全 文 ：仲恺农业工程学院学报 , 22(1):17 ～ 19, 2009
JournalofZhongkaiUniversityofAgricultureandEngineering
文章编号:1674-5663(2009)01-0017-03
　
收稿日期:2008-12-07
基金项目:广东省科技计划农业攻关(2006B20201045)资助项目.
作者简介:赖志勇(1976-), 男 , 广东普宁人 , 农艺师.　　＊通讯作者:E-mail:wang999983@126.com.
RP-HPLC法测定青果鲜果肉中的没食子酸含量
赖志勇 1 , 夏有杰2 , 肖维强 3 , 戴宏芬3 , 黄炳雄 3 , 王晓容3＊
(1.普宁市农业科学研究所 , 广东 普宁 515344;2.湖北省通山县农业局 , 湖北 通山 437600;
3.广东省农业科学院 果树研究所 , 广东 广州 510640)
摘要:在色谱柱为 NucleosilC18反相柱 (250 mm×4 mm), 流动相 A为体积分数 20%的甲醇 , 流动相 B为体积
分数 30%的乙腈 , A和 B流动相用体积分数 50%的磷酸调 pH至 3.2±0.05, 流动相 C为乙腈 , 三元梯度洗脱 ,
流速 0.8 ～ 1 mL/min, 柱温 35 ℃, 分析波长 272nm条件下 , 应用反相高效液相色谱法测定了广东产 15个品种
青果鲜果肉中的没食子酸含量.结果表明 , 没食子酸线性范围为 0.390 6 ～ 25.000 0 μg/mL, 标准曲线 y=
62.662x-16.805, 相关系数 R2 =0.999 6.标准品保留时间和峰面积的相对标准偏差分别为 1.761 4%和 2.773 6%.
标准品回收率平均数为 99.09%(n=5), 回收率相对标准偏差为 3.298%.15个品种青果果肉中均含有没食子
酸 , 含量在 57.958 4 ～ 230.737 3μg/g鲜质量之间 , 以土纳甜种品种的含量最高 , 香种含量最少 , 相对标准偏差
为 0.060% ～ 1.938%.
关键词:反相 HPLC;青果;没食子酸
中图分类号:O657.7+2;TS201.2　　　　　文献标识码:A
DeterminationofgalicacidcontentinChineseolivefleshbyRP-HPLC
LAIZhi-yong1 , XIAYou-jie2 , XIAOWei-qiang3 , DAIHong-fen3 , HUANGBing-xiong3 , WANGXiao-rong3＊
(1.PuningInstituteofAgriculturalSciences, Puning515344, China;2.BureauofAgricultureofTongshanCounty,
Tongshan437600, China;3.InstituteofFruit, GuangdongAcademyofAgriculturalSciences, Guangzhou510640, China)
Abstract:Areverse-phasehigh-performanceliquidchromatography(RP-HPLC)methodwasusedfor
measuringgalicacidcontentinfleshof15Chineseolivesvarieties.Sampleswereinjectedontoreversed-
phaseNucleosilC18column(250 mm×4 mmi.d.).MobilephaseAandBwere20% methanoland
30% acetonitrilerespectively.BothofthemwereadjustedtopH3.2 with50% phosphoricacid.Acetoni-
trilewassetasmobileC.Triplegradientelutionproceededattheflowrate0.8～1 mL/min.Operation
conditionswereasfolows:columntemperature35 ℃, detectionat280 nmofwavelength.Theresults
showedthatlinearcalibrationofgalicacidwaswithin0.390 6～25.000 0μg/mLwithcorelation(r)of
0.999 6.Regressionequationwasacquiredasy=62.662x-16.805.Relativestandarddeviation(RSD)
ofretainedtimeandpeakareaofstandardsamplewererespectively1.761 4%and2.773 6%.Average
recoveryofstandardsamplewas99.09% (n=5)withRSDof3.298%.Galicacidwasdetectedinal
olivesampleswiththecontentwithin57.958 4 ～230.737 3 μg/gfreshmass(FM).Accordingtothe
contentofgalicacid, therichestvarietywasTunatianzhongwhiletheleastwasXiangzhongwithRSDof
0.060%～1.938% .
Keywords:RP-HPLC;Chineseolive;galicacid
　　橄榄 [ Canariumalbum(Lour.)Raeusch] 为橄榄科 (Burseraceae)橄榄属 (Canarium)常绿乔木 ,
是著名的热带 、 亚热带特产果树.橄榄果实又名青果 , 为药食兼用型水果 , 是我国传统中药材之一 , 其味
甘 、涩 、酸 , 性平或寒[ 1] , 具有清热 、 利咽 、 袪痰 、 生津 、 健脾 、 解毒等功效 , 适用于治疗咽喉肿痛 、
咳嗽 、 烦渴 、鱼鳖中毒等症[ 2] .酚类物质是青果的重要药效成分 , 主要集中在果肉中 , 以没食子酸为主 ,
它们与青果的苦涩味以及药理作用密切相关[ 2] .过去常采用薄层扫描法测定青果中没食子酸的含量 [ 3] ,
近年来已逐步应用高效液相色谱 (HPLC)法来分离 、 测定样品中的没食子酸含量 [ 4-6] .我国是世界上橄
榄栽培最多的国家 , 广东省橄榄栽培面积和产量均居全国首位 , 品种资源丰富.关于广东省橄榄品种资源
的栽培特性和理化性状已有较为详尽的报道 [ 7] , 但未涉及没食子酸的含量和比较.作者应用 RP-HPLC法 ,
测定了 15种青果鲜果肉中的没食子酸的含量 , 希望能够为相关研究和应用提供参考.
1　材料和方法
1.1　标准品
没食子酸 (Galicacid)标准品购自中国药品生物制品检定所.
1.2　仪器
Agilent1100型高效液相色谱仪 , 带 Agilent化学工作站和 VWD检测器 、手动进样器 、 20 μL定量管 ,
美国 Agilent公司生产.
1.3　试剂
甲醇 、 乙腈 , 色谱级 , 美国 Fisher公司产品.实验用水为超纯水.其余试剂均为国产分析纯.
1.4　色谱条件
色谱柱为 NucleosilC18反相柱 (250 mm×4 mm), 流动相 A为体积分数 20%的甲醇 , 流动相 B为体
积分数 30%的乙腈 , A和 B流动相用体积分数 50%的磷酸调 pH至 3.2±0.05, 流动相 C为乙腈 , 三元梯
度洗脱 , 起始流速 0.8mL/min.梯度洗脱顺序是:10%B/6min、 40%B+40%C/1min(流速 1mL/min)、
100%C/1min(流速 1 mL/min)、 100%C/4 min(流速 1 mL/min)、 50%B+20%C/ 2 min(流速 1 mL/
min)、 20%B/2 min(流速 1mL/min)、 10%B/2min;柱温 35 ℃.分析波长为 272 nm.
1.5　标准曲线的制作
将没食子酸标准品配制成最高含量为 50 μg/mL的标准液 , 用甲醇溶解 , 用体积分数 50%的甲醇定
容 , 将标准溶液按 2倍稀释 , 分别稀释成 2、 4、 8、 16、 32和 64倍 , 取上述系列标准品各 2 mL于 10 mL
容量瓶中 , 各加入体积分数 5%的 H2SO4 5 mL, 于 70℃水浴中提取 40 min, 蒸馏水定容 , 2倍体积的乙酸
乙酯提取 , 取乙酸乙酯相按上述色谱条件进样分析.根据标准品的浓度和峰面积 , 经 Excel计算 , 得线性
回归方程和相关系数 (R2).
1.6　精密度及样品稳定性试验
选择标准品的一个浓度 , 连续 5次进样 , 并在 0 ～ 48 h内多次进样 , 选 0、 1、 2、 4、 9、 12、 24、 36
和 48h共 9个时间点的分析结果 , 计算标准品峰面积和保留时间的相对标准偏差 (RSD).
1.7　样品处理及分析
采自广东普宁 、 汕头等地的赤钟仔 、 冬节圆 、 长穗赤 、 香种 、土纳甜种 、 八枝香 、 咁种 、 正纳种 、 红
心榄 、 东孙种 、 流黄种 、一枝香 、豆仁种 、白鸡心和小鸡心种等 15个品种的青果鲜果 , 各取 10粒以上 ,
将果肉磨碎 , 称 2 g(精确到 0.01g)于 25mL容量瓶中 , 加体积分数 5%的 H2SO4 12.5 mL, 于 70 ℃水
浴中提取 40 min, 然后超声波提取 2次 , 每次 20 min, 蒸馏水定容 , 2倍体积的乙酸乙酯提取 , 取乙酸乙
酯相经 0.5μm的微孔膜过滤进样.以上各样品均重复 3次.
1.8　数据处理
试验结果先由 Agilent化学工作站积分处理 , 根据峰面积计算各样品中没食子酸的含量 , 然后用 SAS
软件进行差异显著性分析.
1.9　准确度试验
参照戴宏芬等[ 8]的方法 , 选取任一品种的新鲜青果 , 称 2 g(精确到 0.01 g)果肉于 25 mL容量瓶
中 , 加入已知浓度的标准品 , 以不加标准品作参照 , 用上述样品处理中同样的方法处理和测定 , 重复 5
次 , 计算回收率和回收率的相对标准偏差.
18 仲恺农业工程学院学报 第 22卷
图 1　没食子酸标准品色谱图 (含量 6.25 μg/mL)
Fig1　HPLCdiagramofstandardgalicacid(6.25μg/mL)
表 1　15品种青果的果肉中没食子酸含量和相对标准偏差
Table1　ContentofgalicacidandRSDinfleshoffifteenChineseolivesvarieties
品种名称 Variety 含量 Content/(ug/gFreshmass) RSD%
赤钟仔 Chizhongzi 96.126 2f＊ 0.463
冬节圆 Dongjieyuan 65.671 8j 1.004
长穗赤 Changsuichi 107.616 4e 1.469
香种 Xiangzhong 57.958 4l 1.650
土纳甜种 Tunatianzhong 230.737 3a 0.508
八枝香 Bazhixiang 60.737 9k 1.477
咁种 Ganzhong 74.861 3i 1.093
正纳种 Zhengnazhong 121.247 7d 0.909
红心榄 Hongxinlan 132.870 9b 1.045
东孙种 Dongsunzhong 76.763 0h 1.436
流黄种 Liuhuangzhong 73.478 2i 0.643
一枝香 Yizhixiang 109.238 9e 0.840
豆仁种 Dourenzhong 66.110 6j 0.060
白鸡心 Baijixin 127.937 0c 1.175
小鸡心种 Xiaojixinzhong 92.602 0g 1.938
　　＊同一列中不同字母者表示在 P<0.05水平上差异显著.Diferentletersinthe
　　samecolumnindicatedthesignificantdifferenceat0.05level.
图 2　土纳甜种青果中的没食子酸 HPLC图
　　Fig2　HPLCdiagramofgallicacidinfleshofTunazhongChineseOlive
2　结果与分析
2.1　混合标准品的分析
6.25μg/mL的没食子酸标准品在所选
定的色谱条件下得到了良好的分离 , 保留
时间为 5.651 min(图 1).
2.2　标准曲线
根据仪器分析结果 , 标准品没食子酸
的回归方程及相关系数 (R2)分别为:y=
62.662x-16.805, R2 =0.999 6, 标准品在
所选定的检测条件下和浓度范围内 (0.390 6
～ 25.000 0μg/mL), 线性关系良好.
2.3　精密度及标准品稳定性试验
取没食子酸标准品的一个浓度 , 连续 5
次进样 , 其保留时间和峰面积相对标准偏
差为 0.109 4%和 0.743 8%;在 48 h内 9
次进样 , 保留时间和峰面积的相对标准偏
差为 1.761 4%和 2.773 6%, 结果说明仪器
稳定且精密度高 , 标准品在 48h内稳定.
2.4　15种青果果肉中的没食子酸含量
15种青果样品中均含有没食子酸 , 其
中以土纳甜种含量最高 , 达 230 μg/g鲜质
量以上 , 各品种之间没食子酸的含量存在
显著差异 (表 1).在所选定的色谱条件下 ,
样品中的没食子酸可与杂质分开 , 保留时
间为 5.645 min(图 2).
2.5　准确度试验 (标准品回收试验)
在所选择的分析条件下 , 没食子酸标
准品回收率平均数为 99.09% (n=5, 范围
95.26% ～ 103.54%), 回收率相对标准偏
差为 3.298%.结果说明分析条件能满足试
验要求 , 方法稳定 , 试验结果可靠.
3　讨论
试验中关键步骤是果肉中没食子酸含
量的提取.本试验参照谌立巍等 [ 9] 的方法
加以改进 , 明确了提取温度为 70 ℃, 时间
为 40min, 然后超声波提取 2次 , 更有利于
从果肉中提取没食子酸 , 同时 2倍体积乙酸
乙酯提取在同一容器内一次性完成 , 减少
了没食子酸的损失.因此 , 本试验建立的没食子酸含量 RP-HPLC测定和样品的提取方法 , 有效地排除了
其它成分对测定的干扰 , 精密度高 , 方法稳定可靠 , 可作为青果没食子酸质量控制的方法.
(下转第 32页)
19　第 1期 赖志勇 , 等:RP-HPLC法测定青果鲜果肉中的没食子酸含量
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【责任编辑　徐　妍】
(上接第 19页)
　　鲜果肉中没食子酸含量的差异 , 可以为青果的深加工和提高经济附加值提供有益的参考.没食子酸是
青果中的主要酚类化合物 , 与青果的苦涩味以及药理作用密切相关 [ 2] .在生产上 , 人们根据青果果实口
感的苦涩程度 、 单果重 、 果形指数等因素将青果分为鲜食 、 鲜食与加工兼用 、 加工品种.鲜食品种涩味中
等或较轻 , 回甜快 , 加工型品种味涩 , 有时酚类物质的外溢氧化会使果皮呈现出不规则红褐色裂纹 [ 7] .
本试验中的冬节圆 、 长穗赤 、 土纳甜种分别属于鲜食 、 鲜食与加工兼用 、加工优良品种[ 7] , 它们的没食
子酸含量依次为 65.671 8、 107.616 4和 230.737 3 μg/g鲜质量.如何合理开发青果资源 , 应依其不同特
性 , 将其用于鲜食 、 食品加工或药品加工 , 其中果肉中的没食子酸含量应是一个值得参考的因素.
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【责任编辑　冯元璋】
32 仲恺农业工程学院学报 第 22卷