min,以无水乙醇为空白,在 517 nm处测其吸光
度,重复测定 3次。DPPH清除率(%)=[Ao-(Al-As)]/Ao×100 %,其
中A0为 0.5 mL提取试剂+DPPH溶液的吸光度;Al为提取液+3 mL
DPPH溶液的吸光度;As为提取液+3 mL无水乙醇的吸光度[9]。
2 结果与分析
2.1 五指毛桃提取物的提取率
由表 1可知,不同提取溶剂对于五指毛桃的提取率各不相同,
但均低于 10 %。提取率大小依次为:蒸馏水>60 %乙醇>传统煎
煮法>80 %乙醇>甲醇>95 %乙醇>异丙醇>三氯甲烷>正丁
醇>乙酸乙酯,其中除“传统煎煮法”外,其余溶剂均采用超声
波辅助提取法,下同。其中以蒸馏水为提取溶剂的提取率最高,
为 7.16 %;以乙酸乙酯为提取溶剂的提取率最低,为 1.02 %。
2.2 五指毛桃提取物的总黄酮含量
由表 1可知,不同溶剂提取物的总黄酮含量差别较大。以五
指毛桃粉末干重计,乙酸乙酯提取物的总黄酮含量最大,达到了
3.543 mg/g;正丁醇提取物的总黄酮含量最小,只有 0.434 mg/g。
以提取物干重计,仍是乙酸乙酯提取物的总黄酮含量最大,达到
了 347.305 mg/g;而蒸馏水提取物的总黄酮含量最小,只有 22.674
mg/g。
2.3 五指毛桃提取物的总酚含量
由表 1可知,不同溶剂提取物总酚含量差别较大。以干五指
[收稿日期] 2015-08-05
[基金项目] 广东省普通高校人文社会科学省市共建重点研究基地招标项目(12KYKT10);广东省教育厅“高等教育教学改革”项目(GDJG20142453);梅州市
科技局、嘉应学院联合资助项目(2012KJA11)
[作者简介] 况伟(1977-),男,湖北十堰人,副教授,主要研究方向为天然食品添加剂。
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毛桃粉末量计,甲醇提取物的总酚含量最大,达到了 7.721 mg/g;
正丁醇提取物的总酚含量最小,只有 0.018 mg/g。以提取物干重
计,异丙醇提取物的总酚含量最大,达到了 316.649 mg/g;正丁
醇提取物的总酚含量最小,只有 1.652 mg/g。
2.4 五指毛桃提取物的 DPPH自由基清除活性
由表 1可知,在超声波辅助提取法中 60 %乙醇、95 %乙醇、
蒸馏水三种溶剂提取物和传统煎煮法的提取物 DPPH自由基清除
率大于 15 %,其余均小于 15 %。提取液 DPPH清除能力大小依
次为:蒸馏水>传统煎煮法>60 %乙醇>95 %乙醇>乙酸乙酯>
80 %乙醇>正丁醇>异丙醇>三氯甲烷>甲醇。
2.5 提取物 DPPH自由基清除活性与总黄酮、总酚含量的相关性
为进一步了解各提取物清除 DPPH 自由基能力大小与总黄
酮、总酚含量的相关性,进行了相关性分析。结果表明,各提取
物 DPPH自由基清除率与总黄酮的含量的相关系数为 0.0056,表
明它们之间相关性非常不显著,表明本实验测定的各提取物抗氧
化活性主要成分不仅仅是黄酮。可能由于黄酮类物质的多样性及
各个样品中具有抗氧化的有效黄酮的种类和含量不同,显示出的
抗氧化活性有一定的差异[10]。各提取物 DPPH自由基清除率与总
酚的含量的相关系数为 0.0851,表明它们之间相关性非常不显著,
表明本实验测定的各提取物抗氧化活性主要成分不仅仅是酚。在
所测各提取物中,可能还存在酚类以外的其它天然抗氧化性物质,
且各种天然抗氧化性物质往往具有增效作用[11]。
表 1 五指毛桃提取物的提取率及抗氧化活性
Tab.1 The extraction rate and antioxidant activities of Radix fici hirtae
提取方法 提取溶剂 提取率/% 总黄酮含量/(mg·g
-1) 总酚含量/(mg·g-1)
DPPH清除率/% 五指毛桃粉 提取物 五指毛桃粉 提取物
超声波辅助提取法
甲醇 3.72 1.009 27.134 7.721 207.557 3.10
60 %乙醇 5.80 1.815 31.300 2.640 45.521 23.81
80 %乙醇 4.06 1.278 31.479 3.771 92.888 9.64
95 %乙醇 2.80 1.125 40.162 6.590 235.361 20.51
异丙醇 1.40 0.894 63.876 4.433 316.649 4.53
正丁醇 1.06 0.434 40.915 0.018 1.652 5.56
三氯甲烷 1.18 3.312 280.697 1.352 114.545 3.50
乙酸乙酯 1.02 3.543 347.305 1.502 147.275 9.78
蒸馏水 7.16 1.623 22.674 1.057 14.770 46.71
传统煎煮法 5.20 4.425 85.101 1.159 22.289 33.26
3 结论
在同一抗氧化评价指标中,不同溶剂提取物的抗氧化能力存
在较大差异。以五指毛桃干粉重计,乙酸乙酯提取物的总黄酮含
量最大,甲醇提取物的总酚含量最大。在对DPPH自由基的清除作
用中,60 %乙醇、95 %乙醇、蒸馏水三种溶剂结合超声波辅助提
取法的提取物和传统煎煮法的提取物DPPH自由基清除率大于
15 %,依次是23.81 %、20.51 %、46.71 %、33.26 %,抗氧化能力
较强。
参考文献
[1]李磊,王岳飞,梁燕,等.天然抗氧化物质的保健功能及抗氧化活性研
究进展[J].茶叶,2008,34(2):70-74.
[2]陈翠,杨丽云,吕丽芬,等.10种药用植物提取物抗氧化活性的研究[J].云
南中医中药杂志,2008,29(11):51-52.
[3]广东中药志编委会.广东中药志(第一卷)[M].广州:广东科技出版社,
1994.
[4]曹秀军,卢文昱,倪英萍.超声波辅助提取法对丝瓜籽油的理化性质及
成分的影响[J].阜阳师范学院学报(自然科学版),2011,28(3):62-65.
[5]陈金月,龚敏阳,文隽,等.微波煎煮法与传统煎煮法制备驻车方汤剂
的比较[J].广西中医学院学报,2007,10(3):73-75.
[6]况伟,刘志伟,张晨,等.艾草抗氧化活性物质的提取分离[J].中国食
品添加剂,2015,136(6):109-113.
[7]王芳,乔璐,淡小艳,等.桑叶黄酮的提取及抗氧化研究[J].广东农业
科学,2011(15):76-79.
[8]郭德建,仲小青,汪程远,等.五种常用香料的抗氧化活性研究[J].食
品科学,2007,28(12):454-457.
[9]孙丽萍,黄兰,徐响,等.响应面法优化油菜蜂花粉核苷类成分提取工
艺[J].食品科学,2012,33(12):83-88.
[10]杨利军,田迪英.11种中草药抗氧化活性与黄酮含量相关性研究[J].食
品工业科技,2008,29(01):119-120,123.
[11]陆奕娜.天然抗氧化植物化学物的研究进展[J].食品研究与开发,2011,
32(9):238-243.
(本文文献格式:况伟,刘志伟,张晨,等.五指毛桃抗氧化活性
研究[J].广东化工,2015,42(19):42-43)
(上接第 39页)
由上图可以看出,当氯化镁的用量增加至 2 %时,体系的相
对挥发度增大到 1.0894,随着氯化镁用量的继续增加,体系的相
对挥发度变化缓慢。综合考虑实际操作条件、原料成本和盐的回
收利用,本文得出选用氯化镁的用量为二甲苯质量的 2%为最佳条
件。
3 结论
(1)萃取分离间二甲苯-对二甲苯的效果优于常规精馏分离,其
中以 DMF与 DBP作为混合萃取剂使用时,效果最佳;
(2)在体系中加入适量的氯化镁,可以进一步提高间二甲苯-
对二甲苯的相对挥发度,从而改善分离效果;
(3)加盐萃取精馏分离间二甲苯-对二甲苯体系,是一条可行的
工艺路线。
参考文献
[1]朱良.混合二甲苯生产技术现状及发展现状及发展趋势[J].河南化工,
2010,27(5):76-78.
[2]胡洁,杨玉敏.混合二甲苯分离技术研究进展[J].广州化工,2014,
42(19):29-30.
[3]Berg Lloyd.Separation of ethylbenzene from p- and m-xylene by extractive
distillation using mixtures of oxygenated organic compounds.AlChE J,1983,
29(4):694-696.
[4]丁锡雯.二甲苯异构体分离与提纯方法的比较[J].贵州化工,2011,
36(2):10-12.
[5]周小娟,李国栋,李杨,等.沸点相近物质的萃取精馏分离[J].南京师
大学报(自然科学版),1999,22(4):57-59.
[6]叶庆国,韩平.加盐萃取精馏技术进展[J].化学工业与工程技术,2009,
30(2):44-47.
[7]李凤云,岳坤霞.二甲苯异构体分离[J].石油化工高等学院学报,1997,
10(1):14-16.
[8]段占庭,雷良恒,周荣琪,等.加盐萃取精馏的研究(I)-用乙二醇加醋
酸钾制取无水乙醇[J].石油化工,1980,9(6):350-353.
[9]李凤云,秦永航.利用盐效应分离二甲苯异构体可行性研究[J].抚顺石
油学院学报,1995,15(3):16-19.
[10]李万杰.关于苯及其衍生物在盐水溶液中的活度系数的研究[J].化学
学报,1999,57:446-452.
(本文文献格式:杨玉敏,崔蕊,臧红霞,等.加盐萃取精馏法分
离间二甲苯-对二甲苯的研究[J].广东化工,2015,42(19):38-39)