全 文 ：药物分析杂志 C恤 J h P~ An目 2 0 ) (5, 25 ( 2
B r L C 法测定苦参中三叶豆紫檀普的含量
赵慧娟` ,王答其 2 ,孙文基 ` ’
( 1
. 西北大学生物医药重点实验室 西安 7 100 69 ;2 . 西安植物园 71 0 61 )
摘要 目的 :建立 H p L C法测定苦参中三叶豆萦檀昔的含量。 方法 : 以 SUP E CL O C l。 ( 25 c m x 4 . 6 mln , 5 林m )为分析柱 , 甲醇
一 水 (l : l) 为流动相 , 流速为 1 . o mL · 而n 一 ` ,检测波长为 31 0 n m ,采用外标法定量测定 。 结果 : 三叶豆紫檀昔进样量在 0 . 41
一 4 . 10 此 范围内与峰面积呈 良好的线性关系 ( r = 0 . 99 8 ) 。 平均回收率为 98 . 72 % , 9 . 20 % , 9 . 47 % ; R SD 为 1 . 1% ,
1
.
5%
,
2
.
2% (
n = 3 )
。 结论 :本方法操作简便 ,结果准确可靠 ,适用于苦参中三叶豆紫檀昔含量的测定 。
关键词 :高效液相色谱 ;苦参 ;三叶豆紫植昔 ;含量测定
H P L C D e et r m i n a it o n of T r 妞b il r h i z in in S op h o ar 加v e s e e n s A i t .
z H A O H u i 一 j u an ,
,
w AN e D a 一 q i , , s u N w e n 一 j i`
’
( 1
.
B i o 10别 叨 d M成 icn e K e , 肠场 r at o巧 Of Sh a xn i l、 。 v i n e e , N t〕ir hw e st U n iV esr iyt , l ’ an 7 1X() 69 ;
2
.
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A b st ar ct o bj e c it
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e s t ab l i
s h an H PL C m
e ht o d of r d e t e rm i
n at i o n o f t月of l iht i z i n i n S op h o ar 加。 e e ns A i t .
M e ht o d
: SUEP L C O C
l: e o l u m n ( 2 5
e m X 4
.
6 m m
,
5 林m ) w a s u s e d , a n d th e m o b i l e p h a s e e o n s i s t e d o f M e O H -
H Z o ( 1
: l )
.
hT
e n o w ar te w as 1
.
0 m L
· 而 n 一 ’ an d ht e d e t e mr i n a ti o n w va e l e n ght w a s at 3 10 n m . eR s ul st : hT e il n -
e
ar anr g
e w a s i n ht e anr g of 0
.
4 1 一 4
.
10 卜g ( r = 0
.
9 9 9 8 )
.
hT
o va e ar 罗 er e o v e ir e s w e er 9 8 . 7 2% , 9 9 . 2 0% a n d
9 9
.
4 7% ; R SD w e er 1
.
1%
,
1
.
5% a n d 2
.
2% (
n = 3 )
.
C o cln us i
o n : hT i
s m e ht o d 15 s im p l e
,
arn id an d
r e li a b l e fo r
d e t e mr i
n a t io n o f t r i五〕l ihr i z i n i n Sop h o ar 加 , 。 e e ns A i t .
K ey ow
r ds : H P LC ; S op h o r a if
a , e s e e ns A i t
.
;苗肠l iht i z i n ; d e te mr i n a ti o n
中药 苦参 为豆科 槐 属植 物苦参 ( S op ho ar
刀二 es ce n , iA t . )的干燥根 ,具有清热燥湿 、 杀虫等功
效 〔’ 」。 苦参主要含有多种生物碱和黄酮类化合物 。
早期的研究主要集中在苦参生物碱类成分上 ,近年
来侧重 于 黄酮类成分 的研究 , 并取得 了很大进
展 [ 2 ] 。 三叶豆紫檀昔 ( p 一 刀 一 以 u e叩卿 o s ide , 6 a ,
1 2 a 一 d i场 d or 一 6 H 一 「l , 3 ] 一 d i o xol o 「5 , 6 ] b e n z o fu r o
「3 , 2 一 e ]川 b e n z o p弹 n 一 3 一 y l ; itr fo l r h i z i n )为苦参
中一个主要的黄酮类成分 ,经研究 已确认其具有很
强的抗真菌作用 [ ’ l 。 有关苦参药材及其制剂中三
叶豆紫檀昔的含量测定方法未见有文献报道 , 本实
验采用高效液相色谱法测定三叶豆紫檀昔的含量 ,
以控制苦参的质量 。
1 仪器与试药
H IT A CH I高效液相色谱仪 ;L 一 7 420 型检测仪 ;
L 一 7 1 10 型泵 : N2 X() 0 色谱工作站 ; H ITA CH I U -
20 1 分光光度计 ; B 2P 1 I D 型精密电子天平 (瑞士
Sart
o ir o u s 公司 ) 。
对照品 : 三叶豆紫檀昔 (苦参 70 % 乙醇提取 , 乙
酸乙醋萃取 ,反复柱层析 , 经 UV 、 I R 、 M S 、 N M R 鉴定
与文献值 〔` 〕一致 , HPL c 检测为单峰 ,归一化法测定
纯度达 98 % 以上 ) 。
苦参药材由西安植物园王答其副研究员收集和
鉴定 。
实验中所用水为超纯水 ,其余试剂均为分析纯 。
2 色谱条件及系统适用性
色谱柱 : S UPE L C o C l : ( 2 5 e m x 4 . 6 un
,
5
林m ) ;流动相 : 甲醇 一 水 ( 1 : 1 ) ; 流速 : 1 . o tnL
·
m in
一 ` ;柱温 : 常温 ;检测波长 : l3 o ln 。 按上述色谱
条件测定 ,三叶豆紫檀昔峰与相邻峰分离度为 2 , 理
* 通讯联系人 (~
s op n di gn au ht or )
DOI : 10. 16155 /j . 0254 -1793. 2005. 02. 007
药物分析杂志 Ch in J Ph x am An l a2 5 0 0
,
2 5 ( 2 )
论板数以三叶豆紫檀昔峰计算应不低于 23 0 , 色谱
图见图 1 。
l
16 t /
. i n
图 l 对照品 ( A )与甘肃庆阳样品 ( B) 色谱图
F ig 1 Chlo m aot g甩 m s o f er fe er n e e s ub s tan e e ( A ) an d s am ple 肠m
Gasn
u
Qi
n群 an g ( B )
1
. 三叶豆紫檀昔 ( itr fo 石r hi iz n )
3 溶液的制备
3
.
1 对照品溶液 精密称取真空干燥后的三叶豆
紫檀昔 5 . 12 m g , 置 25 m L 量瓶中 ,加流动相溶解并
定容至刻度 ,摇匀 ,即得 。 . 204 8 m g · m L 一 `的对照品
溶液 。
3
.
2 供试品溶液 精密称取苦参粗粉 (过 60 目
筛 ) 0 . 5 9 , 置 5 0 m L 烧瓶中 , 准确加人 7 0 % 乙醇 10
m L
, 称重 , 回流处理 l h ,放冷 ,再称重 ,用 70 % 乙醇
补足减失的质量 , 摇匀 , 30 0 r · m in 一 `离心 10 m in ,
取上清液作为供试品溶液 。
4 线性关系的考察
精密量取 “ 3 . 1” 项下对照品溶液 2 , 4 , 8 , 12 , 16 ,
20 林L 分别进样 ,测定峰面积 , 以三叶豆紫檀昔进样
量 ( 林g )对峰面积作图 ,得一直线 ,其回归方程为 :
Y = 3
.
7 8 6 x I OS X 一 2
,
18 6 x 10 3 r = 0
.
9 9 9 8
三叶豆紫檀昔进样量在 0 . 41 一 4 . ro 林g 范围内与峰
面积呈 良好的线性关系。
5 精密度试验
精密吸取 “ 3 . 1 ” 项下对照品溶液 10 协L , 注人高
效液相色谱仪 , 按上述色谱条件进行分析 , 测定 5
次 , 峰面积的 R SD 为 0 . 53 % 。
6 重复性试验
精密称取同一批样品 (甘肃庆阳 ) 5 份 , 每份
0
.
5 9
, 按“ 3 . 2 ” 项下方法制备供试品溶液 , 按上述色
谱条件进样 20 林L ,测得峰面积值 ,并按面积外标法
计算出三叶豆紫檀昔的平均含量为 0 . 18 % , R S D 为
1
.
5%
。
7 稳定性试验
精密称取样品 (甘肃庆阳 ) 0 . 5 9 , 按 “ 3 . 2 ” 项下
方法制备供试品溶液 , 于 0 , 4 , s h 分别精密吸取 20
卜L 注入液相色谱仪 ,测得峰面积值 , 计算得 R SD 为
0
.
16 %
。 结果表明 :样品在 s h 内稳定性良好 。
8 回收率试验
取已知三叶豆紫檀昔含量的同一批样品 ( 甘肃
庆阳 )约 0 . 25 9 , 共 9 份 , 精密称定 , 3 份为一组 ,每
组分别精密加人 “ 3 . 1 ” 项下对照 品溶液 1 . 5 , 2 . 0 ,
2
.
5 m L
,按 “ 3 . 2 ” 项下方法制备所需溶液 , 按上述色
谱条件进样 20 林L ,测得峰面积值 ,计算平均 回收率
和 R SD 。 结果低 、 中 、高 3 个加人量的平均回收率分
别 为 9 8 . 7 2% , 9 9 . 2 0% , 9 9 . 4 7% ; R S D 分 别 为
1
.
1%
, 一 5 % , 2 . 2% ( n = 3 ) 。 从回收率的结果看 ,
方法的准确度较好 。
9 样品测定
精密称取 6 个产地的样品粉末各 0 . 5 9 ,分别按
“
3
.
2
” 项下方法制成供试品溶液 。 精密量取供试品
溶液及 “ 3 . 1 ” 项下对照品溶液各 20 林 L 分别进样测
定 ,记录峰面积值 ,计算其中三叶豆紫檀昔的含量及
RS D
, 结果见表 l 。
表 1 样品测定结果 (砚 二 5)
T a b 1 5别口 p le 血沈 n耐 n a t i0 O n留川 tS ( n 二 5 )
苦参产地
( so ucr 。 )
三叶豆紫檀杳含量
( co
n et n st of 颐fol i r h i z i n ) /%
R Sn
/ %
1352甘肃庆阳 ( Go u iQ
ll
gy an g )
甘肃甘谷 ( Gan su C出 l gu )
甘肃天水 ( C an s u iT an s h u i )
陕西洛川 ( hS
axn
1 L u l兄 h u an )
陕西商洛 ( hs
~
hs
a ll g {u 。 )
陕西旬邑 ( s h
~
X u n户 )
0
.
18
0
.
20
0
.
35
0
,
25
0
.
4
0
.
0 7
0
.
15
0
.
49
1 0 讨论
10
.
1 检测波长的选择 精密吸取对照品溶液 2 . 0
mL 于 10 mL 量瓶中 ,用流动相定容 ;以流动相溶液作
为参比溶液 ,在 190 一以X〕 n m 波长范围内进行全波长
扫描 ,结果表明 ,三叶豆紫檀昔在 31 0 lun 处有一最大
吸收峰 ,所以本实验选定 31 O lun 为检测波长 。
1 0
.
2 提取方法的选择 本实验对提取溶剂 (乙酸
乙醋 、 甲醇 、 水 、 50 % 甲醇 、 70 % 乙醇 ) 、 提取方
法 (超声处理 、 回流提取 ) 、 提取时间 (巧 , 30 , 45 ,
药物分析杂志 i h Cn J Phm r aA n l a2) 0(5
,
25 ( 2 ) 17 7
6 0
,
7 5 m i n )
、 提取次数 ( l , 2 , 3 次 ) 、 提取溶剂用量
( 5
,
10
,巧 m )L 进行了研究 , 以三叶豆紫檀昔的含量
作为指标 ,结果表明本文提取方法为最佳 。
10
.
3 流动相的选择 为了得到良好的色谱图形和
适宜的出峰时间 ,我们分别比较了乙睛 一 水 ( 3 : 8 ) 、
乙睛 一 0 . 5% 冰醋酸 ( :3 8 ) 、 甲醇 一 水 ( 1 “ 1 ) 、 甲醇 -
0
.
5% 冰醋酸 l( : l) 等流动相的分离效果 , 以甲醇 -
水 ( 1 : l) 为最佳 ,故样品选用甲醇 一 水 ( l : l) 作为流
动相 ,分离效果良好 。
10
.
4 小结 由 6 个产地样品的测定结果可看出 , 6
个样 品 中三 叶豆紫檀昔的含量范围为 0 . 07 % -
0
. 科% ,高低相差 6 倍 , 平均含量为 0 . 25 % 。 其中
旬邑产苦参中三叶豆紫檀昔含量较低 , 而商洛产苦
参中三叶豆紫檀昔含量较高 。
参考文献
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2 Z HA O P i n g (赵平 ) , Z HA N G Y in g 一 jun (张颖君 ) , Y
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uF k
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S叩 h o ar 如二c e二 . S h o 少a k叮 a ku Z a s s h i , 19 8 9 , 4 3 ( 4 ) : 3 4 3
4 OK
m a st u M
,
OT 面om ir T , H a t a yam K
, e z a l
.
St u id e s o n ht e e o n s t i t u
-
e n t s Of S叩h o ar 叩ce ies . VI . Con ist tu e n ts o f ht e ort Of S印 h
o
ar
a 咭山 `如 li a Si eb et Z u e e . ( I ) . aY k叮 a ku aZ s h i , 19 70 , 9 0 ( 4 ) :
46 3
(本文于 2 0以 年 7 月 19 日收到 )
药品检验用标准物质 目录 ( + ) ( 2 0 4 年 12 月 20 日更新 )
1 30 355 奈替米星 N e lt l而 e i n 标准品 效价测定
1 303 56 克拉霉素 C liar t h r o哪 e in 标准品 效价测定
1 303 57 吉它霉素 儿 ats a m y ic n 标准品 效价测定
13 03 59 交沙霉素 J o s am cy i n 标准品 效价测定
13 036 0 万古霉素 V a cn o m cy i n 标准品 效价测定
130 36 1 丙酸交沙霉素 Jo s a m y c in P rO Pio n ate 标准品 效价测定
130 36 2 乙酞麦迪霉素 cA yt hrl m de ce a my ic n 标准品 效价测定
130 36 5 依替米星 E iit m le in 标准品 效价测定
130 37 1 巴龙霉素 Pam m o m cy in 标准品 效价测定
130 372 乙酸吉它霉素 A e e ty lk l ats aJ 叮 ye i n 标准品 ` 效价测定
1304 0 1 4 一差向四环素 4 一 E P it e t r a e y e li n e 化学对照品 杂质检查
13 (娜0 2 脱水四环素 A n hydor t e actr ” h n e 化学对照品 杂质检查
130 4 0 3 脱水差向四环素 4 一 E Pi a hn y dr o t e t r a c y c li n e 化学对照品 杂质检查
1304 04 4
一差向金霉素 4 一 E iP e hl o t e tacr y e il n e 化学对照品 杂质检查
1304 05 p 一 多西环素级 oc h 一 D o x yc y icl n e 化学对照品 杂质检查
13以07 头抱唾吩 C e afl o it n 化学对照品 含量测定
1304 0 8 头抱氨节 C e和lp 丫 in 化学对照品 含量测定
1 304 09 阿莫西林 Am o x i o i ll in 化学对照品 含量测定
1 304 10 氨节西林 AmP ic曲 n 化学对照品 含量测定
13以 11 新霉胺 N e o a m in e 化学对照品 杂质检查
1304 12 头抱呱酮 S 异构体 C e of p e arz o n e 5 ios m er 化学对照品 杂质检查
1304 13 酿式利福平 R iaf m p i e i n Qul one 化学对照品 杂质检查
13以 14 3 一 甲基利福霉素 SV 3 一 F o n n y ilr af m pi e in VS 化学对照品 杂质检查
1 3以 1 5 a 一苯甘氨酸酸 oc h 一 Ph e n尹砂y e ine 化学对照品 杂质检查
1 3以 16 7 一 A DC A 7 一 A DCA 化学对照品 杂质检查