全 文 ：此外 ,甘草锌和氨来呫诺均集中在皮肤内部 ,透
过皮肤的药量甚微 ,随着时间的延长 ,两药的量呈趋
于稳定的状态。这一实验结果提示 ,甘草锌和氨来
呫诺能够很好的透进皮肤 ,在溃疡表面发挥局部作
用 ,并不需要进入到全身血液中 ,可以更快 、更好地
达到促进溃疡面愈合的治疗效果。
参考文献
[ 1] 　种清云.中医药治疗口腔溃疡之我见 [ J].陕西中医函授 ,
2001 , 1(1):18.
[ 2] 　刘亚梅 , 季金坤 , 刘　青.甘草锌治疗复发性口疮 36例疗效
观察 [ J].齐鲁药事 , 2005 , 24(2):118.
[ 3] 　卞志家 , 刘　衡 , 王春龙 , 等.氨来呫诺经对兔口腔颊粘膜
的渗透性 [ J].中国药学杂志 , 2006 , 41(9):683.
[ 4] 　Khandw ala A , Richard G.Van Inwegen , et a l.5% Am lex-
an ox oral paste , a new t reatment for recurrent minor aph-
thous ulcers I:Clinical demons t rat ion of acceleration of heal-
ing and resolu tion of pain [ J] .Oral Su rg Oral Med Oral
Pathol Oral Radiol Endod , l997 , 83(2):222-230.
[ 5] 　Atul Kh andw ala , Richard G. Van Inw egen , M artha R.
Charney , et a l. 5% Am lexanox ral paste , a new t reatment
for recu rrent minor aph th ou s ulcers II:Pharmacokinet ics and
dem onst ration of clinical safety [ J].O ral S urg Oral Med Oral
Pathol , 1997 , 83(2):231-238.
[ 6] 　周东新.口腔缓释粘附膜剂与粘附片剂的比较 [ J].现代中
药研究与实践 , 2003 , 17(6):34-36.
[ 7] 　中国药典 [ S].一部 , 2005:59.
(收稿日期 2009-12-24)
HPLC法测定女贞叶乙醇提取物中的齐墩果酸与熊果酸
石　静1 ,聂　晶2＊ ,冯钰锜1＊
(1.武汉大学化学与分子科学学院 化学系 , 湖北 武汉　430072;2.湖北省食品药品监督检验研究院 中药室 ,
湖北 武汉　430064)
摘　要:目的　建立 RP-HPLC 法同时测定女贞叶乙醇提取物中齐墩果酸与熊果酸的方法。 方法　通过系统地考
察温度 、pH 值 、甲醇-乙腈混合有机相中甲醇的量对齐墩果酸 、熊果酸保留时间和分离度的影响 , 最终确定 H PLC
色谱条件为大连依利特 Kromasil C18(250 mm ×4.6 mm , 5 μm)色谱柱;甲醇-乙腈-10 mmo l/ L 乙酸铵(55∶27∶
18)为流动相 , 体积流量为 1 m L/ min , 检测波长为 205 nm , 柱温 20 ℃。结果　齐墩果酸与熊果酸分别在 0.300 ～
3.00 μg 、0.692 ～ 6.92 μg线性关系良好;加样平均回收率分别为 101.4%、100.2%(n=9)。结论　低温 、中性 pH 、
甲醇-乙腈混合有机相有利于齐墩果酸与熊果酸的分离。优化后的色谱方法分离度高 , 重现性好 ,可用于女贞叶乙
醇提取物中齐墩果酸与熊果酸的测定。
关键词:高效液相色谱;女贞叶乙醇提取物;齐墩果酸;熊果酸
中图分类号:R284.1　　　文献标识码:A　　　文章编号:1674-5515(2010)03-0210-05
HPLCDetermination of oleanolic acid and ursolic acid in ethanol extract of
Ligustrum lucidum leaves
SHI Jing 1 , NIE Jing2 , FENG Yu-qi1
(1.Colleg e o f Chemistry and Molecular Sciences , Wuhan Unive rsity , Wuhan 430072 , China;
2.Hubei Institute for Food and D rug Contr ol , Wuhan 430064 , China)
Abstract:Objective　To establish a RP-HPLC me thod fo r simultaneous quantitative de termination of
oleanolic acid and ursolic acid in ethano l ext ract of Ligustrum lucid um Ait.leaves.Methods　Tempera-
ture , pH value and propo rtion o f me thano l and acetonit rile in organic phase w ere sy stematically studied on
the influence of retention and re solution between oleano lic acid and ursolic acid.The opt imized chromato-
g raphic condi tion w as Kromasil C18 column (250 mm×4.6 mm , 5μm);methano l-acetoni t rile -10 mmo l/L
210 现代药物与临床　　Drugs &Clinic　　2010年第 25卷第 3 期
＊ 作者简介　石　静(1984—),贵州省松桃县人 ,硕士研究生 ,主要从事中药有效成分提取分离及分析研究。
＊通讯作者　聂　晶 , T el:027-87272513 , E-m ail:niejingw h@sina.com
ammonium acetate (55∶27∶18)as mobile phase wi th f low rate 1.0 mL/min.The detection w aveleng th
w as 205 nm and column temperature w as 20 ℃.Results　The linear ranges o f o leanolic acid and ursolic
acid were 0.300 ～ 3.00 μg , 0.692 ～ 6.92 μg respectively ;the average recoveries were 101.4%, 100.2%
(n=9)respectively.Conclusion　Low temperature , neutral pH and mixed o rganic phase wi th methanol-
acetonit rile can improve resolution of oleano lic acid and ursolic acid.The optimized me thod can achieve
bet ter resolut ion and reproducibility , and is suitable to dete rm ine the content of o leanolic acid and ursolic
acid in e thanol ex tract of Ligustrum lucidum Ait.leaves.
Key words:HPLC;ethanol ext ract o f Ligustrum lucidum Ait.Leaves;o leanolic acid;urso lic acid
　　女贞叶为木犀科植物女贞 Ligustrum lucidum
Ait.的干燥叶 ,其乙醇提取物主要活性成分为齐墩
果酸与熊果酸[ 1] ,用于治疗肝肾阴虚 、阴虚阳亢证所
致的原发性高脂血症[ 2-3] 。齐墩果酸 、熊果酸为五环
三萜类同分异构体 ,结构相似 ,性质相近 ,二者常以
结合或游离的形式同时广泛存在于多科植物中 ,因
此齐墩果酸与熊果酸的分离测定对中药的质量研究
具有重要的意义。近年来 ,随着分离检测手段的多
样化 ,已有采用高效液相色谱法对二者进行研究的
报道 ,其中主要有高效液相色谱-紫外光检测法[ 4] 、
高效液相色谱-蒸发光散射法[ 5] 、高效液相色谱-核
磁共振[ 6] 等 。本实验采用高效液相色谱-紫外光检
测法 ,系统考察了 pH 、温度 、有机相中甲醇 、乙腈比
例对熊果酸与齐墩果酸分离的影响 ,为选择这类同
分异构体化合物的色谱分离条件提供了参考 。对女
贞叶乙醇提取物中齐墩果酸与熊果酸的测定结果表
明 ,该方法简便可行 、灵敏 、准确 、重现性好。
1　仪器与试药
HP-1100型高效液相色谱仪(Agilent 公司 ,美
国);大连依利特 kromasil C18液相色谱柱(250 mm×
4.6 mm , 5 μm);METT LER TO LEDO AG135 电
子天平;Startorius BS —210s 电子天平 。
齐墩果酸对照品(批号 110709-200304),熊果
酸对照品(批号 111567-200502),均购自中国药品
生物制品检定所 。所有样品均由三九黄石制药厂提
供 , 批 号 为 080801 、 080802 、 081201 、 081202 、
090101 、090102 、090103 、090104 、090105;甲醇 、乙腈
均为色谱纯(美国 T EDIA);其他试剂均为分析纯。
2　方法与结果
2.1　溶液的制备
2.1.1　对照品溶液的制备
分别精密称取齐墩果酸和熊果酸对照品 7.50 、
17.28 mg , 置 50 mL 量瓶中 , 加甲醇制成 0.150
mg/mL 齐墩果酸和0.346 mg/mL 熊果酸的混合溶
液 ,摇匀 ,即得。
2.1.2　供试品溶液的制备
取女贞叶乙醇提取物 0.1 g ,精密称定 ,置 100
mL 量瓶中 ,加甲醇适量 ,超声处理(功率 250 W ,频
率 33 kHz)10 min ,放冷 ,加甲醇至刻度 ,摇匀 ,滤
过 ,取续滤液 ,即得 。
2.2　色谱条件的选择
2.2.1　测定波长的选择
分别取熊果酸与齐墩果酸对照品溶液 ,于200 ～
400 nm 扫描 ,确定最大吸收波长为 204 nm 和 206
nm 。故选择检测波长为 205 nm 。
2.2.2　温度的影响
有文献报道改变温度可改善离子型化合物的分
离[ 7-8] ,因此采用“2.2.6”项下的色谱条件(除柱温变
化外),考察了不同温度对齐墩果酸和熊果酸的分离
度及保留时间的影响。结果表明随着温度降低 ,两
个化合物的保留时间均延长 ,但分离度得到改善(图
1)。综合考虑分离度及保留时间两个因素 ,选择柱
温为 20 ℃。
温度/ ℃
A-熊果酸　B-齐墩果酸　C-熊果酸与齐墩果酸的分离度
图 1　柱温对齐墩果酸与熊果酸保留时间
及其分离度的影响
2.2.3　甲醇与乙腈比例的考察
以“2.2.6”项下的色谱条件(除有机相比例变化
211现代药物与临床　　Drugs &Clinic　　2010年第 25卷第 3 期
外),考察有机相中甲醇与乙腈的比例对熊果酸和齐
墩果酸保留时间和分离度的影响 ,结果见图 2。可
以看出混合有机相更有利于齐墩果酸与熊果酸的分
离 ,当甲醇-乙腈为 1∶1时 ,其分离度达最大 ,而当
甲醇量增加到 67%即甲醇-乙腈为 2∶1时 ,保留时
间的变化趋于稳定。从分离度和重现性方面综合考
虑 ,选择有机相中甲醇量为 67%作为有机相。
甲醇/有机相
A-熊果酸　B-齐墩果酸　C-熊果酸与齐墩果酸的分离度
图 2　有机相中甲醇比例对齐墩果酸和熊果酸
保留时间及其分离度的影响
2.2.4　pH 的影响
熊果酸与齐墩果酸为离子型化合物 ,其色谱保
留时间受 pH 的影响较大 。以“2.2.6”项下的色谱
条件(除缓冲盐 pH 变化外),考察了不同 pH 值的
水相对熊果酸和齐墩果酸保留时间和分离度的影
响 ,结果见图 3。随着 pH 值的增加 ,熊果酸与齐墩
果酸的保留时间降低 ,且两者的分离度增大 ,说明随
着离子化程度的增加 ,两者的分离得到改善。该现
象与通过函数模型进行熊果酸与齐墩果酸色谱分离
条件优化的 pH 值选择结果一致[ 7] 。因此最终选择
10 mmo l/L 乙酸铵的中性缓冲盐 。
pH
A-熊果酸　B-齐墩果酸　C-熊果酸与齐墩果酸的分离度
图 3　pH对齐墩果酸和熊果酸的保留时间
及其分离度的影响
2.2.5　不同色谱柱对分离的影响
根据优化结果 ,最终选择流动相为甲醇-乙腈-
10 mmol/ L 乙酸铵(55∶27∶18)。并按照优化后
的色谱条件 ,考察了不同色谱柱对两成分分离的影
响 ,结果表明依利特 Kromasil C18(250 mm ×4.6
mm , 5 μm),SHIMADZU VP-ODS shim-pack(250
mm×4.6 mm , 5 μm), Akasi l-C18(200 mm ×4.6
mm , 5 μm ), CAPCELL PAK C18(250 mm ×4.6
mm , 5 μm)柱均能达到齐墩果酸和熊果酸的完全
分离 。最终选择色谱柱为大连依利特 Kromasil C18
(250 mm×4.6 mm , 5 μm ),该色谱柱分离的色谱
图峰形较好 。
2.2.6　色谱条件
最终确定的色谱条件为:大连依利特 Kromasil
C18液相色谱柱(250 mm ×4.6 mm , 5 μm);流动相
为甲醇-乙腈-10 mmol乙酸铵(55∶27∶18),检测
波长为 205 nm ,体积流量为 1 mL/min ,柱温 20 ℃,
进样量均为 10 μL。
2.3　线性关系考察
分别吸取“2.1.1”项下的对照品溶液 2 、5 、10 、
15 、20μL ,注入高效液相色谱仪 ,记录各色谱峰的峰
面积 。以进样量为横坐标(X),峰面积积分值为纵
坐标(Y),进行线性回归 ,分别得到齐墩果酸的回归
方程Y =111.8 X -54.5(r=0.999 4);熊果酸回归
方程为Y =232.9 X -90.5(r=0.999 8)。结果表
明齐墩果酸和熊果酸分别在 0.300 ～ 3.000 μg 、
0.692 ～ 6.920μg 线性关系良好。
2.4　专属性试验
照“2.2.6”项下色谱条件 ,分别吸取供试品溶液
及对照品溶液各 10 μL 注入高效液相色谱仪 ,色谱
图见图 4。结果表明本法专属性较好。
t/min
1-齐墩果酸　2-熊果酸
图 4　对照品(A)和供试品(B)的 HPLC图
2.5　精密度试验
取同一批供试品(批号 080801),照“ 2.1.2”项
下方法制备供试品溶液 ,按“2.2.6”项下色谱条件进
样 6次 ,每次 10μL ,测定 ,结果齐墩果酸 、熊果酸峰
面积的 RSD分别为 1.9%、1.6%。
2.6　重现性试验
取同一批供试品(批号 080801)6 份 , 照
212 现代药物与临床　　Drugs &Clinic　　2010年第 25卷第 3 期
“2.1.2”项下方法分别制备供试品溶液 ,按“2.2.6”
项下色谱条件测定 ,结果齐墩果酸 、熊果酸质量分数
分别为 8.33%、28.81%, RSD 分别 为 2.1%、
1.7%。
2.7　稳定性试验
吸取上述供试品溶液(批号 080801),分别于 0 、
2 、4 、6 、8 、10 、12 h进样 10 μL ,计算齐墩果酸 、熊果
酸峰面积的 RSD分别为 2.2%、1.9%(n=7)。结
果表明供试品溶液在 12 h内稳定性较好。
2.8　加样回收试验
取已知量的供试品(批号 080801)共 9份 ,分别
精密加入一定量齐墩果酸与熊果酸对照品溶液 ,照
“2.1.2” 项下方法制备供试品溶液 ,按“2.2.6”项下
色谱条件测定。结果齐墩果酸 、熊果酸的平均回收
率分别为 101.4%、100.2%, RSD 分别为 1.5%、
1.9%,详见表 1。
表 1　女贞叶乙醇提取物中齐墩果酸与熊果酸加样回收率试验
成　分 取样量/mg 样品/m g 加入量/mg 测得量/mg 回收率/ % 平均回收率/ % RSD/ %
齐墩果酸 50.8 4.54 6.32 10.91 100.8 101.4 1.5
50.1 4.48 6.32 10.83 100.5
49.6 4.43 6.32 10.70 99.2
49.3 4.41 4.33 8.79 101.2
50.4 4.51 4.33 8.90 101.4
50.3 4.50 4.33 8.86 100.7
49.5 4.43 2.10 6.59 102.9
49.8 4.45 2.10 6.59 101.9
50.2 4.49 2.10 6.68 104.3
熊果酸　 50.8 14.51 22.29 36.88 100.4 100.2 1.9
50.1 14.31 22.29 36.78 100.8
49.6 14.17 22.29 36.71 101.1
49.3 14.08 14.48 29.11 103.8
50.4 14.39 14.48 28.56 97.9
50.3 14.37 14.48 28.63 98.5
49.5 14.14 7.43 21.68 101.5
49.8 14.22 7.43 21.56 98.8
50.2 14.34 7.43 21.70 99.1
2.9　样品的测定
取女贞叶乙醇提取物 9批 ,每批样品取 2份 ,按
照“2.1.2”项下方法制备供试品溶液 ,测定 ,以外标
法计算齐墩果酸和熊果酸的量 ,结果见表 2。
表 2　样品测定结果
批号 齐墩果酸/ % 熊果酸/ %
080801 8.94 28.56
080802 8.19 27.82
081201 14.48 29.11
081202 12.99 27.99
090101 11.58 24.93
090102 12.64 27.74
090103 14.38 27.10
090104 14.84 29.05
090105 14.77 29.98
3　讨论
3.1　中药提取物产业是从中药产业中分化出来的
新兴领域 ,它体现了中药产业的技术进步和中药现
代化的要求。女贞叶乙醇提取物中三萜化合物总量
超过 70%,其中熊果酸 、齐墩果酸的总量在 35%～
45%。
3.2　本实验系统地考察温度 、pH 值 、甲醇-乙腈混
合有机相中甲醇的量对齐墩果酸 、熊果酸保留时间
和分离度的影响 ,结果表明低温 、中性 pH 、甲醇-乙
腈混合有机相有利于齐墩果酸与熊果酸的分离 。优
化后的色谱方法分离度高 、重现性好 ,可用于齐墩果
酸与熊果酸的测定及女贞叶乙醇提取物的质量控
制 。
参考文献
[ 1] 　姚　平 , 何宗玉 , 闫光凡 , 等.大孔吸附树脂纯化女贞子中
齐墩果酸和熊果酸的研究 [ J].中草药, 2007 , 36(10):
1498-1501.
[ 2] 　国家药典委员会.国家食品药品监督管理局国家药品标准
新药转正标准第 38册 [ S]. 2004:67-70.
[ 3] 　张　岩 , 黄文秀 , 陈文武 , 等.女贞子对去卵巢大鼠钙代谢
及维生素 D依赖型基因表达的影响 [ J].中草药 , 2006 , 37
(4):558-561.
[ 4] 　Li E N , Luo J G , Kong L Y.Qualitative and qu an titative de-
t ermin at ion of seven t rit erpene acids in E riobotr ya japonica
Lindl. by high-performance liquid chromatograp hy w i th ph o-
t odiode array detect ion and mas s spect rom et ry [ J]. Phyto-
chem Anal , 2009 , 20(4):338-343.
[ 5] 　李　涛 , 赫武常 , 许长根 , 等.HPLC-ELSD法测定不同产
地女贞子中齐墩果酸和熊果酸的含量 [ J].中药材 , 2005 ,
28(5):391-393.
213现代药物与临床　　Drugs &Clinic　　2010年第 25卷第 3 期
[ 6] 　Kon togianni V G , E xarchou V , Troganis A , eta l.Rapid and
n ovel di scriminat ion and qu an tif ication of oleanolic and urs olic
acids in com plex plant ext ract s u sing tw o-dim en sional nuclear
m agnetic resonance spect roscopy -Comparison w i th HPLC
m ethods [ J].Anal C him Acta , 2009 , 635(2):188-195.
[ 7] 　Snyder L R , Kirkland J J , Glajch J L , et al.P ract ical HPLC
M ethod Developm en t [ M].New York:Wiley-In terscience ,
1997:325.
[ 8] 　H ancock W S , Ch loupek R C , Kirland J J , et al.Tempera-
ture as a variable in reversed-phase high-performance liquid
ch rom atographic s eparation of peptide an d p rotein san ples
[ J]. J Chromatog r A , 1994 , 686(1):31-43.
[ 9] 　彭　旖 , 王秀峰 , 王志刚 , 等.熊果酸与齐墩果酸高效液相
色谱分离条件优化 [ J] .广州化学 , 2006 , 31(4):26-30.
(收稿日期 2010-02-26)
肃清丸的质量标准研究
李广松 ,顾宇虹 ,康荣明 ,刘志惠 ,韩　娜 ,殷　军＊
(沈阳药科大学中药学院 , 辽宁 沈阳　110016)
摘　要:目的　制定肃清丸质量控制标准。方法　采用薄层色谱法对肃清丸中的金银花 、玄参 、当归 、黄芪 、地榆 、
甘草 、连翘进行定性鉴别 , 采用高效液相色谱法测定肃清丸中绿原酸的量。色谱柱为 Luna C18柱(250 mm ×4.6
mm , 5 μm),流动相为乙腈-0.4%磷酸溶液(10∶90),柱温 30℃, 体积流量为 1.0 m L/min , 检测波长为 328 nm。结
果　金银花 、玄参 、当归 、黄芪 、地榆 、甘草 、连翘薄层色谱斑点清晰 ,重现性好 ,无干扰;绿原酸在 5.4～ 54.0μg/ mL
线性关系良好 ,平均回收率为 99.77%, RSD=1.59%(n=6)。结论　所建立的定性和定量方法结果准确 、可靠 、重
现性好 ,可用于肃清丸的质量控制。
关键词:肃清丸;质量控制;定性分析;薄层色谱;绿原酸;定量分析;高效液相色谱
中图分类号:R927.11　　　文献标识码:A　　　文章编号:1674-5515(2010)03-0214-06
Study on quality standard for Suqing Pills
LI Guang-song , GU Yu-hong , KANG Rong-ming , LIU Zhi-hui , HAN Na , YIN Jun
(Co llege o f T raditional Chinese Pha rmacy , Shenyang Pharmaceutical Unive rsity , Shenyang 110016 , China)
Abstract:Objective　To establish the quality standard for Suqing Pills.Methods　TLC was applied to
identify F los Lonicerae , Rad ix Scrophulariae , Radix Angel icae S inensis , Rad ix Astragali , Radi x S an-
guisorbae , Radi x Glycyrrhizae , and F ructus Forsy thiae.HPLC was applied to determine the contents of
chlo ro genic acid in the prescription , in w hich Luna C18 column(250 mm×4.6 mm , 5μm)was used.The
mobile phase consisted of acetonit rile-0.4%phosphoric acid(10∶90)solution , and the f low rate w as 1.0
mL/min.Co lumn tempe ra ture w as at 30 ℃ and the detection w aveleng th w as set a t 328 nm.Results　The
spots on TLC plates w ere clear w ithout interference in the blank reference.T he lineari ty range of chloro-
genic acid w as 5.4 -54.0 μg/mL , the average recovery of chlo ro genic acid w as 99.77%, and RSD was
1.59%(n=6).Conclusion　The established method is accurate , feasible and reproducible.It can be used
fo r the quali ty standard contro l of Suqing Pills.
Key words:Suqing Pills;quali ty cont rol;qualit ita tive analy sis;TLC;chlo rogenic acid;quant ita tive a-
nalysis;HPLC
　　肃清丸是由金银花 、玄参 、当归 、黄芪 、地榆 、甘
草 、连翘等组成的中药水丸制剂 ,由阜新市中医医院
制剂室监制 ,具有清热解毒 、凉血止血 、止泻的功效 ,
用于湿热蕴脾所致泄泻 ,症见腹泻 、脓血便 、腹痛 、里
急后重 、肛门灼热 、尿赤 、舌红苔黄腻 、脉滑数 ,溃疡
性结肠炎见上述证候者。经多年临床应用证实 ,肃
214 现代药物与临床　　Drugs &Clinic　　2010年第 25卷第 3 期