全 文 ： ２０１５年 第４４卷 第４期 中 国 南 方 果 树
常山胡柚小青果乙醇提取物的黄酮类物质含量及抗氧化活性测定
刘春荣１，王登亮１，毕旭灿２，郑雪良１，杨 波２，孙崇德３
（１浙江省衢州市农业科学研究院，浙江衢州，３２４０００；２浙江省常山县农业局，浙江常山，３２４２００；
３浙江大学果实品质生物学实验室，杭州，３１００５８）
收稿日期：２０１５－０１－２６；修回日期：２０１５－０３－２０
基金项目：浙江省重大科技专项子专题（２０１２Ｃ１２９０４－１）；浙江省衢州市科技计划项目（２０１１Ｚ００１）资助。
作者简介：刘春荣（１９６５—），高级农艺师，衢州市农业科学研究院副院长，从事柑桔栽培及贮藏加工研究。
电话：（０５７０）３０５０２１８，Ｅ－ｍａｉｌ：ｑｚｌｃｒ＠ａｌｉｙｕｎ．ｃｏｍ
ＤＯＩ：１０．１３９３８／ｊ．ｉｓｓｎ．１００７－１４３１．２０１５００５１
摘 要 采集常山胡柚生理落果期和果实膨大期的小青果（生理落果或人工疏除的果实），采用高
效液相色谱（ＨＰＬＣ）技术检测果实乙醇提取物中黄酮类化合物含量，并采用ＤＰＰＨ法和ＦＲＡＰ法
检测抗氧化活性。结果表明，从常山胡柚小青果中检测出的黄酮类化合物有新橙皮苷、柚皮苷、柚
皮芸香苷、新圣草次苷、圣草次苷、六甲氧基黄酮、七甲氧基黄酮和桔皮素，共８种，前４种含量较
高，后４种含量甚微。总黄酮含量是生理落果高于人工疏果，枳砧嫁接树高于实生树，小果和中果
高于大果。各黄酮类化合物含量也是生理落果高于人工疏果；除六甲氧基黄酮以外的其他黄酮类
化合物含量，均是枳砧嫁接树高于实生树；新橙皮苷、柚皮苷、柚皮芸香苷、新圣草次苷、七甲氧基
黄酮和桔皮素含量有随果实增大而降低的趋势。小青果乙醇提取物的抗氧化活性，是生理落果高
于人工疏果，嫁接树果实高于实生树果实，小果高于中果，中果高于大果。
关键词 胡柚小青果；黄酮类化合物；抗氧化性
常山胡柚（Ｃｉｔｒｕｓ ｐａｒａｄｉｓｉ ‘Ｃｈａｎｇｓ－
ｈａｎｈｕｙｏｕ’）为浙江省衢州市的地方柑桔品
种，丰产性好，抗逆性强，是我国十分珍贵的
柑桔种质资源［１］。常山胡柚果实富含黄酮类
化合物、柠檬苦素等生物活性物质，有着清除
自由基、提高人体免疫力、抗菌消炎等功
效［２］。衢州市每年生理落果和人工疏果产生
上万吨的常山胡柚小青果（６—８月，直径３～
５ｃｍ的果实），加工销售小青果对当地农民
增收效果显著［３］。本研究以常山胡柚小青果
为试材，研究其乙醇提取物中不同类型黄酮
类化合物的含量及抗氧化活性，以期为小青
果的开发和加工提供参考。
１ 材料与方法
１．１ 样品果采集
供试常山胡柚小青果来自浙江省常山县
球川镇九都村。２０１４年５月１２日于１０年
生枳砧常山胡柚园和２１年生实生常山胡柚
园中各选定１５株树。６月１１日（生理落果
期）捡拾生理落果，人工疏除和收集过小果、
畸形果和病虫果，分别选留大小中等的果实
供试。７月２８日（果实膨大期）对枳砧常山
胡柚园中的供试植株再疏果，疏下的果实按
大中小分成３类。共有６类果实样品（处
理）：嫁接树（枳砧常山胡柚园）生理落果期的
人工疏果样品、生理落果样品，果实膨大期人
工疏除的大果、中果和小果样品；实生树生理
落果期的人工疏果样品。
生理落果期的样品果大小较一致，单果
质量２５．７９±２．７２ｇ，纵径３５．８３±１．８７
ｍｍ，横径３３．９０±１．７１ｍｍ。果实膨大期的
大果样品单果质量１１６．３０±８．７０ｇ，纵径
６６．７２±４．５４ｍｍ，横径６３．８４±４．１２ｍｍ；中
果样 品 单 果 质 量８９．０２±５．７０ｇ，纵 径
５８．６２±３．９７ｍｍ，横径５６．４２±３．８４ｍｍ；小
果样 品 单 果 质 量６２．１５±２．７３ｇ，纵 径
４６．６３±２．７６ｍｍ，横径４３．４１±２．６２ｍｍ。
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中 国 南 方 果 树 ２０１５年 第４４卷 第４期
各类样品果各取１５个，用液氮冻透后放入
－４０℃冰箱备用。重复３次。
１．２ 样品液制备
用磨样机将冻透的样品磨成粉末，取
１．０００ｇ磨好的小青果样品粉末，加入８０％
乙醇８．００ｍＬ，混匀后用超声波药品处理机
３０℃下超声提取３０ｍｉｎ，提取液４ ０００转／
ｍｉｎ离心１０ｍｉｎ得上清液，重复一次，合并
两次的上清液，即为样品液（约１６．００ｍＬ），
上清液用于黄酮类化合物组分及抗氧化活性
的测定。
１．３ 高效液相色谱检测
参照Ｓｕｎ等［４］的方法并作适当修改，对
样品液的黄酮类化合物组分进行高效液相色
谱（ＨＰＬＣ）检测。检测器为 Ｗａｔｅｒｓ ２６９５－
２９９６ＤＡＤ，色谱柱为 ＯＤＳ Ｃ１８柱（ＳｕｎＦｉｒｅ
５μｍ，４．６ｍｍ×２５０ｍｍ）。流动相为水（溶
液Ａ）和色谱乙腈（溶液Ｂ），采用梯度洗脱
（５０ｍｉｎ）。梯度洗脱步骤：０～１５ｍｉｎ溶液Ｂ
保持２０％（指在流动相中的体积百分数）→
１５～３５ｍｉｎ溶液Ｂ由２０％增至６０％→３５～
４０ｍｉｎ溶液Ｂ由６０％增至１００％→４０～４２
ｍｉｎ溶液Ｂ保持１００％→４２～４５ｍｉｎ溶液Ｂ
由１００％降至２０％→４５～５０ｍｉｎ溶液Ｂ保
持２０％。检测波长为２８０ｎｍ（黄烷酮糖苷）
和３３０ｎｍ（多甲氧基黄酮），温度为室温（２５
℃），进样量为１０．０μＬ。６种黄酮类化合物
柚皮苷、新橙皮苷、柚皮芸香苷、圣草次苷、新
圣草次苷、桔皮素有标准品，可以根据标准品
的特性进行定量分析。六甲氧基黄酮和七甲
氧基黄酮无标准品，需与文献报道的色谱信
息进行对比定性，再以桔皮素为参照进行相
对定量分析。所测定黄酮类化合物的总和为
总黄酮含量。
１．４ 抗氧化活性测定
１．４．１ ＤＰＰＨ 法 ＤＰＰＨ（１，１－二苯基－２－
三硝基苯肼）是一种很稳定的氮中心自由基，
广泛用于酚类物质等抗氧化能力的测定。参
照Ｂａｏ等［５］的方法，取１００．０μＬ样品液，加
入３．９０ｍＬ ＤＰＰＨ（６０μｍｏｌ／Ｌ），混匀后反
应３０ｍｉｎ，用Ｂｅｃｋｍａｎ ＵＶ８００紫外－可见分
光光度计（美国）测定在５１５ｎｍ 处的吸光
值，以水溶性维生素Ｅ（Ｔｒｏｌｏｘ）和维生素Ｃ
（Ｖｃ）为标准品，计算抗氧化活性。
１．４ ２ ＦＲＡＰ法 ＦＲＡＰ（铁离子还原力）
用于测定总抗氧化能力。参照 Ｄｅｉｇｈｔｏｎ
等［６］的方法，取１００．０μＬ样品液，加入９００．０
μＬ Ｆｅ
３＋－ＴＰＴＺ反应液（现配现用），混匀后
在３７ ℃水浴反应１０ｍｉｎ，以８０％乙醇做对
照，用紫外－可见分光光度计测定５９５ｎｍ处
的吸光值，以 Ｔｒｏｌｏｘ和 Ｖｃ为标准品，计算
抗氧化活性。
１．５ 统计分析
试验数据用 Ｏｆｆｉｃｅ ２００７和ＳＰＳＳ １５．０
软件进行作表和分析。
２ 结果与分析
２．１ 黄酮类物质含量
总黄酮含量比较：生理落果的总黄酮含
量显著高于人工疏果。生理落果期的人工疏
果的总黄酮含量，枳砧嫁接树是实生树的
２．２２倍。果实膨大期的人工疏果的总黄酮含
量，大果低于小果和中果（见表１）。
表１ 不同类型常山胡柚小青果的总黄酮含量
处 理 总黄酮含量／ｍｇ·ｇ－１
生理落果期嫁接树生理落果 ７４．３６ａＡ
生理落果期嫁接树人工疏果 ６２．１１ｂＡ
生理落果期实生树人工疏果 ２７．９９ｃＢ
果实膨大期嫁接树疏除的小果 １６．２５ｄＣ
果实膨大期嫁接树疏除的中果 １４．３３ｄＣ
果实膨大期嫁接树疏除的大果 １０．２６ｅＤ
注：含量均为鲜重计；差异显著性分析采用Ｔｕｒｋｅｙ’ｓ检
验，不同小写字母表示差异显著（Ｐ＜０．０５），不同大写字母
表示差异极显著（Ｐ＜０．０１）。表２至表７同。
生理落果期枳砧嫁接树生理落果和人工
疏果的黄酮类化合物含量比较：从常山胡柚
小青果中检测出圣草次苷、新圣草次苷、柚皮
芸香苷、柚皮苷、新橙皮苷、六甲氧基黄酮、七
甲氧基黄酮和桔皮素等８种黄酮类化合物，
含量较高的为新橙皮苷、柚皮苷、柚皮芸香苷
２４
２０１５年 第４４卷 第４期 中 国 南 方 果 树
和新圣草次苷，其他４种含量甚微。生理落
果的各种黄酮类化合物显著或极显著高于人
工疏果，其中，新圣草次苷相差倍数最大，达
２．２４倍（见表２）。
表２ 常山胡柚（枳砧嫁接树）生理落果期人工疏果和生理落果的黄酮类化合物含量 ｍｇ／ｇ
处理 新橙皮苷 柚皮苷 柚皮芸香苷 新圣草次苷 圣草次苷 六甲氧基黄酮 七甲氧基黄酮 桔皮素
生理落果 ２８．０６ａＡ ２７．０９ａＡ ６．７８ａＡ １１．５３Ａ ０．３３ａＡ ０．４８ａＡ ０．５６Ａ ０．３３ａＡ
人工疏果 ２６．６３ｂＡ ２４．９５ｂＡ ５．８９ｂＡ ３．５６Ｂ ０．２５ｂＡ ０．３１ｂＡ ０．２９Ｂ ０．２５ｂＡ
生理落果期枳砧嫁接树和实生树人工疏
果的黄酮类化合物含量比较：枳砧嫁接树与
实生树比较，除六甲氧基黄酮含量无显著性
差异外，其余７种黄酮类化合物含量差异极
显著或显著，以嫁接树更高，且仍以新圣草次
苷相差倍数最大，达３．２４倍（见表３）。
表３ 常山胡柚生理落果期枳砧嫁接树和实生树人工疏果的黄酮类化合物含量 ｍｇ／ｇ
处理 新橙皮苷 柚皮苷 柚皮芸香苷 新圣草次苷 圣草次苷 六甲氧基黄酮 七甲氧基黄酮 桔皮素
嫁接树 ２６．６３Ａ ２４．９５Ａ ５．８９Ａ ３．５６Ａ ０．２５ａＡ ０．３１ａ ０．２９Ａ ０．２５ａＡ
实生树 １１．００Ｂ １２．５０Ｂ ２．７６Ｂ ０．８４Ｂ ０．２０ｂＡ ０．２７ａ ０．１９Ｂ ０．２０ｂＡ
果实膨大期枳砧嫁接树人工疏除不同大
小果实的黄酮类化合物含量比较：不同大小
果实间的圣草次苷和六甲氧基黄酮含量差异
均无显著性；其余黄酮类化合物含量有随果
实增大而减小的趋势，小果显著或极显著高
于大果（见表４）。
表４ 常山胡柚（枳砧嫁接树）果实膨大期不同大小果实的黄酮类化合物含量 ｍｇ／ｇ
处理 新橙皮苷 柚皮苷 柚皮芸香苷 新圣草次苷 圣草次苷 六甲氧基黄酮 七甲氧基黄酮 桔皮素
小果 ６．１０ａＡ ６．３６ａＡ ２．３７ａＡ ０．７２ａＡ ０．１７ａ ０．１５ａ ０．１９ａＡ ０．１８ａＡ
中果 ５．６９ａｂＡ ５．４４ａＡ １．９３ａＡ ０．６４ａｂＡ ０．１６ａ ０．１４ａ ０．１８ａｂＡ ０．１６ｂＡ
大果 ４．３４ｂＡ ３．５４ｂＢ １．２３ｂＡ ０．５２ｂＡ ０．１５ａ ０．１４ａ ０．１７ｂＡ ０．１６ｂＡ
２．２ 抗氧化活性
生理落果期枳砧嫁接树人工疏果和生理
落果比较，生理落果的ＦＲＡＰ和ＤＰＰＨ抗氧
化活性均极显著高于人工疏果，ＦＲＡＰ抗氧
化活性的Ｖｃ当量和 Ｔｒｏｌｏｘ当量提高０．９３
和０．９５倍，ＤＰＰＨ抗氧化活性的Ｖｃ当量和
Ｔｒｏｌｏｘ当量提高１．１０和１．０１倍（见表５）。
生理落果期嫁接树和实生树人工疏果之
间比较，嫁接树的ＦＲＡＰ和ＤＰＰＨ抗氧化活
性均极显著高于实生树，ＦＲＡＰ抗氧化活性
的Ｖｃ当量和Ｔｒｏｌｏｘ当量提高１．１８和１．１２
倍，ＤＰＰＨ 抗氧化活性的 Ｖｃ当量和 Ｔｒｏｌｏｘ
当量提高０．８９和０．９９倍（见表６）。
常山胡柚（枳砧嫁接树）果实膨大期不同
大小果实之间比较，ＦＲＡＰ和ＤＰＰＨ抗氧化
活性均表现为随果实增大而降低，不同大小
果实之间差异均达到显著性，其中，小果极显
著高于大果（见表７）。
表５ 常山胡柚（枳砧嫁接树）生理落果期
人工疏果和生理落果乙醇提取物抗氧化活性
μｇ／ｇ
处 理
ＦＲＡＰ
Ｖｃ当量 Ｔｒｏｌｏｘ当量
ＤＰＰＨ
Ｖｃ当量 Ｔｒｏｌｏｘ当量
生理落果 １１ １９５．３Ａ１４ ４２９．８Ａ １５ ６４２．２Ａ１７ ０６８．６Ａ
人工疏果 ５ ８１２．１Ｂ ７ ４０１．１Ｂ ７ ４５２．９Ｂ ８ ４９０．６Ｂ
表６ 常山胡柚生理落果期嫁接树和实生树
人工疏果乙醇提取物抗氧化活性 μｇ／ｇ
处理
ＦＲＡＰ
Ｖｃ当量 Ｔｒｏｌｏｘ当量
ＤＰＰＨ
Ｖｃ当量 Ｔｒｏｌｏｘ当量
嫁接树 ５ ８１２．１Ａ ７ ４０１．１Ａ ７ ４５２．９Ａ ８ ４９０．６Ａ
实生树 ２ ６７０．２Ｂ ３ ４８９．８Ｂ ３ ９３７．９Ｂ ４ ２６６．０Ｂ
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中 国 南 方 果 树 ２０１５年 第４４卷 第４期
表７ 常山胡柚（枳砧嫁接树）果实膨大期不同
大小果实乙醇提取物抗氧化活性 μｇ／ｇ
处理
ＦＲＡＰ
Ｖｃ当量 Ｔｒｏｌｏｘ当量
ＤＰＰＨ
Ｖｃ当量 Ｔｒｏｌｏｘ当量
小果 １ ７２３．１ａＡ ２ ３０９．８ａＡ ２ ７２６．７ａＡ ２ ８３１．０ａＡ
中果 １ ５８３．４ｂＡＢ ２ １２６．２ｂＡＢ ２ ４９７．６ｂＡＢ ２ ６２９．７ｂＡＢ
大果 １ ３９１．８ｃＢ １ ８９３．７ｃＢ ２ ２８５．３ｃＢ ２ ４１１．４ｃＢ
３ 结论与讨论
从常山胡柚小青果乙醇提取物中检测出
８种黄酮类化合物（圣草次苷、新圣草次苷、
柚皮芸香苷、柚皮苷、新橙皮苷、六甲氧基黄
酮、七甲氧基黄酮和桔皮素），含量较高的为
新橙皮苷、柚皮苷、柚皮芸香苷和新圣草次
苷，其他４种含量甚微。就总黄酮含量而言，
生理落果高于人工疏果，枳砧嫁接树高于实
生树，小果和中果高于大果。与总黄酮含量
情况相似，各黄酮类化合物含量也是生理落
果高于人工疏果；除六甲氧基黄酮以外的其
他黄酮类化合物含量，均是枳砧嫁接树高于
实生树；新橙皮苷、柚皮苷、柚皮芸香苷、新圣
草次苷、七甲氧基黄酮和桔皮素含量有随果
实增大而降低的趋势，其余黄酮类化合物含
量与果实大小无关。常山胡柚小青果乙醇提
取物的ＦＲＡＰ和ＤＰＰＨ抗氧化活性，均是生
理落果高于人工疏果，嫁接树高于实生树，小
果高于中果，中果高于大果。小果和中果乙
醇提取物总黄酮含量的差异无显著性，但抗
氧化活性差异有显著性，可能与果实中的抗
氧化活性因子除了黄酮类化合物外还有酚类
物质［７－８］有关，有待试验验证。
常山胡柚小青果富含黄酮类化合物，其
药用价值和功能性产品开发已越来越受到人
们的关注［９］。生产中绝大数采用枳砧嫁接
树，树冠矮，刺少，并且小青果黄酮类化合物
含量比实生树高，有利于小青果的生产加工。
生理落果比人工疏果含有更高的黄酮类化合
物，因此掉在园地上的落果也成为小青果重
要来源。
参 考 文 献
［１］ 贝增明，叶杏元．常山胡柚特性及栽培技术［Ｍ］．北
京：科学技术出版社，２００３
［２］ 张九凯．瓯柑和胡柚果实黄酮类化合物组分鉴定、分
离纯化及生物活性研究［Ｄ］．杭州：浙江大学，２０１３
［３］ 刘春荣，郑江程．干胡柚片生产增收调查及产业化发
展对策探讨［Ｊ］．浙江柑桔，２０１１，２８（２）：８－９
［４］ Ｓｕｎ Ｙ Ｓ，Ｗａｎｇ Ｊ Ｈ，Ｇｕ Ｓ Ｂ，ｅｔ ａｌ．Ｓｉｍｕｌｔａｎｅｏｕｓ ｄｅ－
ｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎ ｏｆ ｆｌａｖｏｎｏｉｄｓ ｉｎ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ｐａｒｔｓ ｏｆ Ｃｉｔｒｕｓ
ｒｅｔｉｃｕｌａｔａ ‘Ｃｈａｃｈｉ’ｆｒｕｉｔ ｂｙ ｈｉｇｈ ｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅ ｌｉｑｕｉｄ
ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ－ｐｈｏｔｏｄｉｏｄｅ ａｒｒａｙ ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ［Ｊ］．Ｍｏｌ－
ｅｃｕｌｅｓ，２０１０，１５（８）：５３７８－５３８８
［５］ Ｂａｏ Ｊ，Ｃａｉ Ｙ，Ｓｕｎ Ｍ，ｅｔ ａｌ．Ａｎｔｈｏｃｙａｎｉｎｓ，ｆｌａｖｏｎｏｌｓ，
ａｎｄ ｆｒｅｅ ｒａｄｉｃａｌ ｓｃａｖｅｎｇｉｎｇ ａｃｔｉｖｉｔｙ ｏｆ ｃｈｉｎｅｓｅ ｂａｙｂｅｒ－
ｒｙ（Ｍｙｒｉｃａ ｒｕｂｒａ）ｅｘｔｒａｃｔｓ ａｎｄ ｔｈｅｉｒ ｃｏｌｏｒ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ
ａｎｄ ｓｔａｂｉｌｉｔｙ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌ ａｎｄ Ｆｏｏｄ
Ｃｈｅｍｉｓｔｒｙ，２００５，５３（６）：２３２７－２３３２
［６］ Ｄｅｉｇｈｔｏｎ Ｎ，Ｂｒｅｎｎａｎ Ｒ，Ｆｉｎｎ Ｃ，ｅｔ ａｌ．Ａｎｔｉｏｘｉｄａｎｔ
ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｏｆ ｄｏｍｅｓｔｉｃａｔｅｄ ａｎｄ ｗｉｌｄ Ｒｕｂｕｓ ｓｐｅｃｉｅｓ
［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｔｈｅ Ｓｃｉｅｎｃｅ ｏｆ Ｆｏｏｄ ａｎｄ Ａｇｒｉｃｕｌｔｕｒｅ，
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［７］ 韩寒冰，李海航，曾祥有，等．化桔红果实生长发育过
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［８］ Ｓｈａｈｉｄｉ Ｆ，Ｗａｎａｓｕｎｄａｒａ，Ｐ Ｋ Ｊ Ｐ Ｄ．Ｐｈｅｎｏｌｉｃ ａｎｔｉｏｘ－
ｉｄａｎｔｓ［Ｊ］．Ｃｒｉｔｉｃａｌ Ｒｅｖｉｅｗｓ ｉｎ Ｆｏｏｄ Ｓｃｉｅｎｃｅ ａｎｄ Ｎｕ－
ｔｒｉｔｉｏｎ，１９９２，３２（ｌ）：６７－１０３
［９］ 毕旭灿，刘春荣，裴祖旺，等．常山胡柚小青果生产加
工促农增收调查［Ｊ］．中国果业信息，２０１３，３０（１１）：
１９－２０，２３
（责任编辑：李治飞
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