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不同炮制温度和时间对炮姜中姜酮含量的影响



全 文 :不同炮制温度和时间对炮姜中姜酮含量的影响
徐晓青1,洪 燕2,夏伦祝1,高家荣1,汪永忠1,李钰馨1,2,邓龙飞1,2,韩燕全1
(1.安徽中医药大学第一附属医院 国家中医药管理局中药制剂三级科研实验室,
安徽 合肥 230031;2.安徽中医药大学研究生部,安徽 合肥 230038)
[摘要]目的 考察不同炮制温度和时间对炮姜中姜酮含量的影响。方法 采用超高效液相色谱法对15份不
同炮制温度和炮制时间的炮姜样品中姜酮含量进行测定。色谱条件:色谱柱为Acquity BEH C18(100mm×2.1
mm,1.7μm);流动相为乙腈-水,梯度洗脱;流速0.3ml/min,检测波长280nm,柱温30℃。结果 姜酮进样量
在0.073 2~0.366 0μg时与峰面积呈良好的线性关系(r=0.999 8),平均加样回收率为97.42%(RSD=
2.35%)。炮姜中姜酮含量随着炮制温度和时间的变化明显,以炮制温度为200℃、炮制时间为6min时样品
中姜酮含量最高。结论 炮制过程中姜酮含量随着温度升高和时间延长呈现先升高后降低的趋势,所建立
的超高液相色谱法简便、准确、重现性好,可用于炮姜中新生成分姜酮的测定。
[关键词]超高液相色谱法;炮姜;姜酮
[中图分类号]R927.2 [文献标志码]A [DOI]10.3969/j.issn.2095-7246.2014.05.027
  干姜为姜科植物姜Zingiber officinale Rosc.
的干燥根茎,炮姜为干姜临床常用炮制品,为干姜经
砂烫炮制而成[1]。干姜味辛、性热,能走能守,长于
温中回阳;其砂烫为炮姜后,辛燥之性明显减弱,温
里之力明显弱于干姜,但作用缓和而持久,守而不
走,并长于温经止血[2]。干姜与炮姜的药性发生了
“走”与“守”的转变,功效亦随之变化,其内在机制值
得深入的研究。本课题组前期研究和文献报道均证
实,干姜炮制过程中产生了一种新成分———姜酮
(zingerone,C11H14O3)[3-4],其化学结构见图1。
图1 姜酮的化学结构式
药理学研究表明,姜酮具有一定的抗炎、抗氧
化、抗菌等活性[5-6]。但到目前为止,笔者未见有关
于炮姜中姜酮质量控制和炮制工艺影响方面的系统
研究报道,本实验采用超高效液相色谱法对不同炮
制温度和炮制时间的姜酮含量变化进行了研究,为
基金项目:国家自然科学基金项目(81102811);安徽省自然
科学基金项目(10040606Q40);国家中医药重点学科临
床中药学建设项目(国中医药人教发〔2012〕32号)
作者简介:徐晓青(1977-),男,药师
通信作者:韩燕全,hyquan2003@163.com
炮姜的炮制工艺优选和质量控制提供了实验依据。
1 仪器与材料
1.1 仪器 超高效液相色谱仪 (Waters Acquity
H-Class UPLC):美国沃特世公司,包括四元泵、自
动进样系统、PDA检测器、柱温箱及Empower 2工
作站;超声仪:江苏省昆山超声仪器有限公司;HFB-
200型高速中药粉碎机:湖南省吉首市中州中药机
械厂;炒药设备:自制。
1.2 试药 对照品姜酮(批号 122-485,纯度为
98.51%):由上海鼎瑞 化 工 有 限 公 司 提 供,经
1 H-NMR、13C-NMR、IR、MS和 UV等光谱检测确
认其结构;乙腈为色谱纯:美国 TEDIA公司;水为
市售屈臣氏牌蒸馏水;甲醇等试剂均为分析纯;0.22
μm微孔滤膜:北京八方世纪公司。
2 方法与结果
2.1 炮姜的制备 取干姜16份,每份50g,参照课
题组前期实验方法[7]并稍作改进,采用砂烫法,
180~220℃,每10℃为间隔,每个温度点分别炒制
6、7、8min,得3份样品;共炮制得到15份炮姜样
品,1份干姜不炮制备用,实验共重复进行2次,计
算平均值。
2.2 对照品溶液的制备 精密称取姜酮对照品
7.32mg,精密称定,置10ml容量瓶中,加甲醇溶解
并定容至刻度,摇匀,制成0.732mg/ml的对照品储
备液,4℃冷藏。实验前,精密移取1.0ml对照品储
备液至10ml容量瓶中,加甲醇稀释定容至刻度,得
质量浓度为0.073 2g/ml的实验用对照品溶液。
2.3 供试品溶液的制备 分别取干姜和各炮姜饮
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片适量,粉碎后过40目筛。取过筛粉末0.3g左
右,精密称定后,置具塞锥形瓶中,加10ml甲醇称
定质量,超声(150W,40Hz)30min,放冷,称量,加
甲醇补足损失质量,摇匀,静置,测定前用0.22μm
滤膜滤过,取续滤液作为供试品溶液。
2.4 方法学考察
2.4.1 色谱条件[8-9]:色谱柱为 Waters Acquity
UPLC BEH C18柱(100mm×2.1mm,1.7μm);流
动相为乙腈(A)-水溶液(B),梯度洗脱程序为(A-B:
0~3min,24∶76;3~3.5min,100∶0;3.5~5min,
100∶0;5~6min,24∶76;6~8min,24∶76);检测波
长为280nm,流速为0.30ml/min,柱温30℃。此条
件下对照品、干姜和炮姜样品色谱图见图2。
图2 姜酮对照(A)、干姜(B)和炮姜(C)的超高效液相色谱图(1.姜酮)
2.4.2 标准曲线的绘制:精密吸取对照品溶液1.0、
2.0、3.0、4.0、5.0μl,自动进样器进样,测定峰面
积,以色谱峰面积值(y)对其质量分数(x)进行线性
回归计算,得线性回归方程为y=161 095.6x-
8 115.8,r=0.999 8,表明姜酮进样量在0.073 2~
0.366 0μg时与峰面积呈良好的线性关系。
2.4.3 精密度实验:精密吸取对照品溶液2μl,连
续进样6次,按“2.4.1”项下的色谱条件测得姜酮峰
面积的RSD为1.20%(n=6),结果表明仪器精密
度良好。
2.4.4 稳定性实验:取S 12(210℃,7min)样品溶
液按照“2.3”项下方法制备供试品溶液,分别于0、
2、4、6、12、24h按“2.4.1”项下的色谱条件进样,记
录姜酮峰色谱面积,结果峰面积的RSD为2.39%
(n=6),表明供试品溶液在24h内稳定。
2.4.5 重复性实验:取S5(190℃,6min)样品粉
末,分别按“2.3”项下方法制备供试品溶液6份,按
“2.4.1”项下色谱条件进样,记录姜酮峰色谱面积,
结果峰面积RSD为2.79%(n=6),表明该方法重
现性良好。
2.4.6 加样回收率实验:取S14(220℃,6min)样
品粉末一定量,共6份,精密称定后,置具塞锥形瓶
中,各加入对照品适量,按“2.3”项下方法制备供试
品溶液,按色谱条件测定姜酮峰色谱面积并计算回
收率,结果6份样品的平均加样回收率为97.18%
(RSD=1.29%)。
2.4.7 姜酮含量测定结果与分析:取干姜和15份
炮姜样品粉末,按“2.3”项方法制备溶液,进样2μl,
测定峰面积,计算样品含量,见表1。
表1 样品含量测定结果(n=2)
样品
姜酮含量/
(mg/g)
样品
姜酮含量/
(mg/g)
S1 - S9  0.724
S2  0.108 S10  0.679
S3  0.307 S11  1.041
S4  0.646 S12  0.976
S5  0.633 S13  0.967
S6  0.659 S14  1.021
S7  0.759 S15  0.845
S8  1.143 S16  0.455
  从表1结果可见,干姜中未能测出姜酮(见图
2),表明姜酮确为在炮制过程中产生的新成分,从炮
制样品的姜酮含量测定结果来看,随着炮制温度升
高姜酮含量呈增加的趋势,当温度到达200℃、时间
6min时,姜酮的含量达到最高;随着温度继续升高
或炮制时间的延长,姜酮的含量开始下降,提示就姜
酮的含量来看,200℃、6min左右应是炮姜的建议
炮制温度和时间。
2.4.8 验证实验:按上述姜酮含量最高的炮制工
艺,即炒制温度200℃、炒制6min,进行3批验证试
验,按“2.4.1”项下色谱条件进样,计算姜酮的含量
分别为1.148、1.201、1.129mg/g,平均含量为
1.159mg/g,炮制工艺重复性良好,合理可行。
3 讨论
炮制前后,中药的成分会发生“质”与“量”两个
方面的变化,尤其是“质”的变化即新成分的产生更
是其药性和功效变化直观的体现。《中华人民共和
国药典》2010版中规定,干姜和炮姜的含量测定要
求标准是以6-姜酚计算分别不得少于0.60%和
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0.30%[1]。课题组前期研究表明,干姜中的姜酚成
分含量较高,但在炮制过程中会明显下降[7]。如果
单以炮制过程中可以降低的6-姜酚最低含量来控
制炮姜的质量,存在一定的缺陷,即选用达不到干姜
标准而符合炮姜标准的药材,轻度炮制即可达标,炮
制过程的重要性明显降低。
本实验在文献和前期实验基础上,经过流动相
比例、提取方法、色谱条件等条件的优化,最终建立
了炮姜中新生成分———姜酮含量的超高效液相色谱
测定方法,该方法具有分析时间快、分离度好、色谱
条件简单等优点;对不同炮制温度和炮制时间的炮
姜中姜酮含量测定结果表明,姜酮含量较高且随着
炮制温度和炮制时间变化而变化,提示在炮姜的质
量控制和炮制机制研究时,应考虑将姜酮作为参考
指标之一。另外,对于姜酮的药理活性和对其炮制
前后药性、功效变化的影响机制则是值得进一步研
究的课题。
参考文献:
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(收稿日期:2014-09-25)
Effects of Different Processing Temperatures and Times on Content of Zingerone
in Processed Ginger
XU Xiao-qing1,HONG Yan2,XIA Lun-zhu1,GAO Jia-rong1,WANG Yong-zhong1,LI
Yu-xin1,2,DENG Long-fei1,2,HAN Yan-quan1
(1.The First Affiliated Hospital of Anhui University of Chinese Medicine &Grade 3 Scientific Research Labora-
tory of Traditional Chinese Medicine Preparation,State Administration of Traditional Chinese Medicine,Anhui
Hefei 230031,China;2.Graduate Division,Anhui University of Chinese Medicine,Anhui Hefei 230038,China)
[Abstract]Objective To investigate the effects of different processing temperatures and times on the con-
tent of zingerone in processed ginger.Methods The content of zingerone from 15samples of ginger pro-
cessed at different temperatures for different times was determined by ultra-high-performance liquid chro-
matography(UPLC).UPLC was performed on an Acquity BEH C18column(100mm ×2.1mm,1.7
μm)with a mobile phase of acetonitrile-water for gradient elution at a flow rate of 0.3ml/min,a detection
wavelength of 280nm,and a column temperature of 30℃.Results The content of zingerone showed a
good linear relationship with the peak area within 0.073 2-0.366 0μg(r=0.999 8);the average recovery
rate was 97.42%,with a relative standard deviation of 2.35%.The content of zingerone in processed gin-
ger varied significantly with processing temperature and time;the content of zingerone was highest when
the processing temperature was 200℃and the processing time was 6min.Conclusion The content of
zingerone first increases and then decreases as the temperature rises and the processing lasts.This estab-
lished UPLC method is simple,accurate,and repeatable and can be used for the determination of zingerone
in processed ginger.
[Key words]ultra-high-performance liquid chromatography;processed ginger;zingerone
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