全 文 ：翼鬓; 里江苏食品与发酵 J IAN G SU SH Ip I N Y U FAJ I A O 螺旋藻多糖的分离 、纯化与检测
螺旋薄多糖钓分离、 佑化 与拾浏
郭维平 ` 张 可 2
( 1 南通市产品质量监督检验所 ,南通市 2 21 0 05 ;2 . 江南大学食品学院 ,无锡市 21 4 0 3 6)
摘 要 :
关键词 :
螺旋藻干粉经热水抽提 、醇析 、 脱蛋白得粗多糖 , 经凝胶柱层析纯化得到白 色粉末状多糖纯
品 。 再分别经纸层析 、凝胶柱层析 、 高效液相 色谱分析表明为均一组分 , 并可测得单糖组成 ;
用凝胶柱层析法测分子量 。
螺旋藻多糖 ;分 离纯化
自七十年代起 , 分子生物学家开始研究多
糖 。 多糖是生物体内除蛋白质和核酸外的又一
类重要生物大分子 , 一些多糖如海藻酸钠 、 肝
素 、 真菌多糖等 , 具有许多重要的生物活性和生
理功能 , 如防护放射损伤 、 抗肿瘤 、 抗衰老 、 抗凝
血 、 抗细菌和病毒感染以及刺激免疫和降低血
糖等活性 。 而细胞表面的多糖则具有细胞间通
讯识别 、 信息传递 、 物质交换和运输 、 免疫等重
要功能 。 现在 , 多糖的研究范围越来越广 , 研究
成果亦越来越多 , 多糖已成为新的研究热点 。
螺旋藻 ( S p iur li n a p l a t e n s i s ) 为蓝藻门 , 颤藻
纲 , 螺旋藻属 , 是一种丝状多细胞螺旋形藻类生
物 , 它含有丰富的蛋白质 、 脂肪 、 维生素 、 矿物
质 、 叶绿素 、 p 一胡萝 卜素及多糖类物质 [ ’ 〕。
螺旋藻多糖是从螺旋藻中分离而得的一种
白色粉末状水溶性物质 , 对人体无毒 。 研究表
明 , 螺旋藻中抗肿瘤和免疫调节作用的生理活
性物质就是多糖汇2」。 它具有显著的抗辐射 、 抗突
变功能 , 可用于防癌 、 抗衰老 , 增强机体免疫力
等方面 。 因此 , 它在实践应用上具有诱人的前
景 。 多糖物质的糖基组成 ,化学结构以及他们的
作用方式与其生物功能关系密切 。
作为一种新的药物资源 , 螺旋藻中生物活
性组分的分离纯化及其特性研究受到各国政府
和科学界的重视 。
本文介绍的是九十年代以来螺旋藻多糖分
离纯化工艺的进展以及一些相关特性的分析 。
1 螺旋藻多糖分离提纯的一般方
法
随着螺旋藻多糖研究的展开 , 九十年代以
来 ,形成了一种普遍采用的分离提纯方法【’ 〕。 介
绍如下 :
1
.
1 提取程序
2 0 0 3 年第 1期 总第 1 12 期
螺旋藻多糖的分离 、 纯化与检测 江苏食品与发酵 J IA N G S u SH IH N Y UF A J IA O
【水抽提〕即℃, 肠 真空浓编 摘精沉淀, 离心分离 〔脱蛋白l
荡杭 . 卜洁公 ` 法岭冰 . ” 盆, `保 , J . 山寸目刃义 , r“ 姗 1认 , 讥证 ~ ~ 一 - - - - , 尸
用 se 蝴法
酒箱沉淀, 离心分离 [脱水〕冷冻干涣 「脱蛋白1水层一 沉淀一 螺旋藻多能品一一、 层一用丙用洗酒抬沉捷 移解离子交换柱层析 浓编, 冷冻干澡 溶解, 凝胶过论. . . . 、 4二` 灿` 臼X 、 曰 . . J ~ J , , 卜月 J 确 `, 的优 ’ 仇脱瓜 , 日巴粉木 r进析冷冻干操耽一- - -枷 螺旋藻多糖精品
1
.
2 过程中的多糖分离方法
1
.
2
.
1 酒精沉淀 、 分离
在浓缩液中加人等量或数倍量的 95 % 乙
醇 , 此时螺旋藻多糖以纤维状或胶状沉淀析出 ,
而蛋白质和其他杂质则残留于溶液中 , 再离心
(40 0 转 /分 , 15 m in ) ,去除上清液得沉淀物 。
1
·
2
.
2 S e v a g 法脱蛋白
将沉淀物溶于蒸馏水中 , 用 S ve ag 法脱蛋白
5 次 , 去除氯仿层 ,得水相层 。 此法在避免多糖降
解方面有显著的效果 。
1
.
2
.
3 离子 交换柱层析
将沉淀物溶于蒸馏水中 , 用 D E A E一纤维素
柱 ( 3 . s c m x 45 c m )进行层析 , 以适宜流速流出 ,
用蒸馏水洗脱 , 得单一的洗脱峰 , 减压浓缩至成
为膏状物 ,冷冻干燥得白色粉末制品 。
1
.
2
.
4 凝胶过滤
将上述制品溶于蒸馏水中 ,用 s即h ad ex G -
2 0 0 柱 ( 2 . 26 x 6 o e m )进行过滤 、 水洗 , 得螺旋糖
多糖液体 。
1
.
2
.
5 透析
把糖液置于透析膜中 , 在蒸馏水中透析 48
小时以上 , 除去小分子化合物等杂质 。 透析后 ,
再真空浓缩 、 冷冻干燥 , 即可得到均一精品 。
素柱层析 , 收集单一峰 ,再经 S eP h ad xe G 一 75 柱
层析 , 硫酸 一 葱酮法检测 , 收集单一对称峰得白
色粉末螺旋藻多糖 ( p o ly s a e e h a五d 。 。 f s p iur l in a
p la t e n s i s
,
p s p )
, 证明为均一多糖组分 。
SP P 经全水解采用纸色谱 , 硅胶薄层色谱
和高效液相色谱分析 , 显示 P SP 的单糖组成为
D 一葡萄糖 ( 9 5 . 1% ) , D 一木糖 ( 1 . 7% ) , L 一 鼠李
糖 ( 1 . 8% )和一种未知单糖 ( 1 . 3% ) 。
通过 SP P 降解分离实验进一步证明其多糖
组分的均一性 , 同时可分析多糖的结构并进行
分子量测定 。
2 螺旋藻多糖组分测定「4]
螺旋藻干粉制得的粗多糖经 D E A E 一 纤维
2
.
1 螺旋藻多糖的分离与纯化
螺旋藻干粉 I k g , 加 7 倍量去离子水 , 调至
p H g 一 1 1 , 50℃保温 4 h ,静置 ,取上清液 。 再加人
干粉 5 倍量的去离子水调至 p H g 一 1 1 , 80 ℃保温
h4 后 , 静置 ,取上清液 ,离心去沉淀 , 合并两次提
取液 , 加人有机酸调至 p H 7 左右 , 减压浓缩至适
当体积 , 加人 95 % 乙醇沉淀 , 可得粗多糖 。 用
S
e v a g e 法除去蛋白 , D E A E 一纤维素和 S e p h a d e x
G 一 75 纯化 ,得螺旋藻多糖 ( P S P )l . 6 9 。
2
.
2 糖组分测定
称取 p s p 20 m g , 加 0 . 6 5 m m o l / L H ZS O 4 2 m L ,
用 N Z 除去 0 2 封管 , 10 0℃沙浴水解 1 h1 , 水解液
用 B a C O 3 中和 , 离心过滤 , 水解液进行以下测
定 :
纸层析以中速新华滤纸点样 ( 3 1 x 3 . sc m ) ,
展开剂为 ( l ) n 一 B u o H 一 M e ZCO 一 H ZO (4 : 5 : l ) ,
(2 ) E tO A
C 一 C S H S N 一 H ZO ( 10 : 4 : 3 )
,
( 3 ) n -
B u 0 H 一 H O A C 一 H ZO ( 3 : l : l )
,
( 4 ) n 一 C 3 H 7 O H -
N H
4 O H 一 H ZO ( 12 : 10 : 1 )
,
( 5 ) E t OA
c 一 C S H SN -
H o A 。 一 H Z o ( 10 : l x : 2 : 3 ) ; 显色剂为苯胺 一邻苯
二甲酸正丁醇饱和溶液 , 标准单糖为 D 一葡萄
糖 、 D 一甘露糖 、 L 一 阿拉伯糖 、 L 一 鼠李糖 、 D 一 木
糖和 D 一半乳糖均为分析纯 。
纸色谱结果显示 : 展开剂中不含 H O A。 的只
2 0 0 3 年第 l 期 总第 1 12 期
…::翼:黔黔鲤燮型燮缨哩 螺旋藻多糖的分离 、纯化与检测
显一个斑点 ,与标准 D 一葡萄糖 形值相同 ;展开
剂中含有 H O A C 的显色后除有 D 一葡萄糖外 ,还
有一微弱红色斑点 , 与 D 一 木糖的 fR 值相同 。
硅胶薄层层析 用 0 . l m o l / LN a H ZP O 4 调制
硅胶 G 板 , 1 0 ℃活化 Z h 备用 , 展开剂与显色剂
均与纸色谱相同 , 在硅胶板上只显一个斑点 , 与
D 一 葡萄糖的 fR 值相同 。
高效液相色谱 色谱柱 H R C 一 N H Z ( 4 . 6 x
15 0 m m )
, 流动相为 C H 3 C N 一 H 20 ( 7 5 : 25 ) , 流量
0
.
s m L / m in
, 示差检测 , 定量采用外标法 , 显示
螺旋藻多糖水解液由 D 一 葡萄糖 (95 . 1% ) , D -
木糖 ( 1 . 7% ) , L 一 鼠李糖 ( 1 . 8% )和一种未知单
糖 ( 1 . 3% )组成 。 如图 l 。
E 盆. t 月` . , V 。 口一 《 . 妞 》
F i g Z G e l 一 if l t ar it o n c h r o am ot
g r a P h y o f P S P o n
S e Ph a d e x G 一 7 5 e o l
nt
n
F i g 1 H P L C a n a l y s i s Of P o l y s a e e h a ir d e h y d r o l y s a t e
o f S P i r u il an lP
a et n is s
2
.
4 结构 (连接方式 )
Sm i th 降解 : 称取 p s p 2 3 m g 溶于 2 0m o l /
研 a xO 45 o m L , 放置暗处氧化 14 d , 加人乙二醇
1
.
s m L 后 , 进行去离子水透析 2 4 h , 减压蒸馏到
Zo m L 左右 , 加人 N a B H 4 3 o m g , 电磁搅拌还原
Zh
, 放置过夜 , 加人 36% H o A C调至 p H S 一 6 , 除
去过量的 N a B H 4 , 再透析 2 h4 , 将透析液浓缩至
干 , 加 0 . 1 m o l / L 的 H Z SO ; 溶液 l m L , 在 15℃ 时
水解 2 4 h , 用 N aZ c O , 中和 , 滤液浓缩进行纸层
析 , 展开剂为 E t o A c 一 C S H S N 一 H Z o ( 10 : 4 : 3 ) , 显
色剂为联苯胺 一 高碘酸钠 , 上行法展开 s h ( 3 1 x
3
.
s c m )
, 其结果有葡萄糖和甘油生成 , 表明 P SP
多糖结构主要以 ( 1 一 3) , ( 1 一 6) 昔键连接而
成 。
未知糖 2 . L 一 鼠里糖 3 . D 一 木糖 4 . D 一 葡萄糖
2
.
3 均匀性 (纯度鉴定 )
称取 P S 1P 0 m g , 溶于 3 m L 水中 , 上预先准备
好的 S e ph a de x G 一 7 5 柱 ( 2 . 5 x 7 0 ) ,用水洗脱每
管收集 Zm L , 用硫酸 一葱酮法 , 在 U v 6 2 0n m 处
检测糖的吸光度 , 其结果为单一峰 , 说明 SP P 为
一组均一多糖 。 如图 2 。
2
.
5 分子量测定
用 S e p h a d e x G 一 2 0 0 柱层析法测定分子
量 。 称 S eP h ad ex G 一 2 0 6 9 用蒸馏水溶胀 3d ,然
后装人 2 . 5 x 7 0c m 的层析管内 , 用蒸馏水平衡
3 d
。用 已知分子量的 D ex tar n( 平均分子量分别为
10 0 0 0
,
4 0 00
,
70 00 0
,
5 0 0 0 0 0 5 1脚 a 公司产品 )
分别相继上柱 , 上柱量为 s m g , 流出液按每管
Zm L 分别收集 , 用硫酸 一葱酮比色法测定 , 分别
求得洗脱体积 V e ,然后用兰色葡聚糖 (平均分子
量为 2 0 0 0 00 0) 测出柱床的外水体积 V 。 , 按 V e /
20 0 3 年第 l 期 总第 1 12 期
螺旋藻多糖的分离 、纯化与检测 江苏食品与发酵 J I AN e s u S H I o N Y U F AJ I AO 确嘿舜;
V 。 分子量对数关系作图 , 得标准曲线 , 最后将
SP P (5
.
4m g ) 用少量水溶解上柱 , 按上述同样条
件测定求得 V e , 根据 V e / V。 值 ,查标准曲线 , 测
得多糖分子量为 15 0 0 0 。 如图 3 。
3
2 . 5
里
F i g 3 M
O le c ul
a r
we i g h t Of P S P
o n SeP h a d
e x G 一 2 0 0
3 分离纯化方法对所得螺旋藻多
糖组分的影响
藻类多糖分离纯化的方法不同 , 则得到的
组分可能不一样 。 说明 , 即使是同一属植物 , 种
不一样 , 组成藻类多糖的成分也不一样 。 例如
s he k h ar am 等 51[ 分别用冷水 、 热水和酸抽提
5
. 讨aet sn is 的多糖 ,结果组成多糖的成分发生了
变化 ,但每一种方法只纯化得到 1 个组分。
以极大螺旋藻为例 , 极大螺旋藻多糖能明
显抑制人血癌细胞的生长 , 但其多糖成分复杂 ,
分离纯化难度较大 。 用热水抽提的 5 . m ax im a 的
多糖 , 由于纯化方法的不同 , 可得到两组分或单
一组分的精品 。 但 , 这些组分分别经纸层析 、 凝
胶柱层析 、 高效液相色谱分析均表明是均一组
分 。 说明 ,不同分离纯化方法得到的不同组分的
多糖精品组分均一 。
以下介绍分别从极大螺旋藻中得到两组分
和单一组分精品的分离纯化方法 。
的蒸馏水 , 7 0℃保温提取 24 h , 离心 , 上清液浓缩
后加人 3 倍体积 95 % 乙醇醇析 ,得粗多糖 。
3
.
1
.
2 分离纯化
①小分子杂质及蛋白质的去除 粗多糖
溶于水中 , S ve ag 法脱蛋白 , 考马斯亮蓝检测为
阴性 。 流水透析 2d ,蒸馏水透析过夜 , 浓缩至小
体积 ,加人 3 倍体积 95 % 乙醇醇析 。
② se p h ad xe G 一 10 凝胶柱层析凝胶柱为
7 Oe m x 2
.
6 e m
,
0
.
l m o l / L N a C L 洗脱 , 每管 4 m L ,
硫酸 一苯酚法检测 。
3
.
1
.
3 纯度鉴定
①纸层析 ( P C ) 新华中速滤纸 ( 3 . s e m x
30
c m )
, 点样 ,饱和 h2 , 室温展层 h6 ,展层剂为正
丁醇 : 浓氨水 : 水 ( 40 : 50 : 5 ) , 0 . 5% 甲苯胺蓝乙
醇液染色 , 95 % 乙醇漂洗至背景褪色 。
②凝胶柱层析 s e p h a d e x G 一 2 0 0 柱层
析 ( 3 5 e m x 2 . 6 e m ) , 流速 7 . s m L / h , 0 . l m o l / L
N a CI 洗脱 , 每管 2 . s m L ,硫酸 一苯酚法检测 。
③高效液相色谱分析 ( H P L )C W at e sr
60 0 E 高效液相色谱仪 , T S K 30 0 OGW 层析柱
( 7
.
s m m x 3 0 0 m m )
, 洗脱液 为 H ZO , 流速 为
0
.
7 M L / m in
, 示差折射仪检测 。
.O 三舍
0
.
2 0
·
O ` 诬扭 -
0
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0
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M场川e .
3
.
1 得到单一组分的分离纯化方法 6[]
提取
F i g 4 C h r o 〔。 at o g ar Phy Of H P L C Of P SM
3
.
1
.
1
螺旋藻粉经 Z K 高速自控组织捣碎机破壁
处理 , 镜检无螺旋状藻体存在 。 加人 10 倍体积
纸层析结果为单一海兰色斑点 , 凝胶柱层
析和高效液相色谱分析 (图 4 ) 结果均为单一对
称洗脱峰 ,表明组分均一 。
2 0 0 3 年第 l 期 总第 1 12 期
藻举黔臀{巍 江苏食品与发酵 ,~ su ~ N uY ~ o 螺旋藻多糖的分离 、 纯化与检测
56432
。,0
3
.
2 得到两组分的分离纯化方法 7[]
3
.
2
.
1 分离提取
称取冻干藻粉 4 9 ,加蒸馏水 s o m L , 于 90 ℃
水浴抽提 3 次 ,每次 h8 , 离心 ,合并上清液 ,常压
下 7 0℃水浴中浓缩 , 用 S ve ag 方法脱蛋白 , 用 5
倍体积的无水乙醇沉淀 , 对沉淀物先后用丙酮
和无水乙醚脱水得粗多糖 。
3
.
2
.
2 纯化
将 粗 多糖 溶解 在含 0 . l m ol / L NaC L 的
0
.
o o l m o l / L 磷酸缓冲液中 (p H 7 . 0 ) , 使浓度为
0
.
19 / L
, 然 后 在 2 . s e m x Z o e m 的 D E A E -
S
e ph ad e x A 一 2 5 层析柱上以 0 . s m L / m i n 的流速
洗脱 , 0 . o o l m o l / L 磷酸缓冲液 ( p H 7 . o ) 中 N a e l
的线性梯度为 0 .1 一 4 . 0 m ol / L , 用苯酚 一硫酸
法跟踪检测 , 收集含多糖部分 , 浓缩 , 对
0
.
o o l m o l / L 磷酸缓冲液 (p H 7 . o )透析 、 浓缩 、 冷
冻干燥得多糖精品 。
1「 后 ;子/
O
, . . . . .
` ’ — 一
50 10 0 1 5 0
洗脱体积 v o . u m 。
2 0 0 2 5 0 3 0 0 3 5 0
o f . 人u t i o n ( m L )
F i g 6 精制多糖在 S e hP a ds x G 一 15 0
柱层析上的洗脱
S PS I 一SSP n
极大螺旋藻粉经上述过程得到 2 个白色组
分的多糖精品 : S P S I和 S PS n (图 5 ) , 纯度鉴定
(图 6) 2 个组分均只出现单峰 , 且出峰时间一
致 , 表明精制的多糖已是纯的单一组分 , 同时 , 2
个组分的分子量又相近 。
蛋, 容
1二三
l 0
4 螺旋藻中多糖分离工艺 (去蛋
白 )的优化、一。三二.à,沁3价闷.
!明山力八卜.且.名6、,00
1 0 0
洗脱体积
2 0 0 3 0 0
J O
10 0
V o l
u m e o f 。几u t l o n ( m L )
F i g s
一多糖
粗多糖在 D E A E 一 S e p h a d e x A 一 2 5
柱层析上的洗脱曲线
一 N a CI 浓度
3
.
2
.
3 纯度鉴定
将多糖精品少许溶解在 0 . o o l m ol / L 磷酸
缓冲液 (p H 7 . 0) 中 , 使浓度为 0 . 1 9 / L , 在
2
.
6 e m x 6 o e m 的 S e p h ad e x G 一 15 0 层析柱上 以
0
.
o o l m o l / L 磷酸缓冲液 (p H 7 . o ) 洗脱 , 流速为
I Om L / h
, 用苯酚 一 硫酸法跟踪检测 。
藻蓝蛋白和螺旋藻多糖是螺旋藻中的重要
活性物质 。 藻蓝蛋白具有提高人体免疫力 ,促进
动物血细胞再生 , 抑制癌细胞的作用 ; 螺旋藻多
糖则具有抗氧化 、 抗疲劳 , 防护植物细胞的辐射
遗传损伤的作用 。
一般 , 在制备螺旋藻多糖时所采用的水溶
液加热抽提 、 Sve ag 溶剂萃取去除蛋白等方法 〔8 ’ ,
由于螺旋藻中蛋白质的含量丰富 , 通常水提取
液中蛋白质含量要比一般植物的水提取液中
高 , 因此蛋白要反复多次才能除尽【9 ’ 。 故操作繁
琐 , 易导致生物多糖结构的缺损 。 为此 , 发展了
一种新的分离工艺 , 从螺旋藻中同时分离纯化
得到藻蓝蛋白及螺旋藻多糖 。
该分离工艺 L’ “ ,为了保持蛋白的活性 , 实验
中先在常温下提取蛋白质 , 然后再提高温度提
2 00 3 年第 l 期 总第 1 12 期
螺旋藻多糖的分离 、 纯化与检测 江苏食品与发酵 J IA N G su SHI PI N Y U FAJ IA O 银嘿一歉
取多糖 ,并采用泡沫分离技术来取代 s e va g 溶剂
萃取以去除多糖溶液中的蛋白质 。 螺旋藻中藻
蓝蛋白和多糖分离工艺如图所示 :
螺旋藻活性组分分离纯化工艺
螺旋藻粗 四化建设
沉淀* 凝胶过滤* 经基磷灰石柱层析* 藻胆蛋 白产品
细胞破碎* 蛋 白多级抽
提多糖一泡沫分离去除蛋 白质、 凝胶过滤精制
* 螺旋藻糖蛋 白产品
螺旋藻粗粉先经细胞破碎 , 用水溶液多级
抽提蛋白质 , 上清液经冻干后即为藻胆蛋白粗
品 。
经蛋白抽提后 , 在残渣中加人蒸馏水 , 80 ℃
水浴下加热 3 一 4 h 。 弃去不溶物 ,采用清华大学
化工系发展的环流泡沫分离技术可从上清液中
分离去除大部分蛋白质 。 与 Sve ag 溶剂萃取过程
相比较 , 这是一种处理量大 、 效率高 、 简单易行
且条件温和的分离方法 〔川 。 经过以上步骤 ,多糖
已提取到水溶液中 , 且多糖溶液中的蛋白质得
到有效分离 。 多糖溶液经真空浓缩 、 冷冻干燥后
即可得到螺旋藻粗多糖 。 采用 s e p h a e叮1 5 一 10 0
和 s eP h ad e x G 一 2 0 0 凝胶层析来进一步纯化螺
旋藻粗多糖 , 收集主要多糖组分 , 冷冻干燥后得
到一种尚未见报道的螺旋藻糖蛋白。
螺旋藻多糖因其具有抗辐射 、 抗肿瘤和免疫调
节等生理活性 , 在作为医药产品方面已 日益为
人们所重视 。 作为一种新的药物资源 , 它在实践
应用上具有诱人的前景 。 目前 , 国内外对螺旋藻
多糖进行了多方面的研究 , 但尚不够充分 , 对如
何运用现有分离纯化方法提高多糖得率及纯度
等方面 ,仍有许多工作需要探索 。
参考文献 :
【1」o ir o C . [ J l . M i e or b io lo g ie a l R e v iew s , 19 83 , 4 7 : 55 1
【2] 曾和平 . 螺旋藻多糖蛋白研究状况 . 中国海洋药物杂志
口 ]石斌 ,殷淑芳 , 洪冬英 . 螺旋藻多糖的分离与提纯 . 水产科技情报 , 1 994 , 21 (3 )
4[ ]曾和平 ,郭宝江 . 螺旋藻多糖的化学研究 . 药学学报 , 19 95 , 3 0 (l l)
[5 ] Sh
e
kh
a
amr
K M
.
V
e n k a t a ar m an L V
.
S
a
li m at h P V
.
C
a br o h y d r a t e e o m p o s it i o n a n d 。 h ar ac t e ir z at i o n o f wt o u n us u al s u g o fr
o m
t h
e
b l
u e 『 e e n al 邵 e , S p i ur li n a p l a t e n s is . hP y t o e h e m i s t叮 , 1 98 7 . 2 6 : 22 67 一 2 2 69
【6] 邓时锋 ,刘志礼 , 李兆兰 , 喻利 . 极大螺旋藻多糖的分离纯化及化学结构分析 . 南京大学学报 ( 自然科学 ) , 2 00 , 3 6 (5)
7[ ]周志刚 ,刘志礼 , 刘雪娴 . 极大螺旋藻多糖的分离 、纯化及其抗氧化特性的研究 . 植物学报 , 19 97 , 3 9( l)
[8 ] G
u o
Z W
,
H u i Y 2
.
[ J ]
.
C h i
n e s s Jo u nr al o f C h e m i s ytr
,
1 9 9 6
,
4 ( 3 )
: 2 7 9
9[ ]王辉 , 曾和平 ,杨世柱 . 螺旋藻水溶性多糖的分离纯化及其本征特性 . 精细化工 , 19 99 , 16 (5 )
[10 ]殷钢 , 李深 , 何清华 , 刘铮 , 袁乃驹 , 丁富新 . 螺旋藻中藻胆蛋白和多糖的分离纯化及产品特性 . 精细化工 , 19 9 , 16 (2)
【1 1 ]u u Z H , e t a l . 【J」. B i o s e part io n
,
19 97
,
6 (6 )
:
353
A b st r a e t : C ur d
e Po l y s a e e h a ir d e s w e er p er p a r e d for m p
o w e er d S p iur l i n a p l a t e n s is b y h o t w a t e r e x t r a e t io n
, a l e o h o l p r e
-
e i p i ta t i o n
,
d e p or t e i n i z a ti o n
.
A n d p o l y s a e e h a r id e o f s p iur l i
n a p l a t e n s i s (SP P ) w
a s i s o l a t e d a n d p u ir if e d b y S e p h a d e x g e l
c o l u m n c h or m a t o g r任p h y · I t s h o m o g e n e i炸 w a s e x a m i五e d b y p a p e r c h or m a to g ar P h y , S e p h a d e x g e l c o l u m n c h or m at o asr p h y
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.
A t t h e s a m e t i m e
,
i t s m o n o 一 s a e e h iar d
e e o m p o s i t i o n w a s id e n t i if e d
.
S e p h a d e x g e l e o l u m n e h or m at o g r a p h y w a s
u s e d t o e s t i m a te d th e a v e r a g e m o l e e u l a r w e i gh t
.
K ey w o dr s : POl y
s a e e h iar d
e of s p iur l i n a p l at e n s i s : I s o l a t i o n a n d p u r i if e a t i o n
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