全 文 ：头顶一颗珠对肝癌小鼠免疫功能影响的实验研究
宋秀三1，李玉山2※，詹光杰2
(1．恩施自治州中心医院肿瘤科，湖北 恩施 445000;2．湖北民族学院医学院，湖北 恩施 445000)
中图分类号:Ｒ285. 5 文献标识码:A 文章编号:1006-2084(2015)19-3597-03
doi:10. 3969 / j. issn. 1006-2084. 2015. 19. 051
摘要:目的 研究头顶一颗珠(TTM)注射液对肝癌模型小鼠免疫功能的影响。方法 建立 H22
小鼠肝癌模型，将造模成功的肝癌小鼠依据随机数字表法分为模型组、氟尿嘧啶(5-FU)组、5-FU +
TTM组和 TTM组，每组 10 只。模型组、5-FU组每日按 10 mg /kg腹腔注射生理盐水及 5-FU，5-FU +
TTM组在注射 5-FU的同时每日腹腔按 7. 2 g /kg注射 TTM，TTM组按 7. 2 g /kg注射 TTM。给药 5 d
后测定各组胸腺、脾脏指数，检测外周血中白细胞、淋巴细胞及 CD3、CD4、CD8 细胞的百分比，血清中
白细胞介素 2(IL-2)、肿瘤坏死因子 α(TNF-α)水平。结果 5-FU组和 TTM组的胸腺指数与模型组
比较差异无统计学意义(P ＞ 0. 05)，而 5-FU + TTM 组显著高于模型组(P ＜ 0. 05)。与模型组比较，
5-FU 组外周血白细胞与淋巴细胞数量明显减少(P ＜ 0. 05)，TTM 组显著增加(P ＜ 0. 05);5-FU +
TTM组白细胞数与模型组比较差异无统计学意义(P ＞ 0. 05);与 5-FU组比较，TTM组白细胞与淋巴
细胞数量显著增加(P ＜ 0. 05)，5-FU + TTM组白细胞数量明显增多(P ＜ 0. 05) ，但淋巴细胞数量变化
差异无统计学意义(P ＞ 0. 05)。相对于模型组，TTM 组、5-FU + TTM 组及 5-FU 组 CD3、CD4 百分比
显著增加(P ＜ 0. 05)，CD8 百分比变化差异无统计学意义(P ＞ 0. 05);与较 5-FU + TTM 组比较，TTM
组、5-FU组 CD3、CD4 百分比差异无统计学意义，但 CD8 百分比显著增加(P ＜ 0. 05)。相对于模型
组，TTM组、5-FU + TTM组及 5-FU组 IL-2、TNF-α水平显著增加(P ＜ 0. 05);与 TTM 组比较，5-FU +
TTM组、5-FU组 IL-2 水平差异无统计学意义(P ＞ 0. 05)，但 5-FU 组 TNF-α 水平显著增加(P ＜
0. 05)，5-FU + TTM组差异则无统计学意义(P ＞ 0. 05)。结论 TTM可以促进 T细胞的成熟与迁移，
提高肝癌小鼠 IL-2、TNF-α水平，增强机体免疫力，具有抗肿瘤功能。
关键词:头顶一颗珠;H22 肝癌小鼠;免疫
The Experimental Study on the Effect of Trillium tschonoskii Maxim on Immune Functions of Hepa-
toma-Mice SONG Xiu-san1，LI Yu-shan2，ZHANG Guang-jie2. (1． Department of Oncology，Center Hospital
of Enshi State of Hubei Provine，Enshi 445000，China;2． Medical School of Hubei Minzu University，Enshi
445000，China)
Abstract:Objective To study the effect of Trillium tschonoskii Maxim(TTM)injection on immune
functions of mice modeled with hepatoma． Methods H22 hepatoma-mice model was built，and the hepa-
toma-mice with successful modeling were randomly divided into model group，5-FU group，5-FU + TTM group
and TTM group，10 mice in each group． The model group mice and the 5-FU group mice were given physio-
logical saline intraperitoneal injection with 10 mg /kg per day． The 5-FU + TTM group mice were given TTM
intraperitoneal injection with 7． 2 g /kg at the same time，and the TTM group mice were injected with
7． 2 g /kg． The index of thymus and spleen，the proportion of leucocyte，lymphocyte and CD3，CD4，CD8 cells
in the periphearl blood，and the concentration of IL-2，TNF-α in serum after five days medicines were meas-
ured． Ｒesults The thymus index of mice in 5-FU group and TTM group had no statistical significance and
5-FU + TTM group increased obviously compared with the model group(P ＜ 0． 05);the amount of leucocyte
and lymphocyte of peripheral blood in 5-FU group decreased obviously(P ＜ 0． 05)and the TTM group
increased obviously(P ＜ 0． 05)compared with the model group;the amount of leucocyte in 5-FU + TTM
group had no statistical significance compared with the model group;the amount of leucocyte and lymphocyte
in TTM group increased obviously compared with 5-FU group(P ＜ 0． 05) ;the amount of leucocyte increased
obviously in 5-FU + TTM group，but the amount of lymphocyte had no statistical significance． The proportion
of CD3，CD4 in TTM group，5-FU + TTM group and 5-FU group increased significantly(P ＜ 0． 05)and the
proportion of CD8 had no statistical significance compared with the model group(P ＞ 0. 05)． The proportion
of CD3，CD4 in TTM group，5-FU group had no statistical significance，but the proportion of CD8 increased
obviously compared with 5-FU + TTM group(P ＜ 0． 05)． The contents of IL-2，TNF-αin TTM group，5-FU +
TTM group and 5-FU group increased obviously compared with the model group(P ＜ 0． 05);compared with
TTM group，the contents of IL-2 had no obvious difference and had no statistical significance (P ＞ 0. 05)in
5-FU + TTM group and 5-FU group，but contents of TNF-α in 5-FU group increased obviously(P ＜ 0． 05)
and the contents in 5-FU + TTM group had no statistical significance(P ＞ 0. 05)． Conclusion TTM can
advance the maturation and metastasis of T cells，improve the level of IL-2，TNF-α of mice with hepatoma，
strengthen the organic immunity，thus has the effect of anti-tumor．
Key words:Trillium tschonoskii Maxim;H22 hepatoma-mice;Immunity
头顶一颗珠(Trillium tschonoskii Maxim，TTM)是土家族、
苗族地区应用较多的一种珍稀药材，常被当地人奉为“神
药”，是百合科延龄草属植物延龄草的干燥根茎与成熟的果
实［1］。其含有甾体皂苷、黄酮苷及倍半萜苷等活性成分，研
究表明，TTM 具有抗炎镇痛、改善心肺功能，提高免疫力、
降压、抗衰老等功效［2-4］。由于
繁殖相对比较困难，野生资源稀
少，TTM的研究与开发受到一定
限制。为充分保护、开发利用这
一宝贵资源，人们从不同方面对
TTM 进行研究。本研究对小鼠
H22 肝癌细胞移植瘤模型注射
TTM，观察 TTM 对肝癌小鼠免疫
功能的影响，探讨 TTM 抗肿瘤的
作用机制。
1 材料与方法
1. 1 实验动物 无特定病原体
级昆明种雄性小鼠 40 只，5 周
龄，体质量为 16. 2 ～ 23. 7 g，平均
(20. 3 ± 1. 4)g，购自华中科技大
学同济医学院实验动物中心，常
规饲养，生产许可证号:SCXK
(鄂)2008-0005。
1. 2 实验药品与仪器 小鼠
H22 细胞(上海博谷生物科技有
限公司)，氟尿嘧啶(5-fluoroura-
cil，5-FU)(上海旭东海普药业有
限公司，批号:H31020593)，CD3、
CD4、CD8 荧光抗体(美国 Beck-
man公司)，红细胞裂解液及溶血
素(美国 Beckman 公司)，白细胞
介素 2(interleukin 2，IL-2)、肿瘤
坏死因子 α(tumor necrosis factor α，
TNF-α)检测试剂盒(南京建成生
物制品研究所)，其他化学试剂
为国产分析纯试剂(湖北恩施乐
之塬科技公司)。精密电子天平
(上海天平仪器厂)，全自动酶标
仪(美国 Thermo 公司)，低温冷
冻离心机(美国 Beckman 公司)、
流式 细 胞 仪 (美 国 Beckman
公司)。
1. 3 TTM注射液 TTM由湖北省恩施市板桥乡中药材生产
基地提供，采用水提醇沉法制成含生药 30%(相当于生药含
量 2 g /mL)的液体，用时以 0. 9% 氯化钠注射液稀释成
0. 4 g /mL，瓶装密封消毒贮存于 4 ℃备用［4］。
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1. 4 动物造模、分组及给药 瘤源动物为 H22 传代 7 d的腹
水小鼠，选择状态好、腹水多的小鼠抽取 3 mL腹水，显微镜下
血细胞计数细胞数约为 2. 0 × 108 /mL。取 1 mL 腹水用灭菌
0. 9%氯化钠注射液配成细胞悬液，镜下细胞计数，调整细胞
浓度为 2. 0 × 107 /mL作为接种用瘤液。精确称量 40 只无特
定病原体级雄性昆明种小鼠，75%乙醇对左腋下消毒，皮下注
射接种用瘤液 0. 2 mL［5-6］，制成肝癌模型小鼠。将造模后小
鼠依据随机数字表法分为模型组、TTM 组、5-FU + TTM 组及
5-FU组，每组 10 只。模型组、5-FU 组每日按 10 mg /kg 腹腔
注射 0. 9%氯化钠注射液及 5-FU，5-FU + TTM 组在注射 5-FU
的同时每日腹腔按 7. 2 g /kg注射 TTM，TTM组按 7. 2 g /kg注
射 TTM。各组自由饮食，连续饲养 5 d［6］。
1. 5 胸腺、脾脏指数测定 给药 5 d 后再精确称量各组小
鼠，75%乙醇消毒，眼球取血后断颈处死，小心取出胸腺、脾
脏，放入冰冻 0. 9%氯化钠注射液冲洗拭干，迅速用精密分析
天平称取重量，测定胸腺、脾脏指数［胸腺、脾脏重量(mg)/体
质量(g)× 10］。
1. 6 外周血淋巴细胞检测 在 falcon 进样管中加入 20 μL
荧光抗体，然后加入 100 μL 抗凝血，低速离心室温静置
15 min，再加入稀释的溶血素 450 μL，稍稍低速离心后静置
10 min后利用流式细胞仪对淋巴细胞进行分析［6］。
1. 7 血清 IL-2、TNF-α 检测 小心收集小鼠血液于无内毒
素、热原的促凝管中，4 ℃，10 000 r /min 离心 15 min，于
－ 70 ℃ 保存备用。血清中 IL-2、TNF-α水平检测参考试剂盒
说明书采用双抗体夹心酶联免疫吸附测定法。
1. 8 统计学方法 应用 SPSS 18. 0 软件进行统计分析。计
量资料用均数 ±标准差(珋x ± s)表示，多组比较采用单因素方
差分析，组间两两比较采用 SNK-q 检验。P ＜ 0. 05 为差异有
统计学意义。
2 结 果
2. 1 TTM对肝癌小鼠胸腺、脾脏指数的影响 5-FU 组和
TTM组的胸腺指数与模型组比较差异无统计学意义(P ＞
0. 05)，而 5-FU + TTM组显著高于模型组(P ＜ 0. 05) ，5-FU组
胸腺指数与 TTM组差异无统计学意义(P ＞ 0. 05)，但 5-FU +
TTM组则显著增加(P ＜ 0. 05)，见图 1;各组脾脏指数比较差
异无统计学意义(P ＞ 0. 05)。
图 1 头顶一颗珠(TTM)对肝癌小鼠胸腺指数的影响 5-FU:
5-氟尿嘧啶;a与模型组比较，P ＜ 0. 05;b与 TTM组比较，P ＜ 0. 05
2. 2 TTM 对肝癌小鼠外周血白细胞、淋巴细胞的影响 与
模型组比较，5-FU组的白细胞与淋巴细胞数量明显减少(P ＜
0. 05)，TTM组两种细胞数量显著增加(P ＜ 0. 05);5-FU +
TTM组白细胞数与模型组相比差异无统计学意义(P ＞
0. 05)，而淋巴细胞数量明显减少(P ＜ 0. 05);与 5-FU 组比
较，TTM组白细胞与淋巴细胞数量显著增加(P ＜ 0. 05)，
5-FU + TTM 组白细胞数量明显增多(P ＜ 0. 05)，但淋巴细胞
数量变化差异无统计学意义(P ＞ 0. 05)。见图 2。
图 2 头顶一颗珠(TTM)对肝癌小鼠外周血白细胞、淋巴细胞
的影响 5-FU:5-氟尿嘧啶;a 与模型组比较，P ＜ 0. 05;b与 5-FU组比
较，P ＜ 0. 05
2. 3 TTM对肝癌小鼠外周血 CD3、CD4 及 CD8 的影响 与模
型组比较，TTM组、5-FU + TTM组及 5-FU组 CD3、CD4 百分比
均有显著增加(P ＜ 0. 05)，CD8 百分比变化差异无统计学意
义(P ＞ 0. 05);与 5-FU + TTM 组比较，TTM 组、5-FU 组 CD3、
CD4 百分比差异无统计学意义(P ＞ 0. 05)，但 CD8 百分比显
著增加(P ＜ 0. 05)。见图 3。
图 3 头顶一颗珠(TTM)对肝癌小鼠外周血 CD3、CD4 及 CD8
的影响 5-FU:5-氟尿嘧啶;a与模型组比较，P ＜ 0. 05;b与 5-FU +
TTM组比较，P ＜ 0. 05
2. 4 TTM对肝癌小鼠血清中 IL-2、TNF-α水平的影响 与模
型组相比，TTM 组、5-FU + TTM 组及 5-FU 组 IL-2、TNF-α 水
平均显著增加(P ＜ 0. 05);与 TTM 组比较，5-FU + TTM 组、
5-FU 组 IL-2 水平差异无统计学意义(P ＞ 0. 05)，但 5-FU 组
TNF-α水平显著增加(P ＜ 0. 05)，5-FU + TTM 组虽有增加但
差异无统计学意义(P ＞ 0. 05)。见图 4。
3 讨 论
在抗肿瘤的临床实践中，大多数抗肿瘤化学药物由于缺
少选择作用，患者接受放疗、化疗时虽然杀死了肿瘤细胞，但
正常机体也受到不同程度的损伤。在肿瘤患者治疗中，中医
药不仅可以减轻不良反应，治疗效果也有明显提升，中医药对
肿瘤及其术后、放化疗中的综合治疗具有重要的临床意义和
良好的疗效，加强中药在抗肿瘤机制方面的研究，开发和利用
新型抗肿瘤中药具有重要意义［7-8］。
胸腺、脾脏是两个重要的免疫器官，在抗肿瘤药物的作用
下会导致一定质量的变化，因此该器官质量的变化可以作为
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图 4 头顶一颗珠(TTM)对肝癌小鼠血清中
IL-2、TNF-α水平的影响
IL-2:白细胞介素 2;TNF-α:肿瘤坏死因子 α;5-FU:5-氟尿
嘧啶;a与模型组比较，P ＜ 0. 05;b与 TTM组比较，P ＜ 0. 05
观察药物对免疫影响的指标［9］。在本研究中，观察肝癌小鼠
注射 TTM后对胸腺、脾脏质量的影响，结果表明其对脾脏质
量及指数无明显影响，但 5-FU 与 TTM 混合使用后可以显著
提高胸腺质量和指数，胸腺能促使 T细胞的分化与发育，提示
TTM可以促进 T细胞的成熟与迁移。
目前认为细胞免疫是机体抗肿瘤的主要免疫机制，体液
免疫协同，其中 T细胞介导的特异性免疫应答起至关重要的
作用。张立春等［10］研究认为，参麦注射液配合化疗治疗肿瘤
可以预防白细胞减少，以减轻化疗的不良反应，同时使淋巴细
胞数量增加，增强机体的免疫功能。本研究结果表明，注射
TTM的肝癌小鼠白细胞及 CD3、CD4、CD8 数量有明显增加，提
示 TTM可有效促进 T淋巴细胞水平，调节机体内免疫功能，
表明中药 TTM对化疗患者免疫细胞有一定的保护作用。
IL-2 能激活、调节免疫细胞，参与体液免疫，通过促进 T
细胞的增殖与分化而发挥免疫作用，TNF-α在机体内正常情况
下水平较低，通过激活核因子 κB或 c-Jun 氨基末端激酶信号
转导通路调控肝细胞［11］，具有抑制肿瘤增殖的作用，是目前
发现的抗肿瘤作用最强的细胞因子［5］。本研究结果表明，
TTM能提高肝癌小鼠 IL-2、TNF-α 水平，提示 TTM 可增强机
体免疫力，具有抗肿瘤功能。
本研究结果表明，TTM与 5-FU联用可有效提高机体免疫
力，通过提高 IL-2、TNF-α水平，改善脾脏微环境从而影响 T细
胞亚群来减轻 5-FU对机体的不良影响，从而提高机体自身抗
肿瘤能力，因此，TTM可作为辅助化疗药物，提高肿瘤治愈率。
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收稿日期:2014-10-20 修回日期:2015-03-05 编辑:
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