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部分低浓度提取物对乙酰胆碱酯酶活性不但没有抑制作用，
反而有一定的增强作用，这种现象在海藻组分［12］和蕨类植
物［13］中亦被观察到，本研究进一步证明了这种现象的存在。
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青果中铁含量的测定
陈碧琼1，聂咏飞1，涂 华1，郑幼松2
(1．泸州医学院，四川泸州 646000;2．四川化工职业技术学院，四川泸州 646005)
摘要:为探讨分光光度法测定青果中微量元素铁含量的可行性，利用混合酸 V(HNO3)∶ V(HClO4)= 4 ∶ 1 对青
果湿法消化，在 pH值 3 ～ 7 的溶液中，亚铁离子与邻二氮菲生成稳定的橙色络合物，产生可见吸收，用分光光度法测
定青果中微量元素铁含量。结果表明:所选青果(品种大白圆)中铁平均含量为 88． 53 mg /kg，平均加标回收率为
99． 9%，相对标准偏差(RSD)小于 0． 5%。分光光度法操作简便、干扰少、测量快、结果准确度和灵敏度高，易推广。
关键词:青果;邻二氮菲;微量元素;铁;分光光度计
中图分类号:R284． 1 文献标志码:A 文章编号:1002 － 1302(2012)10 － 0296 － 03
收稿日期:2012 － 03 － 31
基金项目:泸州医学院青年基金(编号:2005103)。
作者简介:陈碧琼(1969—) ，女，讲师，主要从事中药有效成分的研究
和开发。E － mail:huaxuecbq@ 163． com。
青果为橄榄科植物橄榄(Canarium album Raeusch)的干
燥成熟果实，有清热、利咽、生津、解毒之功效，用于咽喉肿痛、
咳嗽、烦渴、鱼鳖中毒等的治疗［1］，还有抗乙肝病毒［2 － 3］、抗氧
化［4］等作用。青果成分丰富，含有挥发油、三萜类、脂、氨基
酸和蛋白质、微量元素等［5 － 10］。在我国，用中草药防病治病
已有几千年历史，中草药种类繁多、资源丰富，可治疗多种疾
病，虽作用慢，但残留与毒副作用小。中药的有效成分包括有
机成分和无机微量元素，它们是中药药理功能的物质基础，中
药的药理作用与微量元素的含量及存在状态密切相关。铁是
人体最重要的营养元素之一，是人与动物组织和血液的极重
要的组成成分，在人体必需的 10 多种微量元素中［11］，无论在
重要性上还是在数量上铁都居首位，因此测定中草药中微量
元素铁的含量在防病治病和保健方面具有极其重要的意义，
且能指导临床用药。铁的测定方法很多，主要有:原子吸收光
谱法、催化荧光法、离心光度法、光谱电化学法、双波长分光光
度法等，本试验探讨用分光光度法测定青果中铁的
含量［12 － 13］。
1 材料与方法
1． 1 试验原理
邻二氮菲也叫邻菲罗琳(o － phenanthroline，C12H8N2) ，是
测定微量铁(Ⅱ)的高灵敏度显色剂，在 pH 值 3 ～ 7 的溶液
中，邻二氮菲与 Fe2 + 生成稳定的橙红色络合物(图 1) ，在
510 nm 波长处对光有最大吸收。若混有 Fe3 +，则用盐酸羟胺
进行还原。
—692— 江苏农业科学 2012 年第 40 卷第 10 期
DOI:10.15889/j.issn.1002-1302.2012.10.039
1． 2 主要仪器和试剂
722 型光栅分光光度计(厦门分析仪器厂生产) ;AL204
电子天平［梅特勒 －托利多仪器(上海)有限公司生产］;ZRD
干燥箱(上海智城分析仪器制造有限公司生产) ;80 － 1 离心
机(河南巩义仪器厂生产)。
硫酸亚铁铵［FeSO4·(NH4)2 SO4·6H2O］、盐酸羟胺、
HAc － NaAc 缓冲溶液(pH 值为 4)、邻二氮菲、高氯酸、浓硝
酸、稀硫酸(2 mol /L) ，试剂均为分析纯;试验用水为二次双蒸
水;市售新鲜青果(品种大白圆，采自四川省合江县)少许。
铁标准溶液:准确称取 0． 028 2 g硫酸亚铁铵置于小烧杯
中，加少量双蒸水完全溶解后加 3 mol /L 稀硫酸 20 mL，混匀
后转移至 250 mL容量瓶中，加入双蒸水稀释到刻度，摇匀，得
0． 016 mg /mL铁标液。
2 结果与分析
2． 1 最佳试验条件的选择
2． 1． 1 吸收曲线的绘制 用移液管吸取 0、1． 0 mL铁标准溶
液，分别置于 50 mL容量瓶中，各加入 1． 0 mL 10%盐酸羟胺
溶液，摇匀，放置 2 min;加入 5 mL HAc － NaAc 缓冲溶液、
2 mL 0． 15%邻二氮菲溶液，用双蒸水稀释至刻度，摇匀，放置
10 min;以空白试剂(即 0 mL 铁标准溶液)为参比溶液，在
450 ～ 550 nm间测定吸光度，间隔 5 nm 测 1 次吸光度(其中
500 ～ 520 nm范围间隔 2 nm) ;以波长为横坐标、吸光度为纵
坐标，绘制吸光度 －波长曲线，从曲线上可得络合物的最大吸
收波长为 510 nm(图 2)。
2． 1． 2 显色剂用量的选择 取 9 只 50 mL 容量瓶，按照
“2． 1． 1”的测定方法，分别向其中加入邻二氮菲溶液 0． 1、
0. 5、1． 0、1． 2、1． 5、1． 8、2． 0、2． 5、3． 0 mL，测定吸光度。当显
色剂的加入量在 2． 0 ～ 3． 0 mL范围内时，测得吸光度较稳定，
故本试验选择 2． 0 mL作为显色剂的加入量(图 3)。
2． 1． 3 显色时间的选择 按照“2． 1． 1”的测定方法，取铁标
准溶液，以试剂溶液为空白，测定不同显色时间下体系的吸光
度。由图 4 可知，铁 －邻二氮菲络合物的吸光度随时间的延
长而增大，显色 10 min 后吸光度达最大且比较稳定，故本试
验选择显色时间 10 min。
2． 1． 4 pH值的选择 按照“2． 1． 1”的测定方法，以试剂溶
液为空白，分别测定铁 －邻二氮菲络合物在不同 pH值(用不
同的缓冲溶液提供)条件下的吸光度。如图 5 所示，溶液的
pH值对铁 －邻二氮菲络合物的吸光度有很大的影响。在 pH
值为 3． 0 ～ 7． 0 时，吸光度的变化小，比较稳定，结合实际，本
试验选择 pH值 4． 0，用 HAc － NaAc缓冲溶液调控。当 pH值
过低时邻二氮菲显色缓慢;而当 pH 值过高时吸光度会急剧
下降，这主要是因为 pH值过高盐酸羟胺的还原性会增强，将
溶液中的 Fe2 +还原成了铁单质，导致吸光度急剧下降。
2． 2 样品测定
2． 2． 1 标准曲线及回归方程的建立 用移液管分别吸取铁
标准溶液 0、1． 0、2． 0、3． 0、4． 0、5． 0 mL 到 6 个洁净的 25 mL
容量瓶中，加入 1 mL 10%盐酸羟胺溶液，摇匀，放置 2 min;再
加入 5 mL HAc － NaAc缓冲溶液、2 mL 0． 15%邻二氮菲溶液，
摇匀，用双蒸水定容至刻度，摇匀，静置 10 min。以 0 mL铁标
准溶液为空白液，在 510 nm波长下测定吸光度，结果见表 1。
经回归处理，得线性回归方程为 D = 186． 789C － 0． 002 72，决
定系数 r2 = 0． 999 4。
—792—陈碧琼等:青果中铁含量的测定
表 1 铁标准曲线数据
浓度 C
(μg /mL)
吸光度 D
(平均值)
RSD
(%)
0 0 0
0． 64 0． 117 0． 011 2
1． 28 0． 235 0． 023 4
1． 92 0． 352 0． 035 6
2． 56 0． 486 0． 042 5
3． 20 0． 589 0． 058 2
2． 2． 2 样品铁含量的测定 取一年生鲜青果晾干，粉碎，放
入 105 ℃烘箱烘干(约 24 h)至恒重，用电子天平精确称取约
2． 3 g左右样品置于带盖容器中，加入 50 mL 浓硝酸 －高氯酸
(4 ∶ 1，V /V) ，盖上盖子，放置 24 h;然后取下盖子，在电热板
上加热消化，先 300 W加热约 1 h，再用 500 W加热至溶液变
成无色或淡黄色并开始冒白烟，继续加热至溶液近干、变为无
色溶液或晶体;加入少量体积比 1 ∶ 1 的硫酸溶液溶解晶体并
加入少量的双蒸水，用 6 mol /L NaOH溶液调溶液的 pH值至
4 ～ 8，然后移入 50 mL 容量瓶中，再用双蒸水稀释定容至刻
度，摇匀，得样品储备液。
用吸管吸取上述样品储备液 10 mL 于 25 mL 容量瓶中，
按“1． 4． 1”标准曲线的处理方法，加入 1 mL 10%盐酸羟胺，
摇匀，放置 2 min;再加入 5 mL HAc － NaAc溶液、2 mL 0． 15%
邻二氮菲溶液，用双蒸水定容至刻度，摇匀，静置 10 min。以
0 mL铁标准溶液为空白液，在 510 nm波长下测定吸光度，根
据标准曲线方程计算各样品中铁含量，结果见表 2。
根据样品的吸光度和标准曲线方程计算样品中的铁含
量，得铁平均含量为 88． 53 mg /kg。
表 2 样品铁含量测定数据
青果质量
(g) 吸光度
铁含量
(mg /kg)
RSD
(%)
2． 273 2 0． 298 88． 52
2． 461 3 0． 323 88． 56
2． 300 9 0． 302 88． 62
2． 298 4 0． 301 88． 43
平均 88． 53 0． 156
2． 3 加标回收试验
精确吸取铁标准溶液 0． 10、0． 20、0． 30、0． 40 mL，分别加入
到已有 30 mL样品溶液(表 2 中第 1 种，浓度为 1． 61 μg /mL)
的 50 mL容量瓶中。按上述方法测定吸光度，并求出各加标
样品中铁的含量，计算加样回收率，计算式为回收率 =(测得
铁含量 －样品中铁含量)/加入铁含量 × 100%，测定的平均
回收率为 99． 9%，RSD = 0． 417%，结果显示回收率较高
(表 3)。
表 3 回收率试验结果(n = 4)
序号
样品量
(μg)
加标量
(μg)
测定值
(μg)
回收率
(%)
1 48． 3 1． 6 49． 90 100． 0
2 48． 3 3． 2 51． 48 99． 4
3 48． 3 4． 8 53． 12 100． 4
4 48． 3 6． 4 54． 69 99． 8
3 讨论
本试验确定了用邻二氮菲分光光度法测定青果中铁含量
的最佳测定条件:测定波长为 510 nm、pH 值为 3 ～ 7、显色剂
用量为 2． 0 mL。结果表明，采用分光光度法测定青果中的铁
含量简便、准确、快速，试验测出的青果含铁较高，平均值为
88． 53 mg /kg。这是利用占合江县青果产量近半的品种大白
圆测定的，该结论为引导人们合理食用青果提供了可靠的理
论依据。青果是重要的药食两用物质，营养丰富，是具有较高
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