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加工工艺与设备
李 睿 李万林 郭卫国 罗 运
微波辅助提取
茄子根中总黄酮工艺条件研究
( 陕西理工学院化学与环境科学学院,陕西 汉中 723001)
摘 要 以烘干茄子根为原料,以茄子根中总黄酮提取率为指标,利用微波辅助提取茄子根中总黄酮。选取乙醇
浓度、微波时间、微波温度、微波功率、料液比为单因素试验,在单因素试验基础上,以正交试验设计方法优化提
取工艺。结果表明,最佳工艺条件为:乙醇浓度为 80%、微波时间为 4m i n、微波温度为 60℃、微波功率为 300W、料
液比 1∶20(g/mL),在此最佳条件下,茄子根总黄酮的提取率达 1.652%。
关键词 微波辅助;提取;茄子根;总黄酮
Abstract The eggplant root as raw material, alkaloids in root of eggplant with microwave assisted alcohol
precipitation method. The volume fraction of ethanol、extraction time、microwave power、microwave temperature、
solid-liquid ratio as the single factor test. The results show that the optimum conditions were: ethanol concentration of 80%、
microwave time 4min、microwave temperature is 60℃、microwave power was 300W、the ratio of material to liquid 1:20(g/
mL), under these conditions, the extraction rate of total alkaloids from eggplant root is 1.652%.
Keywords microwave-assisted; extraction; eggplant root; the total alkaloid
中图分类号:R284 文献标识码:A 文章编号:1006-6314(2014)08-0012-04
基金项目:陕西理工学院大学生科技爱好者协会——大学
生创新实验项目 (项目编号 UIRP14009)。
通讯作者:李睿,主要研究方向:天然产物的提取、分离
和纯化。
收稿日期:2014-5-5。
黄酮类化合物是植物代谢过程中产生的一类重要天
然有机化合物,对人类的肿瘤、衰老、心血管病等疾病
的治疗和预防有重要的意义,并具有良好的市场前景。
特别是近 30 年来黄酮类化合物一直是国内外研究开发利
用的热点,是寻找有开发应用前景的先导化合物和生物
活性成分的源泉。目前,我国很大一部分高纯黄酮依赖
进口,价格十分昂贵。为更好利用废弃资源,服务于经济,
本文研究茄子根中总黄酮的最佳提取条件,为其进一步
分离提纯和生产实践应用打下基础。
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大量试验研究表明,黄酮类化合物中的大豆异黄酮
可以显著的促进动物生长 [1]、提高动物繁殖能力、促进
泌乳、增强机体免疫力 [2]、降低饲料成本、无残留、无
污染,是安全高效的绿色饲料添加剂,发展前景广阔 [3~ 4],
本试验对汉中郊区茄子根中总黄酮的提取工艺条件进行
优化,为茄子根在饲料工业中的开发利用提供一定的理
论依据。
1 材料与方法
1.1 材料、试剂及仪器
茄子根:陕西省汉中市郊区,无水乙醇 ( 分析纯 )
百事化工公司;氢氧化钠 (分析纯 ) 西安试剂有限公司。
760CR 紫外可见分光光度计 ( 上海精密科学仪器
有限公司 );WF-2000 微波快速反应系统 ( 上海尧舜
试验设备有限公司 );GR-200 电子天平 ( 日本 AND) ;
SHZ-D9( Ⅲ ) 循环水式真空泵 ( 巩义予华仪器有限公
司 );电子分析天平 ( 上海第三分析仪器厂 ) ;电热恒温
鼓风干燥箱 ( 上海森信实验有限公司 ) ;电热恒温水浴锅
( 北京科伟兴汉有限公司 );油泵 ( 温岭市速力电机厂 );
FW117 中草药粉碎机 ( 天津泰斯特仪器有限公司 );标
准检验筛 (浙江上虞市道墟张兴纱筛厂 );低速离心机 (北
京京立离心机有限公司 )等。
1.2 茄子根中总黄酮提取工艺流程
茄子根粉末→乙醇微波辅助提取→提取液过滤→离
心→上清液定容→测量吸光度→计算总黄酮含量。
1.3 试验步骤
将 2.0000g 茄子根粉末与一定体积浓度的乙醇按一
定料液比例混合,在一定温度下提取一定时间。提取液
真空抽滤,滤液用 60% 乙醇溶液定容至 100mL 容量瓶
中。准确量取适量提取液于50mL容量瓶中,加5%NaNO2
1.5mL,摇匀,放置 6min ;加 10%Al(NO3)3 1.5mL,摇
匀,放置 6min;加 4%NaOH 20mL,加 65%乙醇至刻度,
摇匀,放置 10min。最后用分光光度计在 510nm波长下
测定吸光度值,并计算总黄酮含量。
1.4 标准曲线制作
准确称取干燥至恒重的芦丁 20.30mg,加适量 75%
乙醇,微热使之溶解。自然冷却后,置 100mL 量瓶中定
容,得芦丁乙醇溶液。吸取芦丁乙醇溶液 0mL、2.0mL、
4.0mL、6.0mL、8.0mL、10.0mL,分别置 50mL量瓶中,
加 5%NaNO2 1.5mL,摇匀,放置 6min,加 10%Al(NO3)3
1.5mL,摇匀,放置 6min,加 4%NaOH 20mL,再加
75%乙醇至刻度,摇匀,放置 13min。最后用分光光度计
在最大波长 510nm下测定吸光度值。结果可得,芦丁标
准曲线为 A=7.3384C+0.2582(R2=0.9992),说明在测定
范围内线性关系良好。
1.5 总黄酮含量的测定
按照试验步骤操作处理后,将所得的滤液置于锥形
瓶中,以乙醇为对照品,用分光光度计在 510nm 处测定
吸光度,按回归方程计算滤液中总黄酮的提取率 (%)。
1.6 单因素试验
选取乙醇浓度、微波时间、微波温度、微波功率、
料液比进行了单因素试验,最后根据单因素试验结果正
交优化得出茄子根中总黄酮的最佳提取工艺条件。
2 结果与分析
2.1 乙醇浓度对茄子根中总黄酮提取率的影响
准确称取 2.0000g 茄子根粉末,在微波时间为
3min、微波温度为 60℃、微波功率为 300W、料液比
为 1∶20(g/mL) 条件下,选取乙醇浓度分别为 50%、
60%、70%、80%、90%,研究不同乙醇浓度的乙醇对茄
子根中总黄酮提取率的影响 (表 1)。
由表 1可知,乙醇浓度在 50%~ 80% 之间,茄子根
中总黄酮提取率随着乙醇浓度的升高而增大,在乙醇浓
度为 80% 时总黄酮提取率最高,可能是因为茄子根中总
黄酮的极性更接近浓度为 80% 的乙醇的极性;随着乙醇
浓度的进一步增大,总黄酮提取率反而降低,可能是由
于一些杂质也溶于乙醇,导致总黄酮提取率下降,故较
佳乙醇浓度为 80%。
2.2 微波时间对茄子根中总黄酮提取率的影响
准确称取 2.0000g 茄子根粉末,在乙醇浓度 80%、
微波温度 60℃、微波功率 300W、料液比 1∶20(g/mL)
条件下,选取微波时间分别为 2min、3min、4min、
C(mg/mL)×稀释倍数×提取液体积
样品质量 ×100%
总黄酮提取率(%)=
表 1 乙醇浓度对茄子根中总黄酮提取率的影响
乙醇浓度(%) 50 60 70 80 90
提取率(%) 0.612 0.734 0.865 0.890 0.775
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加工工艺与设备
5min、6min,研究不同微波时间对茄子根中总黄酮提取
功率的影响,结果见表 2。
由表 2 可知,在微波时间为 2 ~ 4min 范围内,茄
子根中总黄酮提取率随微波时间的延长而增大,4min
时提取率最大,4min 之后茄子根中总黄酮提取率反而
下降。可能因为提取时间过短时,微波反应产生的辐射
能不足以改变细胞结构和细胞膜的电位变化,提取时间
过长,溶剂挥发加剧,提取率降低,故选择 4min 为较
佳微波时间。
2.3 微波温度对茄子根中总黄酮提取率的影响
准确称取 2.0000g 茄子根粉末,在乙醇浓度 80%、
微波时间 4min、微波功率 300W、料液比 1∶20(g/mL)
的条件下,选取微波温度分别为 40℃、50℃、60℃、
70℃、80℃,研究不同微波温度对茄子根中总黄酮提取
率的影响,结果见表 3。
由表 3 可知,在微波温度为 60℃时,茄子根中总黄
酮提取率最高,在 40 ~ 60℃之间总黄酮提取率随着微
波温度的升高而增大,因为温度升高,分子运动加快,
细胞间的摩擦作用使得细胞破裂,茄子根中总黄酮的溶
解及扩散速度加快,提取率显著提高。在 60 ~ 80℃之
间随着温度的升高总黄酮提取率反而下降,可能是因为
茄子根中总黄酮为热不稳定化合物,随着温度的升高一
部分有效成分被分解,故微波温度宜选 60℃。
2.4 微波功率对茄子根中总黄酮提取率的影响
准确称取 2.0000g 茄子根粉末,在乙醇浓度 80%、
微波时间 4min 微波温度 60℃、料液比 1∶20(g/mL) 的
条件下,选取微波功率分别为 100W、200W、300W、
400W、500W,研究不同微波功率对茄子根中总黄酮提
取功率的影响,结果见表 4。
由表4可得,300~ 500W内随着微波功率的增大,
总黄酮提取率逐渐降低,在 300W 时茄子根中总黄酮
提取率最高。100 ~ 300W 之间茄子根中总黄酮提取
率随微波功率的增大而增大,当微波功率较小时,由
于总黄酮溶解不完全,微波功率增大,强大的内压及
分子间的摩擦力使茄子根细胞膜破裂总黄酮溶解速度
加快,提取率增大 ;微波功率过大产生的局部过热现
象使总黄酮变性,提取率下降。因此,选择 300W 为
最佳微波功率。
2.5 料液比对茄子根中总黄酮提取率的影响
准确称取 2.0000g 茄子根粉末,在乙醇浓度为
80%、微波时间为 4min、微波温度为 60℃、微波功率
为 300W 的条件下,选取料液比分别为 1∶5(g/mL)、
1∶10(g/mL)、1∶15(g/mL)、1∶20(g/mL)、1∶25(g/
mL),研究不同料液比对茄子根中总黄酮提取率的影响,
结果见表 5。
由表 5 可得,随着料液比的增大,茄子根中总黄酮
提取率也在增大,因为此时单位体积茄子根周围的乙醇
含量增大,传质速率提高,提取率变大;但是当料液比
大于 1∶20(g/mL) 后,总黄酮的提取率趋缓,这是由于
茄子根中总黄酮已基本浸出,再增大料液比反而增加了
生产成本,故料液比控制在 1∶20(g/mL) 为宜。
2.6 正交试验设计
2.7 正交试验结果与讨论
在单因素的基础上,选择乙醇体积分数 (A)、微波
时间 (B)、微波温度 (C)、微波功率 (D) 和料液比 (E) 为
影响因素,以提取率为指标,选择 L16(45) 进行正交试验,
正交试验设计及结果的直观分析见表 7。
由表 7 可得,从茄子根中提取总黄酮的最佳组
合是 A3B2C4D2E3,即乙醇体积分数 80%、微波时
间 3m i n、微波温度 70℃、微波功率 300W、料液比
表 2 微波时间对茄子根中总黄酮提取率的影响
微波时间(min) 2 3 4 5 6
提取率(%) 0.629 0.737 0.891 0.786 0.719
表 3 微波温度对茄子根中总黄酮提取率的影响
微波温度(℃) 40 50 60 70 80
提取率(%) 0.628 0.735 0.928 0.813 0.722
表 4 微波功率对茄子根中总黄酮提取率的影响
微波功率(W) 100 200 300 400 500
提取率(%) 0.724 0.843 0.958 0.867 0.742
表 5 料液比对茄子根中总黄酮提取率的影响
料液比(g/mL) 1:5 1:10 1:15 1:20 1:25
提取率(%) 0.725 0.823 0.998 1.025 1.031
表 6 L16(45) 正交试验因素水平表
水平
A
乙醇体积分数
(%)
B
微波时间
(min)
C
微波温度
(℃)
D
微波功率
(W)
E
料液比
(g/mL)
1 60 2 40 200 1:10
2 70 3 50 300 1:15
3 80 4 60 400 1:20
4 90 5 70 500 1:25
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1∶20( g/mL ),在此条件下做 3 次平行试验,得其平
均提取率为 1.124%。各因素对总黄酮提取率影响的
大小顺序为 :料液比 > 微波温度 > 微波时间 > 乙醇
体积分数 > 微波功率。
3 结论
在单因素的基础上通过正交试验优化了提取工艺,
得最佳提取工艺条件为:乙醇体积分数 80%,微波时间
90s,微波温度 70℃、微波功率 300W,料液比 1∶20(g/
mL),在此条件下,茄子根中总黄酮提取率达 1.124%。
各因素对茄子根中总黄酮提取率的影响次序为:料液比
> 微波温度 > 微波时间 > 乙醇体积分数 > 微波功率。
微波提取茄子根中总黄酮具有时间短、提取率高等优点,
本文研究结果可为茄子根中总黄酮的提取及其在饲料工
业中的应用开发提供理论依据。
(参考文献略)
表 7 L16(45) 正交试验结果
试验 A B C D E 提取率(%)
1 1 1 1 1 1 0.785
2 1 2 2 2 2 0.726
3 1 3 3 3 3 0.848
4 1 4 4 4 4 0.803
5 2 1 2 3 4 0.864
6 2 2 1 4 3 0.893
7 2 3 4 1 2 0.736
8 2 4 3 2 1 0.709
9 3 1 3 4 2 0.813
10 3 2 4 3 1 0.946
11 3 3 1 2 4 0.863
12 3 4 2 1 3 0.876
13 4 1 4 2 3 0.854
14 4 2 3 1 4 0.728
15 4 3 2 4 1 0.693
16 4 4 1 3 2 0.754
K1 0.521 0.421 0.560 0.463 0.234
K2 0.450 0.714 0.424 0.606 0.506
K3 0.696 0.603 0.502 0.575 0.762
K4 0.552 0.482 0.733 0.576 0.717
R 0.246 0.293 0.309 0.143 0.528
最优组合 A3B2C4D2E3
依据《饲料和饲料添加剂管理条例》,我部组织全
国饲料评审委员会对部分饲料企业提出的《饲料添加剂
品种目录(2013)》(以下简称“《目录》”)修订建议及
材料进行了评审,决定将辛烯基琥珀酸淀粉钠等 2种饲
料添加剂增补进《目录》,对《目录》中二氧化硅的名
称进行修订,批准低聚异麦芽糖扩大适用范围。有关事
项公告如下:
一、增补辛烯基琥珀酸淀粉钠(英文名称:Starch
SodiumOctenylsuccinate)进入《目录》,类别为“粘结剂、
抗结块剂、稳定剂和乳化剂”,适用范围为“养殖动物”,
按生产需要适量使用,质量标准暂按《食品安全国家标
准食品添加剂辛烯基琥珀酸淀粉钠》(GB 28303)执行。
二、增补索马甜(英文名称:Thaumatin)进入《目
录》,类别为“调味和诱食物质”之“甜味物质”,适用
范围为“养殖动物”,在配合饲料中的推荐添加量不高
于 5mg/kg,质量标准暂按卫生部公告 2012 年第 6号
的相关规定执行。
三、修订二氧化硅(类别“粘结剂、抗结块剂、
稳定剂和乳化剂”)名称,增加别名“沉淀并经干燥的
硅酸”,名称为“二氧化硅(沉淀并经干燥的硅酸)(英
文名称:Silicon Dioxide(Silicic Acid, precipitated
and dried))”,质量标准暂按《食品添加剂二氧化硅》(HG
2791)执行。
四、将低聚异麦芽糖的适用范围扩大至断奶仔猪。
上述修订意见自本公告发布之日起执行。各级饲料
管理部门在办理有关行政审批、监督执法事项时,凡涉
及到上述饲料添加剂,均以本公告为准。
农业部
2014年 7月 24日
( 摘自:中国饲料工业信息网 )
中华人民共和国农业部公告第 2134 号