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三叶青地上部分化学成分分析



全 文 :三叶青是我国特有的珍稀药用植物,又名三叶
崖爬藤 Tetrastigma hemsleyanum Diels et Gilg.,别
名破石珠、蛇附子、石抱子、三叶扁藤、金线吊葫
芦、三叶对等 [1]。 三叶青以块根或全草入药,在民
间已有较长的历史,其药用记载最早见于《本草纲
目》,称“三叶崖爬藤,性味苦、辛、凉、清热凉血、活
血祛风。 ”[2]三叶青有清热解毒、祛风化痰、活血止
痛的功效,常用于治疗高热惊厥、肺炎 、哮喘、肝
炎、风湿、月经不调、咽痛、瘰疬、痈疔疮疖等 [3]。 由
于三叶青对生长环境的温度、湿度要求非常苛刻,
并且在自然条件下生长缓慢, 加上近年来人为的
无节制的采挖,野生的三叶青已经濒临灭绝 [4]。 有
关三叶青块根或地上部分化学成分的系统预试验
未见报道, 我们对三叶青地上部分进行化学成分
的系统预试验,以明确其可能的化学成分,为进一
步扩大栽培和深入研究三叶青提供实验依据。
1 仪器与试药
1.1 仪器 HH-5l1-电热恒温水浴锅 (上海跃进
医疗器械厂);XS205 十万分之一电子天平 (梅特
勒-托利多仪器(上海)有限公司);AR2140 万分之
一电子天平(梅特勒-托利多仪器上海有限公司);
SHB-Ⅲ循环水式多用真空泵(郑州长城科工贸有
限公司);RE-52A 旋转蒸发器 (上海亚荣生化仪
器厂)。
1.2 试药 三叶青地上部分的产地为福建省福
安市, 由福建中医药大学药学院范世明高级实验
师鉴定确认。 薄层层析用硅胶 G(青岛海洋化工有
限公司);乙醇、氯仿、乙酸乙酯、正丁醇、石油醚等
试剂为分析纯。
2 方法与结果
2.1 化学成分系统预试验
2.1.1 水提取法 称取三叶青地上部分粉末 5
g,置于 100 mL 锥形瓶中,加 60 mL 蒸馏水,室温
浸泡过夜。滤过,滤液供检查氨基酸、蛋白质用。将
上述剩余的冷水浸泡液连同滤渣置于 60℃的水浴
上加热 1 h,趁热过滤,滤液冷却至室温后供检查
糖、多糖、有机酸、皂苷、酚类、鞣质成分用。
2.1.2 乙醇提取法 称取三叶青地上部分粉末
10 g,加 10 倍量 95%的乙醇,水浴加热回流 1 h,
过滤,滤液分成 2 份:1 份作为乙醇提取液,供检
查酚类、鞣质及有机酸用 1 份浓缩成稠膏,再一分
为二,放冷后,1 / 2 加 2%盐酸溶解,过滤,滤液供
检查生物碱用,滤渣溶解后供检查黄酮、蒽醌用;
1 / 2 用 10 mL 乙酸乙酯溶解,用 5%氢氧化钠将乙
酸乙酯层水洗到中性,乙酸乙酯层用作香豆素、萜
类内酯、强心苷检查。
2.1.3 石油醚提取法 取三叶青地上部分粉末 1
g,加 10 mL 石油醚(沸程 60℃~90℃),放置 2~3
h,滤过,滤液置表面皿上挥干,残留物供检验甾
体、三萜类、挥发油、油脂用。
2.1.4 有机溶剂分离萃取法及薄层色谱鉴别 称
取三叶青地上部分粉末 50 g,加 300 mL 乙醇,在
收稿日期:2013-07-05
基金项目:福建省科技计划项目(2010Y2004)
作者简介:蔡韦炜(1989—),女,2012 级药物分析专业硕士研究生,主要从事药物色谱与光谱分析。
通讯作者:陈丹(1961—),女,教授。 E-mail:13515026709@163.com
三叶青地上部分化学成分分析
蔡韦炜,陈 丹,范世明,连赟芳,郑 利,曾令军,吴泽卿
(福建中医药大学药学院,福建 福州 350122)
摘要: 目的 分离分析三叶青地上部分的化学成分。 方法 用系统预试法, 对三叶青地上
部分乙醇提取物进行分段萃取,用薄层色谱法对各部位进行分离、分析、鉴别。 结果 三叶青地上
部分含有黄酮类、氨基酸类、萜类、强心苷类、甾体类、油脂成分。 结论 三叶青地上部分含有黄酮
类、萜类成分。
关键词:三叶青;地上部分;化学成分;分析
中图分类号:R284.1 文献标志码:B 文章编号:1004-5627(2013)05-0034-02
Journal of Fujian University of TCM October 2013,23(5)
福建中医药大学学报 2013 年 10 月 第 23 卷 第 5 期
34
DOI:10.13261/j.cnki.jfutcm.002859
水浴上回流 1.5 h(注意添加乙醇,使之保持一定
体积),滤过。 取乙醇提取液,置蒸发皿中,挥干溶
剂,得稠膏,加 50 mL 蒸馏水溶解.依次用石油醚、
氯仿、乙酸乙酯、正丁醇溶剂萃取,得石油醚层、氯
仿层、乙酸乙酯层、正丁醇层萃取液,分别回收浓
缩。 对石油醚层萃取液进行薄层色谱(TLC)鉴别,
经试验优选展开剂为石油醚-乙酸乙酯 (8∶2),采
用浓硫酸-香草醛喷雾显色,在自然光下观察检视
斑点颜色,再置紫外光灯下,365 nm 波长处检视。
对氯仿层、乙酸乙酯层、正丁醇层萃取液进行 TLC
鉴别,以氯仿-甲醇-水-乙酸(7∶1∶0.3∶2)为展开剂,
采用 3%三氯化铝乙醇喷雾显色,365 nm 波长处
检视。
2.1.5 结果分析 结果表明三叶青地上部分主要
含有黄酮类、氨基酸类、强心苷类、甾体类、油脂类
成分,鉴别结果见表 1。
石油醚萃取部位的薄层色谱分离分析显示,
自然光下呈 6 个红色斑点及 2 个绿色斑点 ;365
nm 波长处呈 5 个白色荧光斑点及 6 个红色荧光
斑点。 结果表明三叶青地上部分石油醚萃取部位
含有甾萜类及油脂类成分。
氯仿萃取部位、乙酸乙酯萃取部位、正丁醇萃
取部位的薄层色谱分离分析显示,365 nm 波长处
氯仿萃取部位无荧光斑点; 乙酸乙酯萃取部位呈
1 个蓝色荧光斑点和 2 个黄色荧光斑点; 正丁醇
萃取部位呈 4 个黄色荧光斑点。 结果表明三叶青
地上部分乙酸乙酯与正丁醇萃取部位含有黄酮及
其苷类化合物。
3 讨 论
3.1 本实验明确了三叶青地上部分含有酚类、氨
基酸、糖类、黄酮类、萜类、强心苷类、甾体类、油脂
类成分, 其中黄酮类成分主要存在于三叶青地上
部分乙酸乙酯与正丁醇萃取部位, 甾萜类成分存
在于石油醚萃取部位。
3.2 用薄层色谱法筛选石油醚-乙酸乙酯 (90 ∶
10)、(85∶15)、(80 ∶20)、(70 ∶30)4 种不同比例展开
剂,结果显示以石油醚-乙酸乙酯(80 ∶20)为展开
剂时,各斑点分离效果最好。
3.3 用薄层色谱法采用正丁醇-醋酸-水、 氯仿-
甲醇、氯仿-甲醇-水、氯仿-甲醇-乙酸-水 4 种不
同展开剂进行比较, 结果以氯仿-甲醇-乙酸-水
(7∶1∶0.3∶2)作为展开剂时,成点性最好,黄酮各成
分斑点的分离效果最好。
参考文献:
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中医药大学学报,2011,13(1):72-74.
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表 1 三叶青地上部分化学成分系统预试验结果
成分类别
有机酸类
酚类
鞣质
氨基酸类
蛋白质类
糖、多糖、苷类
皂苷类
生物碱类
黄酮类
蒽醌类
强心苷类
香豆素与萜类内酯
皂苷、甾萜类
挥发油和油脂
鉴别方法
pH 试纸反应
溴甲酚蓝试验
三氯化铁试验
三氯化铁试验
明胶试验
茚三酮试验
双缩脲反应
α-萘酚试验
菲林反应
泡沫试验
碘化铋钾试验
硅钨酸试验
碘化汞钾试验
碘-碘化钾试验
盐酸-镁粉反应
三氯化铝试验
碱性反应
乙酸镁反应
3,5-二硝基苯甲酸试验
碱性苦味酸试验
异羟肟酸铁试验
内酯开闭环试验
荧光试验
醋酐-浓硫酸试验
滤纸试验
结果
4~5
阳性
阳性
阴性
阴性
阳性
阴性
阳性
阴性
阴性
阴性
阴性
阴性
阴性
阳性
阳性
阴性
阴性
阳性
阳性
阴性
阴性
阴性
阳性
阳性
(下转第 42 页)
第 5期 蔡韦炜等:三叶青地上部分化学成分分析 35
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4 讨 论
海风藤挥发油是药材的有效成分之一,其中大
部分为倍半萜类化合物。茎叶挥发油的种类不同,
含量差异大,其中 18 种是它们共有的成分,含量
较高的是反式-橙花叔醇(茎 15.18%,叶 28.16%),
α-石竹烯(茎 15.84%,叶 15.64%)。据文献[6]报道,
石竹烯除作为香料外, 还有局部麻醉、 抗炎等作
用,同时还应用于镇咳祛痰的药物中,其氧化物有
镇痛和抗炎的作用。 海风藤茎中石竹烯 8.92%,叶
中 9.26%;氧化石竹烯茎 7.65%,叶 1.18%。挥发油
中的 α-蒎烯、β-蒎烯及 β-月桂烯有镇咳和祛痰
的作用,且能抗真菌 [7]。 β-水芹烯对支气管有温和
的刺激作用,可作祛痰药,还可用于杀虫剂和驱白
蚁剂[7]。 由此可见,海风藤挥发油除了传统的抗风
湿疗效外,还具有潜在的药用价值。
采用不同方法提取的挥发油成分和含量有所
差别 [5]。 我们采用的水蒸气蒸馏法提取挥发油 [8],
虽耗时较长, 但药材挥发油成分基本能提取出来。
由于产地、生长环境及采收季节等因素的影响,福
建产海风藤与浙江产海风藤茎叶挥发油成分有较
大差异,提示药材疗效与来源有很大的关系。
参考文献:
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Component Analysis of Aerial Parts of Tetrastigma Hemsleyanum
CAI Weiwei, CHEN Dan, FAN Shiming, et al
(College of Pharmacy, FUTCM, Fuzhou, Fujian 350122, China)
ABSTRACT: Objective To separate and analyse the chemical compositions of aerial parts of Te-
trastigma Hemsleyanum. Methods The ethanol extracts from aerial parts of Tetrastigma Hemsleyanum re-
ceived stage extraction using comprehensive preliminary tests, and each parts were separated, analyzed and i-
dentified by Thin Layer Chromatography. Results The aerial parts of Tetrastigma Hemsleyanum contained
flavonoids, amino acids, terpenoids, cardiac glycosides, steroids, and volatile oil. Conclusion Identified
many kinds of effective components of aerial parts of Tetrastigma Hemsleyanum, such as flavonoids and ter-
penoids, which provide experimental basis for the further development of Tetrastigma Hemsleyanum.
KEY WORDS: Tetrastigma Hemsleyanum; aerial parts; chemical composition; analysis
(上接第 35 页)
福建中医药大学学报 第 23卷42