全 文 ：绵马贯众的活性成分研究＊
刘　钊１，安熙强２，斯建勇１，曹　丽１，沈连钢１
（１．中国医学科学院北京协和医学院药用植物研究所，北京１００１９３；
２．新疆维吾尔自治区药物研究所食品检测研究室，新疆 乌鲁木齐８３０００４）
　　【摘要】　目的　研究绵马贯众的间苯三酚类活性成分，以确定其抗病毒的物质基础。方法　在文献报道的缓冲硅
胶柱层析法的基础上，对影响分离效果的三个主要因素进行反复量化试验，以探索快速分离、纯化间苯三酚类化合物的
优化方法。结果　应用此优化方法，从绵马贯众中分离得到５个化合物，其中４个为间苯三酚类化合物，用波谱学方法
分别鉴定为绵马酸ＡＢＡ（１）、绵马酸ＡＢＢ（２）、绵马酸ＡＢＰ（３）、东北贯众素ＡＢＢＡ（４）和二十五烷醇（５），其中（３）为从绵
马贯众中首次分离得到的单体化合物。结论　优化后的缓冲硅胶柱层析法分离效果好、样品回收率高，适用于绵马贯众
的间苯三酚类活性成分研究。
【关键词】　绵马贯众；抗病毒；间苯三酚；绵马酸ＡＢＰ
【中图分类号】　ＴＱ０５０．４＋２５　【文献标识码】　Ａ　【文章编号】　ＤＯＩ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｎ．１６７２－３５１１．２０１１．１２．００２
Ａｃｔｉｖｅ　ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ　ｏｆ　ｄｒｙｏｐｔｅｒｉｓ　ｃｒａｓｓｉｒｈｉｚｏｍａ　Ｎａｋａｉ
ＬＩＵ　Ｚｈａｏ１，ＡＮ　Ｘｉ－ｑｉａｎｇ２，ＳＩ　Ｊｉａｎｇ－ｙｏｎｇ１，ｅｔ　ａｌ
（１．Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｍｅｄｉｃｉｎａｌ　Ｐｌａｎｔ，Ｃｈｉｎｅｓｅ　Ａｃａｄｅｍｙ　ｏｆ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｓｃｉｅｎｃｅｓ，Ｂｅｉｊｉｎｇ　Ｕｎｉｏｎ　Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｃｏｌｌｅｇｅ，Ｂｅｉｊｉｎｇ１００１９３，Ｃｈｉｎａ；
２．Ｆｏｏｄ　Ｉｎｓｐｅｃｔｉｏｎ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｘｉｎｊｉａｎｇ　Ｉｎｓｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　Ｍｅｔｅｒｉａ　Ｍｅｄｉｃａ，Ｕｒｕｍｃｈｉ　８３０００４，Ｃｈｉｎａ）
　　【Ａｂｓｒｔａｃｔ】　Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　ｔｈｅ　ｐｈｌｏｒｏｇｌｕｃｉｎｏｌ　ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ　ｏｆ　ｄｒｙｏｐｔｅｒｉｓ　ｃｒａｓｓｉｒｈｉｚｏｍａ　Ｎａｋａｉ，ａｎｄ　ｄｅｔｅｒｍｉｎｅ
ｔｈｅｍ　ａｎｔｉ－ｖｉｒｕｓ　ｍａｔｅｒｉａｌ　ｂａｓｉｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｔｈｅ　ｑｕａｎｔｉｔａｔｉｖｅ　ｔｅｓｔｓ　ｏｎ　ｔｈｒｅｅ　ｍａｉｎ　ｆａｃｔｏｒｓ　ｗｈｉｃｈ　ａｆｆｅｃｔ　ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｂａｓｉｓ
ｏｆ　ｂｕｆｆｅｒｅｄ－ｓｉｌｉｃａ－ｇｅｌ－ｃｏｌｕｍｎ－ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　ｍｅｔｈｏｄ　ｗｅｒｅ　ａｐｐｌｉｅｄ　ｔｏ　ｆｉｎｄ　ａ　ｒａｐｉｄ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｐｕｒｉｆｉｃａｔｉｏｎ
ｏｆ　ｔｈｅ　ｐｈｌｏｒｏｇｌｕｃｉｎｏｌ　ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ　ａｔ　ｌａｓｔ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　 ５ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ　ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ　４ｐｈｌｏｒｏｇｌｕｃｉｎｏｌ　ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ　ｗｅｒｅ　ｓｅｐａｒａｔｅｄ
ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｒｈｉｚｏｍｅ　ｏｆ　Ｄｒｙｏｐｔｅｒｉｓ　Ｃｒａｓｓｉｒｈｉｚｏｍａ．Ｏｎ　ｔｈｅ　ｂａｓｉｓ　ｏｆ　ＮＭＲ　ａｎｄ　ＭＳ　ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｉｃ　ａｎａｌｙｓｅｓ，ｔｈｅｓｅ　ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ
ｗｅｒｅ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ　ａｓ　ｆｉｌｉｘｉｃ　ａｃｉｄ　ＡＢＡ（１），ｆｉｌｉｘｉｃ　ａｃｉｄ　ＡＢＢ（２），ｆｉｌｉｘｉｃ　ａｃｉｄ　ＡＢＰ（３），ｄｒｙｏｃｒａｓｓｉｎ　ＡＢＢＡ （４）ａｎｄ　ｐｅｎｔａｃｏ－
ｓａｎｏｌ（５）．Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ（３）ｗｅｒｅ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｆｒｏｍ　Ｄｒｙｏｐｔｅｒｉｓ　ｃｒａｓｓｉｒｈｉｚｏｍａ　Ｎａｋａｉ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｆｉｒｓｔ　ｔｉｍｅ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｔｈｅ　ｏｐｔｉ－
ｍｉｚｅｄ　ｂｕｆｆｅｒｅｄ－ｓｉｌｉｃａ－ｇｅｌ－ｃｏｌｕｍｎ－ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　ｍｅｔｈｏｄ　ｈａｓ　ａ　ｇｏｏｄ　ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｅｆｆｅｃｔ　ａｎｄ　ａ　ｈｉｇｈ　ｓａｍｐｌｅ　ｒｅｃｏｖｅｒｙ，ｗｈｉｃｈ
ｉｓ　ｓｕｉｔａｂｌｅ　ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　ｔｈｅ　ｐｈｌｏｒｏｇｌｕｃｉｎｏｌ　ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ　ｏｆ　Ｄｒｙｏｐｔｅｒｉｓ　ｃｒａｓｓｉｒｈｉｚｏｍａ　Ｎａｋａｉ．
【Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ】　Ｄｒｙｏｐｔｅｒｉｓ　ｃｒａｓｓｉｒｈｉｚｏｍａ　Ｎａｋａｉ；Ａｎｔｉｖｉｒａｌ；Ｐｈｌｏｒｏｇｌｕｃｉｎｏｌ；Ｆｉｌｉｘｉｃ　ａｃｉｄ　ＡＢＰ
　　基金项目：国家高技术研究发展计划（８６３计划）项目子课题（编号
２００６ＡＡ１０Ａ２０８－３－２）、国家重大传染病防治专项２００８ｚｘ１０００３－００６
通讯作者：斯建勇，研究员，研究方向：中药化学及中药新药；电话及
传真：０１０－５７８３３２９９；Ｅ－ｍａｉｌ：ｊｙｓｉ＠ｉｍｐｌａｄ．ａｃ．ｃｎ
　　贯众应用历史悠久，始载于《神农本草经》［１］，为
民间常用驱虫、抗感染药物。中国药典２０１０年版收
载的贯众品种是绵马贯众（Ｒｈｉｚｏｍａ　Ｄｒｙｏｐｔｅｒｉｓ　ｃｒａｓ－
ｓｉｒｈｉｚｏｍａ），为鳞毛蕨科鳞毛蕨属植物粗茎鳞毛蕨
（Ｄｒｙｏｐｔｅｒｉｓ　ｃｒａｓｓｉｒｈｉｚｏｍａ　Ｎａｋａｉ）的根茎及叶柄残基，
又名东北贯众，主产于吉林、黑龙江、辽宁、河北及甘
肃等地［２］，味苦，微寒，有小毒，具有清热解毒、驱虫、
止血等功效［３］。现代药理研究表明，绵马贯众有抗病
毒、抗菌、抗癌、止血等作用。为研究绵马贯众的抗病
毒作用，本文对其进行了活性部位筛选，发现其间苯
三酚部位有一定的抗病毒作用。间苯三酚类化合物
是绵马贯众的主要活性成分之一，但由于其结构不稳
定，易氧化、分解和聚合，致使此类化合物的分离纯化
难度较大。本文对文献报道的缓冲硅胶柱层析法进
行优化，对影响分离效果的三个主要因素进行反复量
化试验，最终探索出一个能快速分离纯化间苯三酚类
化合物的方法，获得预期效果，现报告于下。
１　材料与方法
１．１　仪器　熔点用Ｆｉｓｈｅｒ　Ｊｏｈｎｓ熔点仪测定；核磁共
振谱用Ｂｒｕｋｅｒ　ＡＶＡＮＣＥⅢ－６００核磁共振仪测定；质
谱用 ＡＢ　３２００ＱＴＲＡＰ质谱仪测定；上海亚荣 ＲＥ－
５２Ａ型旋转蒸发仪；三用紫外光仪（上海康华生化仪
·００３２· 西部医学２０１１年１２月 第２３卷第１２期　Ｍｅｄ　Ｊ　Ｗｅｓｔ　Ｃｈｉｎａ，Ｄｅｃｅｍｂｅｒ　２０１１，Ｖｏｌ．２３，Ｎｏ．１２
器制造厂）。
１．２　药材　绵马贯众 （Ｄｒｙｏｐｔｅｒｉｓ　ｃｒａｓｓｉｒｈｉｚｏｍａ　Ｎａ－
ｋａｉ）于２００６年９月采自辽宁省，由中国医学科学院药
用植物研究所林余霖副研究员鉴定，标本（编号
２００６０９０８２０）存放于药用物植物研究所标本馆。
１．３　试剂　乙醚、石油醚、正己烷、氯仿、乙酸乙酯、
丙酮、乙醇、甲醇、醋酸、无水柠檬酸、磷酸等均为分析
纯（北京化工厂）；无水磷酸氢二钠（北京粗求化工有
限责任公司）；青岛海洋化工厂生产硅胶１００～２００
目；薄层硅胶板：ＨＦ２５４普通和高效预制板为烟台市
化学工业研究所产品；Ｓｅｐｈａｄｅｘ　ＬＨ－２０（Ｐｈａｒｍａｃｉａ产
品）；缓冲硅胶的制备：７０ｍｌ的０．２ｍｏｌ／Ｌ　Ｎａ２ＨＰＯ４
·２Ｈ２Ｏ加３０ｍｌ的０．１ｍｏｌ／Ｌ柠檬酸配制成缓冲溶
液，３００ｇ薄层层析硅胶（３００目）和１００ｇ柱层析硅胶
（１００目）混合均匀制成混合硅胶，然后把缓冲溶液加
入到混合硅胶中，搅拌均匀后放入烘箱，１１０℃烘干２
小时即可。
１．４　方法　干燥绵马贯众药材２００ｇ，粉碎，用乙醚冷
浸提取３次，每次２４小时，合并滤液，回收乙醚，得到
乙醚浸膏１７ｇ。取适量乙醚浸膏点于载玻片上，喷洒
坚牢蓝ＢＢ盐显橙红色，证明其含有间苯三酚类化合
物。取乙醚浸膏上缓冲硅胶层析柱，用石油醚－正己
烷－乙酸乙酯－醋酸 （１９∶６∶１∶０．０１）～（１９∶１０∶５∶０．０１）
梯度洗脱，每５０ｍｌ收集一份，共收集３１份。进行薄
层层析检查，合并成分相似部分，Ｆｒ．３～５合并后
３３０ｍｇ，上缓冲硅胶柱层析，用正己烷－丙酮－乙醇－醋酸
（１８０∶２０∶０．０１∶０．０１）洗脱，得到绵马酸 ＡＢＡ（１）
１０ｍｇ、绵马酸ＡＢＢ（２）１２ｍｇ和二十五烷醇（５）１６ｍｇ；
Ｆｒ．６～７合并后３．６８ｇ，有浅黄色针晶析出，过滤得到
１８ｍｇ绵马酸ＡＢＰ（３）；Ｆｒ．９～１３合并后４．２ｇ，缓冲硅
胶柱层析，用正己烷－丙酮－乙醇－醋酸 （１２０∶２０∶０．０１∶
０．０１）洗脱，得到东北贯众素ＡＢＢＡ（４）１０ｍｇ。
２　结果
应用优化后的缓冲硅胶柱层析法从绵马贯众中
分离得到５个化合物，其中４个为间苯本酚类化合物，
通过波谱学方法分别鉴定为绵马酸 ＡＢＡ（１）、绵马酸
ＡＢＢ（２）、绵马酸ＡＢＰ（３）、东北贯众素ＡＢＢＡ（４）和二
十五烷醇（５），其中（３）为从绵马贯众中首次得到的单
体化合物。现将５个化合物的鉴定详述于下。
２．１　绵马酸ＡＢＢ（ｆｉｌｉｘｉｃ　ａｃｉｄ　ＡＢＢ）（１）　浅黄色针
状结晶（丙酮），坚牢蓝ＢＢ盐显橙红色。ＥＳＩ－ＭＳ　ｍ／
ｚ：６３９（Ｍ－Ｈ），４３１，４１７，４０３，２０９，１９５，推断出其分子
量是６４０，且符合间苯三酚类化合物的裂解规律［４］。１　Ｈ
ＮＭＲ （６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δＨ：１．００（６Ｈ，ｔ，２×－
ＣＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３ ）， １．７３ （４Ｈ， ｍ， ２ ×－
ＣＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３），３．２１（４Ｈ，ｍ，２×－ＣＯＣＨ２ＣＨ２
ＣＨ３），２．５９，２．７２（各３Ｈ，ｓ，－ＣＯＣＨ３），１．４３，１．５５（各
６Ｈ，ｓ，４×－ＣＨ３），３．５３，３．５７（４Ｈ，ｓ，２×－ＣＨ２－），在
９．６～１８．５之间有７个羟基峰，说明该化合物结构不
对称，推断其可能为１个绵马根酸环和２个绵马酚环
组成的三环间苯三酚类化合物，而且绵马酚环位于２
个绵马根酸环位之间，有１个乙酰基和２个丁酰基。１３
Ｃ　ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δＣ：２０８．３（Ｃ－１８），２０３．６（Ｃ－
１４，１４′），１９９．５（Ｃ－４，４′），１８７．８（Ｃ－２，２′），１７３．７（Ｃ－６，
６′），１６１．３（Ｃ－９），１１０．９（Ｃ－１，１′），１０８．７（Ｃ－３，３′），４６．１
（Ｃ－１９，１９′），４４．７（Ｃ－５，５′），２９．５（Ｃ－１５，１５′），２５．４（Ｃ－
１６，１６′），２４．３（Ｃ－１７，１７′），１８．２（Ｃ－２０，２０′），１７．５（Ｃ－
７，７′），１４．２（Ｃ－２１，２１′）。根据以上各种数据推测该化
合物为绵马酸ＡＢＢ，经与文献［５～７］对照各种波谱数据
一致，因此确定该化合物为绵马酸ＡＢＢ。
２．２　绵马酸ＡＢＰ（ｆｉｌｉｘｉｃ　ａｃｉｄ　ＡＢＰ）（２）　浅黄色结
晶性粉末（丙酮），坚牢蓝ＢＢ盐显橙红色。ＥＳＩ－ＭＳ
ｍ／ｚ：６２５（Ｍ－Ｈ），４０３，１９５，可以推断出其分子量是
６２６，且符合间苯三酚类化合物的裂解规律［４］。１　Ｈ
ＮＭＲ （６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３ ）δＨ：１．０２ （３Ｈ，ｔ，－
ＣＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３），１．７３（２Ｈ，ｍ，－ＣＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３），
３．２１（２Ｈ，ｍ，－ＣＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３），２．６０，２．７３（３Ｈ，ｓ，－
ＣＯＣＨ３），１．４３，１．５３（各６Ｈ，ｓ，４×－ＣＨ３），１．１９（３Ｈ，
ｔ，－ＣＯＣＨ２ＣＨ３），３．５２，３．５７（４Ｈ，ｓ，２×－ＣＨ２－），在
９．６－１８．５之间有７个羟基峰，说明该化合物结构不对
称，推断其可能为２个绵马根酸环和１个绵马酚环组
成的３环间苯三酚类化合物，而且绵马酚环位于２个
绵马根酸环之间，有１个乙酰基、１个丙酰基和１个丁
酰基。１３　Ｃ　ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δＣ：２０８．３（Ｃ－１８），
２０３．６（Ｃ－１４，１４′），１７２．９（Ｃ－６，６′），１６７．９（Ｃ－９），１１１．７
（Ｃ－１，１′），４６．１（Ｃ－１９），４４．７（Ｃ－５，５′），２９．５（Ｃ－１５，
１５′），２５．４（Ｃ－１６，１６′），２４．３（Ｃ－１７，１７′），１８．２（Ｃ－２０），
１７．５（Ｃ－７，７′），１４．２（Ｃ－２１）。根据以上各种数据推测
该化合物为绵马酸ＡＢＰ，经与文献［５，８，９］对照各种波谱
数据一致，因此确定该化合物为绵马酸ＡＢＰ。
２．３　绵马酸ＡＢＡ（ｆｉｌｉｘｉｃ　ａｃｉｄ　ＡＢＡ）（３）　浅黄色针
状结晶（丙酮），ｍｐ１６３～１６５℃，坚牢蓝ＢＢ盐显橙红
色。ＥＳＩ－ＭＳ　ｍ／ｚ：６１１（Ｍ－Ｈ），４１７，４０３，２０７，１９５，推
断出其分子量是６１２，且符合间苯三酚类化合物的裂
解规律［４］。１　Ｈ　ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δＨ：１．０２（３Ｈ，
ｔ，－ＣＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３ ）， １．７３ （２Ｈ， ｍ，－
ＣＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３），３．２１（２Ｈ，ｍ，－ＣＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３），
２．７３（６Ｈ，ｓ，２×－ＣＯＣＨ３），１．４３，１．５３（各６Ｈ，ｓ，４×－
ＣＨ３），３．５２，３．５７（４Ｈ，ｓ，２×－ＣＨ２），在９．６～１８．５之
间有７个羟基峰，推断该化合物为２个绵马根酸环和
·１０３２·西部医学２０１１年１２月 第２３卷第１２期　Ｍｅｄ　Ｊ　Ｗｅｓｔ　Ｃｈｉｎａ，Ｄｅｃｅｍｂｅｒ　２０１１，Ｖｏｌ．２３，Ｎｏ．１２
１个绵马酚环组成的３环间苯三酚类化合物，且结构
对称，即１个绵马酚环位于２个绵马根酸环之间，有２
个乙酰基和１个丁酰基。１３　Ｃ　ＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）
δＣ：２０８．３（Ｃ－１８），２０３．６（Ｃ－１４，１４′），１９８．９（Ｃ－４，４′），
１８８．４（Ｃ－２，２′），１７２．９（Ｃ－６，６′），１６０．９（Ｃ－９），１５９．９
（Ｃ－１１），１５８．９（Ｃ－１０，１３），１１１．５（Ｃ－１，１′），１０８．６（Ｃ－３，
３′），１０６．９（Ｃ－８，１２），４６．１（Ｃ－１９），４４．７（Ｃ－５，５′），２９．５
（Ｃ－１５，１５′），２５．４（Ｃ－１６，１６′），２４．３（Ｃ－１７，１７′），１８．２
（Ｃ－２０），１７．５（Ｃ－７，７′），１４．０（Ｃ－２１）。根据以上各种数
据推测该化合物为绵马酸 ＡＢＡ，经与文献［５，８，９］对照
各种波谱数据一致，因此确定该化合物为绵马酸
ＡＢＡ。
２．４　东北贯众素ＡＢＢＡ（ｄｒｙｏｃｒａｓｓｉｎ　ＡＢＢＡ ）（４）　
黄色片状结晶（丙酮），ｍｐ２０１～２０３℃，坚牢蓝ＢＢ盐
显橘红色。ＥＳＩ－ＭＳ　ｍ／ｚ：８１９（Ｍ－Ｈ），６１１，５９７，４０３，
９６，符合间苯三酚类化合物的裂解规律［４］，并可以推
断出其分子量是８２０。１　Ｈ　ＮＭＲ（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δＨ：
１．００（６Ｈ，ｔ，２×－ＣＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３），１．７３（４Ｈ，ｍ，２×－
ＣＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３ ）， ３．２０ （４Ｈ， ｍ， ２ ×－
ＣＯＣＨ２ＣＨ２ＣＨ３），２．７４（６Ｈ，ｓ，２×－ＣＯＣＨ３），１．４３，
１．５３（１２Ｈ，ｓ，４×－ＣＨ３），３．５４（４Ｈ，ｓ，２×－ＣＨ２－），３．８３
（２Ｈ，ｓ，－ＣＨ２－），且在９．６～１８．５之间有１０个羟基峰，
推断该化合物结构对称，为２个绵马根酸环和２个绵
马酚环组成的四环间苯三酚类化合物，即２个绵马酚
环位于２个绵马根酸环之间，有２个乙酰基和２个丁
酰基。１３ＣＮＭＲ（１５０ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δＣ：２０８．５（Ｃ－１９，
１９′），２０３．６（Ｃ－１５，１５′），１９９．４（Ｃ－３，３′），１８８．３（Ｃ－１，
１′），１７２．９（Ｃ－５，５′），１６０．７（Ｃ－９，９′），１５９．９（Ｃ－１１，
１１′），１５８．９（Ｃ－１０，１０′），１１１．４（Ｃ－６，６′），１０８．６（Ｃ－２，
２′），１０６．９（Ｃ－１２，１２′），１０５．９（Ｃ－８，８′），４６．２（Ｃ－２０，
２０′），４４．７（Ｃ－４，４′），２９．５（Ｃ－１６，１６′），２５．５（Ｃ－１７，
１７′），２４．３（Ｃ－１８，１８′），１８．１（Ｃ－２１，２１′），１７．５（Ｃ－７，
７′），１７．３（Ｃ－１４，１４′），１４．２（Ｃ－２２，２２′）。根据以上各
种数据，推测该化合物为东北贯众素 ＡＢＢＡ，经与文
献［８，１０，１１］对照，各种波谱数据一致，因此确定该化合物
为东北贯众素ＡＢＢＡ。
２．５　二十五烷醇（ｐｅｎｔａｃｏｓａｎｏｌ）（５）　白色圆片状结
晶（环己烷－氯仿），ｍｐ６９～７１℃。紫外无吸收，喷洒
１０％硫 酸 乙 醇 烘 烤 后 显 紫 红 色 斑 点。１　Ｈ　ＮＭＲ
（６００ＭＨｚ，ＣＤＣｌ３）δ：３．６４（２Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．５）为直接与轻
基相连的－ＣＨ２－，１．５７（２Ｈ，ｍ），１．２８（４４Ｈ，ｂｒ）为－
（ＣＨ２）２２－，０．８９（３Ｈ，ｔ，Ｊ＝６．７）为末端－ＣＨ３。１３　Ｃ
ＮＭＲ（ＣＤＣｌ３）δ：６３．１（Ｃ－ｌ）为直接与轻基相连的亚甲
基碳信号，３２．５（Ｃ－２），２５．７（Ｃ－３），３１．９（Ｃ－２３），２２．７
（Ｃ－２４），１４．１（Ｃ－２５），２９．７－２９．４（Ｃ４－Ｃ２２）。ＥＳＩ－ＭＳ
以上数据与文献［１２，１３］报道的二十五烷醇一致，综上所
述确定化合物为二十五烷醇（ｐｅｎｔａｃｏｓａｎｏｌ）。
３　讨论
间苯三酚类化合物是绵马贯众的主要活性成分
之一，近代医学证明其具有抗菌、抗流感病毒等作用，
但由于其结构不稳定，易氧化、分解和聚合，致使其分
离纯化难度较大，以致国内外对其研究报道较少。
国内文献报道，采用缓冲柱层析法对绵马贯众进
行化学成分研究，分离间苯三酚类化合物的效果得到
较大的改善，但效果仍然不是很理想［５］。文献报道的
缓冲硅胶制备方法：７０ｍｌ的０．２ｍｏｌ／Ｌ　Ｎａ２ＨＰＯ４·
２Ｈ２Ｏ加３０ｍｌ的０．１ｍｏｌ／Ｌ柠檬酸配制成缓冲溶液，
然后把缓冲溶液加入到３００ｇ薄层层析硅胶（３００目）
中，搅拌均匀后放入烘箱，１１０℃烘干２小时备用，再
用制成的缓冲硅胶装制缓冲硅胶柱。
笔者在实验中发现，按文献报道的方法装制层析
柱，柱体硅胶较为密实，洗脱剂流速小，分离时间过
长，各成分带在缓冲柱体中扩散，而致各成分带相互
交错重叠，分离效果不够理想，回收率低。故本文从
填料、洗脱剂流速和洗脱剂三个主要因素入手，对文
献报道的缓冲柱层析法进行了优化。
３．１　优化填料　在文献报道的缓冲硅胶中再加入一
定体积的层析柱硅胶（１００目），可以使洗脱剂流速增
大，能一定程度地改善分离效果。试验发现，在文献
报道的缓冲硅胶中再加入１／３体积的层析柱硅胶
（１００目）效果最佳。优化后的缓冲硅胶制备：７０ｍｌ的
０．２ｍｏｌ／Ｌ　Ｎａ２ＨＰＯ４·２Ｈ２Ｏ 加３０ｍｌ的０．１ｍｏｌ／Ｌ
柠檬酸配制成缓冲溶液，３００ｇ薄层层析硅胶（３００目）
和１００ｇ柱层析硅胶（１００目）混合均匀制成混合硅胶，
然后把缓冲溶液加入到混合硅胶中，搅拌均匀后放入
烘箱，１１０℃烘干２小时即可。
３．２　优化洗脱剂　试验发现，多元洗脱剂分离效果
较好，甲醇可以增加各成分带的分离度，醋酸可以使
各成分更集中，让各成分在层析柱中形成的色带更
窄；洗脱剂的极性通过改变正己烷、乙酸乙酯和醋酸
的比例来调节。经过反复的量化试验，得到分离效果
较好的多元洗脱剂：石油醚－正己烷－乙酸乙酯－醋酸
（１９∶６∶１∶０．０１）～（１９∶１０∶５∶０．０１）和正己烷－丙酮－乙
醇－醋酸 （１８０∶２０∶０．０１∶０．０１），但仍需要进一步优化。
３．３　优化洗脱剂流速　试验发现，适当地控制洗脱
剂的流速，可以改善分离效果。样品装入缓冲硅胶层
析柱后，先进行中低速洗脱，待各成分色带分开以后，
可适当加大洗脱剂流速，可以减小各成分带的扩散作
用，提升分离效果。
（下转第２３０６页）
·２０３２· 西部医学２０１１年１２月 第２３卷第１２期　Ｍｅｄ　Ｊ　Ｗｅｓｔ　Ｃｈｉｎａ，Ｄｅｃｅｍｂｅｒ　２０１１，Ｖｏｌ．２３，Ｎｏ．１２
ＣＤ３４、ＣＤ４５、ＣＤ９０、ＣＤ２９对ＢＭＳＣｓ进行鉴定，结合
细胞形态学观察证明分离培养的细胞为ＢＭＳＣｓ。
４　结论
本研究结果显示，在Ｐ３代培养细胞中，造血干细
胞标志性抗原ＣＤ４５极低（１．４１％），而ＢＭＳＣｓ标志
ＣＤ９０（９６．５％）高表达，提示反复贴壁筛选法代培养获
取的细胞非造血干细胞，是纯度高的ＢＭＳＣｓ。本实验
试图通过诱导分化后油红 Ｏ染色和茜素红染色反向
证明所培养的细胞为ＢＭＳＣｓ，结果显示，培养细胞经
诱导后可分化为成骨细胞和成脂细胞，进一步表明该
细胞群为具有多向分化潜能的干细胞，而不是骨髓内
的其他成熟细胞。但本实验结果仍不能说明其纯化
程度，因此有关干细胞表型标志物的探索和寻求仍是
干细胞组织工程的一个艰巨任务。
【参考文献】
［１］ Ｐｉｔｔｅｎｇｅｒ　ＭＦ，Ｍａｒｔｉｎ　ＢＪ．Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｓ　ａｎｄ　ｔｈｅｉｒ　ｐｏ－
ｔｅｎｔｉａｌ　ａｓ　ｃａｒｄｉａｃ　ｔｈｅｒａｐｅｕｔｉｃｓ［Ｊ］Ｃｉｒｃ　Ｒｅｓ，２００４，９５（１）：９－２０．
［２］ Ｓｅｋｉｙａ　Ｉ，Ｌａｒｓｏｎ　ＢＬ，Ｖｕｏｒｉｓｔｏ　ＪＴ，ｅｔ　ａｌ．Ａｄｉｐｏｇｅｎｉｃ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ
ｏｆ　ｈｕｍａｎ　ａｄｕｌｔ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｓ　ｆｒｏｍ　ｂｏｎｅ　ｍａｒｒｏｗ　ｓｔｒｏｍａ（ＢＭ－ＭＳＣｓ）
［Ｊ］．Ｊ　Ｂｏｎｅ　Ｍｉｎｅｒ　Ｒｅｓ，２００４，１９（２）：２５６－２６４．
［３］ Ｂｒｕｄｅｒ　ＳＰ，Ｆｉｎｋ　ＤＪ，Ｃａｐｌａｎ　ＡＬ．Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｓ　ｉｎ　ｂｏｎｅ
ｄｅｖｅｌｏｐｍｅｎｔ，ｂｏｎｅ　ｒｅｐａｉｒ　ａｎｄ　ｓｋｅｌｅｔａｌ　ｒｅｇｅｎｅｒａｔｉｏｎ　ｔｈｅｒｏｐｙ［Ｊ］．
Ｃｅｌ　Ｂｉｏｃｈｅｍ，１９９４，５６（３）：２８３．
［４］ Ｏｈｇｕｓｈｉ　Ｈ，Ｃａｐｌａｎ　ＡＩ．Ｓｔｅｍ　ｃｅｌ　ｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　ａｎｄ　ｂｉｏｃｅｒａｍｉｃｓ：ｆｒｏｍ
ｃｅｌ　ｔｏ　ｇｅｎｅ　ｅｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ［Ｊ］．Ｊ　Ｂｉｏｍｅｄ　Ｍａｔｅｒ　Ｒｅｓ，１９９９，４８（６）：
９１３－９２７．
［５］ Ｖａｑｕｅｒｏ　Ｊ，Ｚｕｒｉｔａ　Ｍ，Ｏｙａ　Ｓ，ｅｔ　ａｌ．Ｃｅｌ　ｔｈｅｒａｐｙ　ｕｓｉｎｇ　ｂｏｎｅ　ｍａｒ－
ｒｏｗｓ　Ｍｅｓｅｎｃｈｙｍａｌ　ｓｔｅｍ　ｃｅｌｓ　ｉｎ　ｃｈｒｏｎｉｃ　ｐａｒａｐｌｅｇｉｃ　ｒａｔｓ：ｓｙｓｔｅｍｉｃ
ｏｒ　ｌｏｃａｌ　ａｄｍｉｎｉｓｔｒａｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｎｅｕｒｏｓｃｉ　Ｌｅｔｔ，２００６，３９８（１）：１２９－１３４．
［６］ Ｓｃｈｏｕ　Ｍ，Ｄａ　１ｓｇａａｒｄ　Ｍ　Ｋ，Ｃ１ｅｍｍｅ　ｓｅｎ　０，ｅｔ　ａｌ．Ｇｕｓｔａｆｓ　ｓｏｎ　Ｆ，
Ｈｉｌｄｅｂｒａｎｄｔ　ＰＲ，Ｓｅｃｈｅｒ　ＮＨ．Ｋｉｄｎｅｙｓ　ｅｘｔ　ｒａｃｔ　ＢＮＰ　ａｎｄ　ＮＴ－ｐｒｏＢ－
ＮＰ　ｉｎ　ｈｅａ１ｔｈｙ　ｙｏｕｎｇ　ｍｅｎ［Ｊ］．Ａｐｐｌ　Ｐｈｙｓｉｏｌ，２００５，９９（５）：１６７６－
１６８０．
［７］ Ｃｈｅｎ　ＴＬ．Ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ｇｒｏｗｔｈ　ａｎｄ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔｉａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｏｓｔｅｏｐｒｏｇｅｎｉ－
ｔｏｒｓ　ｉｎ　ｍｏｕｓｅ　ｂｏｎｅ　ｍａｒｒｏｗ　ｓｔｒｏｍａｌ　ｃｅｌ　ｅｕｌｔｕｒｅｓ　ｂｙ　ｉｎｃｒｅａｓｅｄ　ｄｏ－
ｎｏｒ　ａｇｅ　ａｎｄ　ｇｌｕｃｏｃｏｒｔｉｃｏｉｄ　ｔｒｅａｔｍｅｎｔ［Ｊ］．Ｂｏｎｅ，２００４，３５（１）：８３－
９５．
［８］ Ｄｅ　Ｕｇａｒｔｅ　ＤＡ，Ａｌｆｏｎｓｏ　Ｚ，Ｚｕｋ　ＰＡ，ｅｔ　ａｌ．Ｄｉｆｅｒｅｎｔｉａｌ　ｅｘｐｒｅｓｓｉｏｎ　ｏｆ
ｓｔｅｍ　ｃｅｌｍｏｂｉｌｉｚａｔｉｏｎ　ａｓｓｏｃｉａｔｅｄ　ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ　ｏｎ　ｍｕｌｔｉ－ｌｉｎｅａｇｅ　ｃｅｌｓ
ｆｒｏｍ　ａｄｉｐｏｓｅ　ｔｉｓｓｕｅ　ａｎｄ　ｂｏｎｅ　ｍａｒｒｏｗ［Ｊ］．Ｉｍｍｕｎｏｌ　Ｌｅｔｔ，２００３，８９
（２３）：２６７－２７０．
［９］ Ｃｌａｖｉｎ　ＮＷ，Ｆｅｒｎａｎｄｅｚ　Ｊ，Ｓｃｈｏｎｍｅｙｒ　ＢＨ，ｅｔ　ａｌ．Ｆｒａｃｔｉｏｎａｔｅｄ　ｄｏ－
ｓｅｓ　ｏｆ　ｉｏｎｉｚｉｎｇ　ｒａｄｉａｔｉｏｎ　ｃｏｎｆｅｒ　ｐｒｏｔｅｃｔｉｏｎ　ｔｏ　ｍｅｓｅｎｃｈｙａｍｌ　ｓｔｅｍ
ｃｅｌ　ｐｌｕｒｉｐｏｔｅｎｃｙ．Ｐｌａｓｔ　Ｒｅｃｏｎｓｔｒ　Ｓｕｒｇ［Ｊ］．２００８，１２２（３）：７３９－７４８．
（收稿日期：２０１１－０６－０７；编辑：母存培
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）
（上接第２３０２页）
　　整个分离过程对实验室条件的要求：室温不高于
２５℃，环境干燥而避光，缓冲层析柱体须进行遮光，并
用紫外灯监视各成分带的分离行为。
４　结论与建议
优化后的缓冲硅胶层析柱法具有分离效果好、速
度快、样品损失率小、稳定性和重复性好等优点，适用
于间苯三酚类化合物的分离和纯化，将有助于推进绵
马贯众间苯三酚类化学成分的系统研究。但本分离
方法仍有许多尚待改进的地方，建议广大药物研究工
作者对其三个主要的因素进行正交实验，探索出更优
的分离方法。
【参考文献】
［１］ 尚志均．神农本草经校点［Ｍ］．芜湖：皖南医学院科研处，１９８１：
１４０．
［２］ 宋立人，洪　恂，丁绪亮，等．现代中药学大辞典（上册）［Ｍ］．北
京：人民卫生出版社，２００１：１９３２－１９３５．
［３］ 李时珍．本草纲目［Ｍ］．北京：人民卫生出版社，１９８２：７４５．
［４］ 吴寿金，杨秀贤．绵马贯众化学成分的研究（ＩＩ）绵马贯众中间苯
三酚衍生物的质谱－质谱分析［Ｊ］．中草药，１９９７，２８（１２）：７１２．
［５］ 吴寿金，杨秀贤，张　丽，等．绵马贯众化学成分的研究（Ｉ）［Ｊ］．
中草药，１９９６，２７（８）：４５８－４５９．
［６］ ＭｉｎＫｙｕｎ　Ｎａ，ＪｕｎＰｉｌ　Ｊａｎｇ，Ｂｙｕｎｇ　Ｓｕｎ　Ｍｉｎ，ｅｔ　ａｌ．Ｆａｔｔｙ　ａｃｉｄ
ｓｙｎｔｈａｓｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｏｒｙ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ａｃｙｌｐｈｌｏｒｏｇｌｕｃｉｎｏｌｓ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｆｒｏｍ
Ｄｒｙｏｐｔｅｒｉｓ　ｃｒａｓｓｉｒｈｉｚｏｍａ［Ｊ］．Ｂｉｏｏｒｇ．Ｍｅｄ．Ｃｈｅｍ．Ｌｅｔ，２００６，
１６：４７３８－４７４２．
［７］ Ｌｏｕｎａｓｍａａ　Ｍ，Ｋａｒｊａｌａｉｎｅｎ　Ａ，Ｗｉｄｅｎ　ＣＪ，ｅｔ　ａｌ．Ｍａｓｓ　Ｓｐｅｃｔｒａｌ
Ｓｔｕｄｉｅｓ　ｏｎ　Ｓｏｍｅ　Ｎａｔｕｒａｌｙ　Ｏｃｃｕｒｒｉｎｇ　Ｐｈｌｏｒｏｇｌｕｃｉｎｏｌ　Ｄｅｒｉｖａ－
ｔｉｖｅｓ．Ｐａｒｔ．Ｔｈｅ　Ｍａｓｓ　Ｓｐｅｃｔｒａ　ｏｆ　Ｓｏｍｅ　Ｍｏｎｏ－ａｎｄ　Ｂｉｃｙｃｌｉｃ　Ｐｈｌｏｒｏ－
ｇｌｕｃｉｎｏｌ　Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ　ｆｒｏｍ　Ｒｈｉｚｏｍｅｓ　ｏｆ　Ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　Ｄｒｙｏｐｔｅｒｉｓ　Ｓｐｅ－
ｃｉｅｓ［Ｊ］．Ａｃｔａ　Ｃｈｅｍ．Ｓｃａｎｄ，１９７２，２６（１）：８９．
［８］ 高增平．绵马贯众有效成分的研究［Ｄ］．北京：北京中医药大学，
２００３：６９－８４．
［９］ Ｗｉｄｅｎ　ＣＪ，Ｐｙｙｓａｌｏ　Ｈ，Ｓａｌｏｖａａｒａ　Ｐ．Ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　Ｎａｔｕｒａｌｙ　Ｏｃ－
ｃｕｒｒｉｎｇ　Ａｃｙｌｐｈｌｏｒｏｇｌｕｃｉｎｏｌｓ　ｂｙ　Ｈｉｇｈ－Ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ　Ｌｉｑｕｉｄ　Ｃｈｒｏ－
ｍａｔｏｇｒａｐｈｙ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ，１９８０，１８８：２１３．
［１０］ Ｗｉｄｅｎ　ＣＪ，Ｈｕｈｔｉｋａｎｇａｓ　Ａ．Ｐｈｌｏｒｏｇｌｕｃｉｎｏｌ　Ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ　ｉｎ
Ｄｒｙｏｐｔｅｒｉｓ　ｐａｒａｌｅｌｏｇｒａｍｍａ　ａｎｄ　Ｄ．ｐａｔｕｌａ［Ｊ］．Ｐｈｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，
１９７３，１２：９３１．
［１１］ 肖国君．绵马贯众素的ＮＭＲ研究［Ｊ］．波谱学杂志，２００４，２１（２）：
２３１－２３４．
［１２］ 任　强．中药抗急性淋巴细胞白血病活性成分的研究［Ｄ］．北京：
北京协和医学院，２００９：６５．
［１３］ 高增平，李世文，陆蕴如，等．中药绵马贯众的化学成分研究［Ｊ］．
中药学杂志，２００３，３８（４）：２６０－２６２．
（收稿日期：２０１１－０９－１９；编辑：母存培）
·６０３２· 西部医学２０１１年１２月 第２３卷第１２期　Ｍｅｄ　Ｊ　Ｗｅｓｔ　Ｃｈｉｎａ，Ｄｅｃｅｍｂｅｒ　２０１１，Ｖｏｌ．２３，Ｎｏ．１２