全 文 ：化学与生物工程 2007 , Vol. 24 No. 10　Chemist ry &Bioengineering 75　
收稿日期:2007 - 06 - 22
作者简介:尹德忠(1973 -),男 ,江西永丰人 , 硕士 ,讲师 , 主要从事仪器分析的教学与科研工作。 E-mail:Dezh_ yin@126. com。
HPLC同时测定胡黄连中香草酸 、阿魏酸和肉桂酸
尹德忠1 ,赵红侠2 ,刘建勋1
(1. 西北工业大学理学院 ,陕西 西安 710072;2.陕西诚信制药有限公司 ,陕西 渭南 715200)
　　摘　要:建立了一种采用 Shim-pack C18-ODS 柱 ,以乙腈 - 0. 05%磷酸溶液(13∶87)为流动相 ,检测波长为 290 nm ,
同时测定胡黄连中三种苷元有机酸的反相高效液相色谱方法。香草酸 、阿魏酸和肉桂酸的线性范围分别为 14. 0 ～
210. 0 ng(R=0. 9996)、52. 0～ 520. 0 ng(R=0. 9995)和 6. 0～ 90. 0 ng(R=0. 9993),平均回收率分别为96. 6%、98. 9%和
97. 4%。
关键词:高效液相色谱;胡黄连;香草酸;阿魏酸;肉桂酸
中图分类号:O 657. 7　R 284. 1　　　　文献标识码:A　　　　文章编号:1672 - 5425(2007)10 - 0075 - 02
　　胡黄连为玄参科植物胡黄连的根茎[ 1] ,为我国传
统中药之一 ,具有保肝利胆 、抗炎 、抗真菌等药理作用 ,
其主要活性成分为环烯醚萜苷类 ,以胡黄连苷 Ⅰ 、胡黄
连苷 Ⅱ、胡黄连苷Ⅲ为主[ 2 , 3] ,结构中分别含有香草酰
基 、阿魏酰基和桂皮酰基 ,水解产物分别为香草酸 、阿
魏酸和肉桂酸。胡黄连中有机酸的测定方法主要有薄
层色谱法[ 4] 、毛细管电泳法[ 5 , 6] 和高效液相色谱法[ 7] 。
作者采用液相色谱中最常用的 C18化学键合色谱法同
时测定三种有机酸的含量 ,方法简便 、快速 、准确 ,实用
性强 。
1　实验
1. 1　仪器 、试药和样品
L2000型高效液相色谱仪 ,紫外可见检测器 ,N2000
色谱工作站;UV-2550型紫外可见分光光度计;Sartrius
BP211D型电子天平;SB3200-T 型超声清洗器。
香草酸 、阿魏酸和肉桂酸对照品 ,中国药品生物制
品检定所;胡黄连药材 ,购自西安某药房;乙睛为色谱
纯 ,超纯水 ,其它试剂均为分析纯。
1. 2　色谱条件
色谱柱:Shim-pack C18-ODS 色谱柱(250 mm ×
4. 6 mm , 5μm);流动相:乙腈 - 0. 05%磷酸溶液(13
∶87);流速:1. 0 mL min - 1 :检测波长:290 nm 。
1. 3　对照品溶液
精密称取香草酸 、阿魏酸和肉桂酸对照品适量 ,加
甲醇配制成浓度分别为 12. 0 μg mL -1 、58. 4 μg
mL
- 1和 24.6 μg mL - 1的贮备溶液。精密移取此贮备
溶液适量 ,置棕色量瓶中 ,加甲醇配制成对照品系列溶
液。
1. 4　供试品溶液
取药材适量 ,粉碎过 100目筛 ,称取 0. 5 g ,精密称
定 ,置具塞锥形瓶中 ,精密加甲醇 50 mL ,称重 ,放置过
夜 ,超声 1 h ,再称重 ,用甲醇补足损失的质量 ,摇匀 ,
滤过 ,精密量取续滤液 10 mL ,水浴蒸干。残渣用 0. 5
mol L -1氢氧化钠溶液 30 mL 分 3次溶解 ,转移入回
流烧瓶中 ,水浴回流 2 h ,放冷 。移入分液漏斗中 ,用 5
mL 水洗涤烧瓶 , 洗涤液并入分液漏斗中 ,用盐酸调
pH =2 ,用乙醚萃取 4次 ,每次 20 mL ,合并乙醚液 ,在
50 ～ 60℃水浴上蒸至近干 ,用甲醇溶解至 10 mL ,滤
过 ,滤液作为供试品溶液 。
2　结果与讨论
2. 1　水解条件
分别以 0. 5 mol L - 1 NaOH 溶液和 0. 5 mol
L
-1硫酸溶液水解 2 h ,结果碱水解时三种酸的总含量
高于酸水解。用 0. 5 mo l L - 1 NaOH 溶液延长水解
时间至 4 h ,阿魏酸含量略有下降 ,三种酸的总含量无
明显变化 ,故确定水解溶液为 0. 5 mol L - 1 NaOH 溶
液 、水解时间为 3 h 。
2. 2　检测波长的确定
以甲醇为参比 ,扫描三种对照品溶液的紫外吸收
光谱 ,结果香草酸在 215 nm 、260 nm 和 290 nm处 ,阿
魏酸在 215 nm 、260 nm 和 313 nm 处 ,肉桂酸在 219
nm 和 280 nm 处有最大吸收。兼顾三者 ,选取 290 nm
作为样品的测定波长 。
2. 3　线性关系
尹德忠等:HPLC同时测定胡黄连中香草酸 、阿魏酸和肉桂酸 /2007 年第 10 期76　
取对照品系列溶液分别精密进样 10 μL ,将峰面
积Y 与进样量X 进行回归 ,线性方程和线性范围测定
结果分别为:香草酸Y =24 368X - 1214(R=0. 9996)
和 14. 0 ～ 210. 0 ng ;阿魏酸 Y =46 572X +6732(R =
0. 9995)和 52. 0 ～ 520. 0 ng;肉桂酸 Y =75 431X +
4370(R=0. 9993)和 6. 0 ～ 90. 0 ng 。
2. 4　回收率
精密称取胡黄连干燥粉末 6份 ,分成 3组 ,分别精
密加入香草酸 、阿魏酸和肉桂酸对照品贮备溶液 8 mL 、
10 mL和 12 mL ,并补加甲醇至 50 mL ,按1. 4方法制备
供试品溶液 ,进样测定总量 ,计算回收率 。结果香草酸 、
阿魏酸和肉桂酸的平均回收率分别为 96. 6%、98. 9%和
97.4%,RSD分别为1.25%、1. 56%和 1. 49%。
2. 5　样品测定
分别测定了胡黄连药材的三种有机酸含量 ,结果
见表 1 ,色谱图见图 1。
表 1　 样品测定结果(n=5)
Tab. 1　 Determination results of sample(n=5)
有机酸 含量 /m g g - 1 RSD/%
香草酸 0. 74 1. 26
阿魏酸 2. 21 1. 54
肉桂酸 1. 65 1. 33
a.香草酸　 b.阿魏酸 　c.肉桂酸
图 1　对照品(A)和样品(B)的 HPLC色谱图
Fig. 1　HPLC of standard substance(A) and sample(B)
3　结论
采用反相高效液相色谱技术测定胡黄连中三种有
机酸的含量 ,结果表明 ,香草酸 、阿魏酸和肉桂酸的线
性范围分别为 14. 0 ～ 210. 0 ng(R=0. 9996)、52. 0 ～
520. 0 ng(R=0. 9995)和 6. 0 ～ 90. 0 ng(R =0. 9993),
平均回收率分别为 96. 6%、98. 9%和 97. 4%。
参考文献:
[ 1] 　中华人民共和国卫生部药典委员会.中华人民共和国药典(一部)
[ M ] .北京:化学工业出版社 , 2005:167.
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阿魏酸的含量[ J] .分析测试学报 , 2003 , 22(6):95-97.
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和香草酸[ J] .化学工程师 , 2005 ,(10):25-27.
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量测定[ J] .中药材 , 2002 , 25(12):881-882.
Simultaneous Determination of Vanillic Acid , Ferulic Acid and
Cinnamic Acid in Picrohiza Scrophularii f lora Pennell by HPLC
YIN De-zhong1 , ZHAO Hong-xia2 , LIU Jian-xun1
(1. School o f S ciences , Northwestern Poly technical Universi ty , X ian 710072 ,China;
2. S hanx i Cheng xin Pharmaceutical Co. Ltd. ,Weinan 715200 ,China)
Abstract:The simul taneous determination o f vanillic acid , ferulic acid and cinnamic acid in P icrohiza scro-
phularii f lora Pennell by RP-HPLC method w as repo rted in this paper. T he HPLC separation w as performed
on a Shim-pack C18-ODS column(250 mm×4. 6 mm ,5μm)w ith mobi le phase of acetonit rile-0. 05%pho spho ric
acid (13∶87) and detected at w aveleng th 290 nm. The calibration curv e w as linear in the range of 14. 0 ～ 210. 0
ng for vanillic acid(R=0. 9996), 52. 0 ～ 520. 0 ng for ferulic acid(R =0. 9995)and 6. 0 ～ 90. 0 ng fo r cinnamic
acid(R =0. 9993). The average recove ry of v anillic acid , ferulic acid and cinnamic acid w as 96. 6%,98. 9% and
97. 4%, respectively. The method was accurate w ith a good reproducibili ty .
Keywords:HPLC;Picrohiz a scrophularii f lora Pennell;vani llic acid;ferulic acid;cinnamic acid