全 文 ：２０ １６ 第十八卷 第二期 ★ Ｖｏ ｌ． ｌ ８ Ｎｏ ．２
泉于 ＩＴＳ２ 厚列 的 中 药材慕梨柢 ＤＮＡ 分子鉴走 ＊
高 婷 ＼ 朱珣之
（ １ ． 青岛农业大学生命科学学院 山东省高校植物生物技术重点实验室 青岛 ２６６ １ ０９ ；
２ ． 江苏科技大学生物技术学院 镇江 ２ １ ２０ １８ ）
摘 要 ： 目 的 ：通过 ＤＮＡ 条形码鉴定技术 区 分 中 药 材藤梨根及其常见混伪 品 。 方法 ： 对采集 的 中 药材
藤梨根样品及其 常见混伪 品进行 ＤＮＡ 提取 ， ＰＣＲ 扩增和测序 ， 运用 Ｃ ｏｄｏｎＣｏｄ ｅＡｌｉ ｇｎｅ ｒ３ ．５ ． ７ 对所获 ＩＴＳ２
序列 进行拼接 。 应 用 Ｍ ＥＧＡ５ ． ０ 软件计算藤梨根及其常见混伪品的 Ｋｉｍｕ ｒａ２－ｐａｒａｍｅ ｔ ｅｒ（Ｋ２Ｐ ）遗传距 离 ，
并构 建 ＮＪ （邻接 ） 系统聚类树 ， 最后分析种 间 ＩＴＳ２ 序列 的二级结构差异 。 结果 ： 中 药材藤梨根两种基原植
物的 平均 种 内 Ｋ ２Ｐ 遗传距 离 分别 为 ０ ．００ １ 和 ０ ．００２ ， 远小 于藤梨根与其 常见混伪品之间 的 平均 Ｋ２Ｐ 遗传距
离 ０ ． １ ２０ ；藤梨根与其常见混伪品 的 ＩＴＳ２ 二级结构也存在 明显差异 ； ＮＪ 树显示藤梨根的基原植物聚在一起 ，
与混伪品可明显 区 分 ，但无法 区 别 所有稀猴桃属植物。 结论 ： ＩＴＳ２ 序列 可高效区 分藤梨根及其常见混伪品 ，
弥补 了 传统鉴定方法 的不足 ，提高 了鉴定效率及准确性 。
关键词 ： 中 华猕猴桃 ＤＮＡ 条形码 ＩＴＳ２ 序列 分子鉴定
ｄ ｏｉ ： １０ ． １ １ ８４２／ｗｓｔ ．２０ １ ６ ． ０２． ０ １２中 图 分类号 ： Ｒ２８２ ． ５文献标识码 ： Ａ
藤梨 根 Ｒ ａｄｉ ｘＡ ｃｔｉ ｎ ｉｄ ｉａｅ 别 名 圆 専 子 、 藤 梨 、 ｍａｃ ｒｏ ｓｐｅ ｒｍａ 的干燥根猫人参在临床上常被混同为
洋桃藤 ， 为猕猴桃 科猕 猴桃 属 植 物 中 华 猕猴 桃藤梨根使用 ， 二者性能不同 ， 前者性凉 ， 后者性温
Ａ ｃｔ ｉｎ ｉｄ ｉａｃｈ ｉｎ ｅ ｎｓ ｉｓＰｌａｎｃｈ ．Ａ ｃ ｔｉ ｎ ｉｄｉ ａ临床效用亦异 ， 故应区别使用 ［６］ 。 在调查中 曾发现
ａｒｇｕ ｔａＰｌａｎ ｃｈ ． 的干燥根 ［ １ ］ 。 藤梨根味甘 、 咸寒 、微葛赛称猴桃 Ａｃ ｔｉ ｎ ｉ ｉｉｉａｐｏ Ｚ ｙｇａｆｉａ 做为猫人参混伪品
涩 ，具有清湿热 、降血脂 、治黄疸 、促进食欲 、 畅通乳现象 。 此外 ， ５０ 余种猕猴桃属 植物主产于中 国 ， 形
络的功效 ，在中 国分布广泛 ，应用历史悠久 １２ １。 现代态类似 ， 也存在一定混淆现象 。 混伪品危害 了 中 药
药理研究表明 ， 藤梨根具有 明显 的抗肿瘤活性和调材藤梨根 的用药安全 ， 扰乱了 中 药材市场 的秩序 。
节免疫功能 ，尤其对肠道癌疗效甚佳 ［ ３ ’４］ 。寻找一种高效 、可靠的 方法来 区分正伪 品 已 成为
许多 中药材经深度加工后 ， 形态外观上极其相发展现代化中 医药亟需解决的关键 问题 ［５］ 。 然而 ，
似 。 此外 ，各类药典 医书对中药材的来源 、地方习 用目 前对藤梨根及其混伪品 猫人参等的鉴定研究大
名等记载有所差别 。 目前 ， 中药材大多存在 同名 异多停 留 在传统 的 鉴定方法 上 ， 如 饮 片性 状鉴别 、
物和 同 物异名 ， 藤梨根亦存在混伪品扰乱市场的现显 微鉴别 、 简单理 化鉴别 等 ， 但 准确性 和可 靠性
象 。 因药材饮片外形相似 ，近年来 ，称猴桃科植物镊欠佳
合蹄猴桃 Ａ ｃ ｔ ｉｒａ ｉｄ ｉａｉＷｖａｔ ａ 或大軒称猴桃 以 ＤＮＡ 条形码 （ ＤＮＡＢ ａｒｃｏ ｄ ｉｎｇ ） 技术为代表

的分子生物学鉴定方法被越来越多的应用于物种
收稿 曰期 ：２０ １５－ １ １－２９ 的区分鉴定 。 ＤＮＡ 条形码鉴定技术是通过 比较一
修回 日 期 ：２０ １５－ １２＿０７
＊山 东省教育厅 山 东 省高等学校科技计 划项 目 （ Ｊ １４ＬＥ １ ３ ） ：基于 ＤＮＡ条形 码鉴定沙参属 药 用植物 的关键技术研究 ， 负 责人 ： 高婷 ； 山 东省 自 然
基金委山 东省 自 然科学基金高校联合专项 资助项 目 （ ＺＲ２０ １ ３ＨＬ０２ １） ：基于 ＤＮＡ 条形码的 中药材桔梗分子鉴定研究 ， 负 责人 ： 高婷 ；青岛市科
技局 青岛 市应用基础研究计划项 目 （ １４－ ２－４－ ８９－ｊ ｃ ｈ ） ： 北沙参转录组的 高通量测序及香豆素合成 关键酶的克隆研究 ， 负责人 ： 高婷 。
＊ ＊通讯作者 ： 朱珣之 ，副教授 ，主要研究方向 ：分子生物学与 生物多样性。
２ １４ ［ＷｏｒｌｄＳｃ ｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ／Ｍｏｄｅ ｒｎｉｚａｔ ｉｏｎ ｏｆ Ｔｒ ａｄｉｔ ｉｏｎａｌ Ｃｈｉｎｅｓ ｅＭｅｄｉｃ ｉｎｅａｎｄ Ｍａ ｔｅ ｒｉａ Ｍｅｄｉｃａ ］
世界科学技术一中医药现代化★专题讨论 ： ＤＮＡ 条形码技术在中药材及其种源鉴定中的应用
段通用 的 ＤＮＡ 序列 对物种进行快速 、 准 确地识别１ ３ 个下载于 Ｇ ｅｎＢａ ｎｋ（下 载时间 为 ２ ０ １ ５ 年 ６ 月 ） ；
和鉴定 的一种分子生 物学技术 ［ １ １ ］ 。 ＤＮＡ 条形码鉴常见混伪 品猫 人参等样 品 １ ２ 个 ， 其 中 ３ 个购 自 市
定技术可用于动物 、植物 、真菌的鉴定 ， 该技术鉴定场 （ 含 １ 个 伪 品 ） ， ８ 个下载于 Ｇｅ ｎ Ｂａｎ ｋ（ 下 载时 间
速度快 ， 重复性和稳定性高 ； 非专业 分类鉴定人 员为 ２ ０ １ ５ 年 ６ 月 ） ； １ 个来源于野外采集的新鲜叶 片 ，
亦可操作 ；可 利用互联 网 和信息平台实现统一管理详见表 １ 。 实验材料 由青岛农业大学辛华教授进行
和共享 ［ １ ２ ］ 。 在 中 药材鉴定领域 ， ＩＴ Ｓ２ 条形码序 列经典鉴定 ，凭证样本保存于青 岛农业大学植物组标
表现出 良好 的潜力 。 红景天 、金 银花 、羌活 、板蓝根本室 。 此外 ， 从 ＧｅｎＢ ａｎ ｋ 中 下载猕猴桃属 其他 ２４
等 中药材均进行了ＩＴＳ２ 条形码验证 ， 并取得令人满个近缘物种的 ７ ２ 份 ＩＴＳ２ 序列 （表 ４ ） 纳人分析 。
意的结果 ［ １ ３ ＿ １ ５ ］ 。 已建立 的 中 药 材 ＩＴＳ ２＋ｐＭ－ ｉＴＯ ／／１ ． ２ 方 法
的 ＤＮ Ａ 条形码鉴定 系统有利 于推进中 药鉴定标准 １ ． ２ ． １Ｄ ＮＡ 提取
化和 国 际化 ＾ １ ７ 】 。 《 中 国药典 》 （ ２ ０ １ ０ 年版第三 增选取无霉变 的药材用 ７ ５％ 的酒精擦拭其表面
补本 ） 现已 收载 中药材 ＤＮＡ 条形码分子鉴定指导并剪成碎片 ， 无 水 乙 醇浸泡 ５ｍ ｉ ｎ 脱水 ， 避免外 源
原则作为 中药材质量控制 的新方法 ｜ １ ８ ］ 。ＤＮＡ 污染 。 Ｄ ＮＡ 提取方法参照文献 ｜ ２° ］ 。
本研究拟采用 Ｄ ＮＡ 条形码鉴别物种原则 ＿ 区 １ ．２ ． ２ＰＣＲ 扩 增及 测序
分 中 药材藤梨根及其混 伪 品猫人参 等 ， 检验 Ｄ ＮＡＰ Ｃ Ｒ 引 物 、反应体 系及扩增程 序参照前人研究
条形码技术 的有效性 。方法 ｜Ｍ ］ 。 Ｐ ＣＲ 扩增产物 纯化后 由上海桑尼生物科
， ｔ ．，± 技有 限公司采用 ＡＢ Ｉ３ ７ ３０ 正反双 向测序完成 。
１ 材料与万法
，
１ ． ２ ． ３数据分析
１ ． １ 材料 利 用 Ｃ ｏｄ ｏ ｎＣ ｏｄ ｅＡ ｌ ｉ ｇ ｎ ｅ ｒ３ ． ５ ． ７ 软件对测序所获
实验所取藤梨根 的 １ ９ 个样 品 ， 其中 ４ 个购 自 市得的 ＩＴ Ｓ２ 序列 进行拼接与 校对 ， 利 用 Ｍ ＥＧＡ ５ ． ０ 软
场 （含 １ 个伪 品 ） ， ２ 个来源于野外米集 的新鲜 叶片 ， 件计算各 个样 品 的 Ｋ ｉｍｕ ｒａ２－ｐ ａ ｒａｍ ｅ ｔｅ ｒ（Ｋ２Ｐ） 遗

表 １ 藤梨根及常见混伪品样本来源

拉丁 名中文名药材名样品编号采样时间 样品类型登录号
／ 购 头地
Ａｃｔｉｎｉｄｉａｃｈｉｎｅｎｓ ｉｓ中华鄉猴桃藤梨根１河北安 国２０ １ ３ ． １２药材ＫＵ １ ７０７ ７８
Ａｃｈｉｍｍｉｓ中华猕猴桃藤梨根２浙江某地２０ １ ３ ． １ ２药材
Ａｃｔｉｎ ｉｄｉａ ｓｐ．猕猴桃属某种 藤椠根 （伪品 ）３河南 某地２０ １ ３ ． １２药材
Ａｘｈｉｎｅｍｉｓ中华猕猴桃藤梨根４安徽亳州２０ １３ ． １２药材
， ＾？，
ＫＣ５ １９７８４
，
ＫＣ５ １９７８５
， ＫＣ８３２３０２－Ａｃｈ￣中 ｉｒ猕猴桃 藤裂根５－ １４ＧｅｎＢ ａ．ｋ－－ＫＣ８３２３０７ ， ＫＣ８３２３ １５ ，ＫＣ８３２３ １ ６
Ａｃｔｉｎｉｄｉａａｒｇｕｔａ软奉猕猴桃藤梨根１ ５－ １ ７ＧｅｎＢａｎｋ－－ＪＦ９８０３ ２５ ， ＡＦ３ ２３８３５ ， ＡＦ３２３８３ ６
Ａａｒｇｕｔａ软枣称猴桃藤裂根２ ６山 东青岛２０ １ ３ ．６新鲜叶片ＫＵ １ ７０７８ Ｉ
Ａａｒｇ ｕｔａ 软参猕猴桃藤梨根２７山 东青岛２０ １ ３ ．６新鲜叶片ＫＵ １ ７０７８２
Ａｃｔｉｎｉｄｉａ ｖａｋａｔａ摄合猕猴桃猫人参１ ８河北安国２０ １ ３ ． １ ２药材ＫＵ １ ７０７７９
Ａ ｍｔｅａ镊合猕猴桃猫人参２ １－２４ＧｅｎＢａｎｋ－－ＡＦ３ ２３８４２ ，ＫＣ５ １ ９７６２－ＫＣ ５ １９７６４
Ａｃｔ ｉｎｉｄｉａ ｍａｃｒｏｓｐｅｒｍａ 欠杆称猴桃猫人参１ ９浙江某地２０ １ ３ ． １ ２药材ＫＵ １ ７０７８０
Ａ．ｍａｃｒｏｓｐｅｒｍａ大抒鄉振桃猫人参２５ＧｅｎＢａｎｋ－－ＡＦ３２３８３４
Ａｃｔ ｉｎｉｄｉａ ，ｉｐ ．猕猴桃属某种 猫人参 （伪品 ）２ ０安徽亳州２０ １ ３ ． １２药材
Ａｐｏｌｙｇａｍａ葛奉猕猴桃木天蓼２８山 东青岛２０ １ ３ ．６新鲜叶 片ＫＵ １ ７０７８３
Ａ ．ｐｏｌｙｇａｍａ葛枣猕猴桃木天蓼２９－３ １ＧｅｎＢａｎｋ－－ＫＣ５ １ ９７６５ ， ＫＣ５ １ ９７６６ ， Ａ Ｆ３２３７９６
［ Ｗｏ ｒｌｄ Ｓｃ ｉｅｎｃｅａｎｄＴｅ ｃｈｎｏｌｏｇｙ／Ｍｏｄｅｒｎ ｉｚａ ｔ ｉｏｎｏｆＴｒａｄｉｔ ｉｏｎ ａｌ Ｃ ｈｉ ｎｅｓ ｅＭｅｄ ｉｃ ｉｎｅ ａｎｄＭ ａｔｅ ｒｉａ Ｍｅｄ ｉｃａ］２ １５
２０ １ ６ 第十八卷 第二期 ＊ ￥〇１ ． １ ８ 如．２
传距离 ，并 以 此为基础构建 Ｉ ＴＳ ２ 序列的 Ｎ Ｊ 树 ， Ｎ ｊ本共有 ２ 个单倍型 ， １ ５ － １ ７ ， ２７ 号样本序列 均 属 于
树各分支置信度 自举检测 （ ｂｏ ｏ ｔ ｓ ｔｒａ ｐ ） 为 １０００ 次 ，１ 个单倍型 ； ２６ 号样本序列 属 于 １ 个单倍型 ， 仅与
依据 Ｇｅ ｎ Ｂａｎ ｋ 在线 Ｂ ＬＡＳＴ 比对获得序列相似度值 ； 第一单倍型有 １ 个位点存在变异 （表 ２种 内 Ｋ ２Ｐ
依据 Ｉ ＴＳ２ 数据库及信息平台预测 ＩＴＳ２ 序列的二级距离为 〇 ．〇 〇〇－ 〇 ． 〇〇５ ，种 内平均 Ｋ２Ｐ 距离为 ０ ．０ 〇 ２ 。
结构 ［ ２ １ 〗 。２ ． ２藤梨根与 常见混伪 品种 间 变异
＾ 藤梨根各常见混淆品 样品 的 ＩＴＳ２ 序列 长度均２ 为 ２２３ｂＰ 。 藤梨根与各混淆品种 间 序 列存在较多
２ ． １ 藤梨根基原植物种 内 变 异的变异位点 。 种 间 Ｋ ２ Ｐ 距离 为 ０ ． ０２ ８－０ ． １ ９ ５ ， 种 间
１ ３ 个 中 华猕猴桃 样 品 的 Ｉ ＴＳ ２ 序列 长 度均为平均 Ｋ ２ Ｐ距离为 ０ ． １ ２０（ 表 ３） 。其中 ， 中华猕猴桃 （ １，
２ １ ９ｂ ｐ ，ＧＣ 含量分别 为 ５ １ ． ６％ ， ５２ ． １ ％ 。 种 内样本９ ， １ ０） 与葛 枣猕猴桃 （ ２ ８－ ３ １） 遗传距离较近 ， 与镊
共 有 ２ 个单倍 型 ， １ －２ 号 ， ４－８ 号 ， １ １ － １ ４ 号样本均合猕猴桃 （ １ ８ ， ２ １ －２４ ） 和大籽猕猴桃 （ １ ９ ， ２ ５ ） 距离
属 于一个单倍型 ； ９ 、 １ ０ 号样本序列属 于另一个单倍较 远 ； 软枣猕猴桃 （ １ ５ ， ２６） 则 反之 ， 与镊合猕猴桃
型 ， 与第一单倍型有 ２ 个位点存在变异 ， 其他各个位和大籽猕猴桃遗传距离较近 ， 而与葛枣猕猴桃距离
点 碱基均无差异 （ 表 ２ ） 。 种 内 Ｋ２ Ｐ 距离 为 ０ ． ０ ００ －较远 。
０ ． ００５ ， 种 内平均 Ｋ２ Ｐ距离 为 ０ ． ００ １ 。２ ． ３藤梨根及其 常见混伪 品 Ｉ ＴＳ２ 序 列 的 二级结构
５ 个软枣猕猴桃种 内样 品 的 ＩＴＳ ２ 序 列 长度均本研 究选 取 藤梨根 与其 常 见 混 伪 品 种进 行
为 ２ ２ ０ｂ ｐ ，ＧＣ 含量分别为 ６ ２ ． ３％ ， ６ ２ ． ７％ 。 种 内样ＩＴ Ｓ ２ 序列二级结构 预测 ， 如 图 １ 。 藤梨根与其常 见
混伪品 的 ４ 个螺旋区 在茎环数 目 、 大小 、 位 置及螺
表 ２ 藤梨根 ＩＴＳ２ 序 列的种 内变异位点旋发 出 角 度均有较大差异 。 例如 ， 中 华猕猴桃在螺
旋区 Ｉ 有 ５ 个茎环 ， ２ 大 ３ 小 ； 葛枣猕猴桃在螺旋 区
１ ８０ ｂｐ２０３ ｂｐ４２ ｂｐ丨 有 ４ 个茎环 ， １ 大 ３ 小 。 由二级结构预测图 可知 ，
中华称猴桃Ｉ ｉ＿２ ，４－８ ， １ １－ １ ４ＧＣ中 华称猴桃与 其混伪品 的 ＩＴＳ ２ 序列一级结构有 明
Ｉ Ｉ９ ， １０ＴＴ 显差异 。
软朿猕猴桃Ｉ１ ５－ １７ ， ２７ Ｃ２ ．４ 称猴桃属 Ｎ Ｊ 树聚 类分析及伪品 鉴定
ｕ２６Ｔ从 ＧｅｎＢ ａｎ ｋ 中 下载猕猴桃属其他 ２４ 个近缘物
种 的 ７２ 份 Ｉ ＴＳ ２ 序列信息 （ 表 ４ ） ，结合本实验数 据
表 ３ 藤梨根与常见混伪 品种 间 Ｋ２Ｐ 距离共 １ ０ ３ 份样本共同构建 ＮＪ 树 ， 见 图 ２ 。 从 Ｎ Ｊ 树 中
样本编号＾ｉ＾＾可 以看 出 藤梨根基原植物 中华猕猴桃不 同来源 的
３＾＾＾＾￣样 品 聚在一支 ； 藤梨根 另一基原植物软枣猕猴桃聚
１９０ １２８〇 １２３０． １ １０〇． １ １６在另一支 ； 同 时藤梨根 的混伪 品 葛枣猕猴桃 、镊合
２５〇 １ ２８〇
＇
］ ２ ３〇 ｎ〇〇 １ １ ６猕猴桃和大籽猕猴桃也各 聚为一支 。 葛枣猕猴桃与
１８〇 ， ２２〇 ｎ ７〇 １〇４〇 １ ］ 〇软枣猕猴桃 、 镊合或大 籽猕猴桃聚 的较近 ， 而 与 中
２ １〇 １ ３４〇１２８〇〇６〇ｍ华猕猴桃聚 的较远 。 藤梨根与其混伪 品很容易加 以
区分 。
２２０ ． １ ２２０ ． １ １ ７０． １０４０ ． １ １ ０
２３０， ２２０ ． １ ， ７隨０， ， ０鄕大多数 同种Ｍ桃属 物种 能够聚，１上 ，这表明 ＩＴＳ ２ 条形码序 列鉴定能力较强 ； 但也存ａｍ０． Ｈ７〇 － ｉ 〇４＿錄分样＾未能贿的雜－支上 ， 例如安息香猕
° ＇ １３９〇 ＇ １３３猴桃 的 ３ 个样 品 。 这种 现象的存在说明 基于 ＩＴ Ｓ２
° ＇ １５０°＇ １ ４４条形码序列构建 Ｎ Ｊ 树对大量样品 的物种鉴定存在
０ ０５８０ ０５３０ － １ ３９０ － １３３
一定局 限 。 结合 Ｎ Ｊ 树聚 类及 Ｂ ＬＡＳＴ 在线 比 对结
＿８〇 －〇５３０Ａ３９〇 － １ ３３果 （ ＩＴＳ２ 序 列 相似度 均 为 １ ００％ ） 预 测 ： ２ ０ 号混伪
＿＾ ＾ ＾＾１—品应 为葛枣猕猴桃 ； ３ 号混伪品 可能为河南猕猴桃
２ １ ６［Ｗｏｒｌｄ， Ｓｃｉ ｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏ ｌｏｇｙ／Ｍｏｄｅｒｎｉｚａｔｉｏｎｏｆ Ｔｒａｄ ｉｔ ｉｏ ｎａ ｌＣｈ ｉｎ ｅｓｅ Ｍｅｄｉ ｃ ｉｎ ｅａｎ ｄＭａ ｔ ｅｒ ｉａＭｅｄｉｃａ ］
世界科学技术一中医药现代化 ★专题讨论 ： Ｄ ＮＡ 条形码技术在中药材及其种源鉴定中的应用
Ａ ｃｔ ｉ ｎ ｉｄ ｉａｈｅ ｎａｎｅｎ ｓ ｉｓＡｃ ｔ ｉｎ ｉｄｉａ流程建设 ｜ １ ＿ ｜ 。 Ｉ ＴＳ ２ 序列 条形码鉴定技术 已 广泛应
ｃａ ｌｌ ｏ ｓａｖ ａ ｒ ． ｓ ｔｒ ｉｇ ｉ ｌ ｌｏ ｓａ 。 用 于中 药材 的混伪 品鉴定 中 心― ２４ 】 。 Ｃ ｈｅ ｎ 等 以 ＩＴ Ｓ２
飞
为主体序 列 ， 为辅助序 列创建 了 中药材
Ｄ ＮＡ 条形码鉴定体系 对植物 类 中 药 材进行鉴定 。
中药材相关 出 口 贸易 近年来迅速增 加 ， 这就要在 ２ ０ １ ０ 版 《 中 国药典 》 增补 本 中 列 入的 “ 中药材
求一种高效 、便捷的方法能在短时间 内 鉴定大量 中ＤＮＡ 条形码分子鉴定指导原则 ” 将 ＩＴＳ２ 序 列列 为
药 材 的 真伪 ， 传统 的鉴 定方法 无法很好 的满足 要植物类药材核心条形码序列 。
求 。 Ｄ ＮＡ 条形码鉴定技术 为 中药材快速 、准确 鉴定本实验利用 ＩＴＳ２ 序列 对藤梨根及其常见混伪
提供了一个强大 的工具 ， 加快 了 中药材 鉴定标准化品猫人参等进行鉴别 ， 研究发现依据 ＩＴＳ２ 序列 的种
ｍＷＷ
：
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；
； ；
尹＊晨＇＊
ｓ ； ＾
Ｉ ： Ｉ Ｉ
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１ ８ ’■？ 、贫，必
ＩＩｒ ？， ？， ：＊＞？－＊
／〇辦 ：吟浐
中华＃猴桃 Ａ ｃ／ｚ ／ｗｅＡＭ’／ｓ葛 参猕、猴桃 ／ｉ ．ｐｏ ／ｙｇａｍａ
ｌ
■４ ，．ｐ＼ ５，．Ｖ
ｉ＾
？
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？ｖ＇＼ ＼ｆ＊
；
Ｔ？４５４ｒ－＊＇ｖ＾． ｒ／＊ ＊
． ：
…Ａｒ
摄合称猴桃 Ａｖｃｒ ／ｖ〇ｆ＾７软参称猴桃 Ａｆｌｒｇｗ／ｆｌ
图 １ 藤梨根及其常见混伪品种的 ＩＴＳ２ 序 列二级结构
［ Ｗｏｒｌｄ．Ｓｃ ｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏ ｌｏｇｙ／Ｍｏｄｅ ｒｎ ｉｚａ ｔｉｏｎ ｏｆ Ｔｒａｄｉ ｔｉ ｏｎａ ｌＣｈ ｉｎｅｓｅＭｅｄｉ ｃ ｉｎｅ ａｎｄ Ｍａｔ ｅｒｉａＭｅｄｉｃａ］２ ／ ７
２０ １ ６ 第十八卷 第二期 ★ Ｖ〇 １ ． １ ８ Ｎ〇 ．２
 表 ４ 猕猴桃属植物样品表
拉丁 名 中文名 ＩＴＳ２ 序列号
Ａ ．ｍｅｌａｎａｎｄｒａ 黑蕊猕猴才此 ＡＦ４４３２ １ １ ， ＡＦ３２３ ８２ １ ，ＡＦ３２３ ８２０ ， ＡＦ３２３８０８
Ａ ｅｒｉａｎｔｈａ毛花猕猴桃ＡＦ４４３２０ １ ， ＡＦ３２３ ８００
Ａ ． ｅｒｉａｎｔｈａｆ．ｃｄｂａ 白花毛花猕猴桃ＡＦ３２３８０ １
Ａ． ｒｕｆａ 腺齿猕猴桃 ＪＦ９ ８０３３３ ，ＡＦ３ ２３８３９ ， ＡＦ３２３８３８
Ａ．ｆｕｌｖｉｃｏｍａ ｖａｒ． ｌａｎａｔａ绵毛称狼桃ＡＦ３２３７９９
Ａｆｄｖｋｏｍａ 黄毛猕猴桃 ＫＣ５ １９７４５ ， ＫＣ５ １９７４２
Ａ ．ｈｅｎａｎｅｎｓｉｓ 河南猕猴桃ＡＦ３２３８４１ ，ＡＦ３２３ ８４０
狗奉猕糇桃 ＡＦ３２３８３７
Ａ ．ｍａｃｒｏｓｐｅｒｍａｖａｒ．ｍｕｍｏｉｄｅｓ掩叶称狼桃ＡＦ３２３８３２ ， ＡＦ３２３ ８３ １
Ａ ．ｄｅｌｉｃｉｏｓａ美味猕猴桃 ＡＦ３２３８３０ ，Ｌ４２ １ ９７ ， ＫＣ５ １ ９７８６－ＫＣ５ １ ９７８ ８ ， ＫＣ８３２３０８－ＫＣ８３ ２３ １４
Ａ ． ｃａｌ ｏｓａ ｖａｒ． ｓｔｒｉｇｉｌｌｏｓａ毛叶硬齿鄉猴桃ＡＦ３２３８２６－ＡＦ３２３ ８２９
Ａ ．ｃａｌｌｏｓａ ｖａ ｒ．ｈｅｎｒｙｉ 京梨猕猴桃 ＫＣ５ １９７ ５３
Ａ ． ｃａｌｌｏｓ ａｖａｒ． ｄｉｓｃｏｌｏｒ＾ＡＦ３２３８０３ ，ＡＦ３２３ ８０４ ， ＫＣ５ １９７３９
Ａ ｌａｔｉｆｏｌｉａ阔叶猕猴桃 ？ＡＦ３２３８２５ ，ＫＣ５ １９７４ １ ， ＫＣ５ １ ９７３８
Ａ ．ｓｔｙｒａｃｉｆｏｌｉａ 安息香猕猴桃ＡＦ３２３８２２－ＡＦ３２３ ８２４
Ａ ．ｚｈｅｊｉａｎｇｅｎｓｉｓ 浙江猕猴桃 ＡＦ３ ２３８ １７－ＡＦ３２３８ １９
桃花鄉猴桃ＡＦ３２３８ １４－ＡＦ３２３８ １６
Ａ ．ｓａｂｉｉｆｏｌｉａ清风藤猕猴桃 ＡＦ３２３８ １２ ，ＡＦ３２３８ １ ３
Ａ ．  ｉｎｄｏｃｈｉｎｅｎｓｉｓ 中越猕猴桃ＡＦ３ ２３８０９－ＡＦ３２３ ８１ １ ， ＫＣ５ １ ９７６７ ，ＫＣ５ １ ９７６８
Ａ． ｃｙｌｉ ｎｄｒｉｃａｖａｒ．ｒｅ ｔｉｃｕｌａｔａ网脉称猴桃 ＡＦ３２３８０６ ， ＡＦ３２３８０７
Ａ ．ｃｙｌｉｎｄｒｉｃａ柱果猕猴桃ＫＣ５ １９７４６ ， ＫＣ５ １９７４８－ＫＣ ５ １９７４９
Ａ ．ｈｅｍｓ ｌｅｙａｍ 长叶猕猴桃 ＡＦ３ ２３８０２ ，ＫＣ５ １ ９７８ １ －ＫＣ５ １９７８３
Ａ ．ｇｌａｕｃｏｐｈｙｌｈ 华南猕猴桃ＡＦ３ ２３７９８
Ａ ｃ ／ｗｙｓ ａｎｆ／ｗ金花猕猴桃 ＡＦ３ ２３７９７ ， ＫＣ５ １９７ ５４－ＫＣ５ １９７５ ５ ， ＫＣ５ １９７５ ２ ， ＫＣ５ １ ９７４０
内种 间距离 、 Ｎ Ｊ 树及二级结构均可把藤梨根与其常的不 足之处在于部分物种 的基原植物样本采集量
见混伪 品 区 分开 。 ＩＴＳ ２ 条形码分子鉴定与经典形较少或未采集到样本 ， 部分物种 的分析数据仅来 自
态分类结果 可以 很好的吻合 ： 在药店或 药材市场购于 ＧｅｎＢ ａｎ ｋ ， 后续有待进一步采集样本 ， 补充验证 。
买的藤梨根和猫人参样 品均存在一定混伪品现象 ，本研究将 ＤＮＡ 条形码鉴定技术应用于藤梨根
依据分子手段可 以进一步实现混伪 品的准确鉴定 。 及其混伪品 的鉴定区分中 ， 为藤梨根真伪鉴定提供
ＩＴ Ｓ２ 序列仍存在一定的局限性 ， 推广应用 到猕猴桃了一种可靠 、稳定 、有效的手段 ， 是传统鉴 定技术的
属大量物种鉴定时存在部分分类混乱 。有效补充 。 该技术为中 药材基原物种鉴定提供了有
本实验中购 自市场的藤梨根饮片来 自 猕猴桃属力 的科技支撑 ，将在 中药材及 中成药流通监管 、 道
植物 的根 ，将其洗净 ， 晒干而成 ， 切 碎而后进行人药地药材鉴别 、 保健食品 和食品质量安全控制等领域
使用 。 因饮 片仅仅简单切 制 、 低温 干燥 ， 未 进行深发挥重要作用 ［ １ ７ １ 。 同时 ， 随着 ＤＮＡ 条形码技术 与
度炮制 ， 因此药材 的 ＤＮＡ 未严重降解 ， 因此在本实计算机信息 系统 的结合 ， 二维 ＤＮＡ 条形码 的 出 现
验 中可以 成功进行 ＤＮ Ａ 提取 、扩增 、测序 。 而对 于将会大大推进中药鉴定数字化和标准化进程 ｜ ２６ ＇２ ７ １ 。
一 些经过深度炮制加工的饮片 ， 或储存时间较久 、
贮藏养护方式不当 的 中 药材 、 饮片等 ， Ｄ ＮＡ 条形码致谢 ： 感谢 中国 海洋大学侯俊硕 士为本研究提供的
分子鉴定法则 可能具有局限性 ［” ， ２５ ］ 。 此外 ， 本研究实验帮助 。
２ １ ８［ＷｏｒｌｄＳｃ ｉｅｎｃ ｅａｎｄ Ｔｅｃｈｎ ｏｌｏｇｙ／Ｍｏｄｅｒｎ ｉｚａｔ ｉｏｎｏｆＴｒａｄｉｔｉｏｎａ ｌＣｈ ｉｎｅ ｓｅＭｅｄｉｃ ｉ ｎｅａｎｄ Ｍａｔ ｅｒｉａ Ｍｅｄｉ ｃａ ］
世界科学技术一中医药现代化★ 专题讨论 ： Ｄ ＮＡ条形码技术在中约材及其种源鉴定中的应用
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图 ２ 基于 ＩＴＳ２ 序列构建的猕猴桃属植物 ＮＪ 树
注 ： ｂ ｏｏ ｔ ｓ ｔ ｒａｐ１０００ 次 重复 ， 支上数值仅显示 自 展支持率 彡 ５ ０％
１ 张丽 ， 国宏莉 ， 田林 ， 等 ． 藤梨根提取物 对人食管癌细胞生 长抑制３ １ （８ ） ： １ １ ３ １ － １ １ ３４ ．
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［ Ｗｏｒｌｄ Ｓｃ ｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｔｅ ｃｈｎｏｌｏｇｙ／Ｍｏｄｅ ｒｎｉｚａｔ ｉｏｎ ｏｆＴｒａｄ ｉｔ ｉ ｏｎａｌ Ｃｈ ｉｎｅｓ ｅＭｅｄｉ ｃ ｉｎｅａｎｄ Ｍａ ｔｅ ｒｉａ Ｍｅｄ ｉｃａ）２１ ９
２０ １ ６ 第十八卷 第—期 ★ Ｖ 〇１． １８ Ｎ ｏ ．２
ｒｅ ｖｅ ａｌ ｅｄｓｐ ｅ ｃｉｅ ｓｄ ｉ ｖ ｅｒ ｓ ｉ ｔｙａｎ ｄ ｐｏ ｔｅ ｎ ｔ ｉ ａｌ ｓａｆｅ ｔｙ  ｉ ｓｓｕｅ ｓ ． Ｓ ｃｉＲｅｐ ，２０ １ ５ ， ５ ； ５ （ １ ） ；ｅ８６ １ ３ ．
８３ ３ ７ ．２ １Ｓ ｃｈｕ ｈ ｚＪ ，Ｍｕ ｌｌ ｅ ｒＴ ，Ａ ｃ ｈ ｔ ｚｉ ｇｅ ｒＭ， ｅ ｔａｌ ．Ｔｈｅ ｉ ｎ ｔｅ ｒｎ ａｌｔｒａｎ ｓｃ ｒ ｉ ｂｅｄ
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ｉｄ ｅｎ ｔ ｉ ｆｉ ｃａｔ ｉｏｎ ：ｆｒｏｍｍｏｒｐ ｈｏ ｌｏｇｙｔ ｏＤＮＡ ．Ｂｉ ｏｔｅｃ ｈｎｏ ｌＡｄｖ，２ ０１ ４ ，３２ （７ ） ！基源植物 ． 时珍国医国药 ， ２ ０１ ５ ，２６ （ ８） ： １ ９３２－ １ ９３ ５ ．
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１ ８国家药典委 员会中 国药典 （２０ １０ 年版第 三增补本 ） ． 北京 ： 中 国医Ｆｒｕｃ ｔ ｕｓａｎ ｄ ｉ ｔｓａｄｕ ｌ ｔｅ ｒａｎ ｔｓｂ ｙＩＴＳ／ ＩＴＳ２ｓｅｑ ｕｅ ｎｃ ｅｓ ． Ｃ／ｉ ｉＶｚＪ ／ＶａｆＡｆｅ ｄ，
药科技 出版社 ． ２０ １ ２ ：９ ２－ ９４ ． ２０ １ ３ ，１ １ （２） ： １ ２ １ － １ ２７ ．
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２０Ｃ ｈｅ ｎＳＬ ，Ｙａ ｏＨ ， Ｈ ａｎ Ｊ ， ｅ ｔａｌ ．Ｖ ａｌ ｉ ｄａｔ ｉ ｏｎ ｏｆｔ ｈ ｅＩＴＳ２ ｒｅ ｇ ｉｏｎａ ｓａ ｎｏｖ ｅ ｌ２７ 辛天怡 ， 李西 文 ， 姚辉等 ． 中药材二维 ＤＮＡ 条形 码流迪监管体系
ＤＮ Ａｂａ ｒｃ ｏ ｄｅ ｆｏｒ ｉｄｅｎ ｔ ｉ ｆｙｉ ｎｇ ｍｅ ｄ ｉｃ ｉ ｎａ ｌｐ ｌａｎ ｔｓｐｅ ｃｉｅ ｓ ．ＰＬｏＳ Ｏｎｅ ， ２０ １ ０ ，研究 ． 中国科学 ： 生命科学 ， ２０ １ ５ ， ４５ （７） ： ６９５－ ７０２ ．
ＤＮＡＭｏ ｌ ｅｃ ｕ ｌ ａｒ Ｉ ｄｅｎｔ ｉ ｆｉｃａｔ ｉ ｏｎｏ ｆＲａｄ ｉｘＡ ｃ ｔ ｉｎ ｉ ｄ ｉａ ｅＢａ ｓｅｄｏ ｎＩＴＳ ２Ｓｅｑ ｕ ｅｎ ｃｅ
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（ １ ．ＫｅｙＬａ ｂ ｏ ｒａｔ ｏ ｒｙｏｆＰｌａ ｎｔＢ ｉｏ ｔｅ ｃｈｎｏ ｌｏｇｙｉｎ Ｕｎｉｖｅ ｒｓ ｉ ｔｉｅ ｓｏｆ Ｓｈ ａｎｄｏ ｎｇＰｒｏｖ ｉｎｃｅ ，Ｃｏ ｌ ｌｅｇｅｏｊＬ ｉｆｅＳｃｉｅｎ ｃｅｓ ，Ｑ ｉｎｇ ｄａ ｏ
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（责任编辑 ： 马雅静 张志华 ， 责任译 审 ： 朱黎婷 王 晶 ）
２２０［Ｗｏｒｌｄ． Ｓｃｉ ｅｎ ｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ／Ｍｏｄｅｒｎ ｉｚａｔ ｉｏｎｏｆ Ｔｒａｄｉｔ ｉｏｎａ ｌＣｈ ｉｎｅｓｅ Ｍｅｄ ｉｃ ｉｎｅａｎｄ Ｍａｔ ｅｒｉａＭｅｄ ｉｃａ ］