全 文 ：收稿日期:2004-01-07
通讯作者:覃容贵 , Tel:(0851)6777581 , 13984411435
九头狮子草对细菌超微形态结构的影响
覃容贵1 ,李淑芳1 ,罗忠圣2
(1 贵阳医学院 ,贵州 贵阳　550004;2贵阳新天制药有限公司 ,贵州 贵阳　550018)
　　摘要:目的:研究九头狮子草对 β 溶血性链球菌 、肺炎克雷伯菌的抗菌作用机理。方法:用负染法和超薄切片法在电子显
微镜下观察亚MIC 各细菌超微形态结构。结果:各细菌超微形态结构发生显著性改变 ,形成典型的细胞壁缺陷菌(细菌 L-型)。
结论:九头狮子草具有抗菌作用 , 其抗菌作用机理在于引起细菌细胞壁的缺损 , 造成菌体肿胀 、溶解而死亡。
关键词:九头狮子草;抗菌作用机理;细菌细胞壁;细菌超微形态结构
中图分类号:R285.5　　文献标识码:B　　文章编号:1005-9903(2005)01-0046-03
The Effects of Herba Peristrophis on Ultramorphology of Bacteria
QIN Rong-gui 1 , LI shu-fang1 , LUO Zhong-sheng2
(1 Guiyang medical college , Guiyang Guizhou 550004 , China;
2 Guiyang Xintian pharmaceutical limited company , Guiyang Guizhou 550018 , China)
Abstract:Objective:To study antibacterial mechanism of Herba Peristrophis on β-Streptococcus hemolyticus and
Klebsiella pneumonia.Methods:Electron microscope was used to observe the ultramorphology and ultramiscroscopic
structure of the bacteria.Results:Ultramorphologies of the bacteria were obviously changed and formed into typical
morpholoies of bacterial L-form.Conclusion:It indicated that antibacterial mechanism of Herban Peristrophis may destroy
the cell wall of bacteria.
Key words:Herba Peristrophis;antibacterial mechanism;the cell wall of bacteria;the ultramorphology and
ultramiscroscopic structure of the bacteria
　　九头狮子草为爵床科植物九头狮子草
[ Peristrophe japonica (Thunb.)Bremek.] 全草 , 分布于
江苏 、浙江 、福建 、湖南 、江西 、贵州 、四川等地 ,在民
间广为栽培。其性味辛 、凉 ,功用主治为祛风 、清热 、
化痰 、解毒 ,用于治疗风热咳嗽 、小儿惊风 、喉痛 、疔
毒 、乳痈。与其它药物配伍使用 ,治疗肺热咳嗽 、虚
热咳嗽 、小儿吐奶并泄青 、男子尿结 、咽喉肿痛 、痔
疮 、蛇咬伤 、黑疱疔 、妇女白带 、经漏[ 1] 。现代研究表
明 ,清热解毒类中药多具有抗菌作用。前期研究工
作表明九头狮子草有较强的抗菌作用 ,其作用可能
与药物造成细菌细胞壁缺损有关[ 2 , 3] 。本研究主要
从对细菌超微形态结构的影响方面进一步研究九头
狮子草的抗菌作用机理 ,为临床应用九头狮子草提
供实验和理论依据。
1　实验材料
1.1　菌株　β溶血性链球菌(ATCC0379)、肺炎克雷
伯菌 ,由贵阳医学院微生物学教研室及检验系提供 。
1.2　试药制备　九头狮子草采自贵州省贵阳市郊 ,
经贵阳医学院药学系龙庆德副教授鉴定 ,用 70%乙
醇回流提取 4h ,减压浓缩 ,挥干乙醇 ,用蒸馏水配成
1 g mL(含生药量)的药液 ,按需稀释。
1.3　培养基制备
1.3.1　营养肉汤的制备　称取营养肉汤粉(购自上
海医学化验所试剂)31g ,加蒸馏水 1000mL ,加热溶
解 ,备用 。
1.3.2　LB培养基的制备　按文献[ 4]方法称取酪蛋
白胨(购自华美生物工程公司)1g ,葡萄糖 1g ,氯化钠
1g ,酵母提取物(购自华美生物工程公司)0.5g ,加蒸
馏水 100mL ,加热溶解 ,调 pH至 7.6 ,备用 。
1.3.3　2倍浓缩肉汤 、2倍浓缩 LB 培养基的制备:
以上各成分均倍量。
1.4　主要仪器　隔水式电热恒温培养箱(上海市跃
进医疗器械一厂);日立H-600电子显微镜 。
2　实验方法
试管稀释法测定各细菌 MIC [ 5] 后 , 观察亚 MIC
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第 11卷第 1 期
2005年 2 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol.11 , No.1
Feb., 2005
DOI :10.13422/j.cnki.syf jx.2005.01.021
各细菌形态的变化:
2.1　不同浓度含药培养基的制备 　取 10支试管 ,
编号 ,每支试管加 2倍浓缩肉汤 2mL ,吸取 2mL九头
狮子草提取液(1g mL)加入第 1支试管 ,混匀后依次
对倍稀释至第 7支试管 ,制成含药液体培养基 ,使药
物浓度依次分别为 0.5g mL、0.25g mL 、0.125g mL 、
0.0625g mL 、 0.0312g mL 、 0.0156g mL 、 0.0078g mL。
10支试管加棉塞后 ,高压蒸汽灭菌 20min。
2.2　菌液的制备[ 6] 　0.5麦氏比浊标准各菌液 ,用
营养肉汤或 LB 培养基作 1 10 稀释(含菌量约为
10
7
CFU mL)。
2.3　接种　用微量移液器取 100μL 菌液依次由低
浓度至高浓度分别加入 7支含药培养基试管中(最
终接种菌量约为 5×105CFU mL),其余三支试管分
别作有药无菌 、有菌无药 、西药阳性对照(以青霉素
和庆大霉素作阳性对照)。
2.4　培养与检查　置温箱 37℃孵育过夜 ,第18 、24 、
36h用接种环分别取管底菌液涂片 ,细胞壁染色 ,镜
检。细菌不生长的最低浓度即为九头狮子草对该菌
的MIC 。每种敏感细菌为 1组 ,共做 2组。β溶血性
链球菌用 2倍浓缩 LB培养基培养 ,肺炎克雷伯菌用
2倍浓缩肉汤培养。
2.5　对细菌超微结构的影响　将孵育 24h亚 MIC
试管菌液 ,3000rpm离心 10min后 ,取管底菌液 。
2.5.1　负染法 　用细毛细吸管取菌液滴到带
Formvar膜的载网上 ,静置 2min后用洁净的滤纸吸去
多余的液体使稍干 ,然后用醋酸双氧铀染色 ,吸去多
余染液 ,静置干燥后在电镜上观察 。
2.5.2　超薄切片　菌液 3000rpm离心20min ,倾出上
清液 ,用牙签将细菌团挑入盛有 2%预冷戊二醛液
的小瓶中 ,经戊二醛-锇酸双重固定 、丙酮梯度脱水 、
Epon812浸透包埋后 ,制成超薄切片 ,用醋酸双氧铀-
柠檬酸铅双重染色 ,在电镜上观察细菌超微结构。
3　结果
3.1　孵育 18h ,含药试管细菌数量少于有菌无药管 ,
形态无明显变化 。孵育 24h ,含药试管细菌数量明显
少于有菌无药管 ,形态发生显著改变 ,典型 L-型细菌
已形成。孵育36h ,高浓度含药试管已几无细菌生长。
3.2　细菌超微形态的变化(负染法)
3.2.1　正常 β溶血性链球菌呈球形 、长椭球形 ,形
状规则 ,细胞壁光滑 ,菌体染色均匀(见图 1A)。据
文献[ 2] , 九头狮子草对 β溶血性链球菌的 MIC 为
0.0625g mL。在亚 MIC 0.0312g mL 浓度下 ,药后菌
体体积显著增大 ,呈球形 ,细胞壁厚薄不均 ,可见明
显缺陷 。菌体染色明显浅于正常细菌 ,示细胞质疏
松;菌体中央染色深于边缘部位 ,边缘呈电子透明 ,
示菌体体积增大而肿胀(见图 1B)。
图 1A　β 溶血性链球
菌形态(×1.9万)
图 1B　药后 β 溶血性
链球菌形态(×7200)
3.2.2　正常肺炎克雷伯菌呈长椭球形 ,中部一侧稍
内凹 ,细胞壁均匀光滑 ,菌体染色均匀(见图 2A)。
据文献[ 2] ,九头狮子草对肺炎克雷伯菌的 MIC 为
0.5 g mL。在亚 MIC 0.25g mL 浓度下 ,药后菌体体
积显著增大 ,呈球形 ,细胞壁厚薄不均 ,缺陷明显可
见 。有的部位细胞质外溢形成瘤状凸起 ,菌体染色
不均匀 ,一侧略有电子透明感 ,示菌体体积增大而肿
胀(见图 2B)。
图 2A　肺炎克雷
伯菌形态(×1.9万)
图 2B　药后肺炎克雷
伯菌形态(×5800)
3.3　肺炎克雷伯菌超微结构的变化(超薄切片)　
正常肺炎克雷伯菌菌体呈短棒状 ,细胞壁连续 ,微波
状弯曲 ,细胞质呈电子致密并散布均匀空泡(见图
3A);药后菌体体积显著增大 ,呈椭球形或不规则形 ,
细胞壁缺陷清晰 ,界限模糊 ,呈不连续状态 ,细胞质
染色浅 , 示细胞质疏松 ,细胞结构松散(见图 3B 、
3C)。
图 3A　肺炎克雷伯菌
结构图(×5万)
图 3B　药后肺炎克雷
伯菌结构图(×3.5万)
图 3C　药后肺炎克雷伯菌局部结构图(×5万)
4　讨论
九头狮子草长期以来在贵州省布依族民间广为
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中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol.11 , No.1
Feb., 2005
应用 ,主要用于治疗小儿高热 、小儿惊风(一种因儿
童高热引起的惊厥 ,抽搐症状)等 ,因此民间又称其
为惊药 、尖惊药 ,尤以治疗临床原因不明 ,其它药物
无效的高热效果特佳 。九头狮子草的解热作用与其
抗菌作用有密切关系。本实验结果表明 ,各细菌体
积显著增大 ,出现明显肿胀 ,细胞壁缺陷清晰可见。
前期研究工作中 ,我们使用 BH-2光学显微镜观察不
同药物浓度下细菌形态的变化 ,结果表明低浓度下 ,
部分细菌的形态已发生改变 ,随着药物浓度的增大 ,
发生形变的细菌数量增加 ,形变程度加剧 ,直至细菌
不能生长。药物浓度与其抑菌作用强度呈正相关。
同时 ,随着培养时间的延长 ,药物对细菌的作用增
强 ,从形态的微小变化到形成 L-型细菌 ,直至结构功
能的损坏 ,不能继续生长。由此确证九头狮子草的
抗菌作用机理在于它对细胞壁的作用。药物引起细
菌细胞壁缺损 ,细胞外液在渗透压的作用下进入菌
体 ,造成菌体肿胀 、溶解死亡。九头狮子草通过抑制
或杀灭作为发热激活物的病原微生物 ,从而抑制机
体内生致热原的产生而解热[ 7] 。同时 ,九头狮子草
具有增强机体的免疫功能作用 ,提高机体对致病性
细胞壁缺陷菌的抵抗能力而解热[ 8] 。
参考文献:
[ 1] 　江苏新医学院编.中药大辞典[ M] .上海:新华书店上海
发行所 , 1986.48-49.
[ 2] 　覃容贵 , 李淑芳.九头狮子草的抗菌作用研究[ J] .贵阳
医学院学报 , 2000 , 25(2):130-131.
[ 3] 　覃容贵 , 李淑芳 , 罗忠圣.九头狮子草对细菌形态结构
的影响[ J] .贵阳医学院学报 , 2004 , 29(1):58-60.
[ 4] 　范秀容 , 李广武 ,沈萍.微生物学实验[ M] .北京:高等教
育出版社(第 2版), 1990.263.
[ 5] 　上海市第六人民医院检验组编.快速检验诊断资料汇
编[ M] .北京:人民卫生出版社 , 1973.213-214.
[ 6] 　李影林.临床微生物学及检验[ M] .北京:人民卫生出版
社 , 1995.85.
[ 7] 　李楚杰.发热机制研究的新进展[ J] .中国病理生理学
杂志 , 1990 , 6(5):51-52.
[ 8] 　覃容贵 , 李淑芳 , 罗忠圣.九头狮子草对小鼠免疫功能
的影响[ J] .贵阳医学院学报 , 2003 , 28(5):405-406.
护肝素片对小鼠免疫功能的影响
苗明三 ,耿新生 ,张桂兰 ,苗艳艳
(河南中医学院 药学院 ,河南 郑州　450008)
　　摘要:目的:观察护肝素片对小鼠免疫功能的影响。方法:用正常小鼠作为实验动物。 结果:护肝素片能显著提高小鼠腹
腔巨噬细胞吞噬百分率和吞噬指数 ,促进溶血素和溶血空斑的形成和淋巴细胞的转换。结论:护肝素片有好的免疫兴奋作用。
关键词:护肝素片;免疫功能;巨噬细胞;溶血素
中图分类号:R285.5　　文献标识码:B　　文章编号:1005-9903(2005)01-0048-02
收稿日期:2003-12-16
基金项目:河南省高校杰出科研创新人才基金(2001KYCX001),
河南省杰出创新人才基金(0221001800)
通讯作者:苗明三 , Tel:(0371)6335421 , 13014535076,
E-mail:miaomingsan@yahoo.com.cn
　　护肝素片为临床用于酒精性肝损伤 、药物性肝
损伤及肝炎恢复期的医院制剂 ,主要有大枣 、黄芪 、
柴胡 、茵陈等药组成 ,具有益气健脾 、舒肝利胆之功 ,
具有好的保护肝脏 、促进肝损伤恢复的作用。为探
讨其作用特点 ,观察了护肝素片对小鼠免疫功能的
影响 。
1　试验材料
1.1　药品　护肝素片由河南中医学院一附院制剂
中心提供 ,批号 980108;香菇多糖片 ,江苏江阴制药
厂生产 ,批号 980211;PHA ,上海化学化验所生产 ,批
号 970806。
1.2　动物　小鼠 ,昆明种 ,雌雄各半 ,体重 18 ～ 21g ,
由河南省医学实验动物中心提供。
2　方法与结果
2.1　对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响　取小鼠
40只 ,体重 18 ～ 21g ,雌雄各半 ,随即均匀分为 4组 ,分
别灌服大 、小剂量的护肝素片混悬液 、香菇多糖片混
悬液及同体积生理盐水 ,每天给药 1次 ,给药量均为
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2005年 2 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol.11 , No.1
Feb., 2005