全 文 ：皮苷色谱峰的保留时间为 9． 381，橙皮苷色谱峰的
保留时间为 10． 506。如果液相色谱条件不好，两峰
分离度很难达到 1． 5，难以准确定量。运用本实验
液相条件分离度能达到 2． 5，能满足定量的要求。
耐用性试验，运用依利特 C18(250 min × 4． 6 mm，
5μm)和 Kromsail C18(150 mm × 4． 6 mm，5μm)进行
试验分离度均能达到 1． 5 以上。
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HPLC法测定白芪龙胶囊中齐墩果酸和熊果酸
刘玉军， 代 龙* ， 孙明江， 马 睿
(山东中医药大学，山东 济南 250355)
收稿日期:2010-12-05
基金项目:科技部“重大新药创制”科技重大专项(2009ZX09103 － 411)
作者简介:刘玉军(1987—)，男，硕士生，主要从事中药制剂工艺及质量标准的研究。Tel:(0531)82960689，E-mail:liuyj8723@ 163． com
* 通信作者:代 龙(1964—)，男，教授，主要从事中药新药开发及新剂型研究。Tel:(0531)82960689，E-mail:dailongdailong@ 263． net
摘要:目的 建立白芪龙胶囊中齐墩果酸和熊果酸的定量测定方法。方法 色谱柱 Kromasil C18柱(4． 6 mm × 250 mm，5
μm);流动相甲醇-乙腈 － 0． 1%冰醋酸(80 ∶ 5 ∶ 15);检测波长 215 nm;体积流量 1． 0 mL /min;柱温 40 ℃。结果 齐墩
果酸和熊果酸分别在 0． 410 4 ～ 3． 078 0 μg(r = 0． 999 9)、0． 814 4 ～ 6． 108 0 μg(r = 0． 999 9)范围内线性关系良好，回归
方程分别为 Y = 490 276． 942 1X － 1 265． 765 3 和 Y = 457 259． 686 7X + 14 380． 960 3，平均加样回收率分别为
98． 60%(RSD为 1． 35%)和 99． 40%(RSD为 1． 19%)。结论 所建立的方法准确可靠，重复性好，可用于白芪龙胶囊的
质量控制。
关键词:白芪龙胶囊;白花蛇舌草;齐墩果酸;熊果酸;HPLC
中图分类号:R927． 2 文献标志码:A 文章编号:1001-1528(2011)06-0994-03
Determination of oleanolic acid and ursolic acid in Baiqilong Capsule by HPLC
LIU Yu-jun， DAI Long* ， SUN Ming-jiang， MA Rui
(Shandong University of Traditional Chinese Medicine，Jinan 250355，China)
KEY WORDS:Baiqilong Capsule;Hedyotis Herba;oleanolic acid;ursolic acid;HPLC
白芪龙胶囊是由白花蛇舌草、黄芪、天龙等多味 中药经先进的专利制备工艺制得的抗肿瘤六类新
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药，用于非小细胞肺癌(NSCLC)、肝癌等多种恶性
肿瘤的治疗或辅助治疗，效果显著。白花蛇舌草为
方中君药，现代研究表明［1］，其主要含齐墩果酸、熊
果酸、黄酮类及多糖类成分，齐墩果酸具有促进淋巴
细胞增殖和巨噬细胞吞噬的功能，以及迟发超敏反
应的效应;熊果酸在与齐墩果酸相同的剂量下，对正
常小鼠巨噬细胞的吞噬功能同样具有较明显的增强
作用。为有效控制本制剂质量，保证其良好的抗肿
瘤效果，笔者建立了 HPLC 法同时测定白芪龙胶囊
中齐墩果酸和熊果酸的定量测定方法，从而为白芪
龙胶囊质控方法的建立提供参考。
1 仪器与试药
1． 1 仪器 LC － 2010A 型高效液相色谱仪，包括:
UV检测器、CLASS-VP 工作站(日本岛津公司);
UV1100 型紫外分光光度计(上海天美科学仪器有
限公司);AB135-S电子天平(瑞士梅特勒-托利多公
司);KQ-250 型超声波清洗器(昆山市超声仪器有
限公司)。
1． 2 试药 齐墩果酸对照品(110709-200505)、熊
果酸对照品(110742-200516)，均购自中国药品生物
制品 检 定 所;白 芪 龙 胶 囊 (批 号 20100301，
20100302，20100401)，自制;甲醇、乙腈为色谱纯，水
为纯化水，其他试剂均为分析纯。
2 方法与结果
2． 1 色谱条件 色谱柱 Kromasil C18柱(4． 6 mm ×
250 mm，5 μm);流动相 甲醇-乙腈-0． 1% 冰醋酸
(80 ∶ 5 ∶ 15);检测波长 215 nm;体积流量 1． 0 mL /
min;柱温 40 ℃。理论板数按熊果酸峰计算应不低
于2 000。
2． 2 溶液的配制
2． 2． 1 混合对照品溶液 分别取齐墩果酸和熊果
酸对照品适量，精密称定，加甲醇溶解并制成每 1
mL含齐墩果酸 0． 102 6 mg和熊果酸 0． 203 6 mg的
混合溶液，即得。
2． 2． 2 供试品溶液 取本品内容物，研细，取约 2
g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入甲醇 50
mL，称定质量，超声处理(功率 250 W，频率 50 kHz)
30 min，放冷，再称定质量，用甲醇补足减失的质量，
摇匀，滤过，精密量取续滤液 25 mL，蒸干，残渣加甲
醇溶解并定量转移至 10 mL量瓶中，加甲醇定容至刻
度，摇匀，微孔滤膜(0． 45 μm)滤过，取续滤液，即得。
2． 2． 3 阴性对照溶液 取白花蛇舌草以外的其余
药味，制得不含白花蛇舌草的空白制剂，照供试品溶
液的制备方法制备，即得。
2． 3 方法学考察
2． 3． 1 专属性试验 精密吸取上述混合对照品溶
液、供试品溶液和阴性对照溶液各 10 μL，按 2． 1 项
下色谱条件进行测定。结果供试品中齐墩果酸和熊
果酸色谱峰能达到基线分离，且保留时间与相应对
照品一致;阴性对照溶液在对应保留时间处无吸收
峰，表明其余药味对齐墩果酸和熊果酸的测定无干
扰，结果见图 1 ～ 3。
图 1 混合对照品 HPLC图
1．齐墩果酸 2．熊果酸
图 2 供试品 HPLC图
1．齐墩果酸 2．熊果酸
图 3 阴性对照 HPLC图
2． 3． 2 线性关系考察 精密吸取 2． 2． 1 项下混合
对照品溶液，分别进样 4、6、8、10、20、30 μL，按照
2． 1项下色谱条件进行测定。以齐墩果酸、熊果酸进
样量为横坐标(X)，对应峰面积为纵坐标(Y)，分别
绘制 标 准 曲 线，得 回 归 方 程 分 别 为:Y =
490 276． 942 1X － 1 265． 765 3，r = 0． 999 9;Y =
457 259． 686 7X + 14 380． 960 3，r = 0． 999 9。结果
表明，齐墩果酸、熊果酸进样量分别在 0． 410 4 ～
3． 078 0 μg、0． 814 4 ～ 6． 108 0 μg 范围内线性关系
良好。
2． 3． 3 精密度试验 精密吸取 2． 2． 1 项下混合对
照品溶液，按 2． 1 项下色谱条件进行测定，重复测定
5 次，进样量 10 μL。结果齐墩果酸、熊果酸峰面积
的 RSD分别为 1． 32%(n = 5)、0． 92%(n = 5)，表明
仪器精密度良好。
2． 3． 4 稳定性试验 取上述供试品溶液(批号
20100401)分别于配制后的 1、3、5、7、9、12 h 测定齐
墩果酸和熊果酸峰面积，进样量 10 μL。结果齐墩
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果酸、熊果酸峰面积的 RSD 分别为 0． 75%(n = 6)、
0． 81%(n = 6)，表明供试品溶液在 12 h内具有良好
的稳定性。
2． 3． 5 重复性试验 取同一批次白芪龙胶囊(批
号 20100401)内容物，共 5 份，分别按 2． 2． 2 项下方
法制得供试品溶液，照 2． 1 项下色谱条件进行测定，
进样量 10 μL。结果制剂中齐墩果酸、熊果酸的平
均质量分数分别为 0． 338 4 mg /g、1． 268 3 mg /g，
RSD分别为 1． 49%(n = 5)、1． 05%(n = 5)，表明本
测定方法重复性较理想。
2． 3． 6 加样回收试验 取已测定的白芪龙胶囊
(批号 20100401，含齐墩果酸 0． 338 4 mg /g，熊果酸
1． 268 3 mg /g)内容物，共 5 份，各约 1g，精密称定，
分别精密加入混合对照品溶液(齐墩果酸 0． 020 52
mg /mL、熊果酸 0． 040 72 mg /mL)和甲醇各 25 mL，
称定质量，其余按 2． 2． 2 项下方法操作，制得供试品
溶液，照 2． 1 项下色谱条件进行测定，进样量 10
μL，计算加样回收率，结果见表 1。
表 1 加样回收试验结果 (n =5)
成 分
原有量
/mg
加入量
/mg
测得量
/mg
回收率
/%
平均回收
率 /%
RSD
/%
0． 357 4 0． 513 0 0． 856 9 97． 37
0． 373 1 0． 513 0 0． 890 4 100． 84
齐墩
果酸
0． 334 2 0． 513 0 0． 839 2 98． 44 98． 60 1． 35
0． 339 8 0． 513 0 0． 844 7 98． 42
0． 337 9 0． 513 0 0． 840 2 97． 91
1． 339 4 1． 018 0 2． 343 2 98． 61
1． 398 3 1． 018 0 2． 420 3 100． 39
熊果酸 1． 252 4 1． 018 0 2． 248 8 97． 88 99． 40 1． 19
1． 273 8 1． 018 0 2． 286 0 99． 43
1． 266 5 1． 018 0 2． 291 4 100． 68
2． 4 样品测定 取 3 批样品按供试品溶液制备法
制得供试品溶液，并按 2． 1 项下色谱条件进行测定，
每批样品测定 3 份，采用标准曲线法计算，结果见表
2。
表 2 样品测定结果 (n =3)
批 号
齐墩果酸
质量分数
/(mg /g)
RSD
/%
熊果酸
质量分数
/(mg /g)
RSD
/%
20100301 0． 381 9 1． 35 0． 794 1 1． 58
2010032 0． 372 2 0． 86 1． 078 9 0． 69
20100401 0． 338 4 0． 92 1． 268 3 1． 14
根据上述测定结果及《广东省中药材标准》中
白花蛇舌草项下的质量分数低限(总和≥0． 08%)，
确定本制剂中齐墩果酸和熊果酸总和的低限为0． 83
mg /g［600 g 药材 × 0． 08% × 60% (转移率)÷
(1 000粒 × 0． 35 g /粒)= 0． 822 8 mg /g］，3 批制剂
的质量分数均在低限以上，表明所制定的质量分数
限度(总和≥0． 83 mg /g)是合理的。
3 讨论
3． 1 齐墩果酸和熊果酸结构中均无共轭体系存在，
仅为末端吸收。经 200 ～ 600 nm 全波长扫描发现，
齐墩果酸和熊果酸的最大吸收在 206 nm左右，考虑
甲醇在此波长范围内具有较强的末端吸收，对测定
结果干扰较严重，参考相关文献［2-6］，最终确定在
215 nm处测定齐墩果酸和熊果酸。
3． 2 齐墩果酸和熊果酸同属于五环三萜类化学物，
为同分异构体，极性相似，难以有效分离。笔者参考
大量相关文献［7-11］，分别考察了甲醇-水(0． 04%
磷酸二氢钾)(87 ∶ 13)、甲醇-水(82 ∶ 18)、乙腈-甲
醇 － 0． 5%醋酸铵溶液(70 ∶ 10 ∶ 20)、甲醇-乙腈 －
0． 1%冰醋酸(83 ∶ 5 ∶ 12)、甲醇 － 0． 5%醋酸铵溶液
(90 ∶ 10)、乙腈-甲醇-水-磷酸-三乙胺(50 ∶ 30 ∶ 20
∶ 0． 02 ∶ 0． 04)等的分离效果，发现甲醇-乙腈 －
0． 1%冰醋酸(83 ∶ 5 ∶ 12)最佳，并进一步调整流动
相比例为 80 ∶ 5 ∶ 15。此时，齐墩果酸和熊果酸达到
基线分离，且基线平稳、峰形对称，阴性无干扰。
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