全 文 ：第３３卷第５期
２０１４年１０月
中 国 海 洋 药 物
ＣＨＩＮＥＳＥ　ＪＯＵＲＮＡＬ　ＯＦ　ＭＡＲＩＮＥ　ＤＲＵＧＳ
Ｖｏｌ．３３　Ｎｏ．５
Ｏｃｔｏｂｅｒ，２０１４
筛选分离黑海参中具有抗肿瘤活性的
皂苷成分△
＊
刘洁１，２，王先友２，韩华１＊
（１．同济大学医学院，上海，２０００９２；２．河南大学药学院，河南，开封，４７５００１）
摘　要：目的 分离筛选黑海参中具有抗肿瘤活性的三萜皂苷成分。方法 采用萃取、大孔树脂吸附和正反相硅
胶色谱和ＨＰＬＣ对黑海参中具有抗肿瘤活性成分进行提取分离，根据所得化合物的理化性质和波谱数据鉴定
其结构；以 ＭＴＴ法检测肿瘤细胞活性，以ＰＩ染色及 Ｈｏｅｃｈｓｔ　３３２５８染色检测肿瘤细胞周期及凋亡。结果 从黑
海参中分离获得９个组分Ａ－Ｉ，其中组分Ｃ、Ｅ、Ｆ有明显的抑制人肺癌细胞Ａ５４９和白血病细胞株ＨＬ６０的活性，
而对肝癌ＢＥＬ７４０２和 ＭＯＬＴ－４细胞无影响；组分Ｃ诱导Ａ５４９细胞周期阻滞在Ｇ０／Ｇ１和细胞凋亡。据此从组
分Ｃ中分离并鉴定了３个化合物（１～３）。结论 黑海参皂苷组分Ｃ中含有抑制人肺癌细胞的活性成分，进一步
筛选和分离有可能获得具有抗癌活性的皂苷单体；化合物１～３为首次从黑海参中分离得到。
关键词：黑海参；三萜皂苷；抗肿瘤活性
中图分类号：Ｒ９６５　　　文献标志码：Ａ　　　文章编号：１００２－３４６１（２０１４）０５－０２３－０８
Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇ　ａｎｄ　ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ａｎｔｉｔｕｍｏｒ　ｓａｐｏｎｉｎｓ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｓｅａ　ｃｕｃｕｍｂｅｒ
Ｈｏｌｏｔｈｕｒｉａ　ａｔｒａ　Ｊａｅｇｅｒ
ＬＩＵ　Ｊｉｅ１，２，ＷＡＮＧ　Ｘｉａｎ－ｙｏｕ２，ＨＡＮ　Ｈｕａ１＊
（１．Ｓｃｈｏｏｌ　ｏｆ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｔｏｎｇｊｉ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ｓｈａｎｇｈａｉ，２０００９２，Ｃｈｉｎａ；
２．Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ　Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｈｅｎａｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｋａｉｆｅｎｇ，４７５００１，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅ　ｔｈｅ　ｓａｐｏｎｉｎｓ　ｗｉｔｈ　ａｎｔｉｔｕｍｏｒ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｓｅａ　ｃｕｃｕｍｂｅｒ　Ｈｏ－
ｌｏｔｈｕｒｉａ　ａｔｒａＪａｅｇｅｒ．Ｍｅｔｈｏｄ　Ｔｈｅ　ｓａｐｏｎｉｎｓ　ｆｒｏｍ　ｓｅａ　ｃｕｃｕｍｂｅｒ　Ｈｏｌｏｔｈｕｒｉａ　ａｔｒａＪａｅｇｅｒ　ｗｅｒｅ　ｐｒｅｌｉｍｉｎａｒｉ－
ｌｙ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ａｎｄ　ｐｕｒｉｆｉｅｄ　ｂｙ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ｃｏｌｕｍｎ　ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ　ｏｎ　ＤＡ－１０１，ｓｉｌｉｃａ　ｇｅｌ，ｒｅｖｅｒｓｅｄ－ｐｈａｓｅ
ｓｉｌｉｃａ　ａｎｄ　ｒｅｖｅｒｓｅｄ　ｐｈａｓｅ　ＨＰＬＣ．Ｔｈｅｉｒ　ｃｈｅｍｉｃａｌ　ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ　ｗｅｒｅ　ｉｄｅｎｔｉｆｉｅｄ　ｏｎ　ｔｈｅ　ｂａｓｉｓ　ｏｆ　ｃｈｅｍｉｃａｌ　ｅｖｉ－
ｄｅｎｃｅ　ａｎｄ　ｓｐｅｃｔｒａｌ　ｄａｔａ．Ｔｈｅ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｔｕｍｏｒ　ｃｅｌ　ｗａｓ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｂｙ　ＭＴＴ，ａｎｄ　ｃｅｌ　ｃｙｃｌｅ　ａｎｄ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ
ｗｅｒｅ　ｍｅａｓｕｒｅｄ　ｂｙ　ＰＩ　ａｎｄ　Ｈｏｅｃｈｓｔ　３３２５８ｓｔａｉｎｉｎｇ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｎｉｎｅ　ｆｒａｃｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｓａｐｏｎｉｎ，
ｎａｍｅｄ　ａｓ　Ａ－Ｉ，ｗｅｒｅ　ｓｅｐａｒａｔｅｄ　ｆｒｏｍ　ｓｅａ　ｃｕｃｕｍｂｅｒ　Ｈｏｌｏｔｈｕｒｉａ　ａｔｒａ　Ｊａｅｇｅｒ．Ｔｈｅ　ｆｒａｃｔｉｏｎｓ　Ｃ，Ｅ　ａｎｄ　Ｆ
ｓｈｏｗｅｄ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｏｎ　ｈｕｍａｎ　ｌｕｎｇ　ｃａｎｃｅｒ　ｃｅｌ　Ａ５４９ａｎｄ　Ｌｅｕｋｅｍｉａ　ｃｅｌ　ｌｉｎｅ　ＨＬ６０．Ａｎｄ　ｔｈｅｙ
ｈａｄ　ｎｏ　ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｎ　ｌｉｖｅｒ　ｃａｎｃｅｒ　ｃｅｌｓ　ＢＥＬ７４０２ａｎｄ　ＭＯＬＴ－４．Ｔｈｅ　ｓａｐｏｎｉｎ　ｆｒａｃｔｉｏｎ　Ｃ　ｉｎｄｕｃｅｄ
Ｇ０／Ｇ１ｃｅｌ　ｃｙｃｌｅ　ａｒｒｅｓｔ　ａｎｄ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｏｆ　ｈｕｍａｎ　ｌｕｎｇ　ｃａｎｃｅｒ　ｃｅｌ　Ａ５４９．Ｆｕｒｔｈｅｒ　ｓｅｐａｒａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｆｒａｃｔｉｏｎ　Ｃ
ｌｅｄ　ｔｏ　ｔｈｅ　ｉｓｏｌａｔｉｏｎ　ｏｆ　ｔｈｒｅｅ　ｋｎｏｗｎ　ｓａｐｏｎｉｎｓ（１～３）．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｔｈｅｒｅ　ａｒｅ　ａｎｔｉｔｕｍｏｒ　ｃｏｎｓｔｉｔｕｔｅｓ　ｏｎ
Ａ５４９ｉｎ　ｆｒａｃｔｉｏｎ　Ｃ，ａｎｄ　ｔｈｅ　ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ　ｗｅｒｅ　ｓｃｒｅｅｎｅｄ　ａｎｄ　ｉｓｏｌａｔｅｄ　ｆｕｒｔｈｅｒ．Ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ　１～３　ａｒｅ　ｏｂ－
ｔａｉｎｅｄ　ｆｒｏｍ　Ｈｏｌｏｔｈｕｒｉａ　ａｔｒａ　Ｊａｅｇｅｒ　ｆｏｒ　ｔｈｅ　ｆｉｒｓｔ　ｔｉｍｅ．
Ｋｅｙ　ｗｏｒｄｓ：Ｈｏｌｏｔｈｕｒｉａ　ａｔｒａ　Ｊａｅｇｅｒ；ｔｒｉｔｅｒｐｅｎｅ　ｓａｐｏｎｉｎ；ａｎｔｉｔｕｍｏｒ　ａｃｔｉｖｉｔｙ
＊ △基金项目：浙江省教育厅科研项目（Ｙ２００８０３０２０）；博士后基金项目（Ｙ２００９０４５１４７８）资助
　作者简介：刘洁（１９８７－ ），女，硕士研究生，研究方向为药物分析。Ｅ－ｍａｉｌ：ｔｔｄｄ７１２＠１７３．ｃｏｍ．
＊通讯作者：韩华，女，副教授，主要从事海洋生物活性成分研究与新药开发。Ｔｅｌ：０２１－６５９８６２８８Ｅ－ｍａｉｌ：ｈａｎｈｕａ＠ｔｏｎｇｊｉ．ｅｄｕ．ｃｎ
　　收稿日期：２０１４－０１－０６
DOI:10.13400/j.cnki.cjmd.2014.05.004
２４　 中　国　海　洋　药　物 ３３卷
　　《临海水土异物志》等古籍中记载海参“其性温
补，足敌人参”，认为海参具“补肾精、益精髓、消痰
涎、摄小便、壮阳、生百脉血、治溃疡”等功效［１］。海
参中含有海参皂苷、多糖、多肽、蛋白质及脂类等多
种生物活性物质［２］，其中海参皂苷是海参的主要次
生代谢产物，也是海参化学防御的物质基础。海参
皂苷的苷元多数具有羊毛甾醇的基本骨架，其多样
性的结构决定了多种生物活性［３－６］，包括细胞毒、抗
肿瘤、抗真菌、溶血性、降血脂和杀虫作用［７－１０］等。
迄今已从海参中分离出１００余种皂苷类成分［１１］，其
中中国学者分离出数十种［１２－１３］，已经发现多种皂苷
类成分有抑制肿瘤细胞的活性［１４－１９］。
黑海参（Ｈｏｌｏｔｈｕｒｉａ　ａｔｒａ　Ｊａｅｇｅｒ）属棘皮动物
门（Ｅｃｈｉｎｏｄｅｍａｔａ）海参纲（Ｈｏｌｏｔｈｕｒｏｉｄｅａ）楯手目
（Ａｓｐｉｄｏｃｈｉｒｏｔｉｄａ）海参科（Ｈｏｌｏｔｈｕｒｉａｅ）。体呈圆
筒状，口偏于腹面，具触手２０个，无居维氏器。广
泛分布于印度－西太平洋区域，中国福建沿海、海南
岛和西沙群岛等产量较大［１］。有关黑海参皂苷的
化学结构及生物活性尚未见报道［２０－２１］。本文报道
了从采自南海的黑海参中提取出的９种海参皂苷
粗成分的抗肿瘤活性，通过多种手段对该海参具
有抗肿瘤活性组分Ｃ进行了分离，得到并鉴定了３
个海参皂苷化合物（１～３）。这３个化合物为首次
从黑海参中分离得到，为进一步筛选抗肿瘤活性
成分提供依据。
１　材料与方法
１．１　样品
黑海参于２００９年８月采自海南三亚海域，经中
国科学院海洋所廖玉麟教授鉴定为海参科黑海参
Ｈａｌｏｄｅｉｍａ　ａｔｒａＪａｅｇｅｒ，标本（编号 ＨＹＨ２００９０８）存
于同济大学医学院。
１．２　仪器与试剂
分离和结构鉴定工作所用仪器材料Ｂｒｕｋｅｒ
Ｖｅｃｔｏｒ　２２ＩＲ 光谱仪；北京市科仪电光仪器厂
ＸＴ５显微熔点仪（温度未校正）；Ｖａｒｉａｎ　Ｉｎｏｖａ－
４００，Ｉｎｏｖａ－６００核磁共振仪；Ｍｉｃｒｏｍａｓｓ　Ｑｕａｔｒｒｏ
质谱仪；Ｐｅｒｋｉｎ－Ｅｌｍｅｒ３４１旋光仪；Ｆｉｎｎｉｇａｎ　Ｖｏｙ－
ａｇｅｒＧＣ／ＭＳ联用仪（配 ＤＢ－５柱）；Ａｇｉｌｅｎｔ　１１００
ＨＰＬＣ（配ＲＩＤ检测器，２５０ｍｍ×９．４ｍｍ　Ｚｏｒｂａｘ
３００ＳＢ－Ｃ１８ 柱）；Ｓｅｐｈａｄｅｘ　ＬＨ－２０ 葡 聚 糖 凝 胶
（Ｐｈａｒｍａｃｉａ公司）；反相柱层析硅胶 Ｌｉｃｈｒｏｐｒｅｐ
ＲＰ－１８（４３～６０μｍ，Ｍｅｒｃｋ公司）；硅胶预制板和色
谱用硅胶为烟台江友硅胶开发有限公司产品；
ＨＰＬＣ流动相甲醇为色谱纯，其余试剂均为分析
纯。糖及其衍生物的标准品为Ｓｉｇｍａ或 Ｍｅｒｃｋ产
品。活性分析所用仪器材料包括香港力康生物医
疗科技控股有限公司的ＣＯ２培养箱（ＨＦ１００）；多
功能酶标仪（ＴＥＣＡＮ　ＳａｆｉｒＩＩ，瑞士）；倒置荧光显
微镜（Ｌｅｉｃａ　４０００Ｂ，美国）；冷冻高速离心机（Ｂｅｃｋ－
ｍａｎ３Ｋ１５，美国），人肺癌细胞 Ａ５４９、白血病细胞
株 ＨＬ６０、肝癌细胞ＢＥＬ７４０２和 ＭＯＬＴ－４肿瘤细
胞株购自中国科学院上海细胞所并保存于本实验
室。ＰＲＭＩ１６４０培养基、胰蛋白酶购自 Ｇｉｂｃｏ公
司。胎牛血清购自杭州四季青公司；ＭＴＴ（四氮
甲基四唑蓝）购自Ｓｉｇｍａ公司；其余试剂均为国产
分析纯。
１．３　海参中活性组分的提取分离
将黑海参干品（１．５ｋｇ）粉碎后，用６０％～
６５％的乙醇热回流提取（３　０００ｍＬ×４），每次１ｈ，
合并提取液，浓缩后均匀分散于水中，经石油醚
（２　０００ｍＬ×４）、正丁醇（２　０００ｍＬ×４）依次萃取，
合并正丁醇萃取液，浓缩后分散于水中，经大孔树
脂，依次用水、５０％、７０％和９５％的乙醇洗脱，合并
５０％和７０％的乙醇洗脱液，减压浓缩得海参总皂
苷（４５．７４ｇ）。总皂苷经反复的正相硅胶柱色谱分
离，氯仿－甲醇－水（体积比８∶２∶１→６∶４∶１，
下层）洗脱，薄层监测，合并相同部分，得到 Ａ～Ｉ
９个组分。
１．４　海参中所获得组分的抗肿瘤活性
１．４．１　ＭＴＴ法检测各组分对肿瘤细胞株增殖的
影响
采用单因素实验设计，以含细胞不加样品的
１６４０培养液作为标准对照，以不含细胞的１６４０培
养液作为空白对照，利用９种样品的母液配制１１
种浓度 （０．１２５、０．２５０、０．５００、１．０００、２．０００、
４．０００、８．０００、１６．０００、３２．０００、６４．０００、１２８．０００
μｇ·ｍＬ
－１）。每个样品的每个浓度设４个重复。
取处于对数生长期的人肺癌细胞株Ａ５４９，稀释细
胞浓度，按３　０００～４　０００／孔的数量接种于９６孔
板，置于ＣＯ２培养箱（３７℃、ＣＯ２浓度为５％）中培
养２４ｈ。向９６孔板定量加入样品后继续培养细
胞２４ｈ，加入 ＭＴＴ，孵育４ｈ后去除细胞培养液，
用ＰＢＳ冲洗３遍，然后用１５０μＬ　ＤＭＳＯ溶解，测
５期 刘洁，等：筛选分离黑海参中具有抗肿瘤活性的皂苷成分 ２５　
定４９０ｎｍ下的 ＯＤ值。根据下列公司计算细胞
抑制率：抑制率Ｒ％＝［１－（样品孔 ＯＤ－空白对
照孔ＯＤ）／（标准对照孔 ＯＤ－空白对照孔 ＯＤ）］
×１００％。根据实验结果，选择对 Ａ５４９细胞抑制
作用较强的 Ｃ、Ｅ、Ｆ　３个组分（浓度为６４μｇ·
ｍＬ－１）按上述步骤重复检验对白血病细胞株
ＨＬ６０、ＭＯＬＴ－４及肝癌ＢＥＬ７４０２细胞株增值的
影响。
１．４．２　流式细胞仪检测Ａ５４９细胞周期的变化
采用单因素实验设计，设空白对照组、溶剂对
照组和３个实验样品组（分别按３２．０００、６４．０００、
１２８．０００μｇ·ｍＬ
－１的浓度加入Ｃ组分）。每个处
理设４个重复。取处于对数生长期的Ａ５４９细胞，
按每孔１５　０００的数量接种于６孔板，置于ＣＯ２培
养箱（３７℃、ＣＯ２浓度为５％）中培养２４ｈ。培养
２４ｈ后收集细胞。冷ＰＢＳ洗２次，加入ＰＩ低渗液
（含Ｎ　Ｐ－４０、ＲＮ　Ａ酶，添加量为５０ｍｇ·Ｌ－１），混
匀，４℃避光下染色３０ｍｉｎ。用流式细胞仪分析
细胞周期。
１．４．３　Ｈｏｅｃｈｓｔ　３３２５８染色法检测Ａ５４９细胞凋亡
实验设计、Ａ５４９细胞及接种数量以及每个处
理的重复数同１．３．２。用６孔板常规培养细胞（内
置多聚赖氨酸处理的盖玻片）２４ｈ，加入Ｃ组分后
培养２４ｈ。将盖玻片取出，用 ＰＢＳ洗净后加入
４％多聚甲醛固定１０ｍｉｎ。用ＰＢＳ洗３次后，滴加
Ｈｏｅｃｈｓｔ　３３２５８染色液，室温避光下孵育１０ｍｉｎ，
然后用ＰＢＳ冲洗，吸去多余液体，封片后在荧光显
微镜下观察细胞的形态变化。
１．４．４　数据统计分析
采用单因素方差分析方法检验处理影响，利
用Ｄｕｎｃａｎ检验方法比较处理间的差异。取Ｐ＜
０．０５作为差异显著性标准。
１．５　化合物的提取和分离
组分Ｃ（７９０ｍｇ）经反相柱层析（３０％～８５％
ＭｅＯＨ洗脱）获得Ｃ１～Ｃ５　５个亚组分，亚组分Ｃ３
经 ＨＰＬＣ纯化（流动相为６０％ ＭｅＯＨ，流速为
１．５ｍＬ·ｍｉｎ－１），得到化合物１（１３．１ｍｇ，ｔＲ＝
２１．５ｍｉｎ）和２（９．５ｍｇ，ｔＲ＝３０．８ｍｉｎ），亚组分Ｃ４
经 ＨＰＬＣ纯化（流动相为５７％ ＭｅＯＨ，流速为
１．５ｍＬ·ｍｉｎ－１），得到化合物３（１７．６ｍｇ，ｔＲ ＝
３２．１ｍｉｎ）
２　结果
２．１　不同海参皂苷组分及其浓度对细胞Ａ５４９增
值活性的影响
从图１可见，当浓度为０．５μｇ·ｍＬ
－１时，各
海参皂苷组分对 Ａ５４９细胞生长均起促进作用。
浓度为０．５～０．８μｇ·ｍＬ
－１时组分Ｃ、Ｅ和Ｆ对
Ａ５４９细胞产生抑制作用，但在该浓度范围内抑制
作用强度变化不大；浓度升至１６～１２８μｇ·ｍＬ
－１
时，组分Ｃ、Ｅ、Ｆ抑制作用显著增加，呈现量－效关
系。在９种组分中，Ｃ组分对Ａ５４９细胞抑制作用
最强。其他组分当浓度大于０．５μｇ·ｍＬ
－１时产
生轻度抑制，抑制作用强度随浓度增加未表现出
明显的增强。
图１　不同黑海参皂苷组分对人肺癌细胞株Ａ５４９活性的影响（ｍｅａｎ±Ｓ　Ｄ，ｎ＝４）
Ｆｉｇ．１　Ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｓａｐｏｎｉｎ　ｆｒａｃｔｉｏｎｓ　ｆｒｏｍ　Ｈ．ａｔｒａＪａｅｇｅｒ　ｏｎ　ｖｉａｂｉｌｉｔｙ　ｏｆ　ｈｕｍａｎ　ｃａｎｃｅｒ　ｃｅｌ　Ａ５４９
（ｍｅａｎ±Ｓ　Ｄ，ｎ＝４）
２６　 中　国　海　洋　药　物 ３３卷
　　从表１可见，当浓度为６４μｇ·ｍＬ
－１时，组分
Ｃ、Ｅ、Ｆ对白血病细胞 ＨＬ６０具有显著抑制作用
（Ｐ＜０．０５），而对肝癌ＢＥＬ７４０２和 ＭＯＬＴ－４细胞
的增殖影响不很明显的。
表１　黑海参皂苷组分Ｃ、Ｅ、Ｆ对白血病细胞株 ＨＬ６０、肝癌ＢＥＬ７４０２和 ＭＯＬＴ－４的抑制作用（ｍｅａｎ±Ｓ．Ｄ．，ｎ＝４）
Ｔａｂｌｅ　１　Ｔｈｅ　ｉｎｈｉｂｉｔｉｏｎ　ｏｆ　ｓａｐｏｎｉｎ　ｆｒａｃｔｉｏｎｓ　Ｃ，Ｅ　ａｎｄ　Ｆ　ｆｒｏｍ　Ｈ．ａｔｒａＪａｅｇｅｒ　ｏｎ　ｔｕｍｏｒ　ｃｅｌ　ｌｉｎｅｓ　ＨＬ６０，
ＢＥＬ７４０２ａｎｄ　ＭＯＬＴ－４（ｍｅａｎ±Ｓ．Ｄ．，ｎ＝４）
组分ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔ　 ＨＬ－６０ ＢＥＬ－７４０２ ＭＯＬＴ－４
对照组ｃｏｎｔｒｏｌ　 ３．２６±０．５６　 ３．７２±０．６０　 ３．１５±０．４４
Ｃ　 １．２１±０．２３＊ ３．０３±０．７５　 ３．０２±０．５４
Ｅ　 １．９８±０．１４＊ ２．８１±０．６３　 ２．８５±０．５２＊
Ｆ　 １．７２±０．２２＊ ３．１２±０．７２　 ２．６９±０．６４
＊与对照组相比差异显著（Ｐ＜０．０５）。＊Ｐ＜０．０５　ｖｓ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ．
２．２　不同浓度的海参皂苷Ｃ组分对Ａ５４９细胞周
期的影响
从表２可见，利用不同浓度的组分Ｃ预处理
Ａ５４９细胞２４ｈ后，随组分Ｃ浓度增加，Ｇ０／Ｇ１期
细胞数量显著增加（Ｐ＜０．０５），Ｇ２／Ｍ 期细胞数量
逐渐减少。
表２　不同浓度的黑海参总皂苷组分Ｃ对Ａ５４９细胞周期的影响
Ｔａｂｌｅ　２　Ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ　ｏｆ　ｓａｐｏｎｉｎ　ｆｒａｃｔｉｏｎ　Ｃ　ｆｒｏｍ　Ｈ．ａｔｒａＪａｅｇｅｒ　ｏｎ　ｃｅｌ　ｃｙｃｌｅ　ｏｆ　Ａ５４９
组别
ｇｒｏｕｐ
浓度
ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ／μｇ·ｍＬ
－１
不同时期细胞的比例ｃｅｌｓ　ｉｎ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｐｅｒｉｏｄ／％
Ｇ０／Ｇ１ Ｓ Ｇ２／Ｍ
对照组ｃｏｎｔｒｏｌ　 ５６．１６±４．４５　 ５．２２±０．９４　 ２８．５６±３．３７
组分Ｃ　ｇｒｏｕｐ　Ｃ　 ３２　 ６９．５１±４．２４＊ ７．２５±１．４８＊ ２３．２２±４．８１
组分Ｃ　ｇｒｏｕｐ　Ｃ　 ６４　 ７６．６３±４．７２＊＊ ６．９３±１．０７　 １４．９０±３．５６
组分Ｃ　ｇｒｏｕｐ　Ｃ　 １２８　 ８５．３７±５．１６＊＊ ７．０２±１．２９　 ７．１５±３．４４
　＊ 与对照组相比差异显著（Ｐ＜０．０５）。＊Ｐ＜０．０５　ｖｓ　ｔｈｅ　ｃｏｎｔｒｏｌ　ｇｒｏｕｐ．
２．３　不同浓度的海参皂苷Ｃ组分对Ａ５４９细胞凋
亡的影响
从图２可见，按３２、６４、１２８μｇ·ｍＬ
－１的浓度
加入黑海参皂苷组分Ｃ干预Ａ５４９细胞后，细胞核
固缩，细胞核或细胞质内可见浓染致密的荧光。
随组分Ｃ浓度增加，荧光显著增强，表明细胞凋亡
增加。
图２　黑海参皂苷组分Ｃ对Ａ５４９细胞凋亡的影响
Ｆｉｇ．２　Ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｓａｐｏｎｉｎ　ｆｒａｃｔｉｏｎ　Ｃ　ｆｒｏｍ　Ｈ．ａｔｒａＪａｅｇｅｒ　ｏｎ　ａｐｏｐｔｏｓｉｓ　ｏｆ　Ａ５４９ｃｅｌ
（Ａ：对照组；Ｂ：３２μｇ·ｍＬ
－１的组分Ｃ；Ｃ：６４μｇ·ｍＬ
－１的组分Ｃ；Ｄ：１２８μｇ·ｍＬ
－１的组分Ｃ）
（Ａ：Ｃｏｎｔｒｏｌ；Ｂ：Ｓａｐｏｎｉｎ　ｆｒａｃｔｉｏｎ　Ｃ　ａｔ　３２μｇ·ｍＬ
－１；Ｃ：Ｓａｐｏｎｉｎ　ｆｒａｃｔｉｏｎ　Ｃ　ａｔ　６４μｇ·ｍＬ
－１；
Ｄ：Ｓａｐｏｎｉｎ　ｆｒａｃｔｉｏｎ　Ｃ　ａｔ　１２８μｇ· ｍＬ
－１）
５期 刘洁，等：筛选分离黑海参中具有抗肿瘤活性的皂苷成分 ２７　
２．４　海参皂苷的结构
化合物１：白色结晶，ｍ．ｐ．２１４～２１７ ℃；
［α］２０Ｄ ＝－３９．５（ｃ　０．５０，ｐｙｒｉｄｉｎｅ）；Ｌｉｂｅｒｍａｎｎ－
Ｂｕｒｃｈａｒｄ和 Ｍｏｌｉｓｈ反应阳性；ＩＲ （ＫＢｒ）：３４２２
（ＯＨ），１７３５（Ｃ＝Ｏ），１２５３，１０６７（ＳＯ３Ｎａ）；苷
元１　Ｈ－ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ　ｉｎ　ＤＭＳＯ－ｄ６）：δＨ １．７３
（１Ｈ，ｍ，Ｈ－１β），１．３６ （１Ｈ，ｍ，Ｈ－１α），１．８５
（１Ｈ，ｍ，Ｈ－２β），１．６３（１Ｈ，ｍ，Ｈ－２α），３．３８
（１Ｈ，ｄｄ　Ｊ＝４．８，１２Ｈｚ，Ｈ－３），０．８７（１Ｈ，ｔ　Ｊ＝
７．８ Ｈｚ，Ｈ－５），１．６７ （１Ｈ，ｍ，Ｈ－６β），１．４６
（１Ｈ，ｍ，Ｈ－６α），１．３４ （１Ｈ，ｍ，Ｈ－７），１．６７
（１Ｈ，ｍ，Ｈ－７），２．８７（１Ｈ，ｍ，Ｈ－８），５．２６（１Ｈ，
ｄ　Ｊ＝５．８，Ｈ－１１），４．４８（１Ｈ，ｄ　Ｊ＝７．６，Ｈ－１２），
１．７０（１Ｈ，ｍ，Ｈ－１５β），２．０２（１Ｈ，ｍ，Ｈ－１５α），
１．７５ （２Ｈ，ｍ，Ｈ－１６），１．０５ （３Ｈ，ｓ，Ｈ－１９），
１．５６（３Ｈ，ｓ，Ｈ－２１），１．７５（２Ｈ，ｍ，Ｈ－２２），１．６４
（２Ｈ，ｍ，Ｈ－２３），１．５１（２Ｈ，ｍ，Ｈ－２４），１．８５
（１Ｈ，ｍ，Ｈ－２５），１．０７ （３Ｈ，ｓ，Ｈ－２６），１．０８
（３Ｈ，ｓ，Ｈ－２７），０．８１（３Ｈ，ｓ，Ｈ－３０），１．００（３Ｈ，
ｓ，Ｈ－３１），１．１８（３Ｈ，ｓ，Ｈ－３２）；苷元１３　Ｃ－ＮＭＲ
（１００ＭＨｚ　ｉｎ　ＤＭＳＯ－ｄ６）：δＣ３６．４（ＣＨ２，Ｃ－１），
２６．２（ＣＨ２，Ｃ－２），８７．６（ＣＨ，Ｃ－３），３８．９（Ｃ，Ｃ－
４），５１．９（ＣＨ，Ｃ－５），２０．３（ＣＨ２，Ｃ－６），２７．４
（ＣＨ２，Ｃ－７），４０．０（ＣＨ，Ｃ－８），１５２．８（Ｃ，Ｃ－９），
３９．７（Ｃ，Ｃ－１０），１１４．６（ＣＨ，Ｃ－１１），６９．３（ＣＨ，
Ｃ－１２），５７．３（Ｃ，Ｃ－１３），４５．２（Ｃ，Ｃ－１４），３７．８
（ＣＨ２，Ｃ－１５），３５．９（ＣＨ２，Ｃ－１６），９１．３（Ｃ，Ｃ－
１７），１７２．６（Ｃ，Ｃ－１８），２１．９（ＣＨ３，Ｃ－１９），８６．２
（Ｃ，Ｃ－２０），２１．９（ＣＨ３，Ｃ－２１），３５．６（ＣＨ２，Ｃ－
２２），２０．７ （ＣＨ２，Ｃ－２３），３６．４ （ＣＨ２，Ｃ－２４），
２６．２（ＣＨ，Ｃ－２５），２９．１ （ＣＨ３，Ｃ－２６），２９．４
（ＣＨ３，Ｃ－２７），１６．２（ＣＨ３，Ｃ－３０），２７．４（ＣＨ３，
Ｃ－３１），１９．０（ＣＨ３，Ｃ－３２）；化合物１用三氟乙酸
水解后，衍生得到糖腈乙酸酯衍生物，采用 ＧＣ／
ＭＳ分析，经与标准糖腈乙酸酯衍生物对照，表明
存在Ｄ－木糖：Ｄ－奎诺糖：Ｄ－葡萄糖：３－甲氧基－Ｄ－葡
萄糖（１∶１∶１∶１）．糖基间的连接顺序和位置经
由 ＨＭＢＣ谱并综合考虑 ＮＯＥＳＹ谱确定。糖链
１　Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ　ｉｎ　ＤＭＳＯ－ｄ６）：Ｘｙｌ：δＨ４．３２
（１Ｈ，ｄ　Ｊ＝８．０，Ｈ－１），３．３６（１Ｈ，ｍ，Ｈ－２），
３．０６（１Ｈ，ｍ，Ｈ－３），３．９３（１Ｈ，ｍ，Ｈ－４），３．２２
和３．９５（２Ｈ，ｍ，Ｈ－５）；Ｑｕｉ：４．４８（１Ｈ，ｄ　Ｊ＝
７．６，Ｈ－１），３．５２（１Ｈ，ｍ，Ｈ－２），３．２９（１Ｈ，ｍ，
Ｈ－３），２．９９（１Ｈ，ｍ，Ｈ－４），３．３３（１Ｈ，ｍ，Ｈ－
５），１．２４（３Ｈ，ｓ，Ｈ－６）；Ｇｌｕ：４．３６（１Ｈ，ｄ　Ｊ＝
５．４，Ｈ－１），３．２１（１Ｈ，ｍ，Ｈ－２），３．０３（１Ｈ，ｍ，
Ｈ－３），３．２１（１Ｈ，ｍ，Ｈ－４），３．２９（１Ｈ，ｍ，Ｈ－
５），３．３９和３．６８（２Ｈ，ｍ，Ｈ－６）；ＭｅＯＧｌｕ：４．３４
（１Ｈ，ｄ　Ｊ＝８．０，Ｈ－１），３．１３（１Ｈ，ｍ，Ｈ－２），
２．９８（１Ｈ，ｍ，Ｈ－３），３．１４（１Ｈ，ｍ，Ｈ－４），３．２０
（１Ｈ，ｍ，Ｈ－５），３．３９和３．６８（２Ｈ，ｍ，Ｈ－６），
３．５１（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ３）；糖链１３　Ｃ－ＮＭＲ（１００ＭＨｚ
ｉｎ　ＤＭＳＯ－ｄ６）：Ｘｙｌ：δＣ１０３．８（ＣＨ，Ｃ－１），８１．４
（ＣＨ，Ｃ－２），７４．８（ＣＨ，Ｃ－３），７４．３（ＣＨ，Ｃ－４），
６３．０（ＣＨ２，Ｃ－５）；Ｑｕｉ：１０３．６（ＣＨ，Ｃ－１），７４．５
（ＣＨ，Ｃ－２），７４．３（ＣＨ，Ｃ－３），８６．０（ＣＨ，Ｃ－４），
７０．１（ＣＨ，Ｃ－５），１７．３（ＣＨ３，Ｃ－６）；Ｇｌｕ：１０２．９
（ＣＨ，Ｃ－１），７２．１（ＣＨ，Ｃ－２），８７．９（ＣＨ，Ｃ－３），
６８．４（ＣＨ，Ｃ－４），７６．１（ＣＨ，Ｃ－５），６０．８（ＣＨ２，
Ｃ－６）；ＭｅＯＧｌｕ：１０３．９（ＣＨ，Ｃ－１），７３．５（ＣＨ，
Ｃ－２），８５．９（ＣＨ，Ｃ－３），６９．３（ＣＨ，Ｃ－４），７６．８
（ＣＨ，Ｃ－５），６０．８ （ＣＨ３，Ｃ－６），５９．９ （ＣＨ３，
ＯＣＨ３）。糖链的连接（１　Ｈ－和１３　Ｃ－ＮＭＲ）与 ｈｏ－
ｌｏｔｈｕｒｉｎ　Ａ 的一致［２２］。ＥＳＩ－ＭＳ（ｍ／ｚ）：１　２２９
［Ｍ＋Ｎａ］＋，１　１８３［Ｍ – Ｎａ］－推测化合物１的
相对分子质量为１　２０６。经与文献［２３］对照鉴定１
为ｅｃｈｉｎｏｓｉｄｅ　Ａ。
化合物２：白色结晶，ｍ．ｐ．２２４～２２７ ℃；
Ｌｉｂｅｒｍａｎｎ－Ｂｕｒｃｈａｒｄ和 Ｍｏｌｉｓｈ 反 应 阳 性；ＩＲ
（ＫＢｒ）：３　４２５（ＯＨ），１７３５（Ｃ＝Ｏ），１　２６３，１　０６８
（ＳＯ３Ｎａ）；苷元１　Ｈ－ＮＭＲ（４００ ＭＨｚ　ｉｎ　ＤＭＳＯ－
ｄ６）：δＨ１．７４（１Ｈ，ｍ，Ｈ－１β），１．３６（１Ｈ，ｍ，Ｈ－
１α），１．８５（１Ｈ，ｍ，Ｈ－２β），１．６８（１Ｈ，ｍ，Ｈ－２α），
３．３６（１Ｈ，ｄｄ　Ｊ＝４．０，１１．６Ｈｚ，Ｈ－３），０．８５
（１Ｈ，ｍ，Ｈ－５），１．６８（１Ｈ，ｍ，Ｈ－６β），１．４６（１Ｈ，
ｍ，Ｈ－６α），１．３１（１Ｈ，ｍ，Ｈ－７），１．６８（１Ｈ，ｍ，
Ｈ－７），２．８７（１Ｈ，ｍ，Ｈ－８），５．２４（１Ｈ，ｄ　Ｊ＝４．４，
Ｈ－１１），４．３８（１Ｈ，ｄ　Ｊ＝７．６，Ｈ－１２），１．６８（１Ｈ，
ｍ，Ｈ－１５β），２．０３（１Ｈ，ｍ，Ｈ－１５α），１．７４（２Ｈ，
ｍ，Ｈ－１６），１．０５（３Ｈ，ｓ，Ｈ－１９），１．５６（３Ｈ，ｓ，
Ｈ－２１），２．６５（１Ｈ，ｍ，Ｈ－２３），１．５５（１Ｈ，ｍ，Ｈ－
２４），１．６２（１Ｈ，ｍ，Ｈ－２４），１．０７（３Ｈ，ｓ，Ｈ－
２６），１．０８（３Ｈ，ｓ，Ｈ－２７），０．８１（３Ｈ，ｓ，Ｈ－３０），
１．００（３Ｈ，ｓ，Ｈ－３１），１．１６（３Ｈ，ｓ，Ｈ－３２）；苷
２８　 中　国　海　洋　药　物 ３３卷
元１３Ｃ－ＮＭＲ （１００ ＭＨｚ　ｉｎ　ＤＭＳＯ－ｄ６）：δＣ３５．６
（ＣＨ２，Ｃ－１），２６．２（ＣＨ２，Ｃ－２），８７．６（ＣＨ，Ｃ－
３），３８．９ （Ｃ，Ｃ－４），５１．９ （ＣＨ，Ｃ－５），２０．３
（ＣＨ２，Ｃ－６），２７．４（ＣＨ２，Ｃ－７），３９．９（ＣＨ，Ｃ－
８），１５２．８ （Ｃ，Ｃ－９），３９．７ （Ｃ，Ｃ－１０），１１４．５
（ＣＨ，Ｃ－１１），６９．５（ＣＨ，Ｃ－１２），５７．３ （Ｃ，Ｃ－
１３），４５．２（Ｃ，Ｃ－１４），３５．１（ＣＨ２，Ｃ－１５），３５．８
（ＣＨ２，Ｃ－１６），９１．３（Ｃ，Ｃ－１７），１７２．６（Ｃ，Ｃ－
１８），２１．９（ＣＨ３，Ｃ－１９），８６．２（Ｃ，Ｃ－２０），２０．７
（ＣＨ３，Ｃ－２１），２０８．１（Ｃ，Ｃ－２２），２３．５（ＣＨ２，Ｃ－
２３），３６．４（ＣＨ２，Ｃ－２４），６８．０（ＣＨ，Ｃ－２５），２９．１
（ＣＨ３，Ｃ－２６），２９．４（ＣＨ３，Ｃ－２７），１６．１（ＣＨ３，Ｃ－
３０），２７．４（ＣＨ３，Ｃ－３１），１９．０（ＣＨ３，Ｃ－３２）；化
合物２用三氟乙酸水解后，衍生得到糖腈乙酸酯
衍生物，采用ＧＣ／ＭＳ分析，经与标准糖腈乙酸酯
衍生物对照，表明存在Ｄ－木糖：Ｄ－奎诺糖：Ｄ－葡萄
糖：３－甲氧基－Ｄ－葡萄糖（１∶１∶１∶１）．糖基间的连
接顺序和位置经由 ＨＭＢＣ谱并综合考虑ＮＯＥＳＹ
谱确定。糖链１　Ｈ－ＮＭＲ（４００ＭＨｚ　ｉｎ　ＤＭＳＯ－ｄ６）：
Ｘｙｌ：δＨ４．３２（１Ｈ，ｄ　Ｊ＝８．８，Ｈ－１），３．３６（１Ｈ，
ｍ，Ｈ－２），３．０４（１Ｈ，ｍ，Ｈ－３），３．９３（１Ｈ，ｍ，
Ｈ－４），３．２１和３．９３（２Ｈ，ｍ，Ｈ－５）；Ｑｕｉ：４．４９
（１Ｈ，ｄ　Ｊ＝７．６，Ｈ－１），３．５１（１Ｈ，ｍ，Ｈ－２），
３．２９（１Ｈ，ｍ，Ｈ－３），２．９８（１Ｈ，ｍ，Ｈ－４），３．３２
（１Ｈ，ｍ，Ｈ－５），１．２４（３Ｈ，ｓ，Ｈ－６）；Ｇｌｕ：４．３８
（１Ｈ，ｄ　Ｊ＝７．８，Ｈ－１），３．２１（１Ｈ，ｍ，Ｈ－２），
３．０２（１Ｈ，ｍ，Ｈ－３），３．１８（１Ｈ，ｍ，Ｈ－４），３．２９
（１Ｈ，ｍ，Ｈ－５），３．４０和３．６７（２Ｈ，ｍ，Ｈ－６）；
ＭｅＯＧｌｕ：４．３４ （１Ｈ，ｄ　Ｊ＝８．１，Ｈ－１），３．１４
（１Ｈ，ｍ，Ｈ－２），２．９８（１Ｈ，ｍ，Ｈ－３），３．１４（１Ｈ，
ｍ，Ｈ－４），３．２１（１Ｈ，ｍ，Ｈ－５），３．４０ａｎｄ　３．６７
（２Ｈ，ｍ，Ｈ－６），３．４８ （３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ３）；糖链
１３Ｃ－ＮＭＲ（１００ＭＨｚ　ｉｎ　ＤＭＳＯ－ｄ６）：Ｘｙｌ：δＣ１０３．８
（ＣＨ，Ｃ－１），８１．４（ＣＨ，Ｃ－２），７４．８（ＣＨ，Ｃ－３），
７４．２（ＣＨ，Ｃ－４），６３．０（ＣＨ２，Ｃ－５）；Ｑｕｉ：１０３．６
（ＣＨ，Ｃ－１），７４．５（ＣＨ，Ｃ－２），７４．３（ＣＨ，Ｃ－３），
８６．０（ＣＨ，Ｃ－４），７０．１（ＣＨ，Ｃ－５），１７．３（ＣＨ３，
Ｃ－６）；Ｇｌｕ：１０２．９（ＣＨ，Ｃ－１），７２．１（ＣＨ，Ｃ－２），
８７．９（ＣＨ，Ｃ－３），６８．４（ＣＨ，Ｃ－４），７６．１（ＣＨ，
Ｃ－５），６０．９（ＣＨ２，Ｃ－６）；ＭｅＯＧｌｕ：１０３．９（ＣＨ，
Ｃ－１），７３．５（ＣＨ，Ｃ－２），８５．９（ＣＨ，Ｃ－３），６９．３
（ＣＨ，Ｃ－４），７６．８（ＣＨ，Ｃ－５），６０．８（ＣＨ３，Ｃ－
６），５９．９（ＣＨ３，ＯＣＨ３）。ＥＳＩ－ＭＳ（ｍ／ｚ）：１　２５９
［Ｍ＋Ｎａ］＋，１　１３５［Ｍ– Ｈ］－推测化合物１的相
对分子质量为１　２３６。经与文献［２４］对照鉴定２
为ｈｏｌｏｔｈｕｒｉｎ　Ａ３。
化合物３：白色结晶，ｍ．ｐ．２０９～２１１ ℃；
［α］２０Ｄ ＝－３３．２（ｃ　０．４０，ｐｙｒｉｄｉｎｅ）；Ｌｉｂｅｒｍａｎｎ－
Ｂｕｒｃｈａｒｄ和 Ｍｏｌｉｓｈ反应阳性；ＥＳＩ－ＭＳ（ｍ／ｚ）：
１２４３［Ｍ ＋ Ｎａ］＋，１　２５９［Ｍ ＋ Ｋ］＋，１　１９７［Ｍ
–Ｎａ］－推测化合物１的相对分子质量为１　２２０。
ＩＲ（ＫＢｒ）：３　４２１（ＯＨ），１　７６０（Ｃ＝Ｏ），１　６３６（Ｃ
＝Ｃ），１　２２３，１　０７２（ＳＯ３Ｎａ）；苷元１　Ｈ－ＮＭＲ（４００
ＭＨｚ　ｉｎ　ＤＭＳＯ－ｄ６）：δＨ １．７５（１Ｈ，ｍ，Ｈ－１β），
１．３６（１Ｈ，ｍ，Ｈ－１α），１．８５（１Ｈ，ｍ，Ｈ－２β），１．６４
（１Ｈ，ｍ，Ｈ－２α），３．３７（１Ｈ，ｄｄ　Ｊ＝４．０，１１．６
Ｈｚ，Ｈ－３），０．８８（１Ｈ，ｍ，Ｈ－５），１．６７（１Ｈ，ｍ，
Ｈ－６β），１．４６（１Ｈ，ｍ，Ｈ－６α），１．４４（１Ｈ，ｍ，Ｈ－
７），１．６７（１Ｈ，ｍ，Ｈ－７），２．８８（１Ｈ，ｍ，Ｈ－８），
５．２５（１Ｈ，ｄ　Ｊ＝４．４，Ｈ－１１），４．３８（１Ｈ，ｄ　Ｊ＝
４．６，Ｈ－１２），１．７０（１Ｈ，ｍ，Ｈ－１５β），２．０２（１Ｈ，
ｍ，Ｈ－１５α），１．７５（２Ｈ，ｍ，Ｈ－１６），１．０４（３Ｈ，
ｓ，Ｈ－１９），１．３６（３Ｈ，ｓ，Ｈ－２１），４．１０（１Ｈ，ｍ，
Ｈ－２２），３．７０（２Ｈ，ｍ，Ｈ－２３），１．７０（２Ｈ，ｍ，Ｈ－
２４），１．１６（３Ｈ，ｓ，Ｈ－２６），１．２１（３Ｈ，ｓ，Ｈ－２７），
０．８１（３Ｈ，ｓ，Ｈ－３０），１．０１（３Ｈ，ｓ，Ｈ－３１），１．１９
（３Ｈ，ｓ，Ｈ－３２）；苷元１３　Ｃ－ＮＭＲ （１００ ＭＨｚ　ｉｎ
ＤＭＳＯ－ｄ６）：δＣ３５．６（ＣＨ２，Ｃ－１），２６．２（ＣＨ２，Ｃ－
２），８７．６ （ＣＨ，Ｃ－３），３８．８ （Ｃ，Ｃ－４），５１．９
（ＣＨ，Ｃ－５），２０．４（ＣＨ２，Ｃ－６），２７．３（ＣＨ２，Ｃ－
７），４０．１（ＣＨ，Ｃ－８），１５２．６（Ｃ，Ｃ－９），３９．７（Ｃ，
Ｃ－１０），１１４．５（ＣＨ，Ｃ－１１），７０．１（ＣＨ，Ｃ－１２），
５７．４（Ｃ，Ｃ－１３），４４．８（Ｃ，Ｃ－１４），３７．８（ＣＨ２，
Ｃ－１５），３５．９ （ＣＨ２，Ｃ－１６），８８．４ （Ｃ，Ｃ－１７），
１７３．５（Ｃ，Ｃ－１８），２１．９（ＣＨ３，Ｃ－１９），８６．２（Ｃ，
Ｃ－２０），１８．４（ＣＨ３，Ｃ－２１），７９．４（ＣＨ，Ｃ－２２），
３７．８（ＣＨ２，Ｃ－２３），５７．４（ＣＨ２，Ｃ－２４），８１．４（Ｃ，
Ｃ－２５），２７．４（ＣＨ３，Ｃ－２６），２８．４（ＣＨ３，Ｃ－２７），
１６．２（ＣＨ３，Ｃ－３０），２７．６（ＣＨ３，Ｃ－３１），１９．５
（ＣＨ３，Ｃ－３２）；化合物１用三氟乙酸水解后，衍生
得到糖腈乙酸酯衍生物，采用ＧＣ／ＭＳ分析，经与
标准糖腈乙酸酯衍生物对照，表明存在Ｄ－木糖：Ｄ－
奎诺糖：Ｄ－葡萄糖：３－甲氧基－Ｄ－葡萄糖（比例分别
为１∶１∶１∶１）．糖基间的连接顺序和位置经由
５期 刘洁，等：筛选分离黑海参中具有抗肿瘤活性的皂苷成分 ２９　
ＨＭＢＣ谱并综合考虑 ＮＯＥＳＹ谱确定。糖链１　Ｈ－
ＮＭＲ （４００ ＭＨｚ　ｉｎ　ＤＭＳＯ－ｄ６）：Ｘｙｌ：δＨ ４．３４
（１Ｈ，ｄ　Ｊ＝６．７，Ｈ－１），３．３７（１Ｈ，ｍ，Ｈ－２），
３．０８（１Ｈ，ｍ，Ｈ－３），３．９４（１Ｈ，ｍ，Ｈ－４），３．２２
和３．９５（２Ｈ，ｍ，Ｈ－５）；Ｑｕｉ：４．５０（１Ｈ，ｄ　Ｊ＝
７．７，Ｈ－１），３．５１（１Ｈ，ｍ，Ｈ－２），３．２９（１Ｈ，ｍ，
Ｈ－３），３．００（１Ｈ，ｍ，Ｈ－４），３．３３（１Ｈ，ｍ，Ｈ－
５），１．２５（３Ｈ，ｓ，Ｈ－６）；Ｇｌｕ：４．３８（１Ｈ，ｄ　Ｊ＝
５．６，Ｈ－１），３．２１（１Ｈ，ｍ，Ｈ－２），３．０４（１Ｈ，ｍ，
Ｈ－３），３．２１（１Ｈ，ｍ，Ｈ－４），３．３１（１Ｈ，ｍ，Ｈ－
５），３．４２和３．６８（２Ｈ，ｍ，Ｈ－６）；ＭｅＯＧｌｕ：４．３６
（１Ｈ，ｄ　Ｊ＝５．４，Ｈ－１），３．１５（１Ｈ，ｍ，Ｈ－２），
２．９９（１Ｈ，ｍ，Ｈ－３），３．１６（１Ｈ，ｍ，Ｈ－４），３．２２
（１Ｈ，ｍ，Ｈ－５），３．４２和３．６８（２Ｈ，ｍ，Ｈ－６），
３．４９（３Ｈ，ｓ，ＯＣＨ３）；糖链１３　Ｃ－ＮＭＲ（１００ＭＨｚ
ｉｎ　ＤＭＳＯ－ｄ６）：Ｘｙｌ：δＣ１０３．８（ＣＨ，Ｃ－１），８１．４
（ＣＨ，Ｃ－２），７４．８（ＣＨ，Ｃ－３），７４．３（ＣＨ，Ｃ－４），
６３．０（ＣＨ２，Ｃ－５）；Ｑｕｉ：１０３．６（ＣＨ，Ｃ－１），７４．５
（ＣＨ，Ｃ－２），７４．３（ＣＨ，Ｃ－３），８６．２（ＣＨ，Ｃ－４），
７０．１（ＣＨ，Ｃ－５），１７．３（ＣＨ３，Ｃ－６）；Ｇｌｕ：１０２．９
（ＣＨ，Ｃ－１），７２．１（ＣＨ，Ｃ－２），８７．９（ＣＨ，Ｃ－３），
６８．４（ＣＨ，Ｃ－４），７６．１（ＣＨ，Ｃ－５），６０．８（ＣＨ２，
Ｃ－６）；ＭｅＯＧｌｕ：１０３．９（ＣＨ，Ｃ－１），７３．５（ＣＨ，
Ｃ－２），８６．０（ＣＨ，Ｃ－３），６９．３（ＣＨ，Ｃ－４），７６．８
（ＣＨ，Ｃ－５），６０．９ （ＣＨ３，Ｃ－６），５９．９ （ＣＨ３，
ＯＣＨ３）。经与文献［２２］对照鉴定３为ｈｏｌｏｔｈｕｒｉｎ　Ａ。
图３　化合物１～３的结构式
Ｆｉｇ．３　Ｓｔｒｕｃｔｕｒｅｓ　ｏｆ　ｃｏｍｐｏｕｎｄｓ　１～３
３　讨论
本研究是对黑海参中海参皂苷的报道。研究
中应用了抗肿瘤活性筛选追踪分离方法，对产于
中国南海的黑海参进行了研究，分离得到的海参
皂苷组分 Ｃ、Ｅ、Ｆ具有明显的抑制人肺癌细胞
Ａ５４９及白血病细胞 ＨＬ６０的活性，进一步从组分
Ｃ中得到３个单体化合物，化合物１～３均为首次
从黑海参（Ｈ．ａｔｒａ　Ｊａｅｇｅｒ）中分离得到。
海参体内含大量三萜皂苷成分，不仅对其生
存（防卫、捕食等）有重要意义，而且还表明它们具
有广泛的药理活性，特别是多数海参皂苷具有较
强的抗肿瘤活性，可以成为抗癌药物研发的一个
重要的候选类别。黑海参在中国南海分布广泛，
资源丰富，作者首次从其中一组分分离鉴定了３
个三萜皂苷化合物，值得进一步开展研究其它组
分以及单体化合物的抗肿瘤活性，为开发新型抗
肿瘤药物提供资料。
参考文献
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ｃｕｃｕｍｂｅｒ　Ｈｏｌｏｔｈｕｒｉａ　ｆｏｒｓｋａｌｉ （Ｅｃｈｉｎｏｄｅｒｍａｔａ）ｂｙ　ｍａｓｓ
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ｆｒｏｍ　ｓｅａ　ｃｕｃｕｍｂｅｒ（Ｈｏｌｏｔｈｕｒｉｏｄｅａ，Ｅｃｈｉｎｏｄｅｒｍａｔａ）．Ｂｉｏ－
ｌｏｇｉｃａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ａｎｄ　ｆｕｎｃｔｉｏｎｓ［Ｊ］．Ｓｔｕｄｉｅｓ　ｉｎ　Ｎａｔ　Ｐｒｏｄ
Ｃｈｅｍ，２００８，３５：１３５－１９６．
［６］　Ｖｌａｎｄｉｍｉｒ　Ｉ　Ｋ．Ｓｙｓｔｅｍ－ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ（Ｈｏｌｉｓｔｉｃ）ａｐｐｒｏａｃｈ　ｔｏ
ｔｈｅ　ｍｏｄｅｌｉｎｇ　ｏｆ　ｓｔｒｕｃｔｕｒａｌ－ｆｕｎｃｔｉｏｎａｌ　ｒｅｌａｔｉｏｎｓｈｉｐｓ　ｏｆ　ｂｉｏ－
ｍｏｌｅｃｕｌｅｓ　ａｎｄ　ｔｈｅｉｒ　ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ；ａｎ　ｅｘａｍｐｌｅ　ｏｆ　ｔｒｉｔｅｒｐｅｎｅｎ　ｇｌｙ－
ｃｏｓｉｄｅｓ　ｆｒｏｍ　ｓｅａ　ｃｕｃｕｍｂｅｒｓ（Ｅｃｈｉｎｏｄｅｒｍａｔａ　Ｈｏｌｏｔｈｕｒｉｏｄｅａ）
［Ｊ］．Ｊ　Ｔｈｅｏｒ　Ｂｉｏｌ，２０００，２０６：１５１－１９０．
［７］　Ａｎｉｓｉｍｏｖ　Ｍ　Ｍ，Ｐｒｏｋｏｆｉｅｖａ　Ｎ　Ｇ，Ｋｏｒｏｔｋｉｋｈ　Ｌ　Ｙ，ｅｔ　ａｌ．
Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅ　ｓｔｕｄｙ　ｏｆ　ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ　ａｃｔｉｖｉｔｙ　ｏｆ　ｔｒｉｔｅｒｐｅｎｅ　ｇｌｙｃｏ－
ｓｉｄｅｓ　ｆｒｏｍ　ｍａｒｉｎｅ　ｏｒｇａｎｉｓｍｓ［Ｊ］．Ｔｏｘｉｃｏｎ，１９８０，１８（２）：
２２１－２２３．
［８］　Ｋｉｍ　Ｓ　Ｋ，Ｈｉｍａｙａ　Ｓ　Ｗ　Ａ．Ｔｒｉｔｅｒｐｅｎｅ　ｇｌｙｃｏｓｉｄｅｓ　ｆｒｏｍ　ｓｅａ
ｃｕｃｕｍｂｅｒｓ　ａｎｄ　ｔｈｅｉｒ　ｂｉｏｌｏｇｉｃａｌ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ［Ｊ］．Ａｄｖａｎｃｅｓ　ｉｎ
Ｆｏｏｄ　ａｎｄ　Ｎｕｔｒｉｔｉｏｎ　Ｒｅｓｅａｒｃｈ，２０１２，６５：２９７－３１９．
［９］　Ｋａｌｉｎｉｎ　Ｖ　Ｉ，Ｐｒｏｋｏｆｉｅｖａ　Ｎ　Ｇ，Ｌｉｋｈａｔｓｋａｙａ　Ｇ　Ｎ，ｅｔ　ａｌ．Ｈｅ－
ｍｏｌｙｔｉｃ　ａｃｔｉｖｉｔｉｅｓ　ｏｆ　ｔｒｉｔｅｒｐｐｅｎｅ　ｇｌｙｃｏｓｉｄｅｓ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｈｏｌｏｔｈｕ－
ｒｉａｎ　ｏｒｄｅｒ　Ｄｅｎｄｒｏｃｈｉｒｏｔｉｄａ：ｓｏｍｅ　ｔｒｅｎｄｓ　ｉｎ　ｔｈｅ　ｅｖｏｌｕｔｉｏｎ　ｏｆ
３０　 中　国　海　洋　药　物 ３３卷
ｔｈｉｓ　ｇｒｏｕｐ　ｏｆ　ｔｏｘｉｎｓ［Ｊ］．Ｔｏｘｉｃｏｎ，１９９６，３４（４）：４７５－４８３．
［１０］　Ｓｉｎｇｈ　Ｎ，Ｋｕｍａｒ　Ｒ，Ｇｕｐｔａ　Ｓ，ｅｔ　ａｌ．Ａｎｔｉｌｅｉｓｈｍａｎｉａｌ　ａｃｔｉｖｉ－
ｔｙ　ｉｎ　ｖｉｔｒｏ　ａｎｄ　ｉｎ　ｖｉｖｏ　ｏｆ　ｃｏｎｓｔｉｔｕｅｎｔｓ　ｏｆ　ｓｅａ　ｃｕｃｕｍｂｅｒ　Ａｃｔｉ－
ｎｏｐｙｇａ　ｌｅｃａｎｏｒａ［Ｊ］．Ｐａｒａｓｉｔｏｌ　Ｒｅｓ，２００８，１０３：３５１－３５４．
［１１］　Ａｖｉｌｏｖ　Ｓ　Ａ，Ａｎｔｏｎｏｖ　Ａ　Ｓ，Ｄｒｏｚｄｏｖａ　Ｏ　Ａ，ｅｔ　ａｌ．Ｔｒｉｔｅｒ－
ｐｅｎｅ　ｇｌｙｃｏｓｉｄｅｓ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　Ｆａｒ－Ｅａｓｔｅｒｎ　ｓｅａ　ｃｕｃｕｍｂｅｒ　Ｐｅｎ－
ｔａｍｅｒａ　ｃａｌｃｉｇｅｒａ，１．ｍｏｎｏｓｕｌｆａｔｅｄ　ｇｌｙｃｏｓｉｄｅｓ　ａｎｄ　ｃｙｔｏｔｏｘ－
ｉｃｉｔｙ　ｏｆ　ｔｈｅｉｒ　ｕｎｓｕｌｆａｔｅｄ　ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ ［Ｊ］．Ｊ　Ｎａｔ　Ｐｒｏｄ，
２０００，６３（１）：６５－７１．
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ｔｈｒｅｅ　ｎｅｗ　ｃｙｔｏｔｏｘｉｃ　ｔｒｉｔｅｒｐｅｎｅ　ｇｌｙｃｏｓｉｄｅｓ　ｆｒｏｍ　ｔｈｅ　ｓｅａ　ｃｕ－
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