全 文 ：◎研究原著 ◎ 中国临床药理学与治疗学中国药理学会主办
CN 34-1206 R , ISSN 1009-2501
E-mail:ccpt96@21cn.com
2006 Feb;11(2):197-201
2005-10-24收稿　2005-12-12修回
殷志勇 ,男 ,硕士研究生 ,研究方向:呼吸药理。
Tel:(0)13951848634 　 E-mai l:yzycpu@hotmail.com
王秋娟 ,通讯作者 ,女 ,教授 ,博士生导师 ,研究方向:心血管药理。
Tel:025-83271341 　 E-mai l:qjwangnj@sina.com
山苍子水提物柠檬醛抗哮喘作用的实验研究
殷志勇 ,王秋娟 ,贾 莹
中国药科大学生理教研室 ,南京 210009 ,江苏
摘要　目的:研究山苍子水提物柠檬醛的抗哮喘作
用及其机理。方法:通过豚鼠氯化乙酰胆碱-磷酸组
胺喷雾致喘法 、小鼠浓氨水喷雾引咳法 、小鼠酚红排
泻法观察柠檬醛的平喘 、镇咳 、祛痰作用 ,通过观察
张力变化研究柠檬醛对豚鼠离体气管环张力的影响
及乙酰胆碱对气管收缩的抑制作用。结果:柠檬醛
能明显延长氯化乙酰胆碱-磷酸组胺喷雾引起的豚
鼠哮喘潜伏期 ,能延长浓氨水喷雾诱发小鼠咳嗽反
应潜伏期 ,明显减少咳嗽次数 ,能增加小鼠呼吸道酚
红排泌量 ,能抑制乙酰胆碱对豚鼠离体气管平滑肌
的收缩作用 ,使乙酰胆碱所致气管平滑肌量效曲线
右移 。结论:柠檬醛气雾剂具有一定的平喘 、镇咳和
祛痰作用 ,具有良好的支气管解痉作用 。
关键词　柠檬醛;平喘;镇咳;祛痰;气管
中图分类号:R974
文献标识码:A
文 章 编 号:1009-2501(2006)02-0197-05
山苍子为樟科植物的成熟果实 ,在药典中作为
中药材收载 ,味辛 、性温。归脾 、胃 、肾 、膀胱经 。具
有温中散寒 ,行气止痛功效[ 1] 。现代药学研究表明 ,
山苍子的水提物挥发油柠檬醛具有显著增加离体兔
心冠脉血流量;保护心肌缺血再灌注损伤;抗室性心
率失常;降低血小板表明活性 ,抑制血栓形成和抗菌
抗炎的作用[ 2] ,但其对平喘作用及其机理的研究尚
未见报道 。本文以豚鼠氯化乙酰胆碱-磷酸组胺喷
雾引喘法 、小鼠浓氨水喷雾法 、小鼠酚红排泌量法等
观察柠檬醛气雾剂的平喘 、镇咳和祛痰作用 ,并通过
离体气管平滑肌实验对其平喘机理进行探讨。
1　材料与方法
1.1　试验药物与试剂　挥发油柠檬醛:(citral ,分子
量 152.23 ,含量 71.94%,山苍子整粒果实 ,常压水
蒸汽蒸馏提取8 h ,控制加热温度使馏出液总体积为
8 ～ 10倍药材量 ,分离收集挥发油。使用前用 0.4%
吐温-80稀释成所需浓度 ,本校生命与科学技术学
院提供), 溶媒(0.4%吐温 -80), 氯化乙酰胆碱
(Ach ,上海三爱思试剂有限公司),磷酸组胺(His ,上
海丽珠东风生物技术有限公司),异丙肾上腺素
(ISO ,上海禾丰制药有限公司),磷酸可待因(北京中
顺制药厂),浓氨水(上海久一化学试剂有限公司),
氯化铵(amchlor ,汕头市化学试剂厂),酚红(PSP ,
EDWARD GURR Ltd.),吲哚美辛(indomethacin ,江苏
太仓制药厂)。
1.2　动物　健康豚鼠 ,体重 150 ～ 200 g ,雌雄各半 ,
由南京江宁青龙山实验动物养殖场提供 ,动物合格
证号:SCXK(苏)2002-0004;昆明种小鼠 ,雌雄兼用 ,
中国药科大学新药筛选中心 ,动物许可证号:SYXK
(苏)2002-0010。
1.3　仪器　微型人工呼吸器(江湾 Ⅰ型 ,150 ml 次 ,
100次 min ,第二军医大学教材处),S-888E超声波雾
化器(中外合资南京道芬电子有限公司),玻璃喷头 ,
2 L 钟罩 ,TU-1800型紫外分光光度计(北京普林通
用仪器有限公司), HW-4000SE 恒温平滑肌槽 , BL-
410生物机能实验系统肌肉张力换能器 JE-100型
(高碑店市新航机电设备有限公司 ,编号 2310)。
1.4　豚鼠对 Ach-His引喘实验[ 3-5] 　将豚鼠逐个放
入玻璃钟罩内 ,用引喘喷雾装置喷入 2%Ach和 0.1
%His等溶混合液 15 s ,观察豚鼠的引喘潜伏期(作
为给药前引喘潜伏期),120 s内出现哮喘的豚鼠为
合格的敏感动物 。取筛选合格豚鼠 140只 ,分为溶
媒组 、异丙肾上腺素组 、柠檬醛气雾剂 200 、100 、50 、
·197·
25 、12.5 mg·ml-1共 7组 ,每组 20只 ,雌雄各半 。以
喷雾方式给药 ,用微型人工呼吸器使药液雾化喷入
钟罩内 ,给药1 min ,保持3 min后将动物逐只置于另
一个钟罩内 ,以超声波雾化器喷入 2 %Ach 和 0.1
%His等溶量混合液15 s ,然后观察豚鼠引喘潜伏期
(以抽搐翻倒为指征)。以各组引喘前 、引喘后潜伏
期比较 ,用 t 检验进行数据统计处理 。
1.5　小鼠浓氨水喷雾致咳测定[ 6] 　小鼠 90只 ,雌
雄各半 ,体重 18 ～ 22 g ,按体重随机分为 6组 ,每组
15只。对照组(蒸馏水)、溶媒组及磷酸可待因组
(25 mg·kg-1), 给药组分为柠檬醛气雾剂高(200
mg·ml-1)、中(100 mg·ml-1)、低(50 mg·ml-1)三组 。
对照组 、溶媒组和给药组小鼠用微型人工呼吸器 、玻
璃喷头使药液雾化喷入钟罩内给药(喷雾 2 min ,保
持3 min),磷酸可待因组(ig),各组均给药 2次·d-1 ,
连续 3 d ,观察动物有无异常变化。末次给药后 0.5
h ,每鼠置于 2 L 的钟罩内 ,通过超声雾化器等量将
25%氨水均匀地喷入钟罩内 ,喷雾 15 s后即转入另
一个钟罩内 ,以小鼠腹肌收缩(缩胸)同时张大嘴或
伴有咳嗽声为指标 ,用听诊器记录小鼠咳嗽的潜伏
期和 2 min内小鼠咳嗽次数 。用 t 检验进行数据统
计处理。
1.6　小鼠呼吸道酚红排泌量测定[ 3 , 6] 　小鼠 90只 ,
雌雄各半 ,体重 18 ～ 22 g ,按体重随机分为 6组 ,每
组15只。对照组(蒸馏水)、溶媒组及氯化铵组(1.0
g·kg-1), 给 药组 分为 柠 檬醛 气雾 剂 高 (200
mg·ml-1)、中(100 mg·ml-1)、低(50 mg·ml-1)3组 。
对照 、溶媒和给药组小鼠用微型人工呼吸器(150 ml
次),玻璃喷头使药液雾化喷入钟罩内给药(给药 2
min ,保持 3 min),氯化铵组(ig),各组均给药 2次 d ,
连续 3 d。末次药后 0.5 h ,每鼠腹腔注射 5%酚红
溶液 0.5 ml 只 , 30 min 后处死动物 ,剥去气管周围
组织 ,剪下自甲状软骨下至气管分支处的一段气管 ,
放进盛有 2ml生理盐水的试管中 ,再加入 1 mol·L-1
NaOH 0.1 ml ,摇匀 ,离心 5 min(3 000 r·min-1),用紫
外分光光度计 TU-1 800(波长为 546 nm)测 A 值 。
用 t检验进行数据统计处理 。
1.7　豚鼠离体气管平滑肌实验　气管环的制备[ 7] :
取体重 300 ～ 400 g 健康豚鼠 ,击头致昏后迅速分离
主气管 ,置冰冷充氧的 K 氏液(单位 mol·L-1 :NaCl
120×10-3 、KCl 4.7×10-3 、CaCl2 ×10-3 、KH2PO 4 ×
10
-3 、NaHCO3×10-3 、MgSO4·7H2O×10-3 、Glucose ×
10
-3)中 ,轻柔取出气管周围结缔组织 ,将气管剪成
3 ～ 5 mm 的气管环 ,每只豚鼠可制备 5 ～ 7个气管
环 ,悬挂于含 40 ml(37±0.5 ℃)的K氏液恒温浴槽
中 ,并持续通入混合气体(95%O2 ,5%CO2),下端固
定 ,上端接肌张力换能器 ,用 BL-410生物机能实验
系统记录肌张力变化 ,标本给前负荷约 3 g , 每 15
min换营养液 1次 ,每次换液均同时加入吲哚美辛 1
μmol·L-1 ,抑制环加氧酶 ,消除 PGs(前列腺素)对标
本的影响[ 8] ,平衡2 h开始实验 。
对Ach收缩反应的测定[ 9] :在浴槽内加入 Ach
(1.4×10-3mol·L-1),直至出现最大收缩效应 ,出现
张力平台 ,观察无明显变化后 ,用 K氏液冲洗 3次 ,
以此张力平台为对照。再平衡 1 h ,用相同浓度的
Ach使气管出现最大收缩 ,达张力平台 5 min后 ,分
别在0 、5 、10 、15 min加入溶媒 10 μl ,平行做 6遍;重
新平衡气管 ,加入相同浓度 Ach ,再用累计加药法加
入柠檬醛 , 使浴槽内累计浓度分别达到:6.6 ×
10
-10 、6.6×10-9 、6.6×10-8 、6.6×10-7 、6.6×10-6
mol·L-1;重新平衡气管 , 加入相同浓度 Ach , 加入
ISO ,使浴槽内累计浓度分别达到 0.1×10-9 、0.1×
10
-8 、0.1×10-7mol·L-1[ 9] ,每次加药或 ISO 均在前
一个剂量达到最大舒张效应后立即加入 ,每个浓度
做 6组数据。以加入Ach 出现最大收缩后为基础 ,
用加药或 ISO后稳定的张力值减去加 Ach后的最大
收缩值 ,再除以加 Ach 后的最大收缩值 ,计算抑制
率 。
对Ach量效曲线的测定[ 9] :用累计加药法加入
Ach ,使浴槽内浓度依次为 1.4×10-8 、1.4×10-7 、
1.4 ×10-6 、 1.4 ×10-5 、1.4 ×10-4 、1.4 ×10-3
mol·L-1 ,测定其量效关系曲线 ,换液重新稳定 ,重复
作 Ach量效关系曲线 4次 ,观察其反应一致性。正
式实验 ,在浴槽中依次加入柠檬醛使其浓度分别为
0 、6.6×10-10 、6.6×10-9 、6.6×10-8 、6.6×10-7 、6.6
×10-6mol·L-1 ,每加入一种浓度的柠檬醛后孵育 15
min ,再用累计加药法加入 Ach ,测定其量效关系曲
线 。以柠檬醛浓度为 0 mol·L-1时 Ach引起的最大
张力为 100%,计算加入柠檬醛后 Ach 引起的收缩
效应。
2　结果
2.1　柠檬醛气雾剂对豚鼠哮喘潜伏期的影响　气
雾剂200mg·ml-1组 、100 mg·ml-1组和异丙肾上腺素
组给药前后潜伏期存在极显著性差异(P <0.01),
柠檬醛气雾剂50 mg·ml-1组和 25 mg·ml-1组存在显
著差异(P <0.05)。通过概率单位法计算得出柠檬
醛气雾剂的 ED50是 93.4 mg·ml-1 (62.0 ～ 140.8
·198· Chin J Clin Pharmacol Ther 2005
mg·ml-1)。 表明柠 檬醛气雾 剂在 200 和 100
mg·ml-1能极显著性地延长豚鼠哮喘潜伏期 ,在 50
和 25 mg·ml-1能显著延长豚鼠哮喘潜伏期 。提示该
药对豚鼠哮喘有一定的保护作用(表 1)。
表 1　柠檬醛气雾剂对豚鼠哮喘潜伏期的影响(x±s , n=20)
组别 剂量 mg·ml-1 给药前引喘潜伏 s 给药后引喘潜伏期 s 延长率 %
溶媒 0.4% 66.5±11.4 69.7±14.2 -
异丙肾上腺素 0.5 57.4±8.0 196.9±95.9c 242.7
柠檬醛 200 64.2±8.3 115.2±32.7c 79.2
100 65.4±11.4 98.4±31.2c 50.5
50 62.9±12.8 75.8±20.0b 20.5
25 59.2±10.2 67.7±15.0b 14.4
12.5 55.3±5.4 58.3±7.2 5.4
与给药前引喘潜伏期比较bP<0.05 , cP<0.01
2.2　柠檬醛气雾剂对小鼠咳嗽的响　与对照组比
较 ,柠檬醛气雾剂 200 mg·ml-1组在延长小鼠咳嗽潜
伏期有极显著差异(P <0.01),磷酸可待因组(6
mg·kg-1)有显著差异(P <0.05)。柠檬醛气雾剂
200 mg·ml-1组 、在减少小鼠咳嗽次数时有显著差异
(P<0.05),磷酸可待因组(6 mg·kg-1)在减少小鼠
咳嗽次数时有极显著差异(P <0.01)。表明该药有
一定的镇咳作用(表 2)。
表 2　柠檬醛气雾剂对小鼠咳嗽潜伏期及咳嗽次数的影响
(x±s , n=15)
组别 剂量 潜伏期 s
咳嗽次数
次
对照组 - 37±10 20±6
溶媒组 0.4% 37±10 20±6
磷酸可待因组 6 mg·kg-1 , ig 49±14b 13±5c
柠檬醛 200 mg·ml -1 53±13c 15±5b
100 mg·ml -1 39±13 19±5
50 mg·ml -1 32±11 22±10
与对照组比较bP<0.05 , cP<0.01
2.3　柠檬醛对小鼠呼吸道酚红排泌量的影响　与
对照组比较 ,柠檬醛气雾剂 200 mg·ml-1和氯化铵组
(1.0 g·kg-1)组对小鼠呼吸道酚红排泌量有极显著
性差异(P<0.01)。表明该药在 200 mg·ml-1时有一
定的祛痰作用(表 3)。
2.4　柠檬醛对 Ach收缩反应的影响　柠檬醛有明
显的抑制Ach引起的豚鼠离体气管收缩的作用 ,并
且与随浓度的增大而增强 , 在浓度 1.0 ×10-6
mol·ml-1时达最大作用 ,使气管张力明显下降 , 以
Ach刺激最大效应为 100%,计算每次给药后的反应
率 ,用概率单位法求的拮抗参数 IC50是 1.67×10-7
mol·L-1(6.48×10-8 ～ 4.28×10-7mol·L-1 , n =6);
异丙肾上腺素能显著抑制Ach引起的豚鼠离体气管
的收缩作用 ,使气管张力下降;而溶媒组只是在正负
1%之间变化 ,几乎对离体气管没有什么影响(图 1
-3)。
表 3　柠檬醛气雾剂对小鼠呼吸道酚红排泌量的影响(x ±
s , n=15)
组别 剂量 吸光度值(A)
对照组 - 0.033±0.008
溶媒组 0.4% 0.033±0.008
氯化铵组 1.0 g·kg-1 , ig 0.060±0.016c
柠檬醛 200 mg·ml-1 0.048±0.014c
100 mg·ml-1 0.039±0.014
50 mg·ml-1 0.036±0.015
与对照组比较cP<0.01
图 1　柠檬醛对 Ach 引起的豚鼠离体气管收缩作用的影响
(n=6)
2.5　柠檬醛对 Ach量效曲线的影响　以未加 citral
的Ach收缩气管平滑肌的最大反应为 100%,计算
加 citral前 、后 Ach各浓度时收缩反应的百分率 ,结
果见图图 4。Ach 量效反应曲线 ,PD2(亲和力指数)
·199·中国临床药理学与治疗学 2005
为 4.35。终浓度分别为 6.6×10-10 、6.6×10-9 、6.6
×10-8 、6.6×10-7 、6.6×10-6mol·L-1的 citral使 Ach
量效反应曲线发生右移 ,浓度越高量效曲线右移越
明显 ,PD 2[ 10](减活指数)为 4.18(图 4)。
图2　异丙肾上腺素对 Ach引起的豚鼠离体气管收缩作用
的影响(n=6)
图3　溶媒对 Ach引起的豚鼠离体气管收缩作用的影响(n
=6)
图 4　柠檬醛对 Ach量效曲线的影响
3　讨论
哮喘是一种慢性气道炎症性疾病 ,HIS 、Ach 、白
三烯和 TAX2 人是慢性气道炎症的主要介质 ,可引
起支气管痉挛 、气道变应性炎症和气道高反应
性[ 11] 。临床表现为反复发作的喘息 、呼吸困难 、胸
闷或咳嗽 ,常在夜间或清晨发作 ,多数患者可经治疗
缓解或自行缓解[ 12] 。解痉 、祛痰 、镇咳的药物可以
缓解哮喘发作时的临床表现 ,提高哮喘患者的生活
质量。
研究结果表明 ,柠檬醛气雾剂对乙酰胆碱-组
胺所致的豚鼠哮喘有明显的平喘作用 ,能极显著性
地延长豚鼠哮喘潜伏期 ,同时可以抑制ACh 引起的
豚鼠气管平滑肌收缩 ,又能使ACh 收缩的豚鼠气管
平滑肌累积量效曲线右移 ,表明其平喘机理与其竞
争性拮抗气管平滑肌上的 M 受体从而抑制了胆碱
引起的平滑肌收缩有关 。众所周知 ,阿托品为 M受
体拮抗剂 ,其选择性低 ,解除支气管平滑肌痉挛的同
时还可抑制呼吸道腺体分泌 ,从而增加痰液粘稠度 ,
造成痰液难以咳出[ 8] ,实验表明本药能显著增加小
鼠呼吸道酚红排泌量 ,与阿托品相比本药不会增加
痰液粘稠度 ,其排痰作用有利于减轻呼吸道的阻塞 ,
从而有利于哮喘的缓解。同时研究表明 ,本药能极
显著延长小鼠氨水引咳潜伏期 ,有一定的镇咳作用。
支气管哮喘是一种以气道嗜酸性粒细胞 、淋巴细胞 、
肥大细胞浸润为主 ,涉及多种炎性介质和细胞因子
(白三烯 、TNF-α、组胺 、IL-6 、IL-8[ 13])的慢性非特异性
炎症性疾病[ 14] ,其治疗的根本是抑制炎症细胞和炎
症因子 ,目前市场上白三烯受体拮抗剂均为国外专
利产品 ,本药在本实验室他人初步研究中表明对白
三烯受体有特异性的拮抗作用 ,今后将在这个方向
上进一步验证柠檬醛的平喘机制 。
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Empirical study on antiasthmatic effect of citral from aqueous extract of
fruit of cubeb litsea tree
YIN Zhi-yong , WANG Qiu-juan , JA Ying
Department of Physiology , China Pharmaceutical University , Nanjing 210009 , Jiangsu , China
ABSTRACT　AIM:To study antiasthmatic effect of cit-
ral from aqueous extract of fruit of cubeb litsea tree and its
mechanism.METHODS:By inducing asthma with Ach-
histamine method in guinea pig , cough with ammonia in
mice and the output quantity of phenol red from the tra-
chea in mice , the antiasthmatic was observed , preventing
cough and eliminating phlegm effect of citral.By measur-
ing the tension of guinea-pig isolated tracheal rings , the
both influence of citral was observed on isolated guinea
pig tracheal rings and inhibition s effects of citral on con-
traction induced by Ach.RESULTS:Citral prolonged
apparently the incubation period of asthma due to Ach-
histamine solution in guinea pig and the coughing incuba-
tion period , reduced coughing frequency induced by am-
monia in mice , increased excretion of phenol red from the
respiratory tract in mice , inhibited the constrictions in-
duced by Ach , and shifted the dose-effect curves of Ach
to the right.CONCLUSION:Citral has functions of ex-
pelling phlegm , relieving cough and resisting asthma , sat-
isfactory bronchi spasmolysis.
KEY WORDS 　 citral;asthma resisting;relieving
cough;expelling phlegm;tracheal rings
·201·中国临床药理学与治疗学 2005