全 文 ：肿瘤学杂志 2009 年第 15 卷第 7 期
藤梨根提取物对人食管癌 Eca-109细胞
生长和凋亡的调节
燕 平，李志玖，骆志国
（郧阳医学院附属太和医院，湖北 十堰 442000）
摘 要： ［目的］ 探讨藤梨根提取物对人食管癌 Eca-109 细胞生长和凋亡的调节作用。 ［方法］
MTT 比色法检测藤梨根正丁醇提取物及乙酸乙酯提取物在不同浓度及不同时间对 Eca-109 细
胞生长的抑制作用；用 TUNEL 法检测藤梨根不同提取物对诱导肿瘤细胞凋亡效应。 ［结果］
藤梨根正丁醇提取物及乙酸乙酯提取物对人食管癌 Eca-109 细胞的生长具有明显的抑制作
用，并具有浓度依赖性和时间依赖性；其中正丁醇提取物对肿瘤细胞的抑制作用较乙酸乙酯提
取物更为明显。两种提取物均能明显地诱导肿瘤细胞的凋亡。 ［结论］ 藤梨根提取物有较好的
抗肿瘤作用，抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡可能是藤梨根抗肿瘤作用的机制之一。
主题词：食管肿瘤；细胞凋亡；滕梨根；1-丁醇；Eca-109
中图分类号：R730.52 文献标识码：A 文章编号：1671-170X（2009）07-0635-03
Effect of Extract from Actinidia Arguta on the Proliferation and Apoptosis in Human
Esophageal Carcinoma Eca-109 Cell Line∥YAN Ping, LI Zhi-jiu, LUO Guo-zhi
藤梨根又称阳桃根，为植物猕猴桃科藤梨（软枣
猕猴桃）Actinidia arguta(Sieb.teZucc.)Planch.或猕猴
桃 A.chinensisPlanch.的根。研究表明，藤梨根对消化
系统肿瘤有良好的抗肿瘤作用， 不同方法的提取物
抗肿瘤作用存在一定的差异[1，2]。 本课题观察藤梨根
提取物对人食管癌 Eca-109 细胞生长的抑制作用和
对肿瘤细胞凋亡的诱导， 以探讨藤梨根抗肿瘤的作
用机制。
1 材料与方法
1.1 材 料
人食管癌细胞 Eca-109 细胞株购于上海市中科
院细胞库，RPMI-1640 培养基购于武汉天源生物技
术有限公司，为 Gibco 公司产品(货号 31800-022)；超
级新生牛血清为杭州四季青生物工程有限公司产品
(批号 050126)；实验用 1∶250胰酶购于武汉天源生物
技术有限公司，为 Difco 公司产品(批号 020411)；四
甲基偶氮唑蓝(MTT)购于武汉天源生物技术有限公
司，为 Duchefa 分装(货号 BS0880)；二甲基亚砜(DM-
SO) 购于武汉天源生物技术有限公司， 为 Sigma 公
司产品。 TUNEL 试剂盒(编号 ZK-8005)购于北京中
杉生物技术有限公司。
1.2 细胞培养
细胞在含 10%小牛血清的 RPMI-1640 培养液
中，37℃、5%CO2条件下培养，24h 换液一次。 取对数
生长期细胞进行实验。
1.3 药物制备
将藤梨根 1kg粉碎成粗粉，烘干备用。取藤梨根
500g，加入 3 000ml 乙酸乙酯中浸泡 12h；回流提取
1h，过滤；药渣再加 2 000ml 乙酸乙酯回流提取 1h；
合并两次滤液，减压回收乙酸乙酯至稠膏状，真空干
燥；干燥品加蒸馏水 500ml，旋转加热溶解，制成饱
和水溶液；灭菌；原液(500ml，1g/ml，pH=3.8)。 将原液
稀释成 1μg/ml、10μg/ml、100μg/ml等药物浓度；过滤；
灭菌；分装，置 4℃冰箱备用。 同法得正丁醇提取液。
1.4 MTT法
将贴壁细胞用 0.25%的胰蛋白酶消化后计数，
调整细胞浓度为 4×104/ml，接种于 96 孔板，待 24h收稿日期：2008-05-27；修回日期：2008-09-06
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Journal of Oncology,2009,Vol.15,No.7
细胞贴壁后加入藤梨根药液。 实验组分别加入终浓
度为 1μg/ml、10μg/ml、100μg/ml 等药物浓度的药
液，对照组加入等体积溶剂的培养液，每组 12 复孔，
分别于加药后第 1、2、3d 测定各孔的吸光光度值(A
值)。测定前每孔加 5mg/ml 的 MTT 20μl，温育 4h，弃
上清液，加入二甲基亚砜(DMSO)150μl/孔，同时振荡
至结晶完全溶解，用酶联免疫检测仪在 490nm 波长
下测定 A490值。 用各组的平均 A值计算细胞生长抑
制率。
生长抑制率=（对照组 A 值－实验组 A 值）/对照
组 A值×100%
1.5 TUNEL法检测凋亡细胞
同上法得细胞片，用 TDT 法将生物素标记的 d-
UTP 在末端转移酶的作用下， 标记到 DNA 的 5′端
缺口上，再用亲和素标记的 HRP 与之结合，然后加
入底物 DAB 显色，苏木素复染，从而使凋亡细胞核
呈现棕褐色，未凋亡细胞核呈蓝色。在光学显微镜下
随机计数 5 个高倍视野约 1 000 个细胞中的凋亡细
胞数，计算凋亡细胞所占比例。
1.6 统计学分析
计量资料用均数±标准差(x±s)表示，各组样本
均数间比较采用 SPSS10.0 统计分析软件包行 t 检
验。 以 α=0.05为检验水准，P<0.05为差异具有统计
学意义。
2 结 果
2.1 MTT法检测生长抑制率
MTT 法检测不同浓度藤梨根正丁醇提取物不
同时间对人食管癌细胞的生长抑制作用见图 1。 在
1、2、3d时人食管癌细胞的生长抑制率对照组 (藤梨
根正丁醇提取物浓度 0)均为 0；实验组 1(藤梨根正
丁醇提取物 1μg/ml)分别为 18.5%、36.2%、45.3%；实
验组 2 (藤梨根正丁醇提取物 10μg/ml) 分别为
24.5%、46.7%、66.4%；实验组 3(藤梨根正丁醇提取
物 100μg/ml)分别为 36.2%、58.7%、87.2%。
MTT 法检测不同浓度藤梨根乙酸乙酯提取物
在不同时间对人食管癌细胞的生长抑制作用见图
2。 在 1、2、3d时生长抑制率正常对照组(藤梨根乙酸
乙酯提取物浓度 0)均为 0；实验组 1(藤梨根乙酸乙
酯提取物 1μg/ml)分别为 15.9%、26.5%、39.8%；实验
组 2 (藤梨根乙酸乙酯提取物 10μg/ml) 分别为
21.4%、36.1%、58.6%；实验组 3(藤梨根乙酸乙酯提
取物 100μg/ml)分别为 28.7%、54.3%、77.5%。
2.2 TUNEL法检测细胞凋亡
TUNEL 法检测不同浓度藤梨根正丁醇提取物
在不同时间食管癌细胞的凋亡细胞比例见图 3。 人
食管癌细胞的凋亡细胞比例在 1、2、3d 时对照组(藤
梨根正丁醇提取物浓度 0)均为 0；实验组 1 分别为
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13.6% 、22.7% 、38.4% ； 实验组 2 分别为 18.3% 、
28.5% 、49.1% ； 实验组 3 分别为 21.4% 、37.2% 、
60.8%。
TUNEL 法检测不同浓度藤梨根乙酸乙酯提取
物在不同时间食管癌细胞的凋亡细胞比例见图 4。
食管癌细胞的凋亡细胞比例在 1、2、3d 时对照组均
为 0；实验组 1分别为 9.3%、20.6%、33.5%；实验组 2
分别为 14.7% 、25.3% 、44.4% ； 实验组 3 分别为
19.5%、36.3%、58.6%。
3 讨 论
中医药的抗肿瘤作用已得到广泛的肯定， 其机
制有多方面，如抑制 DNA合成、抑制肿瘤血管形成、
诱导细胞分化、促进细胞凋亡、调节机体免疫功能、
抑制蛋白酪氨酸激酶 （protein tyrosine kinase，PTK）
活性等[3～6]。 目前，关于藤梨根的研究已有报道，其对
消化系统肿瘤有良好的抗肿瘤作用， 但其抗肿瘤作
用机制还不清楚。
初步研究发现， 同种猕猴桃根不同提取方法所
得的提取物其抗肿瘤作用也可能不尽相同。 有学者
研究表明猕猴桃根正丁醇、 乙酸乙酯提取物对肿瘤
细胞的生长有良好的抑制作用，但量效关系不明显[2]。
关于藤梨根提取物中抗肿瘤作用的成分， 曾有人报
道主要为三萜类化合物， 分别为乙酸乙酯提取物熊
果酸、β-谷甾醇及正丁醇提取物 2α，3α，24-三羟基-
12-烯-28-乌苏酸 、2β，3β，23-三羟基 -12-烯-28-乌苏
酸、24-hydroxytormentric acid[7]。
藤梨根对多种肿瘤细胞均有抑制作用。 钟振国
等 [8]采用 MTT 比色法、集落形成法等方法对藤梨根
作用的宫颈癌细胞株 Hela、神经肿瘤细胞株 NG108-
15、胃癌细胞株 SGC7901 等进行了研究，结果藤梨
根对不同肿瘤细胞的生长均有不同程度的抑制作
用。 李昊等[9]研究了藤梨根对人胃低分化腺癌 BGC-
823细胞的作用， 发现其浓度在 1.3mg/ml 时抑瘤率
最强(88.19%)，随着药物浓度的降低，抑瘤率随之下
降 ； 藤梨根对胃癌细胞作用 24h 抑制作用最强
(87.61%)，48h 回落，72h 再次上升，其对胃癌细胞有
明显杀伤作用。 卫培峰等[10]在动物实验中证明藤梨
根能有效诱导鼠胃癌细胞的凋亡。
近几年来， 国内外对细胞间隙连接通讯与癌变
的关系进行了大量的研究， 发现多数肿瘤细胞无细
胞间隙连接通讯功能， 而邻近的正常组织或良性肿
瘤的间隙连接正常， 少数肿瘤细胞有脆弱的连接通
讯，但很容易受到破坏，且数量很少，藤梨根可以通
过上调细胞间隙连接通讯功能来抑制某些肿瘤细胞
如高转移性人肺癌细胞的生长[11]。
综上所述， 我们的体外实验也证明不同浓度藤
梨根正丁醇提取物及乙酸乙酯提取物作用于 Eca-
109细胞不同时间后，有明显的凋亡特征。 因此我们
推测，抑制肿瘤细胞增殖、诱导肿瘤细胞凋亡可能是
藤梨根抗肿瘤作用的机制之一。 但细胞凋亡的调控
及信号传导极其复杂， 抗肿瘤作用的真正机制及体
内抑瘤实验需进一步深入研究。
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