全 文 ：cose and h igh insulin. Methods　 The neonata l rat
cardiac fibroblasts w e re cultu red and treated w ith d if-
ferent factors. The ce llular number was dete rm ined by
cry sta l v io let up take;the DNA synthesis w as assayed
w ith [ 3H ] thym idine intakemethod;the pe rcen tage o fS
+G2 +M in the ce ll cyc lew as determ ined by flow cy-
tome try. Results　P iog litazone inh ibited the cell num-
ber、DNA syn thesis and the percentage of S+G2 +M in
the ce ll cycle of cu ltured cardiac fibrob lasts induced
w ith high g lucose and high insu lin. Conc lusion　Pio-
g litazone inh ib its cardiac fibroblast proliferation in-
duced w ith high g lucose and h igh insu lin and the effec-
tive mechanism o f piog litazone on ca rdiac fibrob last
pro liferation needs further study.
Key words:piog litazone;high g lucose;high insu lin;
cardiac fibrob last;p ro life ra tion
藤茶总黄酮对拘束负荷引起小鼠肝损伤的保护作用
郑洁静 1 , 续洁琨 2 , 江　涛 1 , 赵　亮 1 ,贺　飞 1 , 姚新生 2 , 栗原博 1
(1.暨南大学中药及天然药物研究所 , 广东 广州　510632;2.沈阳药科大学中药学院 ,辽宁 沈阳　110016)
中国图书分类号:R-332;R 284.1;R 322.47;R 329.24;
R 363-332;R 575.02;R 575. 053
文献标识码:A 文章编号:1001 -1978(2006)10 - 1249 -05
摘要:目的　研究藤茶总黄酮对拘束负荷造成小鼠肝损伤的
保护作用。方法　采用拘束负荷方法引起小鼠应激性肝损
伤模型。赖氏法和 TBARS法分别测定小鼠血浆中谷丙转氨
酶活性和丙二醛含量 , HPLC法测定肝组织匀浆中维生素 C
及谷胱甘肽水平 , ORAC方法测定肝组织的抗氧化能力指数
及藤茶总黄酮和二氢杨梅素的体外抗氧化活性。 结果　与
拘束模型组相比 , 藤茶总黄酮可以明显提高拘束负荷小鼠肝
组织匀浆的抗氧化能力指数 、维生素 C和谷胱甘肽水平 , 有
效降低血浆中丙二醛含量和谷丙转氨酶水平。藤茶总黄酮
及二氢杨梅素在体外显示出较强的抗氧化能力。 结论　藤
茶总黄酮对拘束负荷引起的小鼠肝损伤具有一定的保护作
用 , 其作用机制可能部分来自于清除自由基和抑制脂质过氧
化过程。
关键词:藤茶总黄酮;拘束应激;肝损伤;抗氧化能力指数
　　藤茶系葡萄科蛇葡萄植物显齿蛇葡萄 [ Ampe-
lopsis grossedntata(Hand-M azz)W. T. W ang]的茎叶 ,
主要分布于广东 、广西等中国南部各省区 ,其性味甘
淡 , 具有清热解毒 , 改善咽喉肿痛等作用 [ 1] 。藤茶
的活性成分被认为是来自二氢杨梅素 (dihydromy r-
ice tin, DMY)、杨梅素等黄酮类化合物。近年来的研
收稿日期:2006 - 04 - 13,修回日期:2006 - 07 - 22
作者简介:郑洁静(1979 -),女 ,硕士生 ,研究方向:应激药理学 , Tel:
020-85227791, Fax:020-85225849, E-m ai l:zjj19790217@
126, com;
栗原博(1954 -),男 , 教授 , 博士生导师 , 研究方向:应激
及神经 -免疫药理学:通讯作者 , Tel:020-33033306, E-
m ail:H iroshi_Ku rih ara@ 163. com
究证明藤茶中总黄酮的含量可达 40%[ 2] 。藤茶茎
叶总黄酮具有抗血栓 、降脂 、保肝及降血糖等作
用[ 3, 4] 。 Hase等 [ 5]的研究确认 DMY对 D-半乳糖胺
和脂多糖诱导的小鼠肝损伤有保护作用 ,但尚未见
对应激负荷引起肝损伤保护作用的研究 。
　　Kurihar等 [ 6]的研究证明小鼠在应激状态下 ,体
内过剩产生的氧自由基攻击生物膜中的不饱和脂肪
酸而引发脂质过氧化反应 ,导致脂肪酸链和细胞膜
完整性的破坏 。肝脏是机体中主要的代谢器官 ,容
易受各种应激负荷的影响 ,促发肝细胞膜脂质过氧
化的链式反应 ,引起肝损伤。本研究通过对小鼠的
拘束负荷建立应激性肝损伤模型 ,考察藤茶总黄酮
(Tengcha flavonoids, FCF)对拘束应激小鼠血浆中谷
丙转氨酶 (ALT)和丙二醛 (MDA)的影响 ,以及对肝
组织匀浆的抗氧化能力指数 (oxygen radica l absor-
bance capacity, ORAC)、维生素 C和谷胱甘肽水平
的影响。并结合藤茶总黄酮和其有效成分 DMY的
体外抗氧化活性来评价藤茶对应激性肝损伤的保护
作用 。
1　材料与方法
1. 1　藤茶总黄酮的制备　实验用藤茶采自广东省
龙门县南昆山 。取其嫩叶干燥粗粉 500 g以 5 000
m l 95%乙醇加热回流 2 h连续提取 3次 ,过滤后合
并滤液 ,减压浓缩后冷冻干燥 ,得实验用藤茶提取物
127 g。参照文献[ 7]以下述方法富集 TCF:称取藤茶
提取物 100 g,添加 300 m l石油醚加热回流 1 h,连
续提取 2次 ,冷却后过滤。滤渣再以 3 000 m l蒸馏
水加热回流 1 h,连续提取 2次 ,趁热抽滤 ,将滤液合
并后浓缩至约 50 m l,冷却后低温放置 3 d使其充分
1249 中国药理学通报　ChinesePharmacologica lB ulletin　2006 Oc t;22(10):1249 ～ 53
析出沉淀。离心收集沉淀并重结晶 ,得 TCF 32.3 g,
回收率为干燥叶片的 8.2%。
1. 2　化学试剂与分析仪器　维生素 E的水溶性衍
生物 6-hydroxy-2, 5, 7, 8-te trame thy l-chroman-2-car-
boxy lic acid(Tro lox), 及氧自由基诱发剂 2, 2′-azobis
(2-am idinopropane)dihydrochloride(AAPH ),荧光素
钠均为日本和光纯药株式会社产品 (W ako Pure
Chem ical Industries, Ltd O saka, Japan)。维生素 C
(S igma Chem ica lCo, S.t Lou is, Mo, USA), 谷胱甘肽
(Koh jin Co, Ltd, Tokyo, Japan), 辛烷磺酸钠 (SOS ,
TokyoK aseiKogyo Co, Ltd, Tokyo, Japan),谷丙转氨
酶 (ALT)测定试剂盒 、丙二醛(MDA)测定试剂盒购
自南京建成生物工程研究所。聚乙二醇 400
(PEG 400)等试剂均为国产分析纯。甲醇为 F ischer
色谱纯 。
　　ALT活性及 MDA含量测定使用芬兰雷博 MK3
型酶标仪 ,维生素 C测定使用 HP1050高效液相色
谱仪 ,谷胱甘肽测定使用日本 H ITACH I高效液相色
谱仪和 E icom 公司 ECD-100型电化学检测器 ,
ORAC测定使用 TECAN GEN ios多功能酶标仪 (奥
地利)及 M agellan工作站 ,组织样品制备使用德国
IKA ULTRA-TURRAX T8型组织匀浆机及 S igma 3-
18K型台式高速冷冻离心机 (德国 ), Sarto rius电子
分析天平(德国)。
1. 3　动物分组及模型制备　7 wk龄 18 ～ 22 g ♂清
洁级昆明种小白鼠 , 购自广东省医学实验小鼠中
心 ,合格证号 SCXK(粤 )2003 - 2002。饲养温度 (23
±2)℃,照明时间 12 h d-1(7:00 ～ 19:00开灯)。
饲养 1 wk后进行实验 。实验动物随机分为禁食禁
水对照组 、应激模型组 、应激模型 +藤茶总黄酮低剂
量组 (125 mg kg- 1)、应激模型 +藤茶总黄酮中剂
量组(250 mg kg -1)和应激模型 +藤茶总黄酮高
剂量组 (500mg kg -1)共 5组 ,每组 7只。样品均
以 50% PEG 400水溶液制成混悬液 ,应激负荷前连
续 4 d经口给予藤茶总黄酮化合物 , 对照组给予等
容量空白溶剂 (50% PEG400),每天 1次 , d 4给药
30 m in后进行拘束应激实验 。
　　小鼠拘束装置参考文献 [ 8] ,使用改造为通风良
好 50m l尖底聚丙烯塑料离心管 。小鼠处于此离心
管一次性拘束负荷 12 h(20:00 ～ 8:00),不能进食
饮水 ,其后乙醚麻醉 ,心脏采血 ,并置于肝素处理过
的离心管中以5 000 r m in-1离心 5 m in分离血浆 ,
用于测定 ALT和 MDA。同时取肝组织 ,以 3%高氯
酸 (PCA)制成 5%肝组织匀浆 , 12 000 r m in-1离
心 15 m in后上清液用于测定抗氧化能力指数
(ORAC),经 0.45 μm 微孔滤膜过滤后用于测定
GSH含量;以 5%偏磷酸制成 10%肝组织匀浆 ,
12 000 r m in- 1离心 15m in后 ,经 0.45 μm微孔滤
膜过滤用于测定肝脏组织中维生素 C水平 。
1. 4　谷丙转氨酶(ALT)活性测定　应激负荷小鼠
血浆 ALT活性通过赖氏法检测试剂盒测定 。测定
原理利用 ALT在 37℃及 pH 7.4条件下 ,作用于丙
氨酸及 α-酮戊二酸组成的底物 ,生成丙酮酸及谷氨
酸。反应 0.5 h后 ,加入 2, 4-二硝基苯肼 (DNPH)盐
酸溶液 ,即终止反应。因 DNPH与酮酸中羰基加成
生成丙酮酸苯腙 , 苯腙在碱性条件下呈红棕色在
492 nm下以比色法进行测定。
1. 5　TBARS(tiobarb itol acid reactive substance)
法测定MDA含量　血浆中 MDA含量使用 MDA检
测试剂盒测定 。测定原理利用 MDA可与硫代巴比
妥酸缩合形成红色产物 ,在 532 nm处有最大吸收峰
的性质 ,通过比色法进行测定 [ 9, 10] 。
1. 6　ORAC测定　ORAC测定参照 Prio r等[ 11]方
法并加以改进 。ORAC方法的特点在于能够提供稳
定可控的自由基来源 ,适用于亲水性和亲脂性化合
物[ 12, 13] 。其原理为荧光物质 disodium fluorescein在
485 nm光激发下 ,发射 527 nm荧光 ,可以被能够释
放过氧自由基的 AAPH氧化而使荧光特性消失。
当抗氧化剂存在时 ,可与 disodium fluorescein竞争
氧化剂 ,减缓其荧光消退的速度。根据这一特性 ,可
测定样品氧自由基清除活性 。实验结果表达为荧光
衰退曲线下积分面积 ,扣除无抗氧化剂的空白曲线
下面积 ,得出抗氧化剂的保护面积 。不同抗氧化剂
的保护面积统一换算成 1μmo l L - 1 Tro lox的保护
面积进行比较 。实验 96孔板每个微孔中加入不同
浓度的待测样品溶液 20 μl,再加入上述磷酸钾缓冲
液 20 μl和 AAPH 140 μl(终浓度 12.8 mmol
L
-1),最后添加 disodium fluo resce in 20 μl(终浓度
63 nmol L - 1)启动反应并迅速将酶标板置于荧光
酶标仪(预置温度 37℃)中开始测定。采用动力学
方式 ,每 2 m in测定一个点 ,至荧光强度衰减为零为
止。
体外 ORAC测定是将藤茶总黄酮以 DMSO溶
解 , DMY以甲醇溶解 ,均以 75mmo l L - 1磷酸盐缓
冲液 (pH 7.4)稀释至适当浓度后进行 ORAC测定。
测定用 disodium fluorescein和 AAPH均以相同磷酸
钾缓冲液溶解配制 。
1. 7　维生素 C含量测定　测定使用 Rp-C18色谱柱
(4.6mm ×150mm , COSMOSIL),流动相为 10mmo l
L - 1磷酸盐缓冲液(pH 3)∶甲醇(99∶1),磷酸盐
1250 中国药理学通报　Chinese Pharmacologica lB ulletin　2006 Oct;22(10)
缓冲液由磷酸二氢钾配制 ,用磷酸调 pH值至 3使
用 [ 14] 。流速设定为 1.0 m l m in- 1 ,紫外检测波长
245 nm ,进样体积为 20 μl。
1. 8　GSH 含量测定 　实验使用日本 Nacalai
Tesque公司 Cosmosil系列 5C18柱 (规格为 4.6mm ×
150mm), 流动相为 99 mmol L -1磷酸盐缓冲液
(pH 2.5), 1%甲醇 , 200 mg L -1 SOS , 5 mg L -1
EDTA ,磷酸盐缓冲液由磷酸二氢钠配制 ,用磷酸调
pH值至 2.5使用[ 15] 。柱温为 25℃,流速设定为 1.0
m l m in-1 ,电压为 600mV及进样体积为 15μl。
1. 9　DMY体外清除 OH的能力　参照 Sm irnoff
等 [ 16]的方法略作改进 ,反应是以 FeSO4添加 H2O2
后产生 OH ,并以 OH氧化水杨酸所得产物的吸
光值来表示 OH 生成 ,吸光值越大 , OH 越多 。
具体方法为 1 m l 1.5 mmo l L -1 FeSO4溶液中添加
0.3m l 20 mmo l L -1水杨酸钠后再加入 1 m l不同
浓度的 DMY液 ,最后加 0.7 m l 6 mmo l L -1 H2O2
并启动反应 , 37℃温浴 1 h后于 510 nm测吸光值 。
对照组用 1m l蒸馏水代替 DMY液 ,结果以下式表
示抑制率(E /%), E /%=(A对照 -A样品 ) /A对
照 ×100%。
1. 10　DMY体外清除超氧自由基的能力　邻苯三
酚在碱性条件下氧化生成 O 2 ,生成的 O 2 与氯化硝
基四氮唑蓝 (NBT)作用后形成紫色化合物 ,该化合
物在 530 nm处有最大吸收峰并以 A值表示 O 2 生
成的量 。本实验参考文献 [ 17]的方法 ,略作修改 。具
体方法是将 0.05mo l L -1 pH 8.2的 Tris-HC l缓冲
液 3 m l置 25℃水浴中预热 20 m in后加入不同浓度
DMY液 0.4 m l, 及 0.98 mmo l L -1NBT 0.8 m l和
10mmol L - 1邻苯三酚 0.4m l,混匀后置 25℃水浴
中预热 4 m in ,立即添加 8mo l L -1HC l 0.1 m l终止
反应 ,并在 530 nm处测定 A值 。对照组用蒸馏水
0.4 m l代替 DMY 液 , 结果以下式表示抑制率
(E /%), E /%=(A对照 -A样品) /A对照 ×100%。
1. 11　统计学处理　实验数据以 –x ±s表示 ,采用 t
检验进行统计学分析 。
2　结果
2. 1　TCF对拘束负荷小鼠血浆 ALT水平的影响
　TCF能降低拘束负荷小鼠的血浆 ALT水平 ,对照
组小鼠 ALT平均值为 (17.75 ±0.39) IU L - 1 ,拘
束负荷小鼠平均值为 (76.61±1.50) IU L - 1 ,与对
照组相比拘束负荷小鼠的 ALT 活性升高了
331.4%。低 、中 、高藤茶总黄酮剂量组小鼠血浆
ALT平均值分别为 (57.54±1.39)、(29.20±1.01)
及 (24.61±0.71) IU L - 1 ,与拘束负荷组相比 ALT
活性分别降低 24.9%、61.9%、67.9%, 且呈一定量
效关系。
2. 2　TCF对拘束负荷小鼠血浆 MDA水平的影响
　不同剂量 TCF能降低拘束负荷小鼠的血浆 MDA
水平 , 对照组小鼠 MDA平均值为 (59 ±13.58)
μmo l L - 1 , 拘束负荷小鼠平均值为 (272.8 ±
33.92)μmo l L- 1 ,比对照组升高了 362.4%。低 、
中 、高 TCF剂量组小鼠血浆 MDA平均值分别为 (19
±1.00)、(30 ±5.01)、(23.2±2.09) μmo l L - 1 ,
与拘束负荷组相比 MDA含量分别降低 93.0%、
89.0%、91.4%,差异具有显著性 (P <0.01)。
2. 3　TCF对拘束负荷小鼠肝组织 ORAC水平的
影响　TCF对拘束负荷引起的肝脏抗氧化能力指数
的下降有明显的减缓作用。对照组小鼠肝组织
ORAC平均值为 (1.49 ±0.19) Tro lox equ iva lence,
拘束负荷小鼠平均值为 (0.69±0.12) Tro lox equiv-
a lence,比对照组降低了 53.7%, 低 、中 、高 TCF剂
量组小鼠平均值分别为 (1.21 ±0.17)、(1.40 ±
0.05)、(1.59 ±0.19) Tro lox equ iva lence,比拘束负
荷组分别升高 72.9%、101.3%、128.3%。
2. 4　TCF对拘束负荷小鼠肝组织维生素 C水平的
影响　不同剂量 TCF对拘束负荷小鼠肝组织中维
生素 C的降低具有保护作用。维生素 C含量对照
组小鼠肝组织平均值为 (331.58±8.01) μg g- 1 ,
拘束负荷小鼠平均值为 (211.59±8.24) μg g- 1 ,
比对照组降低了 36.2%。低 、中 、高 TCF剂量组小
鼠平均值分别为 (213.79 ±6.12)、 (248.21 ±
9.42)、(288.18±8.51) μg g- 1 ,与拘束负荷组相
比分别升高 1.1%、17.3%、36.2%, 且呈一定量效
关系 。
2. 5　TCF对拘束应激负荷小鼠肝脏中 GSH水平
的影响　不同剂量 TCF均可提高应激模型小鼠肝
脏 GSH 含量。对照组小鼠肝脏 GSH 平均值为
(777.89±6.82) μg g- 1 ,拘束负荷小鼠平均值为
(337.98±20.19) μg g- 1 ,与对照组相比下降了
56.6%。低 、中 、高 TCF剂量组小鼠平均值分别为
(389.17±13.66)、(442.96 ±21.15)、(425.06 ±
19.48)μg g- 1 ,与拘束负荷组相比 GSH含量分别
升高 15.1%、31.1%、25.8%。
2. 6　TCF及 DMY的体外 ORAC活性　　藤茶提
取物总黄酮和 DMY在体外均能明显延缓荧光物质
被活性氧自由基淬灭的速度 。其抗氧化作用明显强
于维生素 C ,且具有量效关系见 F ig 1。
2. 7　DMY体外清除羟自由基和超氧阴离子的能
力　不同浓度的DMY对羟自由基和超氧阴离子自
1251 中国药理学通报　Chinese Pharmacologica lB ulletin　2006 Oct;22(10)
F ig 1　 Inh ibiting effect of TCF and DMY on fluorescence decay induced by 2, 2′-azobis(2-am idinopropane) dihydrochloride(AAPH)
C urves of f luorescence decay indu ced by AAPH as a peroxyl radica lgenerator in the presence of d ifferent concentration s of TCF and DMY are show n.
Trolox, a w ater-solub le vitam in E analogue, w as u sed as a con trol stand ard. The ant iox idan t activi ty of a sam p le is expressed as the net area under the
cu rve. Data are exp ressed asm ean s of th ree experim en ts
由基均显示清除作用 , 且呈一定的量效关系 ,直线
回归方程分别是 :^Y =0.177X +0.385和 Y^ =0. 26X
+0.186 ,根据回归方程计算得 EC50分别为 0.65 g
L
- 1和 1.2 g L- 1见 Tab 1。
Tab 1　The scaveng ing effects of DMY a t d ifferent concentra tions
on the hydroxyl radicals and superox ide anion radicals
Concen tration
/g L- 1
Inh ib itory rate /%
hyd roxy l radicals
superoxide anion
radica ls
0. 125 37. 1±0. 26 7. 88±0. 32
0. 25 39. 5±0. 18 26. 4±0. 28
0. 5 49. 1±0. 31 39. 4±0. 16
1. 0 66. 4±0. 24 56. 9±0. 24
2. 0 69. 2±0. 22 63. 4±0. 36
3　讨论
　　小鼠拘束负荷 12 h后血浆 ALT水平升高的同
时 ,脂质过氧化产物 MDA含量亦明显增加 ,表明拘
束负荷引起的肝损伤病理过程可能与机体氧化应激
状态有关系。此结果与 Rauen等 [ 18]的研究证明结
果相一致 ,肝脏在应激负荷状态下活性氧自由基的
生成和消除失去平衡 ,过剩产生的活性氧自由基攻
击生物膜中的不饱和脂肪酸继而发生脂质过氧化反
应 ,破坏脂肪酸链和细胞膜的完整性 ,损伤肝细胞 ,
表现为血浆 ALT活性的增高和 MDA含量增加 。在
本实验中 , TCF明显地改善因拘束负荷增高的血浆
MDA含量和 ALT活性 ,说明 TCF可能通过缓解脂
质过氧化状态 ,改善肝损伤 。
　　维生素 C和 GSH作为小鼠机体的内源性抗氧
化物质发挥清除自由基 ,减少自由基介导的细胞损
害作用。在实验中我们发现拘束负荷小鼠肝组织中
的维生素 C和 GSH因应激反应而减少 ,同时 ORAC
值也相应下降 ,表明小鼠体内呈现氧化应激状态。
当藤茶总黄酮处理小鼠后明显提高肝组织匀浆中的
维生素 C、GSH及 ORAC水平 ,缓解因拘束负荷引起
的氧化应激状态 ,增强了机体的抗应激能力 ,从而减
少应激性肝损伤的发生 。
　　Mu rakam i等 [ 19] 研究证明藤茶活性成分之一
DMY具有保肝 、抗氧化等多种药理活性 。本文结果
表明 , DMY这类黄酮类化合物能明显延缓荧光物质
被活性氧自由基淬灭的速度 , DMY具有较强的清除
羟自由基和超氧阴离子的能力 ,表现出与维生素 C
相类似的抗氧化效果 。 DMY是一种含有 6-酚羟基
的黄酮类化合物 ,其清除自由基作用可能与该化合
物带有多个酚羟基有关 。
　　已知衰老 、肿瘤 、炎症等病理过程均与氧自由基
相关 ,从天然资源中寻找有效的抗氧化物质用于防
治疾病和维持机体健康已引起人们的关注。藤茶中
的总黄酮及活性成分 DMY含量高 ,其抗氧化作用
较强 ,可能具有较好的实际应用价值。
参考文献:
[ 1] 　袁阿兴 ,黄筱美.显齿蛇葡萄化学成分的研究 [ J] .中国中药杂
志 , 1998, 23(6):359 - 61.
[ 1] 　Yuan A X, H uang X M. C hem ica l cons tituents in aerial part of
Ampelop sis grossed entala(H and-Mazz)W. T. w ang[ J] . China J
Ch inM atM ed, 1998, 23(6):359 - 61.
1252 中国药理学通报　Chinese Pharmacologica lB ulletin　2006 Oct;22(10)
[ 2] 　何桂霞 , 裴　刚 , 周天达 ,等. 显齿蛇葡萄中总黄酮和二氢杨
梅素的含量测定 [ J] .中国中药杂志 , 2000, 25(7):423 - 5.
[ 2] 　H e G X, PeiG, Zhou T D , et a.l Determ ination of total f lavonoids
and d ihyd rom yricetinin Ampelop sis grosseden tala (H and-Mazz)
W. T. w ang[ J] . China J Ch in Ma tMed, 2000, 25(7):423 -5.
[ 3] 　钟正贤 ,覃洁萍 ,周桂芬 ,等.广西藤茶总黄酮保肝作用的实验
研究[ J] .广西科学 , 2002, 9(1):57 - 9.
[ 3] 　Zhong Z X , Qin JP, ZhouG F, et a.l Experim en ta l research on to-
tal f lavone of Ampelops is grossedentata from Guangx i in Liver pro-
tection[ J] . Guangxi Sci, 2002, 9(1):57 - 9.
[ 4] 　钟正贤 ,覃洁萍 ,周桂芬 ,等.广西藤茶总黄酮降血糖的实验研
究 [ J] .中国中药杂志 , 2002, 27(9):687.
[ 4] 　Zh ong Z X , Q in J P, Zhou G F, et a.l E xperim en tal stud ies of hy-
pog lycem ic action on total f lavone ofAm pelop sis grosseden tata from
Guangxi[ J] . Ch ina J Ch inMa tMed, 2002, 27(9):687.
[ 5] 　H ase K , Ohsug iM , X iong Q , et a.l H epatop rotective effect of Ho-
ven ia du lcis THUNB on experim ental liver in ju ries indu ced by car-
bon tetrach loride or D-galactosam ine / lipopo lysaccharide[ J] . B io l
Pha rm B u ll, 1997, 20(4):381.
[ 6] 　Ku rihara H , K oda H , A sam i S, et a.l C on tribut ion of the antioxi-
dative p roperty of astaxan th in to its p rotective effect on th e promo-
tion of cancer metastasis inm ice treated w ith restraint s tress[ J] .
Life S ci, 2002, 70(21):2509 - 20.
[ 7] 　罗祖友 ,杨晓萍 , 吴谋成.藤茶水溶性多糖及总黄酮的提取工
艺研究 [ J] . 食品科学, 2005, 26(5):156 - 60.
[ 7] 　Luo Z Y, Yang X P, WuM C. Studies on the ex traction of w ater-
so luble polysaccharides and total flavon e f rom ampelop sis grossed-
entata[ J] . Food S ci, 2005, 26(5):156 -60.
[ 8] 　Yam aoka Y, K aw ak ita T, Nom oto K. Protective effect of a tradi-
tional Japanese m ed icine, Bu-zhong-y i-qi-tang( Japanese nam e:
H ochu-ekk i-to), on th e restraint stress-induced suscep tib ility a-
gains t Listeriam onocytogenes[ J] . Imm unopharm acology , 2000, 48
(1):35 - 42.
[ 9] 　YagiK. A sim p le f luorom etric assay for lipoperox ide in b lood p las-
m a[ J] . B iochem Med, 1976, 15:212 -6.
[ 10] Uch iyama M , M iharaM . Determ ination ofm aloaldehyde p recu rsor
in t issue by th iob arb itu ric acid test[ J] . Ana lB iochem , 1978, 86:
271 - 8.
[ 11] P rior R L, Hoang H , Gu L, et a.l Assays for hydroph i lic and li-
poph ilic an tioxid ant capacity[ oxygen rad ical ab sorban ce capacity
(ORACFL)] of p lasm a and oth er b iological and food sam p les[ J] .
J AgricF ood Chem , 2003, 51(11):3273 - 9.
[ 12] Prior R L, W uX , S chaichK. S tandard izedm ethods for the deter-
m inat ion of ant ioxidan t capacity and ph enolics in foods and d ietary
supp lem ents[ J] . J Ag ric Food Chem , 2005, 53(10):4290 -
302.
[ 13] Huang D, Ou B, Prior R L. The chem istry beh ind d ietary an tioxi-
dan t capacity assays[ J] . J AgricFood Chem , 2005, 53(6):1841
-56.
[ 14] W uK L, Shu iY B, Sasak iK. M easu rem en t of V itam in C in a-
queou s hum ou r and len s sect ion s of guinea p igs and rats by HPLC
[ J] . Ch in Oph tha lR es, 1997, 15(4):257 - 9.
[ 15] H iraku Y , M urataM , Kaw anish i S. Determ ination of in tracellu lar
glu tath ione and th iols by h igh perform ance liqu id ch rom atog raphy
w ith a gold electrode at the fem tomo le level: com parison w ith a
spectroscop ic assay[ J] . B ioch im B ioph ys Acta, 2002, 1570(1):
47 - 52.
[ 16] Sm irnff N, C um bes Q J. H yroxy l rad ical scavenging activi ty of
com patib le solu tes[ J] . Phy tochem istry, 1989, 28(4):1057 -
60.
[ 17] 靳菊情 ,边晓丽 ,葛　萍. 黑石耳多糖对氧自由基及脂质过氧
化的影响 [ J] .中药材 , 2001, 24(9):660 - 1.
[ 17] J in J Q, B ian X L, Ge P. Th e effect of the polysaccharides from
derm atocarponm in iatum on oxygen radicals lip id peroxidation[ J] .
J Ch in MedMa t, 2001, 24(9):660 - 1.
[ 18] RauenU , Reu ters I, Fu chsA , et a l, Oxygen-free rad ical-m ed iated
in ju ry to cu ltu red rat hepatocytes during cold incubation in p reser-
vation solu tions[ J] . Hepa tology, 1997, 26(2):351 -7.
[ 19] Mu rakam iT, M iyakosh iM , A raho D , eta.l H epatoprotective act ivity
of tocha, the stem s and leaves of Am pelopsis grosseden tata, and
am pelopsin[ J] . B io factors, 2004, 21(1):175.
Protective effects of Tengcha flavonoids on liver
injury in m ice loaded w ith restraint stress
ZHENG Jie-jing1 , XU Jie-kun2 , JIANG Tao1 , ZHAO Liang1 , HE Fei1 , YAO X in-sheng2 , H irosh iKurihara1
(1. Institute of T rad itiona l ChineseM edicine＆Natural P roducts, J inan University, Guangzhou　510632, China;
2. S chool of Traditional Ch ineseMa teriaM ed ica, Shenyang Pharm aceuticalUn iversity, Shenyang　110016, China)
Abstract:A mi 　To observe the pro tective effects of
Tengcha flavonoids (TCF ) on liver injury in m ice
loaded w ith restra in t stress. M ethods　The liver injury
mode lw as estab lished under restraint stress fo r 12 h in
m ice. Hepatic function w as evalua ted by assessing ala-
nine am ino transfe rase leve l in p lasma. The levels o f vi-
tam in C and gluta th ione (GSH)we re de tected in liver
by HPLC me thod. TBARS me thod w as pe rformed to
detect the levels o fM a londia ldehyde (MDA) in plas-
ma. Antiox idan t capacity of live rw asmeasured by oxy-
gen radical abso rbance capacity (ORAC) assay. Re-
su lts　TCF increased the leve ls o f ORAC , v itam in C
and GSH in liver, decreased the leve ls o f ALT and
MDA as compa red w ith restrain t stress contro l in a
do se-dependen t manner. Conclusion　 TCF exerted
protective effects on live r in jury inm ice loaded w ith re-
straint stress, wh ich may be re lated to its free radica l
scaveng ing ac tiv ity.
Key words:Tengcha flavono ids;restraint stress;liver
injury;oxygen radical abso rbance capacity
1253 中国药理学通报　Chinese Pharmacologica lB ulletin　2006 Oct;22(10)