全 文 ：中国现代医药杂志 2013 年 10 月第 15 卷第 10 期 MMJC， Oct 2013， Vol 15， No.10
·论 著·
▲基金项目：湖北民族学院科技学院 2013 年科研项目（编号：
KJY201305）
作者单位：445000 湖北恩施 ，湖北民族学院科技学院 （詹光
杰）；湖北民族学院医学院（黄发军、肖本见）
头顶一颗珠对 D-半乳糖所致小鼠衰老模型的影响
詹光杰 黄发军 肖本见
【摘要】 目的 研究头顶一颗珠（TTM）注射液对 D-半乳糖所致小鼠衰老模型的影响。 方法 昆明种小鼠（雌雄各
半）40 只，随机分为对照组、模型组、7.2g/kg TTM 组、3.6g/kg TTM 组及 1.8g/kg TTM 组，各 8 只。 腹腔注射 D-半乳糖造模，
Morris 水迷宫测量小鼠学习和记忆能力。 检测各组小鼠皮肤羟脯氨酸、心脑组织 MDA、LP、SOD 及 GSH-Px 含量，采用双抗
体夹心 ELISA 法检测小鼠血清中 IL-2 及 IL-6 含量。 结果 Morris 水迷宫实验中，TTM 各组潜伏期与模型组相比较明显
减少（P<0.05），模型组小鼠穿越平台的次数比其它各组小鼠少（P<0.05）。 心、脑组织匀浆氧化性指标（SOD、MAD、LP 及
GSH-Px）的检测，对照组及 TTM各组 MAD 与 LP 含量低于模型组（P<0.05）。对照组及 TTM各组 SOD 与 GSH-Px 的活性明
显高于模型组（P<0.05）。 注射过 D-半乳糖小鼠皮肤羟脯氨酸含量都明显低于对照组（P<0.05），TTM 组小鼠皮肤中羟脯氨
酸的含量明显高于模型组（P<0.05）。 TTM组小鼠血清中 IL-2、IL-6 含量显著高于对照组和模型组（P<0.05），模型组小鼠血
清中的 IL-2、IL-6 比对照组要低（P<0.05）。 结论 TTM的有效成分具有多种生物学活性，可以通过不同途径发挥抗衰老作
用，在改善学习记忆功能、清除体内自由基抗氧化、增强机体免疫能力等方面都有较好的作用。
【关键词】 头顶一颗珠 D-半乳糖 小鼠 衰老
Effect of trillium tschonoskii maxim on mice-aging model induced by D-galactose Zhan Guangjie，Huang Fajun，Xiao
Benjian. Science and Technology College of Hubei University for Nationalities，Enshi 445000
【Abstract】 Objective To study the effect of trillium tschonoskii maxim（TTM）injection on mice-aging model induced by
D-galactose. Methods 40 Kunming mice （20 male and 20 female） were randomly divided into control group，model group，
7.2g/kg TTM group，3.6g/kg TTM group and 1.8g/kg TTM group with eight mice in each group. The model induced by D-galac-
tose injected peritoneal cavity and Morris water maze was used to detect the learning and cognitive ability of mice. The levels of
MDA，LP，SOD and GSH-Px of skin hydroxyproline，heart and brain tissue were detected， the IL-2 and IL-6 levels in serum of
mice were detected by double antibody sandwich ELISA method. Results 3 TTM groups were significantly reduced in latency
period compared with the model group during Morris water maze test （P<0.05） and the number of mice in model group through
the platform was less than other mice in each group （P<0.05）. The levels of MAD and LP of the control group and each TTM
group were less than model group in the detection of heart，brain tissue oxidation index （SOD，MAD，LP and GSH-Px），P<0.05.
The activity of SOD and GSH-Px in the control group and each TTM group was significantly higher than that in the model group
（P<0.05）. The skin hydroxyproline content of mice injected D-galactose was significantly lower than that of the control group
（P<0.05） and the skin hydroxyproline content of mice of TTM group was significantly higher than that the of model group （P<
0.05）. The IL-2，IL-6 levels in serum of mice in TTM group were significantly higher than that in the control group and the
model group（P<0.05） and the IL-2，IL-6 levels in serum of mice in the model group was lower than that of the control group（P<
0.05）. Conclusion The effective constituents of TTM have a variety of biological activity which have a good effect on anti-
aging by different ways，improving learning and memory function，eliminating free radicals antioxidant，enhancing the body immu-
nity and other aspects.
【Key words】 Trillium tschonoskii maxim D-galactose Mice Aging
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中国现代医药杂志 2013 年 10 月第 15 卷第 10 期 MMJC， Oct 2013， Vol 15， No.10
头顶一颗珠（trillium tschonoskii maxim，TTM）为
百合科延龄草属植物延龄草的干燥根茎与成熟的
果实。其成分含有甾体皂甙、黄酮苷及倍半萜苷等有
效成分。作为土家族地区的珍稀药材，头顶一颗珠被
土家族人奉为“神药”，具有抗癌、抗炎、镇痛、提高免
疫力、改善心功能和降压、抗老年痴呆等功效[1，2]。 但
长期以来，由于繁殖困难，数量稀少，药材来源受限，
国内外对头顶一颗珠的研究较少。近年来，随着药源
问题的解决，头顶一颗珠的研究与开发日益受到重
视[1]。 本研究采用 D-半乳糖诱导致亚急性衰老小鼠
模型，分别注射不同剂量 TTM 注射液，观察 TTM 对
衰老小鼠学习记忆的影响， 并从氧化应激方面探讨
TTM抗衰老作用机理。
1 材料与方法
1.1实验动物 昆明种小鼠 40 只（雌雄各半），5~7周
龄，体重（22.3±3.2）g，由华中科技大学同济医学院实
验动物中心提供，常规饲养。
1.2 实验药品与实验仪器 D-半乳糖（Sigma 公司），
IL-2、IL-6 ELISA 试剂盒（晶美公司），MDA（丙二
醛）、LP（脂褐质）、GSH-Px（谷胱甘肽过氧化物酶 )、
SOD（超氧化物歧化酶）及羟脯氨酸检测试剂盒（南
京建成生物制品研究所），其它化学试剂为国产分析
纯试剂（湖北恩施乐之塬科技公司）。 FA1640电子天
平（上海天平仪器厂），电动玻璃匀浆机（宁波新芝科
技股份有限公司），全自动酶标仪（美国 Thermo 公
司），紫外分光光度仪（美国 Beckman 公司），DMS-2
MORRIS水迷宫系统（中国医学科学院药物研究所）。
1.3 头顶一颗珠（TTM）注射液 购自恩施板桥乡中
药材生产质量管理规范（GAP）示范基地，采用水提
醇沉法制成含生药 30%（相当于生药含量 2g/ml）的
液体，瓶装密封消毒贮存于 4℃备用, 用时以生理盐
水稀释成 0.4g/ml。
1.4 动物分组、 造模及给药 将 40 只昆明种小鼠随
机分为对照组、模型组、高剂量组、中剂量组及低剂
量组，各 8只。除对照组外各组均每天按 500mg/kg腹
腔注射 D-半乳糖[3]，对照组腹腔注射等量生理盐水。
高剂量组、中剂量组及低剂量组在注射 D-半乳糖的
同时每天腹腔按 7.2g/kg、3.6g/kg 及 1.8g/kg 注射
TTM，模型组、对照组注射等量生理盐水。 各组自由
进食、饮水，常规饲养连续 50d。
1.5 Morris 水迷宫实验 从造模给药第 40d 起，参
照 Morris 水迷宫实验方法测量小鼠学习和记忆能
力[4，5]。 每天注射后进行训练，上、下午各 1 次，历时
10d。 水迷宫为通用型， 圆形桶， 直径 180cm、高
50cm，水池内壁涂为黑色 ，水深 30cm，水温控制
在 22℃~24℃。 在水池壁边沿平均分为四个不同的
标记，把水池分为一、二、三、四个象限，选第三象限
正中放置高度为 28cm，直径 8cm 的平台，没入水下
2cm 。 将小鼠面向池壁，依次由第一、二、三、四象限
入水点放入水中，记录 120s 内找到平台的时间（逃
避潜伏期），如 120s 内未能找到平台，由实验者将其
引至上面停留 10s， 再放回笼中， 逃避潜伏期记为
120s。 第 9d 最后一次训练后撤除水下平台，第 10d
在同一入水点将小鼠面向池壁放入水中， 记录小鼠
在 120s 内跨越原平台相应位置的次数， 以衡量小
鼠对水迷宫记忆的获取能力。
1.6 小鼠皮肤羟脯氨酸及心脑组织 MDA、LP、SOD
及 GSH-Px 的检测 水迷宫训练结束后，分别取各
组小鼠背部皮肤约 1cm2，去毛及脂肪，用 1∶1 丙酮-
乙醚脱脂，切碎晾干，精密称取 30mg，按试剂盒说明
书进行羟脯氨酸含量的测定。然后处死小鼠，取小鼠
心、脑组织放入冰冻生理盐水（0.9%）冲洗拭干，迅速
用精密分析天平称取重量后剪碎，制备成 10%匀浆，
离心后取上清。 按照试剂盒说明书分别进行组织
MDA、LP、SOD 及 GSH-Px 的检测，并用紫外分光光
度计测定出结果。
1.7 ELISA法检测 TTM对小鼠血清中 IL-2 及 IL-
6 的影响 小心收集小鼠血清于无内毒素、 热原的
试管中，及时处理或贮存在-70℃冰箱。 检测采用双
抗体夹心 ELISA 法（具体步骤可参考试剂盒说明
书）。
1.8 统计学方法 所有计数均以均数±标准差表示，
统计学分析使用 SPSS 16.0软件进行处理，统计方法
使用单因素方差分析（one-way ANOVA），以 α=0.05
为检验水准，P<0.05为差异有统计学意义。
2 结果
2.1 TTM 对 D-半乳糖所致衰老小鼠定位航行和空
间探索的影响 观察小鼠在 Morris 水迷宫定位航行
实验中，各组小鼠找到平台的潜伏期如表 1所示。模
型组小鼠找到平台的潜伏期长，结果有显著性差异。
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TTM 各组小鼠与模型组的相比，找到平台的潜伏期
明显短，结果有显著性差异（P<0.05）。在空间探索实
验中，模型组小鼠穿越平台的次数比其它各组小鼠
的次数要少，统计结果有显著差异（P<0.05）。
2.2 TTM 对 D-半乳糖所致衰老小鼠心脑组织匀浆
的抗氧化性的作用 TTM 对 D-半乳糖所致衰老小
鼠各组心、脑组织匀浆氧化性指标（SOD、MAD、LP
及 GSH-Px）的检测结果如表 2 所示。 从表 2 可见，
对照组及 TTM 各组组织匀浆中 MAD 与 LP 含量均
低于模型组，且有显著性差异（P<0.05）。 对照组及
TTM 各组组织匀浆中 SOD 与 GSH-Px 的活性明显
高于模型组，存在明显差异（P<0.05）。 比较各 TTM
组组织匀浆氧化性指标，7.2g/kg 与 3.6g/kg TTM 组
的 MAD与 LP含量要低于 1.8g/kg TTM 组，而其SOD
与 GSH-Px活性高于 1.8g/kg TTM 组，并有显著性差
异（P<0.05）。
2.3 TTM 对 D-半乳糖所致衰老小鼠皮肤羟脯氨酸
含量的影响 检测各组小鼠皮肤羟脯氨酸含量如图
1所示。 注射 D-半乳糖各组小鼠皮肤羟脯氨酸含量
都明显低于对照组（P<0.05），然而 TTM 各组小鼠皮
肤中羟脯氨酸的含量明显高于模型组（P<0.05）。
2.4 TTM 对 D-半乳糖所致衰老小鼠各组血清中
IL-2 的含量 TTM 对 D-半乳糖所致衰老小鼠各组
血清中 IL-2、IL-6 的含量的检测结果如表 3 所示。
从表 3 可知，各 TTM 组小鼠血清中 IL-2、IL-6 含量
显著高于对照组和模型组（P<0.05），模型组小鼠血
清中的 IL-2、IL-6 比对照组要低，并有显著性差异
（P<0.05）。
3 讨论
本研究采用连续注射 D-半乳糖在小鼠体内积
累，使细胞内醛糖还原酶将其还原成不能正常代谢
的半乳糖醇，而半乳糖醇一旦在体内堆积就会影响
细胞的渗透压，导致细胞肿胀、细胞功能障碍、代谢
紊乱而致使机体衰老 [6]。 衰老是一种复杂的生命现
象，是机体在发育成熟后体内各种生理功能进行性
下降的过程。 有关衰老的机制，科学家提出了多种
假说，自由基学说就是其中之一。该学说主要观点认
为衰老是生命过程中代谢所产生的活性氧造成的损
伤累积而引起的，抗氧化转基因动物实验证明了这
表 1 TTM对 D-半乳糖所致衰老小鼠定位航行和
空间探索的影响
组别 平均潜伏期（s） 穿越原平台次数（次）
1.8g/kg TTM 组 50.45±9.86* 2.32±1.68*
3.6g/kg TTM 组 48.53±8.47* 3.84±2.21*
7.2g/kg TTM 组 46.65±8.32* 4.56±1.54*
模型组 81.27±20.34 1.24±0.65
对照组 46.76±11.35 4.58±1.53
注：与模型组比较，*P<0.05
表 2 TTM对 D-半乳糖所致衰老小鼠心脑组织匀浆的
抗氧化作用
组别 SOD（U/mg） MAD（mol/mg） LP（μg/mg） GSH-Px（U/g）
1.8g/kg TTM组 146.23±8.43* 9.65±1.54* 66.82±1.83* 62.87±1.58*
3.6g/kg TTM组 175.32±6.47** 8.43±1.12** 59.76±1.75** 65.39±2.97**
7.2g/kg TTM组 181.54±7.65** 7.54±0.78** 55.24±1.98** 69.31±3.16**
模型组 121.47±9.76 13.67±1.56 77.32±1.76 55.13±3.25
对照组 184.28±7.58* 9.04±0.45* 57.62±2.45* 64.57±4.47*
注：与模型组比较，*P<0.05；与 1.8g/kgTTM 比较，**P<0.05
图 1 TTM对 D-半乳糖所致衰老小鼠各组羟脯氨酸
含量的影响
表 3 TTM对 D-半乳糖所致衰老小鼠各组血清中
IL-2、IL-6 的含量
组别 IL-2 含量（pg/ml） IL-6 含量（ng/L）
1.8g/kg TTM 组 84.38±4.14** 118.54±3.46**
3.6g/kg TTM 组 95.43±3.68** 128.47±3.36**
7.2g/kg TTM 组 101.67±4.35** 146.79±4.87**
模型组 32.78±2.95 53.87±2.74
对照组 57.82±3.24* 96.54±3.08*
注：与模型组比较，*P<0.05；与对照组比较，**P<0.05
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一理论，过量表达 SOD 和过氧化氢酶的转基因果蝇
寿命得以延长 [7]。 过多的氧自由基会造成细胞膜的
破坏，使蛋白质（酶）变性，并会导致一系列神经功能
损伤，造成认知障碍，加速衰老。
衰老早期的认知受损主要表现在学习能力下降
及记忆障碍。 本研究采用 Morris水迷宫来观察 TTM
对 D-半乳糖所致衰老小鼠认知功能的影响，整个水
迷宫实验由定位航行与空间探索实验组成。 水迷宫
测试中，注射过 D-半乳糖的衰老小鼠定位航行游泳
轨迹相对要繁乱盲目， 平均潜伏期要比对照组的
长，撤去平台后，小鼠在原平台穿越的次数也要少于
对照组，结果提示小鼠的空间定位能力、空间记忆能
力等认知能力均出现了一定程度的损伤，而注射
TTM 的小鼠平均潜伏期与模型组相比均明显缩短
（P<0.05）。 撤去平台后穿越原平台次数也要显著增
加（P<0.05），注射 TTM 不同剂量 3 组间无显著性差
异（P>0.05），结果提示注射 TTM 可较好的改善由注
射 D-半乳糖所致小鼠的学习记忆能力障碍，表明
TTM对衰老过程中的认知障碍有较好的恢复作用。
本实验检测 TTM 对 D-半乳糖所致衰老小鼠各
组心 、脑组织匀浆氧化性指标 （SOD、MAD、LP 及
GSH-Px）来观察抗衰老作用。 SOD 在有机体内平衡
氧化与抗氧化能力，清除超氧离子自由基，保护细
胞 ；MAD 则是通过酶系统与非酶系统产生氧自由
基，破坏生物膜中的不饱和脂肪酸，形成脂质过氧化
物， 导致细胞损伤；LP 在细胞中的堆积会引起细胞
免疫能力下降，细胞功能受损，诱发衰老，如果在脑
细胞中堆积则会引发学习记忆等认识障碍；GSH-Px
可特异性还原 GSH 对过氧化氢物的还原，清除有害
过氧化物代谢产物，切断脂质过氧化，保护细胞正常
生理功能。 本实验中 TTM均能提高 SOD和 GSH-Px
的活性，降低 MAD 和 LP 的含量，从而达到一定的
抗衰老作用。 在不同 TTM 剂量组中，高剂量组较低
剂量组效果要显著，提示不同剂量 TTM 对 D-半乳
糖所致衰老模型小鼠的作用效果是不同的，我们推
测与 TTM注射液中有效成份的含量有关。
在羟脯氨酸含量检测中发现，TTM 各组与模型
组相比均可增加皮肤羟脯氨酸的含量。 羟脯氨酸本
是胶原蛋白的组成成分，在机体衰老过程中，会因氧
气供给不足而影响脯氨酸的羟化作用，致使皮肤中
羟脯氨酸的含量下降。本研究结果表明，TTM可以有
效的恢复衰老小鼠皮肤中羟脯氨酸的含量。
衰老的另一特征是免疫能力下降，实验选择测
定血清中 IL-2 及 IL-6 的含量来检测 TTM 的抗衰
老作用。 IL-2 可维持细胞增殖，刺激 T 细胞转铁蛋
白受体、胰岛素受体等抗原表达，诱导多种杀伤细胞
的分化和效应功能。 IL-6与 IL-6受体结合后，在机
体内有多种生物学活性，如可影响细胞生长，促进细
胞分化等。 在本实验中 TTM能显著增加小鼠体内的
IL-2 和 IL-6 的含量， 提示 TTM 能有效的增强衰老
小鼠的免疫功能，有助于促进细胞的分裂增殖。
本实验研究结果表明 TTM 的有效成分具有多
种生物学活性，可以通过不同的通路发挥抗衰老作
用，在改善学习记忆功能，清除体内自由基抗氧化，
增强机体免疫能力等方面都有较好的作用， 但 TTM
抗衰老机制还有待于从分子水平进行研究。
参 考 文 献
1 李志勇，周凤琴，图雅，等 .土家族药头顶一颗珠现代研究进展
[J]. 中国中医药信息杂志，2011，18（1）：104-106
2 詹光杰. 板党、头顶一颗珠、天麻及头顶一颗珠对抗氧化酶表达
作用的比较[J]. 陕西中医，2010，31（6）：754-755
3 姜国良，于晓，徐恺，等.腹腔和皮下注射 D-半乳糖衰老大鼠模
型分析[J].中国老年学杂志，2013，33（5）：1101-1103
4 王绪平，呙登俊，陈宇，等. Morris 水迷宫实验评价血管性痴呆
大鼠模型的学习记忆能力 [J].中华中医药学刊，2013，31（1）：
99-100
5 刘金凤，聂坤，栗振杰，等. Morris 水迷宫测评方法的改进及对
快速老化痴呆小鼠 SAMP8 认知功能的再评价 [J].中国中医急
症，2013，22（1）：5-7
6 Song X，Bao M，Li D. Advanced glycation in D-galactose induced
mouseaging model[J]. Mech Ageing Dev，1999，108（3）：239-251
7 李燕. 银耳多糖的抗衰老作用及其机制研究[D].上海：第二军医
大学，2004：96-97
（收稿：2013－07-22）
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