全 文 ：2.3.2　以 lgC(C为丹酚酸 B含量)对时间 t进行
线性回归 ,得不同温度下 lgC与时间 t的校正方程 ,
由表 4可知 , lgC与 t成直线关系 ,该实验条件下 ,丹
酚酸 B的变化反应是典型的一级反应 。符合方程:
lgC=-k/2.303t+lgC0 ,用直线回归法求得各实验
温度下的反应速度常数 k值 。结果见表 4。
2.3.3　取表 4中各反应温度下的 k值 ,用 lgk和
1 /t作图 ,可求得 25℃时的 k值为 1.7570×10-4 ,进
一步求得在室温 25℃下有效成分减少 1 /10所需的
时间 ,即有效期:t0.9 =0.1054 /k25℃ =600 d=20m=
1.67y。
3 　讨论
3.1 　丹参为方中君药 ,主要有效成分为丹酚酸 B,
故选择其作为本制剂的含量测定指标成分 。将丹酚
酸 B对照品溶液在紫外分光光度计上进行全波长
扫描 ,结果在 286nm处有最大吸收 ,故选择 286 nm
作为含量测定的检测波长 。
3.2 　中药制剂稳定性考察应选择能反映一定治疗
活性的 ,特别是其中不稳定的成分作为考核指标 ,该
方主药丹参水溶性总酚酸类成分较不稳定 ,故选择
丹酚酸 B含量作为考察该制剂质量稳定性的重要
指标 。
3.3　光照试验结果表明 ,丹酚酸 B含量无明显变
化 ,说明该制剂中丹酚酸 B对光的稳定性良好 。
3.4　中药制剂稳定性研究试验方法主要包括留样
观察法和加速试验法 ,本文依据化学动力学原理 ,采
用高温加速实验法对该制剂的有效期进行了预测 ,
下一步需进行留样观察实验 ,从性状 、水分 、含量 、溶
化性等项目进行考察 ,与加速实验结果作对照 ,才能
确定产品的实际有效期 。
参 考 文 献
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酶法除南板蓝根粗多糖中蛋白质
的最佳工艺研究
盛家荣 ,孙小兵 ,卜铃东 ,陆健春
(广西师范学院化学与生命科学学院 ,广西 南宁 530001)
　　摘要　目的:优选南板蓝根多糖提取的最佳酶法脱蛋白质工艺条件。方法:用均匀设计方法设计最佳脱蛋白
质工艺条件 , 以水解液中多糖含量为测定指标 , 考察 pH、胃蛋白酶的用量 、水解温度和水解时间 4个因素对有效成
分多糖提取的影响。结果:最佳脱蛋白质工艺条件为 pH7.0,胃蛋白酶的用量 28 g/kg, 水解温度 50℃, 水解时间 4
h,水解液多糖含量为 87.8%。
关键词　均匀设计;南板蓝根;多糖;除蛋白
中图分类号:R284.2　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2009)04-0615-03
收稿日期:2008-10-13基金项目:广西科学研究与技术开发计划项目(0424008-3E);广西自然科学基金项目(0832105)作者简介:盛家荣(1966-),女,研究员 ,研究方向:天然药物化学研究;Tel:0771-3101993, E-mail:shengjiarong99@ 163.com。
　　南板蓝根为爵床科植物马蓝 [ Baphicacanthus
cusia(Nees)Bremek]的干燥根茎及根 ,主要分布在
我国华南 、西南地区 ,尤其在广西分布范围广 ,资源
蕴藏量巨大 。临床主要用于防治流感 、流脑以及肝
炎等 ,在抗病毒方面优于北板蓝根 〔1〕。南板蓝根含
有多种化学成分 ,其中多糖具有多种生物活性 ,且有
可能为抗病毒的有效成分之一 〔2-5〕。
多糖中的蛋白质去除一般有 3种方法:Sevag
法 、三氟三氯乙烷法 、三氯醋酸法 ,其中 Sevag法在
避免降解上有较好效果 ,但效率不高 ,如能配合加入
一些蛋白质水解酶进行酶解后 ,再用 Sevag法效果
更佳 〔6〕。对于南板蓝根多糖中蛋白质的去除本实
验采取酶解后再用 Sevag法 ,并用均匀设计法筛选
南板蓝根粗多糖的蛋白质去除工艺 ,以期以较低的
成本优选出最佳的脱蛋白质工艺条件。
1　仪器与材料
·615·JournalofChineseMedicinalMaterials　　第 32卷第 4期 2009年 4月
722型光栅分光光度计;Sartorius电子天平;
LD5-10离心机;D60-2F型电动搅拌机;pH计(PHS-
3CA型 ,上海);DF-101S集热式恒温加热磁力搅拌
器 。
南板蓝根采自广西恭城县栗木乡全会村 ,经广
西中医学院刘寿养副教授鉴定为爵床科植物马蓝
[ Baphicacanthuscusia(Nees)Bremek] ;实验试剂均
为分析纯。
2 　板蓝根粗多糖的提取及蛋白质的酶解
板蓝根※用水洗净 、60℃以下烘干 、粉碎※板蓝
根干粉※加乙醇 、乙醚回流 〔7〕※脱脂板蓝根粉※加
水控温提取 3次 〔8〕※滤液※浓缩※冷却※加 4倍量
95%乙醇※沉淀※干燥※粗多糖干品 ※称量※加
10倍蒸馏水加热溶解※调节 pH值※加胃蛋白酶恒
温水解※灭酶※过滤※浓缩 、干燥※定容※硫酸※
蒽酮法测吸光度※计算粗多糖中多糖含量※回归分
析 ,优化出最佳实验方案※验证实验。
3　提取工艺优选
3.1　实验方案设计　在南板蓝根粗多糖(均为 1 g
干粉)的蛋白质酶解工艺中 ,通过采用胃蛋白酶 、胰
蛋白酶 、木瓜蛋白酶的预实验比较 ,选择水解效果比
较好的胃蛋白酶进行酶解实验 。欲考察的 4个因素
为:酶用量 、酶解温度 、起始 pH、水解时间 ,取值范围
分别为:酶用量(胃蛋白酶 /底物)X1:8.0 ～ 28.0 g/
kg;酶解温度 X2:40 ～ 50℃;起始 pHX3:7.0 ～ 8.0;
水解时间 X4:1 ～ 4h。再根据各种因素的取值范围 、
试验精度要求及均匀设计表 〔9〕中的 U10 (105)设计
出实验方案 ,见表 1。
　　表 1 　胃蛋白酶水解的实验方案 U
10
(105)
实验号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
X1 12.0 16.0 20.0 24.0 28.0 8.0 12.0 16.0 20.0 24.0
X2 40 40 40 45 45 45 45 50 50 50
X3 7.5 8.0 7.5 8.0 7.0 8.0 7.0 7.5 7.0 7.5
X4 1 2 4 1 3 4 2 3 1 2
3.2 　南板蓝根多糖含量的测定 (硫酸-蒽酮
法 〔10, 11〕)
3.2.1　标准曲线的绘制:精密量取葡萄糖标准溶
液(1.000g/L)0、1、2、3、4、5、6 mL,分别加入到 100
mL容量瓶中定容;分别吸取 1 mL于试管中 , 加 4
mL蒽酮-硫酸试剂 ,摇匀后迅速浸入冰水中冷却 5
min,各管加完后一起浸入沸水浴中 ,管口加塞 ,以防
蒸发。煮沸 10 min取出 ,用自来水冷却;室温放置
10 min,于 620 nm处测其吸光度 ,得吸光度 A对浓
度 C的回归方程 A=6.8549C, r=0.9978。
3.2.2　样品中多糖含量的测定:准确称取干燥恒
重的粗多糖各 10 mg,用蒸馏水溶解后于 250 mL容
量瓶中定容 , 分别吸取 1 mL样品液于试管中 ,同
“ 3.2.1”项下操作 ,测定粗多糖样品的吸光度并根
据标准曲线的回归方程及以下公式计算样品中多糖
的含量:
样品中多糖的含量 (%)=(C样 ×250 ×10-3 /
W样)×0.90×100%
其中:C样 表示样品浓度(g/L);W样表示粗多糖
样品的质量(g);0.90表示多糖的校正系数 〔11〕。每
试验号的试验按实验方法重复 2次 , 2次所得结果
取平均值作为该试验号的结果(见表 2)。
3.3 　结果分析
3.3.1　实验结果:不同提取条件下南板蓝根粗多
糖水解液中多糖的含量见表 2。
3.3.2 　数据处理及回归方程:由表 2不能看出水
解液中多糖含量与各实验因素的相互关系 ,故需对
表 2的数据进行逐步回归分析 ,得到如下回归方程
及相应参数。
Y= -2322.329 +(-43.69585)×X1 +
59.45986×X2 +347.0689 ×X3 +0.5932481 ×X1 ×
X2 +2.178562×X1 ×X3 +(6.23627E-02)×X22
　表 2 　不同提取条件下水解液中的多糖含量
实验号 X1 /(g/kg) X2 /℃ X3 X4 /h 水解液中多糖含量 /%
1 12.0 40 7.5 1 11.25
2 16.0 40 8.0 2 31.28
3 20.0 40 7.5 4 18.45
4 24.0 45 8.0 1 13.50
5 28.0 45 7.0 3 16.43
6 8.0 45 8.0 4 10.80
7 12.0 45 7.0 2 11.93
8 16.0 50 7.5 3 22.05
9 20.0 50 7.0 1 29.48
10 24.0 50 7.5 2 40.05
3.3.3 　最佳工艺条件:由回归方程不易看出酶解
条件对水解液中多糖含量的总体影响 ,故通过网格
优化法〔12〕来求最大值 ,得到结果为:X1 =28, X2 =
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49.99995, X3 =7, X4 =4.000002, Y=89.07877。在
实验操作易控条件下 ,理论上胃蛋白酶水解板蓝根
粗多糖中蛋白质的最佳实验条件为:酶用量 X1 =28
g/kg,酶解温度 X2 =50℃,起始 pHX3 =7,水解时间
X4 =4 h,水解液多糖含量最高为 89.1%。
3.4 　验证实验　为了验证优化条件的可靠性 ,分
别称取粗多糖干品 1 g溶于 10mL蒸馏水中 ,选 X1
=28g/kg、X2 =50℃、X3 =7、X4 =4h,进行验证实验
(设 3次重复),测得酶解后总多糖平均含量为:Y=
87.8%。在 α=0.05时 ,回归方程的置信区间为:Y
=(89.1 ±1.96 ×S)%=87.7% ～ 90.5%,验证结
果落于置信区间内 ,证明优选工艺条件准确可信。
4 　讨论
4.1 　单独用 Sevag法脱蛋白效果欠理想 ,重复次
数多 ,费时费溶剂;而采取酶解后再用 Sevag法脱蛋
白效果明显 ,而且减少了试剂的用量。实验结果表
明:单独用 Sevag法脱蛋白 , 30 g的粗多糖重复脱蛋
白达 60次才能除尽;而采取酶解后再用 Sevag法脱
蛋白 , 30g粗多糖脱蛋白重复操作 15 ～ 20次即可除
尽 。
4.2 　用硫酸 -蒽酮法测吸光度时 , 一定要现用现
配 ,实验发现溶液的吸光度会随着溶液放置时间的
延长而增大 。
参 考 文 献
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超声法提取铁皮石斛多糖工艺的研究
叶余原
(台州学院医药化工学院 ,浙江 临海 317000)
　　摘要　目的:探索铁皮石斛多糖的超声波提取工艺条件。方法:考察提取温度 、固液比 、提取时间和超声频率 4
个因素对铁皮石斛多糖提取得率的影响。在单因素实验的基础上 , 通过正交试验优化提取工艺。结果:综合确定
的优化提取工艺条件为:1∶30的料液比 , 50℃超声水浴 , 45 kHz超声频率 , 提取 1.5 h, 在此条件下铁皮石斛多糖的
平均提取得率为 15.3%, 结论:超声提取法的多糖得率大于常规水提法 ,更加高效。
关键词　超声提取;铁皮石斛;多糖
中图分类号:R286　　文献标识码:A　　文章编号:1001-4454(2009)04-0617-04
收稿日期:2008-10-14基金项目:浙江省教育厅计划项目(200803289)作者简介:叶余原(1969-),男,讲师 ,硕士 ,主要从事生物医药研究与开发;Tel:13806562108, E-mail:yeyuyuan@163.com。
　　铁皮石斛(DendrobiumcandumWal.exLindl.)
是兰科石斛属多年生附生草本植物 ,为 《中华人民
共和国药典 》收载的 5种石斛属植物之一 , 早在
1989年出版的 《中国濒危珍稀植物》中就被列为濒
危种 。其药用部位是新鲜或干燥的茎 ,具有益胃生
津〔1〕、滋阴清热 、降血糖〔2〕、增强免疫 〔3〕和抗肿瘤〔4〕
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