全 文 ：石参中黄酮类化合物含量的测定及抗氧化活性的研究
郭豫梅 1 ,郭豫杰2 ,刘贵 1 ,季晓晖1 ,闵锁田 1 ,田光辉 1　
(1.陕西理工学院化学与环境科学学院 ,陕西汉中 723001;2.河南农业大学牧医工程学院 ,河南郑州 450002)
摘要　[目的 ]测定石参中总黄酮含量并对其抗氧化性进行研究。 [方法]采用超声波提取技术用体积分数为 80%的乙醇提取石参中的
总黄酮 ,分光光度法测定石参中的总黄酮类含量 ,研究石参中黄酮类化合物对超氧自由基、羟基自由基的清除作用。 [结果 ]石参中总黄
酮含量为 0.742 5%,石参中黄酮类化合物对自由基清除作用随着黄酮浓度的增大而表现出明显的量效关系。总黄酮浓度为 9.791×
10-4 mg/ml时对超氧自由基的清除率最高 ,为 48.91%;浓度为 0.009 9mg/ml时对羟基自由基的清除率最高 ,达到 83.76%。 [结论]石
参总黄酮对超氧自由基、羟基自由基均具有一定的清除作用。
关键词　石参;黄酮类化合物;抗氧化活性
中图分类号　S567.23+9　　文献标识码　A　　文章编号　0517-6611(2010)01-00168-02
DeterminationofTotalFlavonoidsinEremuruschinensisandStudyonItsAntioxidantActivity
GUOYu-meietal　(SchoolofChemistryandEnviromentalSciences, ShaanxiUniversityofTechnology, Hanzhong, Shaanxi723001)
Abstract　[ Objective] TheaimwastodeterminetotalflavonoidsinEremuruschinensandstudyitsantioxidant.[ Method] Thetotalfla-
vonoidsinE.chinenswereextractedbyvolumefractionof80%ethanolandusingultrasonicextractiontechnology.Thecontentwasdeter-
minedbyspectrophotometricmethod.Andtheremovalefectofflavonoidsonsuperoxideradical, hydroxylradicalwasstudied.[Result] The
contentofflavonoidsinE.chinenswas0.742 5%.Withtheincreasingofflavonoids, theremovalefectonfreeradicalbecameincreasingly
obvious.Whenconcentrationoftotalflavonoidis9.791×10-4 mg/ml, thescavengingrateonsuperoxideradicalwashighest, upto48.91%;
whenconcentrationis0.009 9mg/ml, thescavengingrateonhydroxylradicalwashighest, upto83.76%.[ Conclusion] Totalflavonoidin
E.chinenshasremovalefectonsuperoxideradicalandhydroxylradical.
Keywords　Eremuruschinensis;Flavonoids;Antioxidantactivity
基金项目　陕西理工学院专项科研基金项目(SLGQD0711)。
作者简介　郭豫梅(1975-),女 ,内蒙古赤峰人 ,讲师 ,从事天然药物化
学研究。
收稿日期　 2009-09-07
　　石参又名石蒜苔 、崖参 ,属百合科独尾草属的独尾草
(Eremuruschinensis),为多年生草本植物 ,其根肉质 ,柔软 ,黄
色或深褐色 ,为其食用部分 ,干制加工产品呈金黄色 ,味甘
甜 。我国有 4个品种 , 1种产西南 , 3种产新疆。据调查 ,其
在陕西的分布仅见于略阳县境内西淮坝乡的西淮坝村 、张家
山等几个狭窄地带 ,目前野生独尾草已非常少见。据陕西省
资源生物重点实验室初步测定 ,其含有丰富的蛋白质和纤维
素 ,蛋白质几乎接近于大米中的含量 [ 1-2] 。但对于石参化学
成分的研究目前尚未见报道 ,笔者主要对石参中总黄酮的含
量进行了测定并对石参总黄酮对超氧自由基(O2· -)及对羟
基自由基(· OH)清除作用进行初步探索 ,为开发 、保护利用
这一珍稀植物资源提供科学的理论依据。
1　材料与方法
1.1　试验材料
1.1.1　材料与试剂 。野生石参购于汉中略阳 。芦丁标准品
购自中国药品生物制品检定所;邻苯三酚 、邻二氮菲 、95%乙
醇 、亚硝酸钠 、硝酸铝 、氢氧化钠 、三氯化铝 、盐酸 、双氧水 、硫
酸亚铁 、磷酸二氢钠 、磷酸氢二钠 、三氯化铁 、三羟基氨甲烷
均为分析纯。
1.1.2　仪器。 722N型可见光分光光度计(上海精密科学仪
器有限公司);SHZ-D(Ⅲ)循环水式真空泵(巩义市予华仪器
有限责任公司);RE-52型旋转蒸发仪;电子天平(上海天平
仪器厂)。
1.2　试验方法　取石参样品在干燥箱中 70 ℃干燥 ,粉碎 ,
过 100目筛 。用天平精密称取 50.240 6 g样品 ,用体积分数
80%的乙醇超声提取 2 h,再将提取液减压浓缩 ,真空干燥。
1.3　分析方法
1.3.1　标准曲线的制作 。精密称取芦丁样品 5 mg,置 50 ml
容量瓶中 ,用 30%乙醇适量置水浴上加热溶解 ,放冷 ,再用
30%乙醇稀释至刻度 ,摇匀。量取 0、1.0、2.0、3.0、4.0 ml分
别置于 10ml容量瓶中 ,各加 30%乙醇至 5.0ml,然后加 5%
亚硝酸钠溶液 1.0 ml摇匀 ,放置 6 min, 10%硝酸铝溶液 1.0
ml摇匀 ,放置 6min,再加 4%氢氧化钠溶液 10.0ml,用 30%
乙醇稀释至 25ml,放置 15 min后 ,置比色皿中 ,以试剂同法
操作作为空白 ,在波长 510nm处测定吸光度 [ 3-4] 。以吸光度
为纵坐标 ,芦丁浓度为横坐标 ,绘制标准曲线。
1.3.2　总黄酮含量的测定 [ 5] 。分别精密量取待测液 0.1
ml,加入 9.9 ml的 30%乙醇 ,置于 25 ml容量瓶中 ,加 5%亚
硝酸钠溶液 1.0 ml摇匀 ,放置 6min, 10%硝酸铝溶液 1.0 ml
摇匀 ,放置 6 min,再加 4%氢氧化钠溶液 10.0 ml,用 30%乙
醇稀释至 25 ml,放置 15 min后置比色皿中 ,以试剂同法操作
作为空白 ,在波长 510 nm处测定吸光度。通过回归方程计
算出溶液浓度(C)(mg/ml)。再计算样品中总黄酮含量:
T=C×10×N×50/5 000
式中 , N为各样品相应的稀释倍数;T为样品中总黄酮百分
含量 [ 6] 。
1.3.3　石参总黄酮对超氧自由基(O· -2 )的清除作用。采用
邻苯三酚自氧化法 [ 7] 。取 0.05 mol/LpH值 8.2的 Tris-HCl
缓冲液 4.5ml,加入盛有 4.2ml蒸馏水的试管中 ,置 25℃水
浴中预热 20 min。分别加入不同的斑褐孔菌醇提物溶液 0.1
ml,立即加入在 25 ℃水浴中预热的 3 mmol/L邻苯三酚(由
10 mmol/LHCl配制)0.3ml,混匀后 25 ℃水浴中准确反应 4
min,立即加入 8 mol/LHCl2滴终止反应 ,在 420 nm处测定
吸光度(样品管以同浓度的斑褐孔菌醇提物溶液做参比)。
模型组以 0.1 ml蒸馏水代替样品试液(以蒸馏水做参比)。
计算清除率:
责任编辑　熊章琴　责任校对　况玲玲安徽农业科学 , JournalofAnhuiAgri.Sci.2010, 38(1):168-169
DOI :10.13989/j.cnki.0517-6611.2010.01.088
清除率(%)=(A空白 -A样品)/A空白 ×100
1.3.4　石参总黄酮对羟基自由基(·OH)的清除作用。用邻
二氮菲 -Fe2+氧化法测定 Fe2+ /H2O2体系中产生的羟基自
由基(·OH)[ 8] 。依次加入邻二氮菲 1.5 ml, pH值 7.4的
PBS溶液 3.8 ml及试样总黄酮溶液 1ml(损伤管及未损伤管
不加试样总黄酮溶液)混匀 ,再加 FeSO4溶液 1.5ml,立即混
匀 ,最后加 H2O2 1 ml(未损伤管不加)。最终浓度邻二氮菲
0.75 mmol/L、FeSO4 0.75 mmol/L、H2O2 0.01%,总体积 9 ml
(不足用蒸馏水补足)。各管置 37 ℃恒温水浴箱保温 60
min,分别测定各管 A536值(样品管以同浓度的试样总黄酮溶
液做参比 ,损伤管及未损伤管以蒸馏水做参比)。
清除率(%)=(A样品 -A损伤)/(A未损 -A损伤)×100
2　结果与分析
2.1　标准曲线和回归方程的建立　标准曲线回归方程:C
=0.091 2 A+0.026 3(R=0.999 7 )(图 1)。
图 1　芦丁的标准曲线
Fig.1　Thestandardcurveofrutin
2.2　石参总黄酮含量的测定　将测定的吸光度值代入回归
方程得浓度为 0.029 7 mg/ml。进一步计算得总黄酮含量
(T)为 0.742 5%。
2.3　石参总黄酮对超氧自由基(O· -2 )的清除作用　在邻苯
三酚体系中 ,邻苯三酚的自身氧化速度比较快 ,在加入了提
取液后 ,由于黄酮类化合物含有活泼的 3′、4′位酚羟基 ,能提
供活泼的氢 ,从而阻断自由基反应。因此 ,抗氧化是通过供
氢来完成清除 O2· -反应 。如图 2所示 ,提取物浓度对超氧
自由基的清除率表现出明显的量效关系 ,开始时随着浓度的
增加其清除率不断增加 ,在浓度为 9.791×10-4 mg/ml时对
超氧自由基的清除率最高 ,为 48.91%;然后随着总黄酮浓度
的增加其清除率又慢慢下降。
2.4　石参总黄酮对羟基自由基(· OH)的清除作用　在
Fe2+ -H2O2 -邻二氮菲体系中 ,未加 H2O2之前 , Fe2+与邻二
氮菲形成红色配合物 ,加入 H2O后 , Fe2+减少 ,配合物颜色变
浅 ,再加入提取液 ,提取液中所含的黄酮类化合物与·OH结
合 ,阻止了羟自由基继续氧化 Fe2+。黄酮类化合物抗氧化能
力不同 ,使体系中 Fe2+浓度不同 ,所显示的颜色深浅也不同 。
如图 3所示 ,提取物浓度对羟基自由基(·OH)的清除率表现
出明显的量效关系。开始时随着总黄酮浓度的增加其清除
率不断增加 ,在浓度为 0.009 9 mg/ml时对羟基自由基的清
除率最高 ,为 83.76%;然后随着总黄酮浓度的增加其清除率
图 2　不同浓度总黄酮溶液对超氧自由基(O· -2 )清除率的影响
Fig.2　Effectsofdifferentconcentrationsflavonoidsolutionon
thescavengingrateofsuperoxideradical(O· -2 )
图 3　不同浓度总黄酮溶液对羟基自由基(·OH)清除率的影响
Fig.3　Effectsofdifferentconcentrationsflavonoidsolutionon
thescavengingrateofhydroxylradical(·OH)
又慢慢降低。
3　结论
试验结果显示 ,石参中含有黄酮类化合物 ,以芦丁为标
准试剂 ,测得石参中黄酮的含量约 0.742 5%。抗氧化性试
验证明 ,石参总黄酮对超氧自由基(O· -2 )、羟基自由基
(·OH)具有一定的清除作用 ,其清除作用随着黄酮浓度的增
大而表现出明显的量效关系 。在总黄酮浓度为 9.791×10-4
mg/ml时对超氧自由基(O· -2 )的清除率最高 ,为 48.91%;总
黄酮浓度为 0.009 9 mg/ml时对羟基自由基(·OH)的清除率
最高 ,达 83.76%。
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16938卷 1期　　　　　　　　　　　　　　　　郭豫梅等　石参中黄酮类化合物含量的测定及抗氧化活性的研究