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1口尽丁年 1 1月
浙江水产学院李报
JO U RA N LO F Z釜I E JI AG NC O L LE GE O FI FS L王E RI E S
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.
6, N o
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2
N o v
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1 . 名 7
拟厚膜藻胶多糖
成份的分离及纯化的研究 ’
陈 芝 雅
(食品工程 系 )
拟厚膜藻 ( P ac hm 己 , ioP sl’ : s p . )系太平洋西部特有红藻种类 , 常见于朝鲜东南岸和 日本温
水域 。 在我国主要分布于浙江省中北部外海诸岛 〔’ ] , 以嗓洒列岛和中街山列岛生长最茂。 因
其生长快 、 藻体大 , 含胶量多 、 且可能属于卡拉胶一类多糖 , 曾引起人们开发利用的较大兴
趣 。 对于它的藻胶提取研究及主要成分 ( 3 . 6一内醚半乳糖 , 半乳糖 ) 含量测定已有报导 〔“ 1。
本工作采用藻胶多糖粗制品原料系从浙江舟山黄兴岛附近海域 , 四月采集藻体中提取得到 。
对其成分作 了分离 、 纯化等方面的研究 , 结果报告如下 :
实 验 方 法
一 、 分离纯化
1
.
T A , T 。 组分的分离
1 克拟厚膜藻胶粗制品 ( 四月胶 )经粉碎 , 溶于 1 50 毫升蒸馏水 , 离心后取粘稠上清溶液 ,
经 D E A E一 S e p h a d e x A 一 2 5 ( C I一 型 )柱 ( 5 5 m m x 2 6 0m m )层析 L“ ] [毛J 。 层析柱先用蒸 馏水平
衡 , 进样后 , 顺次用 H : O 、 ZM 脉 、 SM 脉 以及含 o . 4M N a H C O : 的 SM 脉展层 , 最后用含
ZM N a cl 的 SM 脉洗脱 , 收集对硫酸一苯酚法 ln[ 阳性反应的高峰部分流出液 , 减压 浓 缩 ,
三倍量工业 乙醇沉淀 , 离心 ( 2 0 0 0转 /分 ) 10 分钟收集白色沉淀 , 依次用无水乙醇 、 无水乙醚各
洗涤二次 , R O 。 真空干燥 , 得白色固体 ( 0 . 63 克 ) , 纯度检测出现二个主要峰 (如图 〔 1 〕称为
T 人
、
T 。 混合物。
T A T
B 混合物重新溶介于蒸馏水 , 搅拌下加入无水乙醇 , 5 一 60 %及 76 一 80 %浓度乙醇
洁液分部沉淀 沙 〕 , 高速离心 ( 1 6 0 0 。转 /分 ) 20 分钟 , 得 T (^ 82 毫克 )淡黄色有弹性固体 ; T 。为
自色粉末状固体 ( 63 毫克 ) , 样品 ( T 人 和 T B )分别经 S e p h ar os e一 6B L K B 层析系统 纯 度 检
测 T 人 如图 [ 2〕 , T 。 如图 〔3〕。
2
。
T B 分离纯化
T B ( 6 0毫克 ) 溶于少量 o . ZM N a C I分三次进样 , 于 S e Ph a r o s e一 6 B 柱 L K B 系统柱 层
析分离 , 示差折射及紫外检测 自动绘图 , 显示三个峰位如图 〔 3 〕 , 收集高峰各管 , 分别合并
T
o l 、
T 二 2
、 及 T 二 3 高峰各管 , 对蒸馏水透析 2 天 , 减压浓缩 , 冷冻干燥 , 分别得 T 。 , 、 T 口 “
及 T 。 , 白色絮状固体 。 其中 T 二 : 含量较多 。
* 气相色谱及红外光谱分析均由中国科学院上海药物研究所分析研究室进行 , 药理试验由中国科学院 上海药物研究
所药理研究室进行 。 作者在此表示感谢 。
1 3 4 浙江水产学院学报 6 卷
二 、 性质分析
1
. 酸完全水解 v[] 薄板层析
取 T 口 :、 T 二 : 和 T 口 3样品每份约 4毫克 , 加入 Z M 三氟醋酸 10 毫升 , 封管 1 20 ℃ 水解 1
小时 , 减压浓缩至干 , 反复加甲醇后蒸干 (三次 ) , 滴入小量水 , 硅胶 60 F 2 。` 薄板层 析 , 用氯
仿 : 水 : 甲醇 ( 8 : 1 : 1 5) 溶剂系统 , 标准糖 ( L 一木糖 , D一葡萄糖 , D一半乳糖 )对照 , 上行
层析 3 小时 , 取出晾干 , 喷洒 A lu is id n e一H cl l8[ 显色 (通风橱内 )后 , 置于 1 0 ℃ 烘箱 10 分
钟 , 显示褐色斑点如图 〔 4 〕。
2
. 乙酸化衍生物气相分析
T
二 ; 、 T m : 、 T 二 : 之水解物 , 溶于小量水 , 加入约 10 毫克 N a B H ; , 室温还原二小时 , 冰
醋酸中和后蒸干 , 加甲醇及醋酸 1 滴蒸干 , 反复三次 , 最后加甲醇蒸干 , 然后用 10 毫升无水
醋醉 , 于 沸水浴 1 小时 , 蒸干后加入 甲苯三次 (每次蒸干 ) , 残渣溶于氯仿 , 经水洗涤 , 无水
N a
:
5 0
` 干燥 , 减压浓缩至小体积 , 进行气相分析 , 结果如图 〔 5 〕。
3
. 分子量测定
采用凝胶过滤法 〔’ 」测定分子量 , 将已知分子量的标准多糖 T一 40 ( M W 4 x l少 ) , T一70
( 7 X l o
`
)
,
T一 1 1 0 ( 1 1 X l o 4 ) , T一 5 0 0 ( S X l o 。 ) , T一 2 0 0 0 ( Z x l o . ) 分别相继上柱 , 求 出 柱
之空体积 V 。 , 按 V ./ V 。 与分子量对数关系作图得到标准曲线 , 样品 T 二 ; T 二 : T 二 3 分别按相
~ 、 , 、 一 , , , 。 一 二* , ,~. 、 . r . , , 、 , , . 二 ~ , 、 二 、 _ 。 ~ , 、 , 、 * ~ , , V 。 一 V 。 、 : ~ , 。同条件于 L K B 柱层析系统流出 , 从流出体积 ( V . ) , 空体积 ( V 。 ) 根据 K a , = 一v1t 但二寻尸一计算得,叫 ~ , , J 一一 ,山 ’吕 ` , ’ ` “ 、 刁 “ “ ` 。囚 ’ 夕 、 “ ’ 。叫 厅 `犷 ’ 、 ’ . ` ’ 工 r 广 `犷 ’ ` ” “ 叭扣 “ a , V 。一 V 。 ` ’ 夕 r ” `分子量 : T 二 , “ 6 X l o、 T 二 2 ` i X l o 4 , T 二 3* 4 x l o s o
4
. 红外分析
T 二 : 样品经 K B r压片 , 红外光谱分析如图 〔6」发现该组分为典型多糖 , 并带有 5 0 ` 基团 ,
在 8 2 o e m 一 ` ~ 8 4 o e m 一 ` 有吸收 ( C一 0 一S )振动 , 1 2 4 0~ i 2 4 5 e m 一 ’ 有吸 收 ( S = o 振 动 ) , 证 明
5 0
` . 存在 , 同时在 i 6 4 o e m 一 ` 有多糖特征吸收 , 3 0 0 0~ 3 5 0 0 e m 一 ` 有较宽的多糖 O H 吸收带 。
5
.
T 人 与 T B 的免疫药理试验
分离所得 T A 与 T 。 两组分多糖 , 免疫药理试验结果 (如表 1 )表明 : T A , T B 两组 分 的
混合多糖对于 C 5 7 / B L 系小鼠 ( 3 月令 , 1 8一2 克 ) iP 给药 , 能增加抗体合成 (血清溶血素 和
P F C— 脾脏空斑形成细胞 )和 T 淋巴细胞转化率 , 统计结果显著 ( * * * P < 0 . 0 1 ) 、 其中尤以
T
A 组分作用明显 , 且有效剂量较低 。
表 I T^ , T 。免夜药试验结果
日|一……剂量 毫克 / k g x 天 ! 途 径 1 动 物 数 脾重 (毫克八。克》 胸 腺 重 肝 重对 照 2: 5 i P 8 47 士 5 1 7士 3 6 06 士 2 4T A 5 i P 8 95 土 8 个, ’ 今 1 3士 3T B 8 5 2 士 5 1 4士 8 七衫勺二 J , 个 ’ 一
5 26 士 4 1
血清溶血素
H C 5 0
P F C /
脾 细
T 细 胞 转 化
3H
.
T d r渗入 e pm 补 体 C
3
微克八 O微升 I g G微克 / 1。微升
3 9 0士 2 1
连6 0士 7 1 个.
5 2 0士 5 9 个巾 . 巾
1 3 3士 3 9
3 60土 3 4
1 8 0士 3 6
7 9 8 7士 1 3 2 0
3 0 1 47 士 3 9 3 4个巾 二
2 1 3 97 士 3 6 2 0干…
8
.
5土 1 . 1
5
.
3士 0 . 8
9
,
8 土 1 . 1
1 1 5土 5 6
1 3 1士 2 8
1 4 8士 1 6
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2 期 拟厚膜藻胶多糖成份的分离及纯化的研究 13 5
结 果 与 讨 论
拟厚膜藻的藻体经热水抽提得水溶性多搪 , 含 T A 、 T B二部分 , 均为混合物 , 图 〔2〕〔3〕 ,
T A经冷冻干燥为类白色海绵状弹性固体 ; T 。为白色絮状 固体 。
T 。 经 L K B I层析系统 , 柱层析分离 , 得到三个组分 ( T ` , T 二 2 , T o 3 ) , 水介后 T L C 分
析及水介物还原 乙酞化衍生物的G C分析 , 结果如图〔 4〕〔5〕、 表 明T 。 ,含单糖组分以带有硫酸
根的半乳糖硫酸醋为主 、 摩尔比为 : 木糖 : 半乳糖一 5 0 ` = 1 : 10 . 4 T 二 : 含有单糖除带有硫酸
根的半乳糖外 , 尚有木糖 、 鼠李糖其摩尔比为 : 鼠李糖 : 木糖 : 半乳糖一 5 0 ` = 0 . 2 : 1 : 10 。 4。
T 二 3 含 有半乳糖不带硫酸根 , 摩尔比为 : 鼠李糖 : 阿拉伯糖 : 木糖 : 半乳糖 : 葡萄搪 = 0 。 :5
1 : 2
。
7 : 3
。
2 : 4
。
6
。
曾有报导 〔“ 〕拟厚膜藻胶含水解硫酸根 ( 5 0 ` 一 ) 19 一 20 % , 图〔6〕表明 T m : 的红外光谱分析
显示硫酸根的存在 。 从 T A 、 T 。免疫药理试验结果表明 , T 人免疫试验结果明显 , 值得继续探
索其精细结构及其各个部分的功能 。
据 R e s 等报导 汇’ 。 ’ , 六十年代已对海藻的卡拉胶结构作了大量研究 , 并提出卡拉胶有六
种类型 ( l , 林, 、 , e , K , 入卡拉胶 ) , 从本工作中得到 T 人 、 T B 都不是均一胶质 , 它们表现 性
质亦不同 , 并且已从 T B 分得三个不 同的组分 。 根据推断 , 拟厚膜藻胶属卡拉胶类物 质 。 故
拟厚膜藻胶多糖可能为含有不同类型卡拉胶的混合胶多糖 , 有持进一步研究 。 T^ 及 T 。各组
成成分多糖的重复结构亦有待今后探讨。
二.’弓….’
J习 I T , 、 T B i昆合物 S e P h a r o s e 一 6 B柱层折
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鲁。 昌。 。
图 2 T A S e Ph a r o s e 二 6 B柱层 析
图 3 T BS e Ph a o r s e于6B柱层折 l到 4
荀半木 、 ,伙伽 ,
T 。 : T 、 T 二 3水介物板层 折
1 36 浙江水产学院学报 6 卷
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图 S T , : T 解 T 。 、还原乙 酞化衍生物 气相 层 沂
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图 6 T 二 : 红 外光语 ( K B )r
之期 拟厚膜藻胶多糖成份的分离及纯化的研究 1 3 7
参 考 文 献
二 1〕 王 素娟 : 1 9了 9“ 浙江中北 部沿海岛屿红藻的研究 ” 〔 1〕 。 中国海洋湖泊学会第三届代表大会暨学术会论文汇 编
二 2口 崔绍荣等 : 1 98 3“ 拟厚膜藻胶的研究— 拟厚膜 藻胶的提取 、 化学成 分和性质 . 海洋药物4 ( 总 8( ) 10 9一 19 3)〔 3〕 衰静明 : 1 9 7 3“ 授胶层析法及其应用 ” , 科学出版社
二4 〕 R e y L . W I飞;: t l e r e t a l : 1 9 6 5 “ G e l P e r m e a t i o n C h r o m a t o g : a p h y ” C a r b o h y d r a t e C h e m i s t r y s (选5一 5 2 )
〔 5 」 孔1i e l l o l . D . o t a l : 2 9 5 6 “ C o [o r i m o t r i e M e t h o d F o r D e t e r m i n a t io n o f S u g a r s A n d R e l a t e d S u b st a n e e s ”
八 n al . C h e m . 2 8 ( 3 5 C )
气` 三 方积 匀. : 1哭 这“ 多糖的分离纯化及其纯 度鉴别与分子量测定 ”药学通报 19 ( 1 0 ) 4 6
乙7 己 方积年华 : 1哭 o “ 竹黄多糖研究一分离 、 纯化及其性质 ” , 生物化学与生物物理学报 1 2 ( 3 65)
〔 8 1 气V 、 ) l f r o 也 . 卜卜 L . e t a l : 1 9 5 6 “ D e t e e t i o n o f C a r b o h y r a * e s O n P a p e r C h r o m a t o g r a m s ” A n a l . C l l e m .
2 8 ( 1 03了 )
誓_ 9 〕 D l℃ l l e r . T . W . c t a l 1 9 7 9 . J . C h r o m a t e g r . 1 7吐( 4 4 3 )
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1叼 史升果 : 1 9 3 1 “ 一种用途广泛的海藻多糖一卡拉胶 ” , 海洋科 学 2 ( 4 7一5 4 )
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G E L F R O M 尸A C万Y M E N I O尸5 1 5 S P
C h e n Z h i y a
( F o o d E n g i n e e r i n g D e P a r t m e n t )
T h i s P a p e r 15 e o n e e r n e d w i t h a s o r t o f s u l f a t e d w a t e r s o l u b l e P o ly s a e e h
-
a .l id e s e x t r a e t e d f r o m o n e k i n d o f r e d a lg a e p a e h万m e n i叩 5 15 s P . A f t e r t h e e o a r s e
g e l h a v in g b e e n e h r o m a t o g r a P h e d ( D E A E 一 S e Ph a d e x A 一 2 5 e o lu m n e h r o m ·
a 七o g r a P h y ) , t h e t w o p r o d u e t s P r e e iP i t a t e d i n s e q u e n e e w h e n th e f i l l e d s o lu t i o n
r e a e h e d 5 5一 6 0 % a n d 7 6一 8 0% e o n e e n t r a t i o n o f e t h a n o l r e s P e e t i v e ly 。 T h e n ,
a f t e r e e n t r i f u g a t i o n T A a n d T o w e r e a v a i l a b l e
.
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.
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,
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; ,
T 二 : a n d T m 3 , t h e n t h e h y d r o li z a t i o n o f
t h e t h r e e e o m P o n e n t s
, t h e t h r e e e o m P o n e n t s
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b e u s e d f o r a n a ly s i s w i t h T L C a n d G C
.
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.
T h e i n f r a
一
r e d s P e e t a o f t h e s u l f a t e d P o ly s a e e h a r i d e T
二 : s h o w e d it s a b s o r -
P t i o n b a n d s a t 8 2 0一 8 4 0 e m 一 ’ a n d 1 2 4 0一 1 2 4 5 e m 一 ’ , w h i e h m a y b e at t r ib u t e d
t o i t s P r im a r y e q u a t o r ia l e s t e r s u lf a t e l in k a g e
.
蛾虎鱼亚 目四种鱼的染色体组型的初步研究
— 费志清… ,浙水 院报 , 1 9 8 7 , 6 (2) , 1 2 7一 1 3 0本文报导了 四种照虎鱼的染色 体组 型。 大弹涂 鱼 B .
夕。 c t` n f r o s t r i s的核型为 Zs t : 4理亡。 中华乌塘鳗 B . : i n e n s i s
的核型为 4 s m : Z s t : 吐Zt 。 纹编暇虎鱼 G . f a s e i a犷o p u o e t a才。 s
的核型为 l o m : Z s s nt : Zs t , 通t 。 项斑鲤 虎 ’ 鱼 T . 才r `g o n o e e -
夕 h a 翻 s 核 型为 1 6 s m : 6 st : 2 4t 。 并且将它 们与本属其它鱼的
核型进行 比较 , 对嫉虎鱼 的核型变化提出一些看法。
拟厚膜藻胶多糖成份的分离及纯 化 的 研 究
一一 陈芝稚 ; 浙水院报 , 1 9 8 7 , 6 ( 2 ) , 1 3 1一 1 3 6
本文论述一种红藻胶 (拟厚膜藻 )水 溶性多糖的分 离 、
纯化和结构分析 。 粗胶 经 D E A E一 S叩 h ad e x A 一 2 5 往 层
析 , 在 5 %一 60 %及 76 %一 80 % 的 乙醇溶液分部沉淀得到
T人 和 T B 两部分。 T B 经 S e p h a r o s e一6 B L K B 层析系统
往层析 , 分得 T 二 , 、 T o Z、 T二 3三个峰 , 经冷 冻千燥 得 到
三个白色絮状固体 , T侧 、 T 二 2 和 T 二 3 分 别经 酸 完 全 水
解 , 水解物经薄层层析以及还原后 的乙阶化产物用 气相色
谱分析 。 T。 , 、 T二 : 和 T m 3 经 L K B 凝佼过滤测 得 分子量
分别为 : 6 x z。 , , l x z o 刁和 4 x z o 3 。 对 T 二 : 、 T o Z 和 T o 3
单糖构成及其摩尔比进行分析 , 并对 T 二 : 作 红外分析 。
带鱼浮延绳钓相对平衡的研究— 陈建国 ;浙水 院报 , 1 9 8 7 、 6 ( 2 ) , 1 3 7一 1 4 0
本文根据理论 分析和实践检验 , 在带鱼浮 延绳钓作业
中 , 用控制延绳干线中点浮力的办法 , 把千 线中点平衡到
干 线两端点水深位置上下 , 从而使较多的钓钩处于渔 获水
层 , 则能明显地提高带鱼浮延绳钓的上钩率 。