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HPLC法同时测定松塔中槲皮素和山奈酚含量



全 文 :HPLC法同时测定松塔中槲皮素和山奈酚含量
张志琴1,宿轶冬2,刘光明3,郭向群1
(1.楚雄医药高等专科学校 药学系,云南 楚雄675005;2.楚雄技师学院,云南 楚雄675000;
3.大理学院 药学与化学学院,云南 大理671000)
摘 要:目的:建立高效液相色谱法测定松塔药材中两种有效成分槲皮素和山奈酚的含量测定方法。方
法:色谱柱为InertSustain C18(250mm×4.6mm,5μm),流动相为乙腈(A)-0.1% 磷酸(B),梯度洗脱;流
速为1.0mL/min;检测波长为360nm。结果:松塔中槲皮素在0.034~0.272μg进样量范围内(r=
0.999 9),山奈酚在0.039~0.317μg进样量范围内(r=0.999 8)与各自峰面积积分呈良好的线性关
系,槲皮素平均回收率为99.74%(RSD=1.92%),山奈酚为98.33%(RSD=1.36%)。结论:该法灵敏
度高,操作简便,结果准确可靠,可作为评价松塔药材质量的依据。
关键词:松塔;槲皮素;山奈酚;HPLC
中图分类号:R284.1   文献标识码:A   文章编号:1673-2197(2014)22-0014-02
收稿日期:2014-07-25
基金项目:国家自然科学基金资助项目(81260632);云南省教育厅科学研究基金项目(2012Y328)
作者简介:张志琴(1979-),女,白族,楚雄医药高等专科学校副教授,研究方向为中药材及其制剂质量控制。E-mail:cxyzzzq
@163.com
Simultaneous Determination of Quercetin and Kaempferol in Pinecone by HPLC
Zhang Zhiqin1,Su Yidong2,Liu Guangming3,Guo Xiangqun1
(1.Pharmacy Department,Chuxiong Medical Colege,Chuxiong 675005,China;2.Chuxiong Technology
Colege,Chuxiong 675000,China;3.Colege of Pharmacy and Chemistry,Dali University,Dali 671000,China)
Abstract:Objective:To establish an analytical method on simultaneous determination of queretin and kaempferol in Pinecone.
Methods:The sample was determined on InertSustain C18column(250mm×4.6mm,5μm).The mobile phase was A(Acetoni-
trile)-B(0.1%phosphoric acid solution)with gradient elution and the flow rate was 1.0mL/min,the UV detector was set at
360nm.Results:A linear relationship of quercetin was good at the range of 0.034~0.272μg(r=0.999 9)and kaempferol was
good at the range of 0.039~0.317μg(r=0.999 8).The average recovery of quercetin was 99.74% (RSD=1.92%)and of
kaempferol was 98.33% (RSD=1.36%).Conclusion:The method is accurate,reliable and repeatable with stable result.It can
be used as a method of quantitative determination of quercetin and kaempferol in the Pinecone.
Key Words:Pinecone;Quercetin;Kaempferol;HPLC
  松科松属植物在全世界范围内约有80余种,分布于北
半球,可直达北极圈,在热带和亚热带地区只生长于山地。
我国有22种,10个变种,另引进16种,2个变种,合计50余
种,分布广泛[1]。松塔系松科(Pinaceae)松属(Pinus)植物的
球果,别名松球、松实、松元,曾收载于《中国药典》1977年版
一部[2],具有祛痰、止咳、平喘的功效。据文献报道,从松属
植物中分离到的化学成分主要有萜类、黄酮、木质素、多糖
等[3-4],具有抗肿瘤、抗病毒、增强免疫力等生物活性[5-7],具
有重要的药物开发价值。为进一步开发利用该植物资源,
本文对采自云南的三种松塔中的槲皮素和山奈酚含量进行
测定,现报道如下。
1 仪器与试药
1.1 仪器
高效液相色谱仪LC-20A(日本岛津),二级管阵列检测
器SPD-M20A(日本岛津),自动进样器SPD-M20A(日本岛
津)。SartoriusAGBS110S电子天平(北京赛多利斯天平有
限公司)。
1.2 试药
槲皮素对照品(批号为100081-200907,中国食品药品
检定研究院);山奈酚对照品(批号为110861-200808,中国
食品药品检定研究院);乙腈为色谱纯;水为超纯水;其他试
剂为分析纯。松塔药材采自云南省大理州和怒江州,经大
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理学院生药教研室周浓鉴定为云南松(Pinus yunnanensis
Franch)、华山松(Pinus armandii Franch)和乔松(Pinus
wallichiana A.B.Jackson)。
2 实验方法与结果
2.1 色谱条件
色谱柱:InertSustainC18(250mm×4.6mm,5μm);流动
相:乙腈(A)-0.1%磷酸(B),梯度洗脱(0min:15%A;
15min:40%A;25min:20%A);检测波长:360nm;流速:
1.0mL/min;柱温:30℃;进样量:10μL。
2.2 对照品制备
分别取槲皮素和山奈素对照品适量,精密称定,加无水
甲醇制成每毫升分别含槲皮素0.170mg和山奈酚0.198mg
的混合溶液作为贮备液。精密吸取贮备液1mL,稀释至
10mL,即得。
2.3 供试品溶液制备
取65目松塔粉末约0.5g,精密称定,精密加入甲醇-
25%盐酸(4∶1)混合溶液50mL,称定质量,加热回流1h,放
冷,再称定质量,用甲醇补足减失的重量,摇匀,滤过,取续
滤液,即得。
2.4 线性关系考察
按“2.1”项下色谱条件,精密吸取对照品溶液2、4、8、
10、12、16μL,分别注入液相色谱仪,测定槲皮素与山奈酚峰
面积。以进样量(μg)为横坐标,峰面积为纵坐标,绘制标准
曲线,其回归方程分别为Y=6×106X-131.2,r=0.999 9
和Y=4×106X-777.6,r=0.999 8。结果表明,在上述色
谱条件下,槲皮素在0.034~0.272μg进样量范围内,山奈
酚在0.039~0.317μg进样量范围内与各自峰面积积分呈
良好的线性关系。
2.5 精密度试验
取同一份供试品溶液,按“2.1”项下色谱条件,连续测
定6次,分析槲皮素和山奈素峰面积积分值,其RSD分别为
1.54%和0.92%,表明仪器精密度良好。
2.6 重复性试验
平行操作制备供试品溶液6份,吸取供试品溶液各
10μL,注入液相色谱仪,记录峰面积。槲皮素和山奈酚质量
分数RSD分别为1.38%和1.03%,表明该方法重现性良
好。
2.7 稳定性试验
制备供试品溶液,分别于0、2、4、6、8、12、24h吸取供试
品溶液10μL,按“2.1”项下色谱条件进样分析并记录峰面
积。槲皮素和山奈酚峰面积RSD分别为1.05%和1.12%,
表明样品溶液在24h内稳定。
2.8 回收率试验
取已知槲皮素与山奈酚含量的松塔粉末0.5g,精密称
定,共称取6份,每份分别加入一定量的槲皮苷与槲皮素对
照品,按供试品制备方法制成供试品溶液,并按含量测定方
法进行测定。试验结果表明,槲皮素平均回收率为99.74%
(n=6),RSD=1.92%,山奈酚平均回收率为98.33%(n=
6),RSD=1.33%,表明该测定方法结果准确。回收率试验
结果见表1。
表1 槲皮素和山奈酚加样回收试验结果
样品
样品中含
量(mg)
对照品加
入量(mg)
测得总量
(mg)
回收率
(%)
回收率平
均值(%)
RSD(%)
0.041 79 0.042 5 0.084 97 101.6
0.041 82 0.042 5 0.084 23 99.78
槲皮素
0.042 10 0.042 5 0.083 66 97.79
99.74  1.92
0.041 98 0.042 5 0.085 19 101.7
0.042 77 0.042 5 0.084 04 97.10
0.041 98 0.042 5 0.084 68 100.5
0.130 9 0.128 7 0.259 8 100.1
0.131 0 0.128 7 0.258 9 99.34
山奈酚
0.131 9 0.128 7 0.256 3 96.65
98.33  1.36
0.131 5 0.128 7 0.258 8 98.90
0.134 0 0.128 7 0.260 1 97.96
0.131 5 0.128 7 0.256 4 97.01
2.9 样品测定
分别取采自云南大理地区和怒江地区的6批样品,按
照供试品溶液制备方法操作,然后按照“2.1”项色谱条件测
定供试品中槲皮素和山萘素的含量,对照品和供试品色谱
见图1,含量测定结果见表2。
图1 对照品溶液(A)和样品溶液(B)HPLC色谱
         注:1.槲皮素;2.山奈酚 
表2 云南产几种松塔中槲皮素和山奈酚含量测定结果
(mg/g)
样品 槲皮素含量 山奈酚含量
云南松1  0.084  0.263 2
云南松2  0.078  0.272 7
华山松1  0.095  0.270 1
华山松2  0.083  0.269 9
乔松1  0.075  0.278 8
乔松2  0.089  0.259 7
3 讨论
(1)检测波长选择:采用二极管阵列检测器对槲皮素、
山奈酚素对照品混合溶液进行全波长扫描,结果表明槲皮
素对照品溶液在372nm波长处有最大吸收峰,山奈酚对照
品溶液在368nm波长处有最大吸收峰,结合3D图谱,兼顾
二者选择360nm为检测波长。
(2)提取溶剂选择:本实验共考察了甲醇 - 盐酸
(4∶1)、甲醇-25%盐酸(4∶1)、甲醇-2mol/L 硫酸
(4∶1)、甲醇-硫酸(4∶1)四种提取溶剂,结果表明采用甲
醇-25%盐酸(4∶1)作为提取溶剂时提取效果最优。
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黄蜀葵中活性成分含量测定
李 永,葛兆宏*,段琼辉,于生兰,李勇军,谈祥宇,王 丹
(江苏农牧科技职业学院,江苏 泰州225300)
摘 要:目的:测定黄蜀葵中主要活性成分的含量。方法:采用硫酸-苯酚法测定多糖的含量,采用分光
光度法测定总黄酮的含量,采用 HPLC法测定槲皮素和金丝桃苷的含量。结果:黄蜀葵中多糖含量为
5.68%,总黄酮含量为1.577 5%,金丝桃苷和槲皮素含量分别为1.102%、0.404 1%。结论:黄蜀葵中
多糖、总黄酮、金丝桃苷、槲皮素等活性成分含量较高,所选的相应测定方法简便,结果可靠,可作为其质
量控制参考。
关键词:黄蜀葵;活性成分;含量测定;金丝桃苷;槲皮素;多糖;总黄酮
中图分类号:R284.1   文献标识码:A   文章编号:1673-2197(2014)22-0016-03
收稿日期:2014-09-17
基金项目:江苏农牧科技职业学院大学生实践创新训练计划项目(201312806023X,201412806028X)
作者简介:李永(1980-),男,江苏农牧科技职业学院讲师,研究方向为中药学教育教学与科研。
通讯作者:葛兆宏(1954-),男,江苏农牧科技职业学院教授。
Content Determination of Active Constituents in Abelmoschi Corola
Li Yong,Ge Zhaohong,Duan Qionghui,Yu Shenglan,Li Yongjun,Tan Xiangyu,Wang Dan
(Jiangsu Agri-animal Husbandry Vocational Colege,Taizhou 225300,China)
Abstract:To determine the content of active constituents in Abelmoschi corola.Methods:The phenolμsulfuric acid method was em-
ployed to determine the content of polysaccharide,the method of spectrophotometry was employed to determine the content of total
flavonoids and the HPLC was used to determine the content of hyperfine and quercetin.Results:The content of polysaccharide in
Abelmoschi corola.is 5.68%,The content of total flavonoids in Abelmoschi corola.is 1.577 5%,The content of hyperfine in Abel-
moschi corola.is 1.102%,The content of quercetin in Abelmoschi corola.is 0.4041%.Conclusions:The content of active constitu-
ents in Abelmoschi corola.is higher.The methods are simple and can be adopted for the quality control of Abelmoschi corola.
Key Words:Abelmoschi Corola;Active Constituents;Content Determination;Hyperfine;Quercetin;Polysaccharide;Total Flavonoids
  黄蜀葵始载于《嘉佑本草》,资源丰富,药用历史十分悠 久,在民间常用于治疗疔疮、腮腺炎、肺热咳嗽等,其根、茎
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  (3)流动相系统选择:本实验共考察了甲醇-水、
甲醇-0.1%磷酸、乙腈-0.1%磷酸等度和梯度洗脱,结果
表明采用乙腈-0.1%磷酸梯度洗脱时分离效果较好。
综上所述,本研究建立的同时测定松塔中槲皮素与山
奈酚含量方法结果准确,重复性良好,对云南产几种松塔药
材的质量控制有实际应用价值,为进一步制定松塔药材的
质量标准提供了科学依据。
参考文献:
[1] 中国科学院中国植物志编辑委员会.中国植物志[M].第7
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松松塔及松子壳的抗癌活性[J].大理学院学报,2008,7(2):
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(责任编辑:尹晨茹)
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