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松塔景天组织培养与快速繁殖的研究



全 文 :松塔景天组织培养与快速繁殖的研究
胡颖慧1,马春祥1,梁孝莉2
(1.黑龙江省农业科学院牡丹江分院,黑龙江 牡丹江 157041;2.牡丹江市种子管理处)
摘 要:以松塔景天幼嫩叶片作为外植体,利用含有不同浓度配比植物生长调节剂的培养基分别进
行愈伤组织的诱导、不定芽的诱导、生根培养及驯化移栽,建立了松塔景天组织培养和快速繁殖体
系。试验结果表明:诱导愈伤组织的最适培养基为 MS+6-BA 0.5mg/L+NAA 0.05mg/L,愈伤
组织诱导率达87.78%;诱导不定芽的最适培养基为 MS+6-BA 1.0mg/L+NAA0.1mg/L,不定
芽诱导率达88.89%;组培苗最佳生根培养基为1/2MS+IBA 0.3mg/L,生根率达91.33%;组培
苗的移栽成活率达84%。
关键词:松塔景天;组织培养;植物生长调节剂
Tissue Culture and Rapid Propagation of Sedum nicaeense
Hu Yinghui 1,Ma Chunxiang1,Liang Xiaoli 2
(1.Mudanjiang Branch of Heilongjiang Academy of Agricultural Sciences,Mudanjiang,Heilongjiang 157041;
2.Mudanjiang City Seed Administration)
Abstract:The leaves were used as the explants and taking MS as the basic medium supplemented
some different plant growth regulators to establish the tissue culture and rapid propagation sys-
tem of Sedum nicaeense Al.through initial induction,subculture proliferation,rooting cultured
and transplantation.The result showed that the suitable medium for calus was MS supplemented
with 0.5mg/L 6-BA and 0.05mg/L NAA,and the induction rate of calus reached 87.78%;The
suitable medium for shoot induction was MS supplemented with 1.0mg/L 6-BA and 0.1mg/L
NAA,and the induction rate of shoot reached 88.89%;The optimal medium for roots induce-
ment was 1/2MS supplemented with 0.3mg/L IBA and the induction rate of roots reached
91.33%;The survival ratio of plantlets reached 84%.
Key words:Sedum nicaeense Al.;Tissue culture;Plant growth regulators
  松塔景天(Sedum nicaeense Al.),又名松叶景
天,为景天科景天属多年生常绿肉质草本植物,植株
基部分蘖能力较强,而成丛状,株高10~20cm,全株
呈灰绿色[1]。叶短针状,三岀轮生,排列紧密,
櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐櫐
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开发及新药生产提供了一种新途径。
参 考 文 献
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作者简介:逄世峰(1983-),男,研实员,主要从事药用
植物质量评价研究,E-mail:psf5295@sohu.com;*通讯作
者:王英平(1967-),男,博士生导师,从事药用植物资源与
评价研究,E-mail:yingpingw@126.com。

第2期(总第129期) 中 国 林 副 特 产 No.2(GSNO.129)
2014年4月 Forest By-Product and Speciality in China  Apr.2014
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DOI:10.13268/j.cnki.fbsic.2014.02.016
呈密集的开裂松果状,花黄色。生长习性耐旱、极耐
寒,喜光,不耐荫。对土壤要求不严,但以排水良好、
富含腐殖质的砂壤土更为适宜。可用于庭院作地被
栽植,或作花坛镶边,或配置模纹花坛,也可盆栽作
观叶植物置于室内,或用于屋顶绿化[2],在生态城市
建设中有着极为广阔的应用前景。
松塔景天成活率高、观赏性状优良,目前其栽培
繁殖已逐步进入市场化,繁殖方式以扦插繁殖为主,
但此法繁殖率较低,且耗时耗力。通过组织培养,在
短时期内获得大量植株,是经济有效的快速繁殖方
法,也是工厂化育苗的主要途径,此外也可以为合理
开发利用和保存野生植物资源提供有价值的参考,
因而对松塔景天离体快繁的研究在生产上有重大意
义。
目前,对松塔景天的研究主要集中在引种栽
培[3]以及抗逆生理响应[4-7]等方面,对组织培养的研
究鲜有报道,仅有邢苗苗等以茎段为外植体,研究了
松塔景天和粗壮景天的组培快繁[8],而本研究是以
幼嫩叶片为外植体,通过器官发生途径建立松塔景
天的高效快繁体系,相同方法的研究还未见报道。
1 材料方法
1.1 材料
供试植物材料为松塔景天(Sedum nicaeense
Al.),外植体选择发育正常的幼嫩叶片。
1.2 培养条件
培养基以 MS培养基为基础培养基,蔗糖30g/
L、琼脂7.8g/L、pH值为5.8、培养温度(25±2)℃、
光照强度1500~2000lx。
1.3 方法
1.3.1 外植体处理。取松塔景天植株幼嫩叶片作
为外植体,经清水冲洗10min后,用75%的酒精浸
泡10~15s表面消毒;再浸入10%次氯酸钠溶液3
~5min;随后,用灭菌蒸馏水淋洗3次。将其平放
在高压灭菌过的滤纸上,用灭菌刀将叶片切成
0.5cm长的小块。
1.3.2 愈伤组织诱导。将外植体接种于含基本培
养基附加不同浓度的6-BA(0、0.1、0.5、1.0mg/L)
和NAA(0、0.05、0.1、0.15mg/L)的培养瓶中,每
处理接种30个外植体,重复3次,置于培养室内先
进行暗培养14d后再进行光照培养,观察不同激素
配比培养基中愈伤组织的生长状态,统计愈伤组织
诱导率。
1.3.3 芽分化及再生。将诱导出的松塔景天愈伤
组织,切分后分别继代培养于附加不同浓度6-BA
(0.1、0.5、1.0mg/L)和 NAA(0.05、0.1、0.15mg/
L)的培养瓶中进行光照培养,每处理接种30个愈
伤组织,重复3次,30d后比较不同浓度植物生长调
节剂组合下愈伤组织芽分化情况、统计芽分化率。
1.3.4 生根培养。将诱导的不定芽切下接种于附
加不同浓度IBA的生根培养基上。生根培养基以
1/2MS为基本培养基,附加4种浓度梯度的IBA
(0.1、0.3、0.5、1.0mg/L),每处理接种50个不定
芽,重复3次,30d后观察生根情况,统计不定芽生
根率。
1.3.5 驯化移栽。待组培苗的根长达到3~5cm
时即可进行驯化移栽,首先松动培养基的瓶盖1~
2d,然后将瓶盖完全打开,倒入少量无菌水,在培养
室中炼苗6~7天后轻轻夹出小苗,洗净培养基,并
避免根部损伤。移栽到混合基质(草炭土∶蛭石∶
珍珠岩=2∶1∶1)中,喷雾或浇水加盖塑料薄膜以
保持水分平衡,提高小苗周围空气湿度(90%~
100%),减少叶面蒸腾。
1.3.6 数据处理。所有试验数据采用SPSS数据
统计软件进行方差分析,0.05检测水平。
2 结果与分析
2.1 不同浓度的植物生长调节剂配比对愈伤组织
诱导的影响
将松塔景天外植体接种于不同植物生长调节剂
配比培养基中,培养7~10d,切口处开始膨大(图1-
A),经过30d培养,会有不同程度的愈伤组织长出,
但在不同浓度梯度下,愈伤组织的诱导率明显不同,
愈伤组织的色泽、松散程度及生长状态也有所差别
(见表1)。
试验结果表明,在不添加任何植物生长调节剂
及只添加一种植物生长调节剂的培养基中,愈伤组
织的诱导率显著低于2种激素不同浓度配比的培养
基(表1),说明6-BA及NAA对松塔景天诱导愈伤
组织都起着至关重要的作用。
由表1可以看出,在 MS+6-BA0.5mg/L+
NAA0.05mg/L培养基上诱导培养的愈伤组织不仅
诱导率高达87.78%,显著高于其他几种浓度配比
的培养基,且生长速度快,质量最好,外观呈浅绿色
的颗粒状(图1-B),质地较为疏松,生长速度快。一
般认为,这种愈伤组织为具有分化能力的愈伤组

2014年 中 国 林 副 特 产 第2期
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织[9]。
表1 不同浓度植物生长调节剂对
松塔景天愈伤组织诱导的影响
植物生长调节剂
/(mg·L-1)
6-BA  NAA
愈伤组织诱导率
/%
愈伤组织生长状态
0 0 0g 外植体全部褐化死亡
0  0.05  6.67±1.93efg
几乎不产生愈伤组织,
易褐化死亡
0  0.1  3.33±3.85fg
几乎不产生愈伤组织,
易褐化死亡
0  0.15  7.78±2.93ef
几乎不产生愈伤组织,
易褐化死亡
0.1  0  8.89±2.22ef
几乎不产生愈伤组织,
易褐化死亡
0.1  0.05  52.22±2.93c
愈伤组织结构较为紧密,
呈白色或淡黄色
0.1  0.1  48.89±3.85c
愈伤组织结构较为紧密,
呈白色或淡黄色
0.1  0.15  37.78±2.93d
愈伤组织呈玻璃化,
透明或白色
0.5  0  8.89±1.11ef
几乎不产生愈伤组织,
易褐化死亡
0.5  0.05  87.78±2.93a
愈伤组织质地疏松,颜色呈
淡绿色,颗粒状,易于分开
0.5  0.1  73.33±1.93b
愈伤组织结构较为松散,
颜色呈浅黄色,半透明
0.5  0.15  51.11±2.94c
愈伤组织结构较为紧密,
呈白色或淡黄色
1.0  0  12.22±2.22e
仅有少量愈伤组织形成,
质地紧密,呈黄色,不易分开
1.0  0.05  68.89±1.11b
愈伤组织结构较为松散,
颜色呈浅黄色,半透明
1.0  0.1  47.78±4.01c
愈伤组织结构较为紧密,
呈白色或淡黄色
1.0  0.15  38.89±2.94d
愈伤组织呈玻璃化,
透明或白色
  注:同一行数据后标不同小写字母表示差异显著(P<0.05)
2.2 不同浓度的植物生长调节剂配比对愈伤组织
芽分化的影响
将长势良好的愈伤组织切割后,接种于不同植
物生长调节剂配比培养基中诱导芽分化,培养30d
后,统计芽诱导率见表2,试验结果表明,在不同植
物生长调节剂浓度配比中,MS+6-BA 1.0mg/L+
NAA0.1mg/L培养基中愈伤组织芽分化率显著高
于其他培养基,为88.89%,14d时愈伤组织表面开
始出现的绿色芽点(图1-C),随后淡绿色芽点渐渐
密集(图1-D),30d后迅速诱导产生丛生芽(图1-
E),将丛生芽切分后进行继代培养,14d后形成不定
芽(图1-F)。
表2 不同浓度植物生长调节剂对松塔景天
愈伤组织芽分化的影响
植物生长调节剂
/(mg·L-1)
6-BA  NAA
芽诱导率/% 不定芽生长状态
0.1  0.05  6.67±1.93f 仅形成少量不定芽,且不易成活
0.1  0.1  17.78±4.01e 不定芽细小,叶色发黄,无分化
0.1  0.15  32.22±2.94d
不定芽细弱,叶色偏黄,长势缓
慢,分化少
0.5  0.05  48.89±1.11c
不定芽较为细弱,黄绿色,,不
定芽较高,分化较少
0.5  0.1  62.22±5.88b
不定芽较为粗壮,绿色,分化较
多,长势一般
0.5  0.15  43.33±3.85c
不定芽较为细弱,黄绿色,,不
定芽较高,分化较少
1.0  0.05  62.22±2.93b
不定芽较为粗壮,绿色,分化较
多,长势一般
1.0  0.1  88.89±2.94a
不定芽粗壮,绿色,分化较多,
丛状生长
1.0  0.15  43.33±3.85c
不定芽较为细弱,黄绿色,,不
定芽较高,分化较少
2.3 不同浓度的植物生长调节剂对组培苗生根的
影响
图1 松塔景天组培快繁过程

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注:A:外植体伤口膨大;B:愈伤组织;C:愈伤组织表面形成芽
点;D:芽点增多;E:丛生芽;F:不定芽的伸长;G:生根培养;H:驯化
移栽
选择在最适芽分化培养基中继代培养的松塔景
天组培苗,接种到1/2MS培养基,附加不同浓度的
IBA,30d后统计生根情况(见表3)。
表3 不同浓度IBA对松塔景天组培苗生根的影响
IBA/(mg·L-1) 生根率/% 根部生长状态
0.1  41.33±1.76c 根细,主侧根难以区分
0.3  91.33±4.06a 根粗壮,主侧根明显,有须根
0.5  64.67±3.53b 根比较壮,主侧根较为明显
1.0  43.33±2.40c 根较细,主侧根不太明显
  由表3可以看出,松塔景天组培苗在几个不同
处理培养基中均能生根,但生根率及根部长势有所
不同,在添加0.3mg/L IBA的培养基中生根率达
91.33%,显著高于其他浓度处理,且根部长势粗壮,
主侧根能够明显区分(图1-G),因此1/2MS+0.3
mg/L IBA为松塔景天组培苗最适生根培养基。组
培苗生根后获得完整的再生植株,待根部长至3~
5cm后,进行驯化移栽,30d后松塔景天组培苗成
活率达84%(图1-H)。
3 讨论与结论
由于植物细胞在离体状态下缺乏合成生长素和
分裂素的能力,因此,在组织培养过程中往往需要添
加适当的外源植物生长调节剂(PGRs)以促进细胞
的生长和分化[10]。PGRs又称植物激素,包括细胞
分裂素、生长素等。细胞分裂素和生长素搭配使用
可诱导植物脱分化形成愈伤组织,被广泛应用于植
物组织培养。但不同的植物对植物生长调节剂的种
类和浓度的反应不尽相同[11]。
本试验以松塔景天幼嫩叶片为外植体,通过器
官发生途径,即诱导愈伤组织、愈伤组织芽分化、生
根培养的途径研究松塔景天的高频再生体系,试验
结果表明松塔景天最适愈伤组织诱导培养基为 MS
+6-BA 0.5mg/L+NAA0.05mg/L,愈伤组织诱导
率达87.78%,愈伤组织颜色淡绿色,生长较快,质
地疏松。关于芽分化培养有研究结果表明,6-BA/
NAA的比值高时有利于不定芽的分化[12-13],本试
验筛选出的最适芽分化培养基为 MS+6-BA
1.0mg/L+NAA0.1mg/L,其6-BA/NAA 的比值
为10,这与前人研究结果相一致。关于植物组织生
根培养,大多数试验已得出结论,以1/2MS作为生
根培养的基本培养基效果较好[14],因此本试验也使
用这种配方,邢苗苗[8]认为NAA抑制根的生长,而
IBA适合景天类植物生根,并发现1/2 MS附加
IBA 0.5mg/L为最佳的生根培养基,而本试验筛
选出的最适生根培养基为1/2MS+IBA 0.3mg/L,
这可能是由于不同外植体自身的生理结构、分化状
态以及脱分化能力存在的差异造成的。长势良好的
组培苗经驯化移栽后成活率达84%。
本试验建立了松塔景天快速繁殖体系,可大量
提供优质松塔景天组培苗,此外还可为松塔景天的
种植资源保存、品种改良等提供一定的指导意义。
参 考 文 献
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从事园林植物与观赏园艺方向研究;E-mail:mdjhyh@126.
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2014年 中 国 林 副 特 产 第2期
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