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核桃仁活性成分的提取及体外抗氧化活性研究



全 文 :!! ##$,%&’( ,)&( $ 《食品科学》
山东省自然科学基金资助课题 *编号:+,-.##/# 0
近年来的研究表明,许多疾病的发生发展与自由
基有密切关系。来自体内体外的过量自由基在一定环
境下时刻影响机体的各个方面。人体自身虽然有完整
的抗氧化系统进行自发保护,但当体内自由基产生太
多或清除能力下降时,就会导致各种炎症、变态性疾
病、癌症、衰老等一系列病变 1 $ 2 3。适当补充外源性抗
氧化剂或调整膳食结构可使上述损伤与病变改善。
核桃仁为胡桃科胡桃属植物胡桃 * 456’789 :;6<7’ 0
的果仁,有补肾固精、敛肺定喘、镇咳之功效,是老幼
喜食的坚果之一。核桃资源丰富,是重要的山区资
源。目前,国内核桃抗氧化作用的研究较少。为了解核
桃仁清除自由基的能力,本文用 .==>法、化学发光
法、?@A法测定了不同溶剂核桃仁提取物的抗氧化活
性,以期为核桃仁保健食品的开发应用提供科学依
据。
$ 材料与方法
$( $ 实验材料
核桃产于山东沂南,晒干后砸碎取仁。核桃仁
B#C鼓风干燥粉碎过 -#目筛备用。
亚油酸,上海来泽精细化学品厂,分析纯。
叔丁基对苯二酚 * ?@>D0,法国罗地亚公司,食品
级。
茶多酚,纯度大于 ,/E,福建松溪生物化工厂。
二苯代苦味酰自由基 *.==>0,东京化成工业株
式会社,分析纯。
F% G H/!型紫外可见分光光度计,上海分析仪器
总厂。
IJ G H型化学发光分析仪 * ?&K&L5 M’;NO:&P8S59O:<7’ T&( UOS( 47V780
$( 实验方法
$( ( $ 核桃仁活性成分的提取
称取干燥后粉碎的核桃仁 /#6,用 /##W’正己烷
在常温下震荡浸提 XK,重复两次,收集滤液;滤渣部分
继续用乙酸乙酯按上述方法浸提两次,收集滤液;滤
渣部分再用 /##W’ ,/E乙醇浸提两次,收集滤液。将各
滤液分别用旋转蒸发器蒸发至粘稠后,转移至真空干
燥器干燥,分别得乙醇提取物,乙酸乙酯提取物,正己
核桃仁活性成分的提取及体外抗氧化活性研究
孟洁 杭瑚 青岛大学化学系 XX#H$
摘 要 用 ,/E乙醇、乙酸乙酯、正乙烷依次萃取核桃仁的可溶成分。用化学发光法、.==>法、?@A法测定各提取物的
抗氧化活性。结果表明:核桃仁各取物对 .==>自由基均有清除作用,以 ,/E乙醇提取物最佳,乙酸乙酯提取物次之;
,/E乙醇提取物对亚油酸自氧化体系的抑制作用也强于乙酸乙酯提取物,而正己烷提取物则表现出促氧化作用,在以
Y; Z及 Y;8O&8反应催化的亚油酸脂质过氧化体系中,,/E乙醇提取物的抑制作用强于同浓度的茶多酚;此外,,/E乙
醇提取物对碱性连苯三酚体系产生的超氧阴离子自由基 *I G ( 0有较强的清除作用,但对 %T G T5 Z G酵母 G >I体系
产生的羟基自由基 *·I>0清除作用较差。
关键词 核桃仁 抗氧化活性 自由基
!#$%&’$ [&’5P’; N&WV&8;8O9 &\ 456’789 :;6<7’ ];:; ;^O:7NO;S 56<86 ,/E ;OK78&’_ ;OK‘’7N;O7O;_ 8 G K;^78; &8; P‘
&8; 78S OK;<: 78O<&^<7O 78S ?@A W;OK&S( ?K; :;95’O9
9K&];S OK7O 7’’ L<8S9&\ ;^O:7NO9&\ 456’789 :;6<7’ K7a;K7S 9N7a;86<86;\\;NO9 &8.==>:7S9K&];S OK; K<6K;9O 7NOO78N; O& OK; 75O&^&^;OK78&’ ;^O:7NO9 ]79 9O:&86;: OK78 O;7 V&’‘VK;8&’9 ]9O:&86 9N7a;86<86 ;\\;NO9 &8 95V;:&^P5O 60 =:&S5N;S P‘ %T G T5 G P7:W G >I 9‘9O;W(
()* +,%-# 456’789 :;6<7’ A8O<&^!营养卫生
《食品科学》 !#$$%,&’() ##,*’) %#
图 ! 提取物对 ##$自由基的清除作用
图 % 提取物对亚油酸的抗氧化作用
烷提取物。
%) #) # 抗氧化活性的测定
%) #) #) % 样品对 +,,-自由基的清除率按文献 . / 0
的方法测定
%) #) #) # 样品对亚油酸脂质过氧化的抗氧化活性按
文献 . / 0采用 123法进行测定
%) #) #) / 以 45# 6催化亚油酸脂质过氧化体系的抗氧
化活性测定
参考 789:8;<等人 . ! 0 的方法,略有修改。在 %$=(
$) #=’( > ? @- A B) !的磷酸钠缓冲液中,加入 #) C的
亚油酸乙醇液 !) %=(,二次蒸馏水 !) D=(,并加入 %=(
45# 6 E . 45# 6 0 A #) ! F %$ G /H > ? I 作催化剂形成底物溶
液。加入底物质量 $) $#C、$) $JC、$) %$C的核桃仁乙
醇提取物、茶多酚和 12-K,混匀后于 !$L生化培养
箱中反应 %M:,取出待测样品,迅速加入 #C的三氯
乙酸混匀,放置,终止反应。然后加入 $) JBC的 123,
于沸水浴中加热 %=8N。取出冷却后加入 !=(正丁醇,
摇匀,于 !$$$O > =8N 离心 %=8N,取正丁醇液,于
/#N=比色,同时测定不加抗氧化物的吸光度。吸光
度越小,表明抗氧化能力越强。
%) #) #) ! 以 45NP’N 反应催化亚油酸脂质过氧体系
的抗氧化活性测定
在 %$=( $) #=’( > ? @- A B) !磷酸钠缓冲液中,加
入 !=( #) C 的亚油酸,二次蒸馏 !) !=(,并加入
%=(45# 6 E . 45# 6 A #) ! F %$ G /H > ? 0 I 及 $) $%C 的
-#Q#$) =( 作催化剂,形成底物液。其余方法同
%) #) #) /。
%) #) #) 样品对碱性连苯三酚体系 E非酶体系 I产生
的 Q#的清除作用,参照文献 . 0的方法进行测定
%) #) #) J 样品对 &R G RS# 6 G酵母 G -#Q# 体系产生
的·Q-的清除作用,按文献 . J 0的方法测定。
# 结果与讨论
#) % 对 +,,-自由基的清除能力
在含有 #) F %$ G =’( > ? +,,- 自由基的反应体
系中,各溶剂提取物对 +,,-自由基的清除能力如图
%所示。
三种溶剂提取物对 +,,- 自由基都有不同程度
的清除能力。其中乙醇提取物对 +,,-自由基的清除
能力最强。当添加量为 %) # F %$ G H > =(时,其清除率达
D#) #C,与添加量为 /) M F %$ G JH > =(的茶多酚、添加
量为 %) $ F %$ G H > =( 12-K清除自由基的能力相当。
继续增加剂量对自由基的清除不再有明显的效果。其
次为乙酸乙酯提取物,当添加量达 J) # F %$ G !H > =(以
上时,其清除能力才达 D#C,比相同添加量的茶多酚
及 12-K差;正己烷提取物对 +,,-自由基的清除效
果最弱,当添加量为 M) $ F %$ G /H > =(时,其清除率仅为
$C。
#) # 对亚油酸脂质氧化体系的抑制作用
用 123 法测定各提取物对亚油酸脂质过氧化的
抑制能力,结果见图 #。可见核桃仁 DC乙醇提取物、
乙酸乙酯提取物对亚油酸脂质过氧化过程均有抑制
作用。但相同浓度下,乙醇提取物的抗氧化能力优于
乙酸乙脂提取物,比天然抗氧化剂茶多酚亦强,与 &T
相当,但不及同浓度的合成抗氧化物 12-K。正己烷提
取物不但没有表现出抗氧化性,对亚油酸的氧化过程
还有促进作用。
#) / 催化条件下样品对亚油酸脂质过氧化体系的抗
氧化作用
#) /) % 45# 6催化条件下的抗氧化作用
研究表明 . B 0亚油酸氧化的起始反应很慢,但微量
!营养卫生
! #$$%,&’() ##,*’) %# 《食品科学》
+,-乙醇提取物含量 .- /
$) $#
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清除率 .- /
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茶多酚含量 .- /
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3456含量 .- /
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表 ! #$乙醇提取物在 %&! 催化条件下的抗氧化作用
表 ’ #$乙醇提取物在 %&()*(反应催化条件下的抗氧化作用
+,-乙醇提取物含量 .- /
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表 + #$乙醇提取物对 ,! #的清除作用
样品用量 .78 9 : /
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+#) 2
+1) %
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的过渡金属离子可以催化反应加速进行。当向亚油酸
中加入 <=# >时,除了可以加速起始反应外,还可与脂
质过氧化的中间产物脂质过氧化物 . :??5/ 反应,使
其分解产生烷氧基 . :?· / 和脂质过氧自由基
. :??· /,从而加速脂质氧化反应的进行 @ 2 A:
<=# > > :??5%:?· > ?5· > <=1 >
<=1 > > :??5%:??· > 5 > > <=# >
亚油酸的氧化产物过氧化物可分解产生二级产物
丙二醛,丙二醛与硫代巴比妥酸作用生成 34B染料,最
大吸收波长为 ,1#C7。由吸光值的大小可判断丙二醛产
生的多少,并评估各样品在催化条件下的抗氧化效果。
核桃仁 +,-乙醇提取物对 <=# >催化条件下的抗
氧化作用见表 %。由表可知,提取物对 <=# >催化条件下
亚油酸的脂质过氧化均有抗氧化作用,且随提取物浓
度的增强抗氧化性增强。+,-乙醇提取物的抗氧化性
强于同浓度的天然抗氧化剂茶多酚,但不及同浓度的
合成抗氧化剂 3456。
胡春等人 @ 0 A认为黄酮类化合物在抑制油脂自动氧
化中的作用是作为金属离子络合剂。核桃仁富含黄酮
类及甙。本文认为核桃仁之所以对 <=# >催化系统的氧
化作用有抑制效果,是其提取物对 <=# >的络合以及对
自由基清除作用的综合表现。
#) 1) # 对 <=CD’C反应催化条件下的抗氧化作用
在该反应体系中,<=# >除了催化起始反应,与过氧
化物形成 :?·:??·自由基外,还可以与5#?#反应,产
生高活性的氢氧自由基·?5,加速氧化反应的进行 @+ A。
核桃仁 +,-乙醇把提取物对 <=CD’C 反应催化下
脂质过氧化的抑制作用见表 #。可见核桃仁提取物对
该体系也有一定的抗氧化作用,略强于茶多酚。
#) ! 对 ?#·的清除作用
+,-乙醇提取物能有效地抑制碱性连苯三酚体
系的化学发光作用,对 ?#有明显的清除作用,结果见
表 1。
由表可知,提取物对 ?# 的清除作用随体系中提
取物用量的增大而增大。当浓度小于 $) %78 9 :时,几
乎不表现清除能力,浓度进一步增大后,清除能力开
始升高,其 EF,$为 ) #78 9 : .清除 ,$-所需样品量 /,
当浓度增加至 %+) +78 9 :时清除率为 +#) 2-,继续增
加浓度,清除率不再有明显变化。由此可得,提取物清
除 ?#的有效浓度范围是 $) % G %+) +78 9 :。
#) , 对·?5的清除作用
从 &F ; FH# > ;酵母 ; 5#?# 体系产生的·?5 化
学发光体系来看,核桃仁对·?5清除作用较差,浓度
的改变,对发光强度影响很小 .数据略 /。
1 结论
1) % 核桃仁 +,-乙醇提取物对 IJJ5自由基、碱性
连苯三酚体系产生的 ?# 自由基都有很强清除作用,
其清除能力随提取物的增加而增大,但当浓度达一定
值后,其清除率不再变化。
1) # 核桃仁 +,-乙醇提取物对亚油酸的氧化体系、
<=# >及 <=CD’C反应催化的过氧化体系都有较好的抑
制作用,且强于同浓度的茶多酚。对 &F ; FH# > ;酵母
; 5#?#体系产生的·?5清除能力较差。
1) 1 核桃仁乙酸乙脂提取物对 IJJ5 自由基有清
除,对亚油酸的氧化体系亦有抗氧化作用,但都弱
于 +,- 乙醇的提取物。核桃仁正乙烷提取物对
IJJ5有一定的清除作用,但对亚油酸脂质过氧化却
有促进作用。
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!营养卫生
《食品科学》 !#$$%,&’() ##,*’) %#
参考文献
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蔬菜类食品“赛金”与茄子抗氧化作用的研究
丛涛 赵霖 鲍善芬 解放军总医院营养科微量元素室 %$$EJI
田鹤 哈尔滨制药三厂
摘 要 目的 观察蔬菜类食品“赛金”和典型的茄果类蔬菜 @茄子的冷冻干燥粉对生长中大鼠体内的抗氧化功能的
影响。方法 饲料中分别添加 \_的“赛金”和茄子的冷冻干燥粉,设置对照组,饲喂 !J 天后断头处死,取血及肝、脑、
脾、肾等组织,分别测定血清及组织匀浆液中的 H;‘和 :4a1 @ H;‘活性、9‘Y含量以及组织匀浆中的 3H+ @ ^<活
性。结果 茄子组大鼠脑组织中 H;‘活性显著高于对照组;“赛金”和茄子组动物脑组织中 :4a1 @ H;‘水平均显著高
于对照组,肝脏中 :4a1 @ H;‘活性则显著低于对照组。“赛金”和茄子组大鼠血清中的 9‘Y水平均明显低于对照组;茄
子组动物肝脏中的 9‘Y含量也明显低于对照组。3H+ @ ^<活性各组间有显著差异。结论 蔬菜食品“赛金”和茄子能
够提高 H;‘灭活氧自由基的能力,抑制脂质过氧化,降低丙二醛含量,改善机体的抗氧化能力。
关键词 “赛金” 茄子 抗氧化
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新鲜蔬菜的防衰、抗癌功效已成为当今医学和营
养学研究的热点问题之一。本研究采用人工半合成饲
料和代谢实验技术,观察了我国蔬菜类保健食品“赛
金”和典型的茄果类蔬菜 @茄子的冷冻干燥粉对生长
中大鼠体内抗氧化功能的影响。为探讨蔬菜防衰抗癌
的作用机理提供依据。
!营养卫生