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生命科学仪器 2009 第7卷/ 5月刊
研究简报
杏香兔耳风(Ainsliaea fragrans Champ.)是菊科兔耳
风属植物，别名白走马胎，金边兔耳草，一枝香等，天
然分布于长江以南各省区，《江西省中药材标准》和
《卫生部药品标准》均有收载，具有清热补虚、凉血止
血、利湿解毒等功效，民间全草入药，用于治疗肺结
核咳血、跌打损伤、无名肿毒、慢性宫颈炎等[1]，主
要含有倍半萜内酯、倍半萜苷、甾体、黄酮、三萜类
等化学成分[2]。张锐等从杏香兔耳风中首次分离并鉴
定了绿原酸[3]，刘戈等从杏香兔耳风的全草中分离并
鉴定了槲皮素、木犀草素、芹菜素、小麦黄素、木犀
草素7-O-β-D-葡萄糖苷、槲皮素-5-O-β D-葡
萄糖苷等黄酮类化合物[4]。文献也报道了杏香兔耳风
及其制剂中绿原酸和总黄酮含量的测定方法[5-7]。药
理实验证明杏香兔耳风对金黄色葡萄球菌、乙型链球
菌等有抑制作用，能明显促进受损宫颈上皮组织的修
复，对创面有较强的收敛作用[8]，具有杀菌、抗炎、
止痛作用，其药用价值较高，属广谱抗菌中草药[9]。临
床上可治疗慢性宫颈炎、慢性盆腔炎、阴道炎等妇科
炎症疾病，能快速消除带下病的各种症状[10,11]。杏香
兔耳风虽分布广泛，天然资源丰富，但随着其药用价
值被广泛认识，原料药材使用量大量增加，致使野生
资源锐减[12]。目前，杏香兔耳风人工种植技术已获
成功。为了评价和比较两种不同来源杏香兔耳风药材
的质量，本实验建立高效液相色谱法同时测定了种植
及野生杏香兔耳风不同部位中绿原酸和芦丁的含量，
旨在为药材的GAP种植和资源开发利用提供实验依
据 。
1 仪器与试药
Waters高效液相色谱仪(515泵，2996光电二极
管矩阵检测器，7725I 进样阀，Empower 中文色谱工作
站)，RO-MB-10D高纯水机(杭州永洁达膜分离设备
厂)，CP225D分析天平(德国Sartorius公司)，KS-1500
超声提取仪器(宁波科盛仪器厂)。
甲醇(色谱纯，上海陆忠试剂厂)；乙醇(分析
纯，南昌洪都试剂化工厂)；绿原酸和芦丁对照品(中
国药品生物制品检定所，批号：110753-200212、
100081-200406，供含量测定用)。杏香兔耳风2007年
9月采自江西宜春市，经鉴定为杏香兔耳风Ainsliaea
fragrans Champ.的全草。
2 方法与结果
2.1色谱条件
流动相为甲醇(A)-水(B)，梯度洗脱程序见表1；
流速0.8 ml·min-1；检测波长350 nm；柱温25℃；
光电二极管阵列检测器(PAD)。 绿原酸和芦丁分离度均
大于2.0，对称因子分别为1.05和1.03，以绿原酸和芦
丁计理论塔板数分别为4829和14528。绿原酸和芦丁
对照品及杏香兔耳风样品的色谱见图1。
2.2对照品溶液的制备
精密称取减压干燥至恒重的绿原酸对照品2.15 mg
RP-HPLC梯度洗脱法测定杏香兔耳风
不同部位中绿原酸和芦丁的含量
邹盛勤
（江西省天然药物活性成分研究重点实验室，宜春学院化学与生物工程学院，江西宜春，336000）
摘要 目的：建立高效液相色谱法同时测定杏香兔耳风不同部位中绿原酸和芦丁的含量。方法：采用Kromasil C18
柱(4.6 mm×250 mm，5 μm)，以甲醇-水为流动相，梯度洗脱程序为0 min (25:75)-13 min (25:75)-14 min (45:55)-30
min (45:55)-40 min (75:25)；流速0.8 ml·min-1；检测波长350 nm；柱温25 ℃；光电二极管阵列检测器 (PAD)。
结果：绿原酸线性范围为0.430~3.870 μg，r= .9996，样品的平均加样回收率为98.9 ％ (RSD=1.7 ％)；芦丁线性范
围为0.252~2.268 μg，r=0.9995，样品的平均加样回收率为97.6 ％(RSD=2.3 %)。结论：方法快速简便，专属性强，
重复性好，可作为杏香兔耳风中绿原酸和芦丁的定量分析方法。
关键词 杏香兔耳风；高效液相色谱；光电二极管阵列检测器；梯度洗脱；绿原酸；芦丁
作者简介：邹盛勤(1970- )，男(汉族)，江西奉新人，副教授，主要从事天然药物成分提取与分析研究。
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和芦丁对照品1.26 mg，精密量取10 ml甲醇溶解于小
型针剂瓶中，配制成含绿原酸0.215 mg·ml-1和芦丁
0.126 mg·ml-1的对照品混合溶液，用0.45 μm微孔
滤膜过滤，即得。
表 1 梯度洗脱程序
时间（min） A（%） B（%） 流量（ml/min）
0 25 75 0.8
13 25 75 0.8
14 45 55 0.8
30 45 55 0.8
40 25 75 0.8
A. 绿原酸和芦丁对照品；B. 杏香兔耳风样品
1. 绿原酸；2. 芦丁
图1 对照品和样品HPLC色谱
2.3杏香兔耳风样品溶液的制备
将各样品的根、叶、柄分离，于80℃干燥10h
后分别粉碎。过20目筛，精密称取约4g，置具塞三
角烧瓶中，加95%乙醇40 ml，放置30min，加H2O
10ml，35℃超声提取90min，滤过，滤液置于50 ml
量瓶中，用95%乙醇冲洗残渣，合并滤液至刻度，
摇匀，0.45μm滤膜过滤，即得。
2.4测定波长的选择
采用PAD检测器进行三维扫描，提取绿原酸和芦
丁对照品在流动相中的紫外光谱图（图2），流动相中
绿原酸最大吸收波长分别为218.6 nm和328.7 nm，芦
丁最大吸收波长分别为204.5 nm、256.3 nm和356.2 nm。
提取各波长下色谱进行比较，选择350 nm作为检测波
长，保证了低含量组分芦丁有较高的信噪比，且基线
平稳，峰形对称。
图2 绿原酸和芦丁紫外光谱
2.5线性关系
分别精密吸取对照品混合溶液2.0μl、6.0μl、
10.0μl、14.0μl、18.0μl进样，按上述色谱条件
测定峰面积，以对照品的进样量(μg)为横坐标，以峰
面积(μv·s)为纵坐标，进行线性拟合，绿原酸的回
归方程为：Y =1.69×106X+2.00×104 (r=0.9996) ，芦
丁的回归方程为：Y =2.16×10-6X-3.07×104 (r=0.9995)。
表明当绿原酸进样量在0. 43~3.87 μg，芦丁进样量在
0.252~2.268 μg范围内线性关系良好。
2.6精密度实验
取对照品混合溶液重复进样5次，进样量10μl，
以峰面积积分值计算，绿原酸峰面积RSD为0.3 %，
芦丁峰面积RSD为0.2 %。表明仪器精密度良好。
2.7重复性实验
取同一批杏香兔耳风样品，精密称取5份，制
备样品溶液，进样10μl，按外标法计算含量。绿
原酸含量RSD为1.2 %，芦丁含量RSD为2.3 %。
2.8回收率实验
精密称定已知绿原酸和芦丁含量的同一批杏香兔
耳风样品6份，每份约2 g，按高、中、低三种浓
度加入适量对照品，制备样品溶液，测定加样样品
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中两组分含量。绿原酸和芦丁的平均加样回收率分别
为98.9 ％(RSD 1.7 ％)和97.6 ％(RSD 2.3 %)。
2.9样品测定
按“2.3”所述方法制备样品溶液，注入高效
液相色谱仪，平行3次，测定杏香兔耳风样品中绿原
酸和芦丁的峰面积，按外标法计算含量。样品测定结
果见表2。
表2 野生和种植杏香兔耳风样品中绿原酸和芦丁测定结果(n=3)
编号 来源 部位 绿原酸（%） 芦丁（%）
1 野生 根 0.370 0.016
2 含柄叶 1.192 0.246
3 无柄叶 0.164 0.032
4 种植 根 0.210 0.014
5 含柄叶 0.180 0.038
6 无柄叶 0.415 0.047
3 讨论
3.1 测定结果表明，野生杏香兔耳风中绿原酸的含量
含柄叶>根>无柄叶，芦丁的含量含柄叶>无柄叶>根；
种植杏香兔耳风中绿原酸的含量无柄叶>根>含柄叶，
芦丁的含量无柄叶>含柄叶>根。不同来源的杏香兔耳
风中，野生样本根、含柄叶中绿原酸和芦丁的含量均
高于种植样本，但野生无柄叶中2种成分的含量均低
于种植无柄叶。这可能是由于野生杏香兔耳风叶柄中
绿原酸和芦丁的含量要大大高于种植杏香兔耳风样本，
其原因有待进一步研究证实。
3.2 采用高效液相色谱-光电二极管检测器法定量分
Determination of Rutin and Chlorogenic Acid in Different Parts of
Ainsliaea Fragrans by HPLC with Gradient Elution
Shengqin Zou
（Key Laboratory of Jiangxi Province for Research on Active Ingredients in Natural Medicines, College of
Chemistry and Bioengineering, Yichun University, Yichun, 336000, China）
Abstract　Objective: To establish a method for simultaneous determination of chlorogenic acid and rutin in different parts of Ainslia a
fragrans. Method: A Kromasil C18 (4.6 mm×250 mm, 5μm) column was used with a mobile phase consisted of phase A (methanol)-
phase B (water) in gradient elution 0 min (25:75)-13min (25:75)-14min (45:55)-30 min (45:55)-40 min (25:75) by flow rate of 0.8 ml?
min-1 in this method, the detection wavelength was set at 350 nm and the column temperature was 25 ℃. Photodiode array detector was
used. Result: The calibration curve was linear at a range of 0.430~3.870 μg for chlorogenic cid (r=0.9996) The average recovery was
98.9 ％ and RSD was 1.7 ％(n=6).The calibration curve was linear at a range of 0.252~2.268 μg for rutin (r=0.9995). The average
recovery was 97.6 ％ and RSD was 2.3 ％(n=6). Conclusions: This method is rapid, simple and reproducible. It can be used as a quality
control method for rutin and chlorogenic acid in Ainsli ea frag ans.
Key words　Ain liaea fragrans；HPLC；PAD；Gradient elution；Chlorogenic acid；Rutin
析时可在以色谱峰保留时间定性的基础上，同步检测
组分的紫外光谱和分析组分峰的纯度，增强了色谱方
法的定性能力，保证了定量方法的准确性和可靠性。
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