全 文 ：　　　来稿日期：２０１４－１２－０４
　　　基金项目：河北省中药局资助项目（２０１３０７７）；河北北方学院应用化学创新团队（ＣＸＴＤ１３０６）
　　　作者简介：赵恒成（１９６３－），男，山东武城人，河北北方学院中医学院实验师。
　　　通讯作者：甄攀（１９６５－），女，河北曲阳人，硕士，教授，硕士生导师，研究方向为药物化学及药物分析。
铁线透骨草中槲皮素的提取条件优化及含量测定
赵恒成，耿凯凯，李少坡，汤彦丰，李　娜，梁惠花，甄　攀
（河北北方学院，河北 张家口０７５０００）
　　摘要：目的　利用正交试验研究铁线透骨草中槲皮素的最佳提取条件，测定不同批次铁线透骨草中槲皮素
的含量。方法　设置Ｌ９（３４）正交试验，安排提取温度、溶媒 （甲醇）量、提取时间、加盐酸量４个因素，
ＨＰＬＣ法检测；色谱柱：Ｈｙｐｅｒｓｉｌ　Ｃ１８色谱柱 （４．６ｍｍ×２５０ｍｍ，５μｍ）；流动相：甲醇－０．１％乙酸（５０∶５０）；流
速：１．０ｍＬ·ｍｉｎ－１；柱温：２５℃；检测波长：３７５ｎｍ。结果　最佳提取条件为：样品量约２．０ｇ，加入３５ｍＬ
甲醇、１０ｍＬ浓盐酸，浸泡０．５ｈ，于４０℃超声震荡提取４０ｍｉｎ。在此条件下测定的８个批次铁线透骨草中槲
皮素的含量为０．１０９　９～０．８８０　３ｍｇ·ｇ－１。结论　提取方法效率高、时间短、温度低，是提取铁线透骨草中槲
皮素较好的方法。不同批次铁线透骨草中槲皮素的含量相差较大。
关键词：铁线透骨草；槲皮素；ＨＰＬＣ；正交试验
中图分类号：Ｒ　２８４．１　　　　文献标识码：Ａ　 ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７３－１４９２．２０１５．０２．００４
Ｏｐｔｉｍｉｚａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　Ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ａｎｄ　Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ
ｏｆ　Ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ　ｆｒｏｍＣｌｅｍａｔｉｓ　Ｉｎｔｒｉｃａｔａ　Ｂｕｎｇｅ
ＺＨＡＯ　Ｈｅｎｇ－ｃｈｅｎｇ，ＧＥＮＧ　Ｋａｉ－ｋａｉ，ＬＩ　Ｓｈａｏ－ｐｏ，
ＴＡＮＧ　Ｙａｎ－ｆｅｎｇ，Ｌｉ　Ｎａ，ＬＩＡＮＧ　Ｈｕｉ－ｈｕａ，ＺＨＥＮ　Ｐａｎ
（Ｈｅｂｅｉ　Ｎｏｒｔｈ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｚｈａｎｇｊｉａｋｏｕ，Ｈｅｂｅｉ　０７５０００，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍａｌ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ　ｆｒｏｍＣｌｅｍａｔｉｓ　ｉｎｔｒｉｃａｔａ
Ｂｕｎｇｅ　ｂｙ　ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ｔｅｓｔ　ａｎｄ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ　ｃｏｎｔｅｎｔｓ　ｏｆ　ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ　ｉｎ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｂａｔｃｈｅｓ　ｏｆ　Ｃｌｅｍａｔｉｓ　ｉｎｔｒｉｃａｔａ
Ｂｕｎｇｅ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｓｅｔｔｉｎｇ　ｔｈｅ　Ｌ９（３４）ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ｔｅｓｔ　ｔａｂｌｅ，ａｒｒａｎｇｉｎｇ　ｆｏｕｒ　ｆａｃｔｏｒｓ：ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｔｅｍｐｅｒａ－
ｔｕｒｅ，ａｍｏｕｎｔ　ｏｆ　ｓｏｌｖｅｎｔ （ｍｅｔｈａｎｏｌ），ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｔｉｍｅ　ａｎｄ　ａｍｏｕｎｔ　ｏｆ　ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｃ　ａｃｉｄ．Ｄｅｔｅｃｔｉｎｇ　ｂｙ
ＨＰＬＣ；ｃｏｌｕｍｎ：Ｈｙｐｅｒｓｉｌ　Ｃ１８ （５μｍ，４．６ｍｍ×２５０ｍｍ），ｍｏｂｉｌｅ　ｐｈａｓｅ：ＣＨ３ＯＨ－０．１％ ＣＨ３ＣＯＯＨ
（５０∶５０），ｆｌｏｗ　ｒａｔｅ：１．０ｍＬ／ｍｉｎ，ｃｏｌｕｍｎ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ：２５ ℃；ｄｅｔｅｒｍｉｎｉｎｇ　ｗａｖｅｌｅｎｇｔｈ：３７５ｎｍ．
Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍａｌ　ｃｏｎｄｉｔｉｏｎ　ｗａｓ　ｔｈａｔ　ｔｈｅ　ｓａｍｐｌｅ　ｗｉｔｈ　ａｂｏｕｔ　２．０ｇ　ｃｏｎｉｃａｌ　ｆｌａｓｋ　ｗｉｔｈ　ｐｌｕｇ　ｗａｓ　ｐｏｕｒｅｄ
３５ｍＬ　ＣＨ３ＯＨ　ａｎｄ　１０ｍＬ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｅｄ　ｈｙｄｒｏｃｈｌｏｒｉｃ　ａｃｉｄ，ｔｈｅｎ　ｗａｓ　ｓｏａｋｅｄ　ａｂｏｕｔ　０．５ｈ，ａｎｄ　ｅｘｔｒａｃｅｄ
４０ｍｉｎ　ａｔ　ｔｈｅ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ　ｏｆ　４０℃ ｗｉｔｈ　ｕｌｔｒａｓｏｕｎｄ　ｃｏｎｃｕｓｓｉｏｎ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｔｈｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄ　ｃｏｕｌｄ
ｈａｖｅ　ｈｉｇｈ　ｅｆｆｉｃｉｅｎｃｙ，ｓｈｏｒｔ　ｔｉｍｅ　ａｎｄ　ｌｏｗ　ｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ，ａｎｄ　ｂｅ　ｂｅｔｔｅｒ　ｔｏ　ｅｘｔｒａｃｔ　ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ　ｆｒｏｍ　Ｃｌｅｍａｔｉｓ
Ｉｎｔｒｉｃａｔａ　Ｂｕｎｇｅ．Ｔｈｅ　ｃｏｎｔｅｎｔｓ　ｏｆ　ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ　ｃｏｕｌｄ　ｄｉｆｆｅｒ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ　ｉｎ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｂａｔｃｈｅｓ　ｏｆ　Ｃｌｅｍａｔｉｓ　Ｉｎｔｒｉ－
ｃａｔａ　Ｂｕｎｇｅ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｃｌｅｍａｔｉｓ　ｉｎｔｒｉｃａｔａ　Ｂｕｎｇｅ；ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ；ＨＰＬＣ；ｏｒｔｈｏｇｏｎａｌ　ｔｅｓｔ
　　透骨草基源混乱，同名异物现象非常严重。据统计，记载为透骨草的原植物共计２１科４４种５变
种［１，２］。这些来源于不同科属的商品名均为透骨草的植物，在化学成分、药理作用、功效和毒性等方面不
尽相同［３，４］。在河北、北京、内蒙古等北方地区将黄花铁线莲 （Ｃｌｅｍａｔｉｓ　ｉｎｔｒｉｃａｔａ　Ｂｕｎｇｅ）作为透骨草使
用，称为铁线透骨草。目前对于透骨草的研究大多限于风仙透骨草和珍珠透骨草［５，６］，对于铁线透骨草的
·３１·
第３１卷第２期
２０１５年４月 　　　　　　　
（自然科学版）
Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｈｅｂｅｉ　Ｎｏｒｔｈ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｎａｔｕｒａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅ　Ｅｄｉｔｉｏｎ）
　　　　　　
Ｖｏｌ．３１Ｎｏ．２
Ａｐｒ．２０１５
研究报道较少。槲皮素是其重要的黄酮类活性成分，具有抗氧化、抗炎、抗过敏、抗菌、抗病毒、清除体
内自由基、抑制恶性肿瘤生长和转移［７－１０］等多方面药理作用。本文基于均匀设计方案研究了铁线透骨草中
槲皮素的最佳提取条件，并测定不同批次铁线透骨草中槲皮素的含量。
１　材料与方法
１．１　药材
文中所用铁线透骨草样品，有６种为张家口市市售药材，２种由作者采集，均经河北北方学院中医学
院赵恒成老师鉴定为黄花铁线莲 （Ｃｌｅｍａｔｉｓ　ｉｎｔｒｉｃａｔａ　Ｂｕｎｇｅ）。正交试验所用药材为样品１。具体如下：
样品１：２０１２年３月购自张家口华佗药房长青路店；
样品２：２０１３年４月购自张家口华佗药房纬一路店；
样品３：２０１３年４月购自河北北方学院校医院；
样品４：２０１３年４月购自张家口华佗药房长青路店；
样品５：２０１３年４月购自张家口德仁堂药房长青路店；
样品６：２０１３年４月购自张家口南山堂药房公园路店；
样品７：２０１０年采自河北涿鹿杨家坪；
样品８：２０１３年采自河北涿鹿杨家坪。
１．２　试剂
槲皮素标准品：中国食品药品检定研究院提供，批号：１０００８１－２００９０７。
甲醇 （色谱纯）、浓盐酸 （分析纯）、冰乙酸 （分析纯）。
１．３　主要实验仪器
Ａｇｉｌｅｎｔ　ＨＰ１１００高效液相色谱仪。
２　方法与结果
图１　槲皮素色谱图 图２　铁线透骨草色谱图
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２０１５年４月　　　　　　　　　　　　　　 河北北方学院学报 （自然科学版） 　　　　　　　　　　　　　　第２期
２．１　色谱条件
Ｈｙｐｅｒｓｉｌ　ＯＤＳ　Ｃ１８ （５μｍ，４．６ｍｍ×２５０ｍｍ）色谱柱 （美国Ｔｈｅｒｍｏ）；甲醇－０．１％冰乙酸溶液 （５０∶５０）
为流动相；检测波长：３７５ｎｍ；进样量：２０μＬ；流速：１．０ｍＬ·ｍｉｎ－
１；柱温：２５℃。色谱图见图１和
图２，图中 “１”为槲皮素 （ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ）峰。
２．２　标准曲线
精密称取１．１３ｍｇ槲皮素对照品置于５０ｍＬ容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，即得２２．６μｇ·ｍＬ－
１
的槲皮素对照品溶液。
将对照品溶液按倍数稀释成０．７１、１．４１、２．８３、５．６５、１１．３、２２．６μｇ·ｍＬ－
１，分别进样，进样量２０μＬ，
峰面积分别为４８．５、７６．８、２１７．２、４８３．３、１　０２５．９、２　１７４．１ｍＡＵ。以槲皮素浓度为横坐标，峰面积为
纵坐标，绘制标准曲线，回归方程为ｙ＝９７．９３１ｘ－５５．３５６，ｒ２＝０．９９９３。线性范围０．７１～２２．６μｇ·ｍＬ－
１。
２．３　Ｌ９（３４）正交试验
甲醇为提取溶剂，超声震荡法提取。以槲皮素含量为指标，设计Ｌ９（３４）正交试验。各样品的重量约
为２．０ｇ，均精密称定，用提取溶剂浸泡０．５ｈ，各试验均平行２份。实验因素和水平见表１，正交试验结
果见表２。
表１　正交试验的因素和水平
水平 提取温度 （Ａ）（℃） 溶媒 （甲醇）（Ｂ）（ｍＬ） 提取时间 （Ｃ）（ｍｉｎ） 浓盐酸 （Ｄ）（ｍＬ）
１　 ３０　 ２０　 ２０　 ５
２　 ４０　 ３５　 ３０　 １０
３　 ５０　 ５０　 ４０　 １５
表２　Ｌ９（３４）正交试验结果
试验号 温度 （Ａ） 溶媒量 （Ｂ） 时间 （Ｃ） 加酸量 （Ｄ） 含量１ （ｍｇ·ｇ－１） 含量２ （ｍｇ·ｇ－１）
１　 １　 １　 ３　 １　 ０．５３０　 ０．５９０
２　 ２　 １　 ２　 ２　 ０．４９０　 ０．４４０
３　 ３　 １　 １　 ３　 ０．１３６　 ０．１３４
４　 １　 ２　 ２　 ３　 ０．５５０　 ０．５９０
５　 ２　 ２　 １　 １　 ０．４７０　 ０．５４０
６　 ３　 ２　 ３　 ２　 ０．７８０　 ０．８００
７　 １　 ３　 １　 ２　 ０．４６０　 ０．４５５
８　 ２　 ３　 ３　 ３　 ０．６６０　 ０．６５０
９　 ３　 ３　 ２　 １　 ０．４００　 ０．４００
Ｔ１ ３．１７５　 ２．３２０　 ２．１９５　 ２．９３０ ∑ｘ＝９．０７５　
Ｔ２ ３．２５０　 ３．７３０　 ２．８７０　 ３．４３０ ∑ｘ２＝５．１０７４
Ｔ３ ２．６５０　 ３．０２５　 ４．０１０　 ２．７２０ Ｃ＝４．５７５０　
Ｒ　 ０．６００　 １．４１０　 １．８１５　 ０．７１０
ＳＳ　 ０．０３６　 ０．１６６　 ０．２８１　 ０．０４４ ＳＳ总＝０．５３２ ＳＳ误＝０．００５
表３　方差分析表
误差来源 ＳＳ ν ＭＳ　 Ｆ　 Ｐ
Ａ　 ０．０３６　 ２　 ０．０１８　 ３２．１４ ＜０．０１
Ｂ　 ０．１６６　 ２　 ０．０８３　 １４８．２０ ＜０．０１
Ｃ　 ０．２８１　 ２　 ０．１４１　 ２５１．７９ ＜０．０１
Ｄ　 ０．０４４　 ２　 ０．０２２　 ３９．２９ ＜０．０１
误差 ０．００５　 ９　 ０．０００　５６
总和 ０．５３２　 １７
　　由正交试验结果可知，提取槲皮素的最佳
条件为 Ａ２Ｂ２Ｃ３Ｄ２，即用３５ｍＬ溶媒 （甲醇），
１０ｍＬ浓盐酸，浸泡０．５ｈ，然后于４０℃超声
震荡提取４０ｍｉｎ。
２．４　方差分析
对以上正交试验结果进行方差分析，见表３。
方差分析结果显示，槲皮素的提取时间、
提取温度、加浓盐酸量和溶媒 （甲醇）量均为
显著性影响因素 （Ｐ＜０．０１），其中提取时间和溶媒 （甲醇）量影响尤其显著。
·５１·
２０１５年４月 赵恒成 等：铁线透骨草中槲皮素的提取条件优化及含量测定 第２期
２．５　样品中槲皮素的含量测定
取以上８个批次的铁线透骨草样品，按最佳提取条件提取，在上述色谱条件下测定槲皮素的含量。见
表４。
表４　样品中槲皮素的含量
样品编号 称取质量（ｇ） 含量（ｍｇ·ｇ－１） ＲＳＤ （％）
１　 ２．０６７　２　 ０．８８０　３　 ２．３
２　 ２．０３４　１　 ０．１３０　０　 ３．０
３　 ２．０６５　３　 ０．８２２　１　 ４．３
４　 ２．０６１　０　 ０．５８１　７　 １．４
５　 ２．０２３　６　 ０．８４２　４　 １．２
６　 ２．０６９　５　 ０．１１４　８　 ４．１
７　 ２．０４０　５　 ０．８３０　８　 １．４
８　 ２．００１　２　 ０．１０９　９　 ３．８
３　讨论与结论
１）药物分析中，经常会遇到多因素多水
平的问题，例如提取中草药中的有效成分，提
取效率常受到提取液的种类及组成、提取时
间、浸泡时间、溶液的ｐＨ等条件的影响。为
了寻找最优提取条件，常安排多因素多水平正
交试验，通过有限的实验次数，再通过合理的
统计分析，即可得出最优提取条件。但要注
意，当正交试验表中所有因素都排满时，要进
行重复试验，否则无法进行方差分析。
２）前期试验研究了加酸和不加酸对槲皮素含量的影响，结果表明加酸后槲皮素的含量有显著提高，
所以本试验探讨了加酸量的影响。前期试验中比较了冷浸取、超声提取、索氏提取和回流提取对槲皮素含
量的影响，结果是超声提取效果更佳，所以本实验采用超声提取法。用本文得到的方法提取槲皮素，效率
高、时间短、温度低，是提取铁线透骨草中槲皮素较好的方法。
３）８个批次铁线透骨草中槲皮素的含量为０．１０９　９～０．８８０　３ｍｇ·ｇ－１，而且色谱图也有区别，说明不
同批次铁线透骨草中槲皮素的含量相差较大，化学成分不尽相同，可能与其生长环境有关。
参考文献：
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［３］杨林，钱娇玲，蒲利红，等．棉团铁线莲总皂苷抗肿瘤活性研究Ⅱ［Ｊ］．中医药学报，２０１３，４１（０２）：５１－５３．
［４］卢莉娜，赵伟赛，李丹，等．湖州铁线莲乙醇提取物体外抗 Ｋ５６２与 ＭＧＣ－８０３活性研究［Ｊ］．浙江中医药大学学报，２０１２，
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［５］索金红，伊勋非．珍珠透骨草的化学成分及药理作用［Ｊ］．内蒙古民族大学学报：自然科学版，２００９，２４（０５）：５０６－５０８．
［６］陈秀梅，钱士辉，冯锋．凤仙透骨草的化学成分［Ｊ］．药学与临床研究，２００９，１７（０１）：３１－３３．
［７］杨晓军，高芬，涂院海，等．黄花铁线莲乙酸乙酯组分的抗炎作用研究［Ｊ］．安徽农业科学，２０１２，４０（２９）：１４２３１，１４２６２．
［８］赵·德力格尔呼，付明海，阿丽莎，等．蒙药材黄花铁线莲抗肿瘤活性成分研究［Ｊ］．中国保健营养，２０１２，（０４）：２９７－２９９．
［９］Ｌｅｅ　Ｋ　Ｗ，Ｋａｎｇ　Ｎ　Ｊ，Ｈｅｏ　Ｙ　Ｓ，ｅｔ　ａｌ．Ｒａｆ　ａｎｄ　ＭＥＫ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｋｉｎａｓｅｓ　ａｒｅ　ｄｉｒｅｃｔ　ｍｏｌｅｃｕｌａｒ　ｔａｒｇｅｔｓ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｃｈｅｍｏｐｒｅｖｅｎｔｉｖｅ
ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ，ａ　ｍａｊｏｒ　ｆｌａｖｏｎｏｌ　ｉｎ　ｒｅｄ　ｗｉｎｅ［Ｊ］．Ｃａｎｃｅｒ　Ｒｅｓ，２００８，６８（０３）：９４６．
［１０］Ｓｈａｉｋ　Ｙ　Ｂ，Ｃａｓｔｅｌａｎｉ　Ｍ　Ｌ，Ｐｅｒｒｅｌａ　Ａ，ｅｔ　ａｌ．Ｒｏｌｅｓ　ｏｆ　ｑｕｅｒｃｅｔｉｎ（ａ　ｎａｔｕｒａｌ　ｈｅｒｂａｌ　ｃｏｍｐｏｕｎｄ）ｉｎ　ａｌｅｒｇｙ　ａｎｄ　ｉｎｆｌａｍｍａｔｉｏｎ
［Ｊ］．Ｊ　Ｂｉｏｌ　Ｒｅｇｕｌ　Ｈｏｍｅｏｓｔ　Ａｇｅｎｔｓ，２００６，２０（３～４）：４７．
［责任编辑：刘守义　英文编辑：刘彦哲］
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