全 文 ：［收稿日期］ 20110922(004)
［第一作者］ 毛红梅，硕士，Tel:13576982640，E-mail:573662247@ qq． com
［通讯作者］ * 平欲晖，副教授，本科学历，从事药物质量分析研究，Tel:13677090003，E-mail:pingyh@ 163． com
HPLC同时测定败酱草中常春藤皂苷元、
齐墩果酸和熊果酸的含量
毛红梅，平欲晖* ，宗星星，刘玢
(江西中医学院药学院，南昌 330004)
［摘要］ 目的:建立高效液相色谱法同步测定败酱草败酱药材中常春藤皂苷元、齐墩果酸和熊果酸的含量。方法:采用
反相高效液相色谱法，色谱柱为 Ultimate C18(4. 6 mm × 250 mm，5μm) ;以甲醇-0. 2%乙酸铵水溶液为流动相，进行梯度洗脱，
检测波长为 210 nm，流速为 1. 0 mL·min －1，柱温为 25 ℃。结果:常春藤皂苷元、齐墩果酸和熊果酸在 0. 026 ～ 0. 26，0. 082 ～
0. 82，0. 079 ～ 0. 79 g·L －1具有良好线性关系(r ＞ 0. 999 8) ，平均回收率分别为 100. 62%(RSD 2. 01%，n = 6) ，96. 71%(RSD
1. 89%，n = 6) ，97. 85%(RSD 2. 17%，n = 6)。结论:该方法灵敏度高，快速，简便，专属性强，准确和重复性好，为败酱草药材
质量控制标准的建立提供科学依据。
［关键词］ 败酱草;常春藤皂苷元;齐墩果酸;熊果酸;高效液相色谱法;含量测定
［中图分类号］ R284． 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2012)15-0089-04
Simaltanous Determination of Hederagenina，Oleanolic
Acid and Ursolic Acid in Herba Patriniae by HPLC
MAO Hong-mei，PING Yu-hui* ，ZONG Xing-xing，LIU Bin
(Jiangxi College of Traditional Chinese Medicine，Nanchang 330004，China)
［Abstract］ Objective:To establish a method for the quantitative determination of hederagenin，oleanolic
acid and ursolic acid in Herba Patriniae Simudtanoukly by HPLC． Method:The analysis was performed on
Ultimate C18 (4. 6 mm × 250 mm，5 μm)column with mobile phase consisted of methanol-0. 2% ammonium
acetat water by Gradient elution． The detected wavelength was set at 210 nm． The flow rate was 1. 0 mL·min －1
and the column temperature was at 25 ℃ ． Result:The linearity was good in the ranges of 0. 026-0. 26，0. 082-
0. 82 and 0. 079-0. 79 g·L －1 respectively for ederagenin，oaleanolic acid and ursolic acid (r ＞ 0. 999 8)． The
average recoveries of hederagenin，oleanolic acid and ursolic acid were 100. 62% (RSD 2. 01%，n = 6) ，
96. 71% (RSD 1. 89%，n = 6)and 97. 85% (RSD 2. 17%，n = 6)． Conclusion:This method was highly
sensitive，rapid，simple，specific，accurate and well represented，which can be used for the quality control of
Herba Patriniae．
［Key words］ Herba Patriniae;hederagenin;oleanolic acid;ursolic acid;HPLC;content determination
败酱草为败酱科多年生草本植物黄花败酱、白
花败酱的根茎或带根全草，《神农本草经》列为中
品，是一味古老而常用的中药。药理研究表明，败酱
草具有清热解毒、排脓破瘀、活血化瘀之功效［1］。
其化学成分主要是三萜皂苷类，其苷元类型主要为
常春藤皂苷类、齐墩果酸皂苷类、熊果酸皂苷类化合
物，其次是黄酮类、环烯醚萜类、香豆素类、甾醇类、
挥发性化合物类等化合物。其中三萜皂苷类成分是
败酱草的主要有效成分，临床药理活性证明，其齐墩
果酸、熊果酸和常春藤皂苷元都具有抗菌消炎、利尿
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第 18 卷第 15 期
2012 年 8 月
中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 18，No． 15
Aug．，2012
DOI:10.13422/j.cnki.syfjx.2012.15.037
抗水肿、抑制肿瘤细胞生长、保肝、降酶、提高机体免
疫力的作用［2-6］。1977 年版《中国药典》曾收录了败
酱草，标准仅有性状鉴别和化学鉴别，而化学鉴别的
泡沫反应专属性不强。该品种在以后的药典中未收
载。为了全面评价该常用药材的质量，有必要对败
酱草药材中的三萜皂苷类成分进行定量分析。但目
前文献中关于败酱草三萜皂苷成分的含量测定研究
主要针对齐墩果酸和总皂苷［7-9］。本实验采用高效
液相色谱法，建立了同时测定败酱草中常春藤皂苷
元、齐墩果酸、熊果酸 3 种成分的方法，为败酱草的
质量控制提供科学依据。
1 材料
1. 1 试药 常春藤皂苷元对照品(南昌贝塔生物
科技有限公司，批号 10085-200912)、齐墩果酸对照
品(中国药品生物制品检定所，批号 110709-
200304) ，熊果酸对照品(南昌贝塔生物科技有限公
司，批号 10481-200917) ;收集了不同购买地的败酱
草样品，其药材均经我院中药资源教研室付小梅老
师鉴定，其中福建同春药业股份有限中药分公司、南
京国盛连锁药店和安徽亳州购买的败酱草为黄花败
酱 Patrinia scabiosaefolia Fisch． ex Link、其余都为白
花败酱 P． villosa Juss。甲醇为色谱纯试剂，水为三
蒸水，其他试剂均为分析纯。
1. 2 仪器 安捷伦 1200 型高效液相色谱仪，
BS214D 型电子天平(厂家为 Sartorius 公司) ，KQ-
500B超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司) ，
SL-100 型高速多功能粉碎机(浙江省永康市松青五
金厂) ，蒸发皿，水浴锅。
2 方法与结果
2. 1 溶液的制备
2. 1. 1 对照品溶液 分别精密称取常春藤皂苷
元、齐墩果酸和熊果酸对照品适量，加甲醇制成常春
藤皂苷元质量浓度为 0. 52 g·L －1、齐墩果酸质量浓
度为 0. 82 g·L －1、熊果酸质量浓度为 0. 79 g·L －1的
对照品溶液。临用时精密移取适量各对照品溶液混
匀，即得混合对照品溶液。
2. 1. 2 供试品溶液的制备 取败酱草药材粉末
(过 4 号筛)2 g，精密称定，置具塞锥形瓶，加甲醇
50 mL，超声提取 60 min，滤过，残渣用甲醇适量洗
涤，合并滤液与洗液，蒸干，残渣加水 10 mL溶解，用
水饱和正丁醇萃取 3 次，每次 20 mL合并提取液，蒸
干，残渣加甲醇 20 mL，盐酸 4 mL 加热水解 4 h，水
解物加水 10 mL，用三氯甲烷振摇提取 2 次，每次 20
mL，合并提取液，蒸干，残渣加甲醇溶解并定量转移
至 10 mL量瓶中，加甲醇至刻度，摇匀，滤过，取续滤
液，即得。
2. 2 色谱条件 Ultimate C18色谱柱(4. 6 mm × 250
mm，5 μm) ;流动相 A为甲醇，B 为 0. 2%乙酸铵水
溶液，梯度洗脱程序(0 ～ 15 min，80% A，20% B;
15 ～ 25 min，80% ～ 95% A，20% ～ 5% B;25 ～ 30
min，95% A，5%B) ;检测波长 210 nm，流速 1 mL·
min －1，柱温 25 ℃。对照品和样品色谱图见图 1。
1. 常春藤皂苷元;2. 齐墩果酸;3. 熊果酸
图 1 对照品(A)和败酱草药材(B)高效液相色谱图
2. 3 线性关系考察 分别精密吸取适量常春藤皂
苷元、齐墩果酸和熊果酸对照品溶液，加甲醇配制不
同浓度的对照品混合溶液，分别取上述溶液各 20
μL，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积为纵坐
标，质量浓度为横坐标绘制标准曲线并进行回归计
算，常春藤皂苷元、齐墩果酸和熊果酸的回归方程分
别为 Y = 7 748. 7 X － 9. 606 6(r = 0. 999 9) ，Y =
6 830. 9X + 74. 347(r = 0. 999 8) ，Y = 4 544. 2X +
316. 66(r = 0. 999 8) ，分别在 0. 026 ～ 0. 26，0. 082 ～
0. 82，0. 079 ～ 0. 79 g·L －1具有良好线性关系。
2. 4 精密度试验 精密吸取上述对照品溶液，按上
述色谱条件重复进样 6 次，测定峰面积，结果表明，
常春藤皂苷元、齐墩果酸和熊果酸的 RSD 分别为
0. 78%，1. 19%，0. 60%，精密度良好。
2. 5 稳定性试验 取同一供试品溶液，分别于 0，
4，8，12，16，24 h 进样测定峰面积，结果表明，样品
中常春藤皂苷元、齐墩果酸和熊果酸峰面积的 RSD
分别为 1. 32%，1. 61%，2. 60%(n = 6) ，表明供试品
放置 24 h基本稳定。
2. 6 重复性试验 取同一产地败酱草样品(1 号
样品)6 份，每份约 2 g，分别精密称定，照 2. 1. 2 项
下操作，按上述高效液相色谱条件测定。常春藤皂
苷元、齐墩果酸和熊果酸的 RSD 分别为 1. 52%，
1. 82%，1. 96%，表明该方法重复性良好。
2. 7 加样回收率试验 取已知含量的(1 号样品)
败酱草 6 份，每份 1. 0 g，精密称定，分别精密加入常
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中国实验方剂学杂志
Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae
Vol． 18，No． 15
Aug．，2012
春藤皂苷元、齐墩果酸和熊果酸对照品适量，照
2. 1. 2 项下方法操作制备所需溶液，按上述高效液
相色谱条件测定。结果见表 1。
表 1 败酱草中 3 成分加样回收试验(n = 6)
成分 样品序号
供试品含量
/mg
对照品加入量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均回收率
%
RSD
%
常春藤皂苷元 1 0． 634 9 0． 52 1． 162 0 101． 36 100． 62 2． 01
2 0． 634 4 0． 52 1． 186 4 102． 19
3 0． 634 5 0． 52 1． 128 6 97． 48
4 0． 635 0 0． 52 1． 181 2 100． 11
5 0． 635 0 0． 52 1． 171 0 103． 06
6 0． 634 1 0． 52 1． 138 7 99． 52
齐墩果酸 1 1． 436 0 0． 82 2． 229 1 96． 72 96． 71 1． 88
2 1． 435 0 0． 82 2． 250 0 99． 38
3 1． 435 1 0． 82 2． 209 6 94． 44
4 1． 436 1 0． 82 2． 219 4 95． 52
5 1． 436 3 0． 82 2． 223 0 95． 95
6 1． 434 4 0． 82 2． 240 1 98． 26
熊果酸 1 1． 984 5 0． 395 2． 383 8 101． 07 97． 85 2． 17
2 1． 983 1 0． 395 2． 358 6 95． 05
3 1． 983 3 0． 395 2． 365 3 96． 70
4 1． 984 7 0． 395 2． 375 4 98． 90
5 1． 984 9 0． 395 2． 367 0 96． 72
6 1． 982 4 0． 395 2． 372 0 98． 65
2. 8 样品测定 取所收集的败酱草样品，按供试品
溶液制备方法制备供试液，按上述高效液相色谱条
件测定，计算含量，结果见表 2。
表 2 败酱草中各成分含量测定 %
No． 购买地 常春藤皂苷元 齐墩果酸 熊果酸
1 江苏省医药公司 0. 063 0. 143 0. 198
2 福建同春药业股份有限中药分公司 0. 029 0. 196 0. 248
3 杭州海王星辰健康药房 0. 556 0. 143 0. 177
4 江西樟树 0. 036 0. 461 0. 559
5 南京国盛连锁药店 0. 027 0. 128 0. 209
6 青山湖康怡大药房 0. 016 0. 303 0. 273
7 安徽亳州 0. 002 0. 019 0. 022
8 江西汇仁堂大药房 0. 029 0. 188 0. 268
9 南京医药合肥大药房 0. 006 0. 090 0. 106
10 江西赣州华而康大药房 0. 037 0. 592 0. 630
3 讨论
3. 1 检测波长的选择 取对照品溶液，在 585 ～
190 nm波长进行光谱扫描，结果常春藤皂苷元、齐
墩果酸、熊果酸在 210 nm 处均有最大吸收，故采用
210 nm为检测波长。
3. 2 流动相的选择 常春藤皂苷元、齐墩果酸与
熊果酸均为五环三萜，其中齐墩果酸与熊果酸为同
分异构体，结构和性质均极其相似，在药材中往往共
·19·
毛红梅，等:HPLC同时测定败酱草中常春藤皂苷元、齐墩果酸和熊果酸的含量
生互存，分离测定较为困难。本实验在参考相关文
献［10-14］基础上，考察了不同系统的流动相，包括
乙睛-水、甲醇-水、甲醇-水-磷酸-三乙胺、甲醇-水-冰
醋酸-三乙胺系统，结果均未得到良好的分离。经反
复实验，以甲醇-0． 2%乙酸铵水溶液体系为流动相，
采用梯度洗脱方法，齐墩果酸和熊果酸分离较好，故
选用甲醇-0. 2%乙酸铵水溶液作为流动相。
3. 3 提取条件的选择 对包括超声提取法、回流提
取法和冷浸法 3 种提取方式进行了考察，结果表明，
采用超声提取时，常春藤皂苷元、齐墩果酸和熊果酸
的提取率最高，且该方法简单易行;另对超声提取
条件如提取溶剂、溶剂用量及超声时间进行考察，当
采用 50 mL 80%的甲醇超声，每次 60 min 时，常春
藤皂苷元、齐墩果酸和熊果酸的提取率最高;同时
考察水解条件，盐酸的用量、水解温度及水解时间，
结果表明，盐酸用量为 4 mL 在 90 ℃水浴回流水解
4 h时，常春藤皂苷元、齐墩果酸和熊果酸的提取率
较高。
测定了 10 批不同购买地的败酱草样品的含量，
结果表明，不同购买地的败酱草样品中常春藤皂苷
元、齐墩果酸和熊果酸的含量存在较大的差异，可能
受品种、生长环境、生长时间、采摘时间等因素的影
响。含量测定结果还表明，样品中齐墩果酸和熊果
酸的含量均明显高于常春藤皂苷元。本实验首次建
立同时测定败酱草药材中常春藤皂苷元、齐墩果酸
和熊果酸含量的方法，具有准确可靠、重复性好、特
征性强、方法简便等特点，对败酱草药材的质量评价
具有重要的意义。
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［责任编辑 顾雪竹］
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